GB 15193.10-2003非程序性DNA合成試驗(yàn)

ICS07.100C53中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15193.10—2003代替GB15193.10—1994非程序性DNA合成試驗(yàn)UnscheduledDNAsynthesistest2003-09-24發(fā)布2004-05-01實(shí)施中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB15193.10—2003本標(biāo)準(zhǔn)全文強(qiáng)制。本標(biāo)準(zhǔn)代替GB15193.10一1994《非程序性DNA合成試驗(yàn)》。本標(biāo)準(zhǔn)與GB15193.10—1994相比主要修改如下：在"范圍”中增加了受試物的具體內(nèi)容：食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過(guò)程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)、生物和物理因素，檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑(含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑）食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設(shè)備、洗滌劑、消毒劑農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等；-在"試劑”中，增加了"參考陽(yáng)性對(duì)照物”,7,12-二甲基苯并蔥(7.12-dimethylbenzathracene),2-乙酰氨基芬(2-acetylaminofluorene),4-硝基隆啉氧化物（4-nitroquinolineoxide）,N-甲基亞硝胺(N-dimethylnitrosamine);-在"UDS的液體閃煉計(jì)數(shù)顯示法”中；增加“每組(包括對(duì)照組)至少做6個(gè)培養(yǎng)瓶。在"UDS的放射自顯影顯示法”中，增加了"應(yīng)同時(shí)設(shè)有陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組,包括加S-9和不加S-9兩種情況”；增加了“結(jié)果判定”內(nèi)容。自本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施之日起,GB15193.10—1994同時(shí)廢止。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江醫(yī)科大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：徐應(yīng)年、丁辰、本標(biāo)準(zhǔn)于1994年首次發(fā)布.本次為第一次修訂。

GB15193.10—2003非程序性DNA合成試驗(yàn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了非程序性DNA合成試驗(yàn)的基本技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)食品生產(chǎn)、加工、保藏、運(yùn)輸和銷售過(guò)程中所涉及的可能對(duì)健康造成危害的化學(xué)生物和物理因素的誘變性和/或致癌性，檢驗(yàn)對(duì)象包括食品添加劑(含營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑)食品新資源及其成分、新資源食品、輻照食品、食品容器與包裝材料、食品工具、設(shè)備、洗滌劑、消毒劑、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品工業(yè)用微生物等。用這種短期篩選方法可以檢測(cè)出一些短期體外試驗(yàn)法所不能檢出的誘變劑和)或致癌劑、術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)27非程序性DNA合成unscheduledDNAsynthesis,UDS當(dāng)DNA受損傷時(shí),損傷修復(fù)的DNA合成主要在S期以外的其他細(xì)胞周期,稱非程序性DNA合成3原理正常情況下,于細(xì)胞有絲分裂周期中.僅S期是DNA合成期。當(dāng)DNA受損傷時(shí),損傷修復(fù)的DNA合成主要在其他細(xì)胞周期,稱程序外DNA合成,即DS.因此發(fā)現(xiàn)UDS增高.即表明DNA發(fā)生過(guò)損傷。在體外培養(yǎng)細(xì)胞中,用UDS的測(cè)量來(lái)顯示DNA修復(fù)合成的主要關(guān)鍵在于如何鑒別很高水平的半保留DNA復(fù)制和水平較低(充其量只有半保留DNA復(fù)制的5%)的UDS。這可以用同步培養(yǎng)將細(xì)胞阻斷于G1期并用藥物(常用羥基豚)抑制殘留的半保留DNA復(fù)制后顯示。同步培養(yǎng)可用缺乏必需氨基酸精氨酸的培養(yǎng)基(ADM)使DNA合成的始動(dòng)受阻而使細(xì)胞同步于G1期。在這些半保留DNA合成明顯抑制和阻斷了的細(xì)胞中,UDS即可用"H-胸腺喀啶核苷的摻入增加顯示。它可用放射自顯影或液體閃煉計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)量試劑與器材4.1試劑全部試劑除注明外,均為分析純，試驗(yàn)用水為雙蒸水4.1.1參考陽(yáng)性物對(duì)照物：可用7,12-二甲基苯并意(7,12-dimethylbenzathracene),2-乙酰氨基芬（2-acctylaminofluorene)，4-硝基喹啉氧化物（4-nitroquinolineoxide），N-甲基亞硝胺(N-dimethylnitrosamine）4.1.2細(xì)胞增殖用培養(yǎng)基：Eagle氏最低要求培養(yǎng)基(MinimalEssentialMedium,簡(jiǎn)稱EMEM)85份.小牛血清15份，加入青霉素、鏈霉素貼存液1份.使青霉素、鏈霉素的最終濃度分別為100單位及100%g/mL。iMEM培養(yǎng)基可選用各種商品供應(yīng)之粉