醫(yī)用細胞生物學第三章

第三章

細胞生物學的研究方法

ResearchMethodsforCellBiology第一節(jié)細胞的分離與培養(yǎng)（細胞分離）第二節(jié)細胞組分的分離與純化（細胞組分分離）第三節(jié)顯微鏡技術（細胞結(jié)構(gòu)）第四節(jié)細胞化學與分子示蹤（細胞分子）第五節(jié)細胞功能基因組學研究技術（分子功能）第一節(jié)細胞的分離與培養(yǎng)一、細胞分離（離心、流式、免疫磁珠、激光切割）二、細胞培養(yǎng)（原代、傳代、細胞系、細胞株）差速離心或密度梯度離心流式細胞技術（FACS）免疫磁珠法激光俘獲顯微切割技術細胞培養(yǎng)技術細胞培養(yǎng)技術細胞培養(yǎng)技術第二節(jié)細胞組分的分離與純化一、分級離心（差速離心、速度沉降、平衡沉降）二、層析法分離蛋白質(zhì)（柱層析、高效液相層析）三、蛋白質(zhì)電泳（SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳）分級離心技術分級離心技術（成分的大小和形狀）（成分的浮力密度）層析分離技術層析分離技術層析分離技術蛋白質(zhì)電泳技術蛋白質(zhì)電泳技術—WesternBlot蛋白質(zhì)電泳技術蛋白質(zhì)電泳技術第三節(jié)顯微鏡技術一、光學顯微鏡（普通、熒光、激光共聚焦）二、電子顯微鏡（透射、掃描、技術投影法）三、納米顯微鏡（掃描隧道、原子力）普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡普通光學顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡三共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡共聚焦激光掃描顯微鏡電子顯微鏡透射電子顯微鏡（TEM）與掃描電子顯微鏡（SEM）第四節(jié)細胞化學與分子示蹤一、酶細胞化學技術二、免疫細胞化學技術三、放射自顯影技術四、活細胞分子示蹤技術酶細胞化學技術酶細胞化學技術抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)標記破骨細胞免疫細胞化學技術免疫細胞化學技術放射自顯影技術放射自顯影技術胰島B細胞3H-亮氨酸標記完成之后，A10分鐘后；B.完成45分鐘后。細胞內(nèi)分子示蹤技術細胞內(nèi)分子示蹤技術細胞內(nèi)分子示蹤技術第五節(jié)細胞功能基因組學研究技術基因的基本研究技術限制性核酸內(nèi)切酶

核酸凝膠電泳

聚合酶鏈式反應DNA文庫和基因克隆DNA測序

核酸分子雜交限制性核酸內(nèi)切酶技術核酸凝膠電泳技術聚合酶鏈式反應技術（PCR）DNA文庫和基因克隆技術DNA測序技術核酸分子雜交技術原位雜交技術Southern、Northern

Blot技術一、細胞及其組分的分離和純化技術：多種方法可從組織中分離和純化特定類型的細胞或分離和純化細胞組分和活性分子。細胞培養(yǎng)需要無菌條件和營養(yǎng)供應。二、顯微成像技術：光鏡技術是研究細胞結(jié)構(gòu)最早和最基本的工具；電鏡技術用于研究細胞的亞顯微結(jié)構(gòu)。三、細胞化學和細胞內(nèi)分子示蹤技術：細胞化學技術可以顯示細胞和組織中的酶類；免疫細胞化學技術是生物大分子定性和定位研究的有效工具；原位雜交技術用以檢測組織和細胞中的特異性核酸分子；放射自顯影術可以追蹤并分析體內(nèi)大分子代謝的動態(tài)過程；綠色熒光蛋白用于示蹤細胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)。四、細胞功能基因組學技術：PCR技術可以在體外快速擴增特異性DNA