臨床微生物標(biāo)本的正確采集與運送優(yōu)秀課件

臨床微生物標(biāo)本的正確采集與運送第一頁，共五十二頁，2022年，8月28日前言

“準確的病原學(xué)診斷”

“針對性病原學(xué)治療”

正確的微生物標(biāo)本采集和運送，是準確的病原學(xué)診斷的前提！第二頁，共五十二頁，2022年，8月28日標(biāo)本采集的重要性1、病原微生物能否成功檢出，有一半的因素取決于標(biāo)本采集與運送是否滿意；2、細致采集標(biāo)本和有效的運送可有效降低分離微生物的難度。第三頁，共五十二頁，2022年，8月28日標(biāo)本采集的原則1、盡早采集，應(yīng)在應(yīng)用抗生素前或停藥一周后采集標(biāo)本，如不能停藥，應(yīng)于下次抗生素應(yīng)用前采集；2、掌握標(biāo)本的送檢指征；3、選擇正確的采集容器；4、采取正確的采集方法，無菌采集：無菌部位的標(biāo)本應(yīng)嚴格無菌技術(shù)操作，其他標(biāo)本應(yīng)盡可能避免標(biāo)本外細菌污染；5、收集足夠的標(biāo)本量；選擇不同的采集時機和標(biāo)本種類；6、正確保存和運送：標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。第四頁，共五十二頁，2022年，8月28日

1、血液標(biāo)本的采集與運送2、尿液標(biāo)本的采集與運送3、糞便標(biāo)本的采集與運送4、呼吸道標(biāo)本的采集與運送5、皮膚、軟組織感染的標(biāo)本采集與運送常見標(biāo)本采集與運送方法第五頁，共五十二頁，2022年，8月28日血液標(biāo)本的采集與運送第六頁，共五十二頁，2022年，8月28日一、血液標(biāo)本的采集指征1.一般患者出現(xiàn)以下一種體征時可作為采血的重要指征（《臨床微生物學(xué)檢驗操作規(guī)范》）發(fā)熱（Ｔ≥38℃）或低溫（Ｔ≤36℃）；寒戰(zhàn)；

WBC增多（計數(shù)≥10×109/L，特別有核左移時）；皮膚粘膜出血；昏迷；多器官衰竭；BP降低；C反應(yīng)蛋白升高及呼吸困難；血液病患者出現(xiàn)粒細胞減少（成熟的多形核白細胞＜1×109/L）；或同時具備上述幾種體征時而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血液培養(yǎng)。第七頁，共五十二頁，2022年，8月28日2、幾種特殊情況：①新生兒可疑敗血癥時，除發(fā)熱或低溫外，很少培養(yǎng)出細菌，應(yīng)同時做尿液和腦脊液培養(yǎng)。②老年菌血癥患者可能不發(fā)熱或不低溫，如伴有身體不適、肌痛或中風(fēng)，可能是感染性心內(nèi)膜炎，也應(yīng)采取血培養(yǎng)③骨髓培養(yǎng)與血液培養(yǎng)的送檢指征基本一致，臨床常規(guī)血液感染有指征時以抽血培養(yǎng)為主。但當(dāng)骨髓炎時或長期使用抗生素患者，抽取骨髓培養(yǎng)陽性率遠高于血培養(yǎng)。第八頁，共五十二頁，2022年，8月28日二、血液標(biāo)本的采集方法標(biāo)本容器：血培養(yǎng)瓶，注意：提前從冰箱內(nèi)取出復(fù)溫。1、皮膚消毒程序：嚴格執(zhí)行以下三步法:①穿刺處皮膚首先用75%的酒精擦拭并待干30秒②用1-2%碘酊作用30秒或碘伏作用60秒，從穿刺點向外畫圈消毒，消毒直徑≥5cm；③75%的酒精脫碘待干。對碘過敏者用酒精消毒60秒，待干后采血。第九頁，共五十二頁，2022年，8月28日2、培養(yǎng)瓶消毒程序：①75%的酒精擦拭血培養(yǎng)瓶橡皮塞或蓋子60秒，并待干；②用無菌棉簽清除橡皮塞表面殘余酒精后注入血液。第十頁，共五十二頁，2022年，8月28日三、血液標(biāo)本的采集方法3、抽取血液后，不要換針頭，直接注入血培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻，以防血液凝固。若同時作需氧和厭氧培養(yǎng)，應(yīng)先將標(biāo)本接種到厭氧瓶中，然后再注入需氧瓶中，嚴防空氣注入?yún)捬跗恐?。第十一頁，共五十二頁?022年，8月28日四、采血套數(shù)及血量：一般情況：建議不同部位2套4瓶每套包括一個需氧培養(yǎng)瓶和一個厭氧瓶；采血量與培養(yǎng)基量：1:5～1:10為宜；成人：8～10ml/瓶；兒童：1～5ml/瓶；血液量太多或太少不利于細菌檢出，陽性率增加3～5%/ml，人體血液內(nèi)包含各種抑菌因子或抗生素，血量太多可能會抑制細菌生長。第十二頁，共五十二頁，2022年，8月28日1.盡可能在抗菌素使用前，在24小時采2～3套，因為研究證實該量足以檢測所有的菌血癥和真菌血癥；2.入院前2周內(nèi)接受抗生素藥物治療的患者，連續(xù)3天，每天采2套，可選用能中和或吸附抗生素的培養(yǎng)基；3.對間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰來到之前0.5～1小時采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1小時采血。因為發(fā)熱時血液中可能沒有細菌。五、血液標(biāo)本的采血時間第十三頁，共五十二頁，2022年，8月28日五、血液標(biāo)本的采血時間4.特殊的全身或局部感染采血培養(yǎng)的建議：①可疑急性原發(fā)性菌血癥、真菌菌血癥、腦膜炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎或肺炎的患者應(yīng)在不同部位采2～3套血標(biāo)本；②不明原因發(fā)熱，如：隱性膿腫、傷寒熱、稽留熱等應(yīng)先采集2～3套標(biāo)本，24～36小時后估計體溫升高前，再采集2套以上；③可疑菌血癥或真菌血癥，但血培養(yǎng)持續(xù)陰性，應(yīng)改變血培養(yǎng)方法，選擇其他種類的培養(yǎng)瓶，如：高滲培養(yǎng)瓶、吸附抗生素的培養(yǎng)瓶、結(jié)核菌培養(yǎng)瓶，以獲得罕見或茍養(yǎng)的微生物；④可疑細菌性心內(nèi)膜炎，在1～2小時內(nèi)采集3套血標(biāo)本，若24小時后陰性，再采集3套以上。第十四頁，共五十二頁，2022年，8月28日

血液標(biāo)本的采集方法5、采血點：靜脈采血，一個靜脈點只能采一套血培養(yǎng)標(biāo)本，采集第2套是應(yīng)更換靜脈穿刺點；除非懷疑CR－BSLs否則不可從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置處取血。6、血培養(yǎng)瓶保存：及時送檢，若不能則常溫保存、切勿冷藏，因為某些苛養(yǎng)菌會在冰箱溫度中死亡。如天氣寒冷，應(yīng)注意保溫措施。第十五頁，共五十二頁，2022年，8月28日

血液標(biāo)本的采集方法7、標(biāo)識：多套、多點采集時培養(yǎng)瓶上應(yīng)注明采集時間、部位，但不能將標(biāo)簽貼在條形碼上，否則儀器無法識別。第十六頁，共五十二頁，2022年，8月28日血液標(biāo)本的病原菌血液標(biāo)本中常見的病原菌：血液標(biāo)本中致病菌以細菌為主（需氧菌為主。厭氧菌、真菌也占相當(dāng)比例），偶為支原體；醫(yī)院內(nèi)感染的菌血癥常見的病原菌：金葡、表葡、腸球菌、大腸埃希菌、肺克、其他腸桿菌、銅綠假單胞菌、不動桿菌、厭氧菌、真菌等。第十七頁，共五十二頁，2022年，8月28日血液標(biāo)本的采集與運送社區(qū)感染的菌血癥常見的病原菌：肺炎鏈球菌、金葡、表葡、腸球菌、草綠色鏈球菌、大腸埃希菌、沙門菌屬、流感嗜血桿菌，厭氧菌、真菌明顯少見。第十八頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿液標(biāo)本微生物檢驗第十九頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿液微生物標(biāo)本送檢指征有典型的尿路感染癥狀；肉眼血尿或膿尿；尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為WBC增高和/或亞硝酸鹽陽性；不明顯的發(fā)熱，無其他局部癥狀；留置導(dǎo)尿管病人出現(xiàn)發(fā)熱；膀胱排空功能受損；泌尿系疾病手術(shù)前。第二十頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿液微生物標(biāo)本采集時間①未使用抗生素前；或停藥后一周，如不能停用抗菌藥物，應(yīng)在下次使用前。②一般取晨起第一次尿液送檢（或尿液在膀胱內(nèi)停留數(shù)小時）③在臨床癥狀明顯時收集。第二十一頁，共五十二頁，2022年，8月28日采集方法①清潔中段尿采集法：晨尿5～10ml，最常用，易污染；醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)：囑患者睡前少喝水，清晨起來用肥皂水清洗外陰部，從前到后擦干外陰部。開始排尿，握杯子外面，但不要觸及杯子邊緣。舍棄前小段尿液和后段，取中間段的尿液，充滿試管的一半，小心旋緊杯子的蓋子立即送檢，1小時內(nèi)接種。②恥骨上膀胱穿刺法：金標(biāo)準，痛苦，主要用于厭氧菌培養(yǎng)或標(biāo)本留取困難的嬰幼兒。第二十二頁，共五十二頁，2022年，8月28日采集方法③導(dǎo)尿法：未留置導(dǎo)尿者可能導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡為留取微生物標(biāo)本而導(dǎo)尿；留置導(dǎo)尿者：應(yīng)當(dāng)使用75%酒精或碘伏等消毒導(dǎo)尿管2遍（連接處上方，消毒長度至少5cm）后，使用無菌注射器抽取標(biāo)本送檢。不可以從集尿袋中采集，或是打開導(dǎo)尿管和集尿袋的接口進行采集。注意：消毒劑要待干，盡量不混入消毒劑；長期留置導(dǎo)尿管者應(yīng)更換導(dǎo)尿管后再采集標(biāo)本。定期夾閉尿管者應(yīng)開放棄去前段尿，留取中段尿第二十三頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿液微生物標(biāo)本保存：①用無菌容器盛標(biāo)本，標(biāo)本應(yīng)立即送檢，及時接種，運送過程安全，防溢出及污染；②若不能立即接種可將標(biāo)本置于4～8℃的冰箱內(nèi)保存，但不得超過8小時；③尿液中不得加入防腐劑或消毒劑。第二十四頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿液培養(yǎng)結(jié)果說明①正常參考值：無細菌生長；②細菌學(xué)診斷標(biāo)準：A膀胱穿刺尿：細菌均有意義；B清潔尿中段：菌落計數(shù)：革蘭陰性菌≥105/ml,革蘭陽性菌濃度≥104/ml；但如為非留置導(dǎo)尿管病人臨床上無尿路感染表現(xiàn)，則要求2次尿培養(yǎng)的細菌數(shù)均≥105/ml,并為同一細菌時為病原菌；C用導(dǎo)尿法采集尿標(biāo)本細菌定量培養(yǎng)計數(shù)≥103/ml時有意義。第二十五頁，共五十二頁，2022年，8月28日尿培養(yǎng)最常見的病原菌：

大腸埃希菌約占60～80%。其他：腸球菌、非發(fā)酵菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌、葡萄球菌、結(jié)核桿菌、支原體、衣原體等。第二十六頁，共五十二頁，2022年，8月28日不合格尿標(biāo)本①同一種標(biāo)本培養(yǎng)出4種以上的細菌，應(yīng)認為收集或處理標(biāo)本不當(dāng)被污染；②送檢容器不合格；③送檢時間超過2小時。第二十七頁，共五十二頁，2022年，8月28日糞便微生物標(biāo)本的采集與運送第二十八頁，共五十二頁，2022年，8月28日糞便標(biāo)本送檢指征急慢性腹瀉；伴或不伴有發(fā)熱\全身乏力者無痛性大量水樣便或米泔樣稀便先吐后瀉，可疑為食源性疾病者；長期抗菌藥物治療后腹瀉患者；嬰幼兒高熱驚厥者?？梢蔀橹卸拘跃』肌５诙彭?，共五十二頁，2022年，8月28日標(biāo)本采集的方法：①采集容器：一次性無菌盒②采集時間：盡可能在急性期或發(fā)病早期和應(yīng)用抗菌藥物之前，在不同的時間采集2～3份標(biāo)本可以提高致病菌分離率；第三十頁，共五十二頁，2022年，8月28日采集方法自然排便法：采標(biāo)本時取有膿血、粘液、組織碎片的糞便2～3克，液體糞便則取絮狀物，1～3ml直接裝入容器或保存液或運送培養(yǎng)基中。第三十一頁，共五十二頁，2022年，8月28日糞便標(biāo)本的采集與運送：直腸拭子法：一般用于排便困難的患者或兒童。方法：用肥皂水將肛門周圍洗凈，用NS棉拭子插入肛門，成人約4～5cm，兒童2～3cm與直腸粘膜直接接觸，輕旋轉(zhuǎn)，必須將拭子置于滅菌容器內(nèi)送檢。食物中毒患者也可以取食物、嘔吐物、胃液培養(yǎng)。第三十二頁，共五十二頁，2022年，8月28日糞便標(biāo)本的采集與運送：標(biāo)本運送：糞便標(biāo)本應(yīng)立即送檢，運送過程安全，防溢出及污染，溫室條件下不能超2h。不合格標(biāo)本：①糞便標(biāo)本放置時間超過2h；②直腸拭子未置于運送培養(yǎng)基內(nèi)送檢；③運送的標(biāo)本中混有尿液；④標(biāo)本已干燥。第三十三頁，共五十二頁，2022年，8月28日呼吸道標(biāo)本的采集與運送第三十四頁，共五十二頁，2022年，8月28日1、部位：①上呼吸道：喉以上部位；②下呼吸道：氣管、支氣管、肺泡2、檢查項目：痰液的細菌、真菌、結(jié)核菌培養(yǎng)；真菌、結(jié)核菌涂片第三十五頁，共五十二頁，2022年，8月28日上呼吸道標(biāo)本微生物檢驗送檢指征感冒伴咽痛細菌性咽扁桃腺炎上感伴有鼻竇炎等第三十六頁，共五十二頁，2022年，8月28日上呼吸道標(biāo)本采集方法咽拭子：患者漱口，將舌外拉，用無菌棉拭子通過舌根到咽后壁或腭垂的后側(cè)，涂抹數(shù)次。注意拭子避免接觸口腔和舌粘膜。鼻咽拭子：由鼻腔穿入鼻咽部，輕輕旋轉(zhuǎn)擦拭，然后取出，再從另一鼻腔收集標(biāo)本。采集過程中避免唾液污染，標(biāo)本迅速送檢。注：以晨起后采集為佳。第三十七頁，共五十二頁，2022年，8月28日痰標(biāo)本的微生物檢驗送檢指征：

咳嗽、咳痰、咯血、呼吸困難、發(fā)熱伴白細胞增高、胸痛。注：肺部感染患者有25～50%可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時作血培養(yǎng)。第三十八頁，共五十二頁，2022年，8月28日采集方法：用一次性無菌留痰盒①自然咳痰法：以晨痰為佳先用清水或漱口液反復(fù)漱口或牙刷（不蘸牙膏）清潔口腔和牙齒用力咳出深部的第一口痰于無菌容器中；咳痰困難者可用4.5%NS霧化吸入，使痰易咳出。對咳痰少的幼兒，可輕輕壓迫胸骨上部的氣管，使其咳嗽。第三十九頁，共五十二頁，2022年，8月28日支氣管鏡采集法:氣管吸引法:環(huán)甲膜穿刺\經(jīng)胸壁穿刺注小兒吸痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將試子伸入咽部，刺激咳嗽時可將噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。第四十頁，共五十二頁，2022年，8月28日痰標(biāo)本采集注意事項晨痰為佳立即送檢，以防細菌死亡如不能及時送檢者應(yīng)置冰箱保存4℃第四十一頁，共五十二頁，2022年，8月28日痰標(biāo)本評價標(biāo)準①經(jīng)篩選的痰液(涂片鏡檢鱗狀上皮細胞<10個/低倍視野,白細胞>25個/低倍視野,或二者比例<1:2.5)連續(xù)兩次分離出相同病原體。②痰定量培養(yǎng)分離到病原菌濃度≥106cfu/ml。③痰或下呼吸道采樣標(biāo)本中分離到通常非呼吸道定植的細菌或其它特殊病原體。第四十二頁，共五十二頁，2022年，8月28日呼吸道不合格標(biāo)本①咽拭子、咳痰、吸出的分泌物進行厭氧菌培養(yǎng)無意義，應(yīng)采用氣管穿刺法留取標(biāo)本；②痰標(biāo)本呈水樣、唾液樣；③送檢時間超過2h；④同時同部位或同一天兩份相同的檢測標(biāo)本。第四十三頁，共五十二頁，2022年，8月28日化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本的微生物檢驗第四十四頁，共五十二頁，2022年，8月28日1、指征：局部有感染的典型特征，紅腫熱痛伴或不伴有全身癥狀疑有皮膚軟組織急性化膿性感染，包括癤、癰、蜂窩織炎、丹毒、褥瘡感染、乳房膿腫等創(chuàng)傷感染，如術(shù)后切口感染、燒傷感染、臍炎第四十五頁，共五十二頁，2022年，8月28日2、采集方法：①組織塊：嚴格消毒皮膚和手術(shù)區(qū)域，經(jīng)手術(shù)或侵入性技術(shù)獲得的標(biāo)本最好；盡量多采集組織；置于無菌容器或厭氧運送系統(tǒng)送檢，標(biāo)本量少要加入少量無菌NS送檢。第四十六頁，共五十二頁，2022年，8月28日②膿腫；a開放性傷口：開放性傷口抽吸前用無菌NS擦去表面分泌物，以免污染，盡量抽吸深部膿液送檢。b閉合性膿腫：抽吸前用2～3％碘酊和75％酒精消毒周圍皮膚，穿刺抽取膿液或分泌物送檢，也可在切開