組織硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒

PAGEPAGE3組織硫代巴比妥酸反應(yīng)物（TBARS）比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）主要用途硫代巴比妥酸反應(yīng)物技術(shù)，檢測與之反應(yīng)的丙二醛，其產(chǎn)物丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物，在分光光度儀下，檢測其吸光峰值的變化，即采用比色法測定組織樣品中硫代巴比妥酸反應(yīng)物含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物組織（人體、動物、昆蟲等）中硫代巴比妥酸反應(yīng)物的含量檢測。廣泛用于組織氧化應(yīng)急研究，特別是脂質(zhì)過氧化的分析。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。技術(shù)背景脂質(zhì)過氧化反應(yīng)（lipidperoxidation；LPO）是動物和植物細(xì)胞損傷的一種機(jī)制，也是評價細(xì)胞和組織氧化應(yīng)急的標(biāo)志。含有兩個或以上雙鍵（doublebond）的多聚不飽和脂肪酸（PolyunsaturatedFatty對自LO（lipidperoxylradical（lipidoxidationLO＋同時通過攻擊分子內(nèi)雙鍵，經(jīng)環(huán)化、裂解形成環(huán)狀內(nèi)過氧化物cyclicendoperoxide，例如丙二醛malondialdehydMDA）4-羥基壬烯酸4-hydroxynonenalHN）等氫過hydroperoxid（aldehyd（TBAR）混合物。硫代巴比妥酸反應(yīng)物含量增加，表明氧化應(yīng)急增強(qiáng)。作為脂質(zhì)過氧化性低分子量終端產(chǎn)物之一的丙二醛，廣泛用于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的指標(biāo)，即硫代巴比妥酸反應(yīng)物（thiobarbituricacidreactivesubstance；TBAR）表述為丙二醛等類物（MDAequivalentlen，以評價脂質(zhì)氧化或氧化應(yīng)急程度。在丁羥甲苯（ButylatedHydroxytoluene；BHT）妥酸t(yī)hiobarbituricacid；TB）進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生丙二醛雙硫代巴比妥酸加合物（MDA-TB，通過分光光度儀（532nm波長）來定量分析硫代巴比妥酸反應(yīng)物的含量，其反應(yīng)方式為：Malondialdehyde + 2thiobarbituricacid → TBARS產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液（Reagent裂解液（ReagentB）抗干擾液（Reagent萃取液（ReagentD）反應(yīng)液（ReagentE）補(bǔ)充液（ReagentF）稀釋液（Reagent產(chǎn)品說明書

80毫升10毫升500微升毫升管2毫升1毫升1份保存方式4C）E）D）6月用戶自備15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器1.5毫升離心管：用于制備樣品和樣品反應(yīng)的容器超聲儀：用于裂解組織的儀器（微型）臺式離心機(jī)：用于樣品收集、澄清恒溫水槽：用于反應(yīng)孵育酶標(biāo)板：用于比色的容器實驗步驟（Reagent500（Reagent到反（Reagent管里（10次操作量（532nm。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定組織重量（選擇步驟）50毫升錐形離心管（500毫克組織）（選擇步驟）3緩沖液（Reagent（選擇步驟）小心抽去緩沖液（Reagent移入到一個液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：）15毫升錐形離心管500裂解液（Reagent5秒，充分混勻200505秒1.5毫升離心管15秒4103000g（6000RPMeppendorf5415）5001.5毫升離心管16．（選擇步驟）102050毫克/毫升（用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1）17．即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作二、比色測定101.5毫升離心管，并做好相應(yīng)標(biāo)記：背景對照和樣品280緩沖液（Reagent20抗干擾液（Reagent100補(bǔ)充液（Reagent或待測樣品（注意：總量為12）用槍頭混勻50萃取液（Reagent用槍頭混勻50反應(yīng)工作液蓋上蓋子，上下傾倒數(shù)次，混勻106060112分鐘4510000g（13000RPMeppendorf5415）25096孔酶標(biāo)板的相應(yīng)孔里（注意：）放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測（樣品讀數(shù)－背景對照讀數(shù)三、計算樣品總濃度[樣品實際讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X0.25（體系容量；毫升）]÷[0.05（樣品容量；毫升）X156（毫摩爾吸光系數(shù)）X0.6]＝微摩爾/毫升÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝微摩爾/毫克注意事項20次操作操作時，須戴手套用戶可以采用組織勻漿（30秒）處理代替超聲處理萃取液（ReagentD）具有腐蝕性，注意操作安全反應(yīng)液（ReagentE）1周抗干擾液（ReagentC）反應(yīng)液（ReagentE）避免光照，并密封0.05微摩爾丙二醛等類物500.25摩爾蔗糖會干擾檢測（13％）10．可