抗酒石酸酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒(PNP比色法)

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抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)檢測(cè)試劑盒(PNP比色法)酸酸性磷酸酶(acidphosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細(xì)胞(Tartrate-resistntacidTRAP絕大多數(shù)來(lái)源于破骨細(xì)胞，因此可以通過(guò)測(cè)量血液中的TRAPTRAP一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細(xì)胞(osteoclast)和破軟骨細(xì)胞(chondroclast)中高表達(dá)，在活化的巨噬細(xì)胞和神經(jīng)元中也有表達(dá)。Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)檢測(cè)試劑盒(PNP比色法)(TartrateResistntAcidPhosphataseColorimetricAssayKit)檢測(cè)原理是利用Para-nitrophenyl下生成。在堿性條件下呈黃色，產(chǎn)物黃色越深，說(shuō)明酸性磷酸酶活性越高，反之則酶活性越低，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，據(jù)此通過(guò)比色分析就可以計(jì)算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的酒石酸存在的情況下進(jìn)行酸性磷酸酶的活性檢測(cè)，檢測(cè)得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。該試劑盒可用于檢測(cè)細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。編號(hào)TE0045編號(hào)TE0045Storage名稱試劑(A):ACPAssaybuffer試劑(B):pNPP試劑(C):TartrateSolution60T50ml24℃-20℃避光4℃試劑(D):p-nitrophenol(10mM)0.2ml-20℃避光試劑(E):StoppingSolution80mlRT使用說(shuō)明書(shū)1份自備材料：1、比色杯2、水浴鍋或恒溫箱3、分光光度計(jì)北京雷根生物技術(shù)有限公司操作步驟(僅供參考)：1、配制檢測(cè)工作液：①配制顯色工作液：取出1支pNPP，恢復(fù)至室溫后溶解于ACPAssaybuffer，混勻，冰上預(yù)冷備用。新配制的顯色工作液應(yīng)及時(shí)用完。②配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取出 p-nitrophenol(10mM)恢復(fù)至室溫后，取溶解于μlACPAssaybuffer，使?jié)舛冗_(dá)到一定程度。2、準(zhǔn)備樣品：①尿液通常也可以直接用于測(cè)定，凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測(cè)。②PBS或生理鹽水進(jìn)行適當(dāng)勻漿，一般細(xì)胞數(shù)量在106以上，組織應(yīng)在100mg酸酸性磷酸酶的檢測(cè)。③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生理鹽水或PBS布或?yàn)V紙過(guò)濾，離心，留取上清液并測(cè)量體積，凍存，用于抗酒石酸酸性磷酸酶的檢測(cè)。④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的抗酒石酸酸性磷酸酶，可以使用ACPAssaybuffePBS3、加樣：按照下表設(shè)置空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。標(biāo)準(zhǔn)品的用量分別為0.03、0.06、0.12、0.18、0.24、0.3ml，待測(cè)樣品直接加0.3ml。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。空白對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)品管待測(cè)樣品管ACPAssaybuffer0.3ml(0.3-x)ml(0.3-y)ml顯色工作液0.3ml0.3ml0.3mlTartrateSolution30μl30μl30μl待測(cè)樣品——yml標(biāo)準(zhǔn)品工作液—xml—4、輕輕混勻，孵育。5、每孔加入StoppingSolution終止反應(yīng)。6畢。計(jì)算：酸性磷酸酶活性單位的定義：pH4.837℃條件下，每分鐘水解 para-nitrophenyl北京雷根生物技術(shù)有限公司phosphate顯色底物產(chǎn)生1微摩爾p-nitrophenol所需的酸性磷酸酶的量定義為一個(gè)酶活力單位。根據(jù)酶活性定義，計(jì)算出樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性。注意事項(xiàng)：1、待測(cè)樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。2、建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以使標(biāo)準(zhǔn)更準(zhǔn)確，另外標(biāo)準(zhǔn)品需避免反復(fù)凍融。3、如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色杯的最小檢測(cè)體積，盡量采用小體積的比色杯。4、所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)用ACPAssaybuffer稀釋樣品后重新測(cè)定。5、一支顯色工作液配制后需當(dāng)日使用完畢，因此請(qǐng)注意適當(dāng)多準(zhǔn)備一些樣品一起檢測(cè)。6、p-nitrophenol溶液對(duì)人體有害，反應(yīng)終止液有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。7、如果希望進(jìn)行酶活性的絕對(duì)定量，進(jìn)行酶反應(yīng)時(shí)應(yīng)精確計(jì)時(shí)，此時(shí)推薦采用孵育30min或更長(zhǎng)時(shí)間，以減小操作過(guò)程中的時(shí)間誤差。8、待測(cè)樣品中抗酒石酸酸性磷酸酶活性較低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間至30min。9、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。有效期：12個(gè)月有效。編號(hào)CC0007CS0001DC0032DF0135編號(hào)CC0007CS0001DC0032DF0135PS0013TE0002名稱磷酸緩