臨床微生物實驗室質量控制及質量保證

臨床微生物實驗室

質量控制及質量保證1/5/20231微生物實驗室質量控制

為保證檢測結果的準確性、可靠性，臨床細菌室室內質控需要：

對人員進行評估建立質量控制標準、選擇和適的質控物對標本質量進行評價對試劑、培養(yǎng)基、儀器設備進行監(jiān)測對檢測過程進行監(jiān)控對檢測結果和結果的臨床應用進行評估1/5/20232臨床微生物實驗室質量控制環(huán)節(jié)標本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設備結果報告標本留取運送分析前分析后分析中人員1/5/20233人員具備相關教育背景，每年接受專業(yè)技術及知識培訓，熟悉微生物實驗室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識。..包括新員工培訓、老員工的再培訓以及員工工作能力評估人員能力人員培訓人員資質包括其對諸如分析前、中、后特定階段的專業(yè)經驗和熟練試驗技術。并直接參與質控工作1/5/20234分析前質量控制1/5/20235分析前質量控制建立質量控制標準（SOP)

制定自檢測申請、標本采集開始到發(fā)出檢測結果報告止的全過程的操作和管理程序微生物檢驗標本質量控制實驗室應給標本采集者提供標本采集和運送的指導手冊實驗室應持續(xù)監(jiān)測標本采集和運送過程實驗室應對標本質和量進行評估不合格標本拒收1/5/20236標本采集和運送標本采集和運送是細菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)但由于標本的采集和運送常有護士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的環(huán)節(jié)，造成的后果是:標本污染、陽性率低1/5/20237標本收集基本原則1）在抗菌藥物使用前采集標本2）采樣時嚴格執(zhí)行無菌操作3）采樣后立即送檢4）棉拭子標本宜用運送培養(yǎng)基5）標本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。6）送檢標本應注明來源和檢驗目的1/5/20238

標本收集和運送的質量控制

向臨床提供標本采集說明(sop)不同部位標本的采集方法采集最佳時間、次數標本采集量正確時間、部位、方法等

對收集和運送標本的容器控制

無菌、無防腐劑、足夠大、安全嚴密、不易破碎、選擇合適的運送培養(yǎng)基

1/5/20239

標本收集和運送的質量控制正確的運送方式

標本因冷藏及pH改變或在氧氣中暴露，可能減少很多種細菌的存活時間

腦膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，沙門菌，志賀氏菌，霍亂弧菌，空腸彎曲菌及厭養(yǎng)菌定量評價細菌數量的培養(yǎng)（尿標本）（運送時間）需進行微生物學檢測的所有標本，應在收集后2小時內送到實驗室1/5/202310標本運送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積液、腹水、滑液關節(jié)鼻竇分泌物短時間內運送：標本在帶帽的注射器內保證厭氧條件長時間內運送：使用運送培養(yǎng)基室溫避免冷藏支氣管肺泡液、痰、其他分泌物、便等立刻送檢2-3小時冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直腸、傷口拭子用運送培養(yǎng)基>4小時室溫微生物檢驗驗標本的運運送及貯存存條件12/29/202211有可靠的標標本質量評評價方法分類白細胞鱗狀上皮細胞門診或難以取材可培養(yǎng)6<25<25最好，適于培養(yǎng)5>25<104>2510-25不適于培養(yǎng)，重新留取標本3>25>25210-25>251<10>2512/29/202212有可靠的標標本質量評評價方法12/29/202213不合格格標本本拒收收除非不不能再再采集集的標標本，，否則則不予予檢測測；如果培培養(yǎng)或或檢測測，要要對結結果進進行說說明。。12/29/202214樣本拒拒收標標準1）樣樣本上上無病病患標標簽或或病患患標簽簽與檢檢驗申申請單單不符符；2）樣樣本以以不當當的溫溫度、、運送送培養(yǎng)養(yǎng)基及及容器器運送送；3）樣樣本量量不足足、已已被防防腐劑劑固定定或運運送時時間過過長；；4）樣樣本外外漏、、容器器破損損及明明顯受受污染染的標標本；；5）樣樣本的的檢驗驗項目目申請請不適適合進進行；；6）特特殊的的難以以再次次獲得得標本本，與與臨床床醫(yī)師師聯(lián)系系后再再做相相應處處理12/29/202215分析中中質量量控制制12/29/202216分析析中中質質量量控控制制培養(yǎng)養(yǎng)基基主要要試試劑劑自制制生生化化鑒鑒定定試試劑劑染色色液液細菌菌、、酵酵母母菌菌鑒鑒定定系系統(tǒng)統(tǒng)藥物物敏敏感感試試驗驗儀器器設設備備對臨臨床床微微生生物物實實驗驗室室室內內質質控控的的基基本本要要求求只能能滿滿足足分分析析中中對對主主要要培養(yǎng)養(yǎng)基基、、試試劑劑的的質質控控需需要要是試試驗驗室室進進行行相相應應操操作作的應應做做到到或或至至少少要要做做到到12/29/202217培養(yǎng)養(yǎng)基基的的質質量量控控制制12/29/202218培養(yǎng)基基的質質量控控制購買有有質量量保證證標準準的商商品培培養(yǎng)基基，保存制制造商商質量量控制制性能能合格格的證證明文文件購買無無質量量保證證標準準的商商品或或自制制培養(yǎng)養(yǎng)基，，每批批號產產品檢檢測相相應的的性能能，如如無菌菌試驗驗、生生長試試驗、、生長長抑制制試驗驗等12/29/202219最好使使用標標準菌菌ATCC美美國國典型型菌株株保藏藏中心心NCTC英英國國國家典典型菌菌種保保藏中中心12/29/202220培養(yǎng)基基質量量控制制肉眼檢檢查培培養(yǎng)基基的顏顏色、、均一一性、、厚度度、氣氣泡等等無菌試試驗<100塊隨隨機選選取5%的的量，，>100塊則則任意意選取取10塊平平板或或管裝裝培養(yǎng)養(yǎng)基35℃℃，培培養(yǎng)24小小時，，無菌菌生長長為合合格。。生長試試驗生長抑抑制試試驗（（必要要時））12/29/202221常用培培養(yǎng)基基已知知菌生生長試試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預期結果血瓊脂需氧或CO2，24小時化膿鏈球菌19615肺炎鏈球菌6035大腸埃希菌25922生長，?溶血生長，α溶血生長巧克力瓊脂需氧或CO2，48小時淋病奈瑟菌43069流感嗜血桿菌10211生長生長SS瓊脂需氧，24小時鼠傷寒沙門菌14028福氏志賀菌12022糞腸球菌29212大腸埃希菌25922生長生長部分生長或抑制部分生長或抑制12/29/202222常用培培養(yǎng)基基已知知菌生生長試試驗孵育條件已知菌株（ATCC)預期結果麥康凱瓊脂

需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落紅色不分解乳糖，菌落無色透明不生長中國藍瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922福氏志賀菌12022金黃色葡萄球菌25923分解乳糖，菌落藍色不分解乳糖，菌落無色不生長

營養(yǎng)瓊脂需氧，24小時金黃色葡萄球菌25923生長沙保羅瓊脂需氧，24小時大腸埃希菌25922白色假絲酵母菌生長不生長12/29/202223常用生生化反反應培培養(yǎng)基基的質質量控控制標標準生化管陽性質控菌株陰性質控菌株陽性質控結果靛基質大腸埃希菌肺炎克雷伯菌加入吲哚試劑后兩者液面接觸處由無色變?yōu)榧t色枸櫞酸鹽培養(yǎng)基弗勞地枸櫞酸桿菌大腸埃希菌培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{色硝酸鹽培養(yǎng)基大腸埃希菌鮑曼不動桿菌將甲液和乙液等量加入后培養(yǎng)基由淡灰色變?yōu)榧t色

V-P培養(yǎng)基肺炎克雷伯菌大腸埃希菌將甲液和乙液按3：1加入后培養(yǎng)基由無色變?yōu)榧t色質控要要求：：每批批試劑劑使用用前應應使用用相應應陰性和和陽性性反應應（標標準））菌株株做質質控12/29/202224試劑質質量控控制具體要要求：：每批次次或使使用當當天用用相應應的標標準菌菌株作作陰、、陽性性對照照控。。氧化酶酶試驗驗血漿凝凝固酶酶試驗驗過氧化化氫酶酶試驗驗β-內內酰胺胺酶12/29/202225過氧化氫氫酶（H2O2）陽性對照照：金黃黃色葡萄萄球菌ATCC25923陰性對照照：糞腸腸球菌ATCC29212區(qū)別鏈球球菌屬/葡萄球球菌屬，，少見G-菌、、G+菌菌12/29/202226血漿凝固固酶試驗驗陽性對照照：金黃黃色葡萄萄球菌ATCC25923陰性對照照：表皮皮葡萄球球菌ATCC12228區(qū)別金黃黃色葡萄萄球菌/凝固酶酶陰性葡葡萄球菌菌12/29/202227氧化化酶酶陽性性對對照照：：綠綠膿膿假假單單胞胞菌菌ATCC27853陰性性對對照照：：大大腸腸桿桿菌菌ATCC25922氧化化酶酶試試驗驗G-菌菌區(qū)區(qū)別別，，腸桿桿菌菌科科/非非發(fā)發(fā)酵酵菌菌/弧弧菌菌科科/少少見見G-菌菌等等12/29/202228β內內酰酰胺胺酶酶陽性性對對照照：：金金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌ATCC25923陰性性對對照照：：流流感感嗜嗜血血桿桿菌菌ATCC29247判斷斷苛苛養(yǎng)養(yǎng)菌菌流流感感嗜嗜血血桿桿菌菌、、卡卡他他布布蘭蘭漢漢菌菌和和淋淋病病奈奈瑟瑟菌菌對青青霉霉素素、、阿阿莫莫西西林林和和氨氨芐芐西西林林的的敏敏感感性性。12/29/202229染色色液液質質控控革蘭蘭染染色色：：G+:金金黃色葡萄萄球菌ATCC25923G-:大大腸埃希菌菌ATCC25922抗酸染色:陽性:Mube.trculosisATCC25177陰性:大腸腸埃希菌ATCC25922要求:每批批試劑并每每周12/29/202230照片革革蘭氏抗抗酸12/29/202231設備質量控控制新設備的檢檢查，包括括如安全性性、配件、、有無破損損等新設備比對對實驗（與與舊設備比比對或與參參考設備或或方法比對對）設備運行記記錄、維護護保養(yǎng)記錄錄、維修記記錄制定和執(zhí)行行標準操作作規(guī)程培訓操作人人員12/29/202232手工、半自自動、自動動鑒定系統(tǒng)統(tǒng)使用廠家規(guī)規(guī)定的標準準菌株對相相應試劑進進行質控，，每批試劑劑至少1次次使用廠家規(guī)規(guī)定的標準準菌株做質質控，應符符合預期結結果當新儀器啟啟用時、新新批號試劑劑啟用時、、結果出現(xiàn)現(xiàn)問題時都都需要做質質控12/29/202233設備備質質量量控控制制天平平、、pH計計、、離離心心機機、、加加樣樣槍槍、、溫溫度度計計、、生生物物安安全全柜柜、、高高壓壓鍋鍋等等需需進進行行校校準準冷藏藏和和培培養(yǎng)養(yǎng)等等設設備備應應進進行行溫溫度度監(jiān)監(jiān)控控并并記記錄錄12/29/202234藥物物敏敏感感試試驗驗質質量量控控制制紙片片擴擴散散法法：：每每周周至至少少1次次；；更更換換藥藥物物或或培培養(yǎng)養(yǎng)基基時時要要做做質質控控。。常見見菌菌：：大大腸腸埃埃希希菌菌ATCC25922,金金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌25923,綠綠膿膿假假單單胞胞菌菌27853質質控控手工工法法（（稀稀釋釋法法））：：每每周周至至少少1次次，，最最好好每每次次試試驗驗做做控控。。解釋釋：：常常規(guī)規(guī)試試驗驗通通常常使使用用微微量量肉肉湯湯稀稀釋釋法法，，標標準準做做法法是是每每批批試試驗驗標標準準菌菌株株與與臨臨床床分分離離株株同同時時做做。。金金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌29213,大大腸腸埃埃希希菌菌ATCC25922綠綠膿膿假假單單胞胞菌菌27853質質控控12/29/202235藥物物敏敏感感試試驗驗質質量量控控制制藥物物敏敏感感試試驗驗（（儀儀器器法法））使用用廠廠家家規(guī)規(guī)定定的的標標準準菌菌株株對對相相應應試試劑劑進進行行質質控控?每每批批試試劑劑至至少少1次次?當當試試驗驗結結果果異異常常、、不不穩(wěn)穩(wěn)定定，，或或缺缺少少經經驗驗的的人人員員操操作作時時，，應應增增加加質質控控的的頻頻率率。。12/29/202236紙片片擴擴散散法法藥藥敏敏試試驗驗質質量量控控制制條條件件及及質質控控菌菌株株細菌類別質控菌株試驗條件腸桿菌科大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內酰胺類藥/β-內酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h銅綠假單胞及不動桿菌屬銅綠假單胞ATCC27853大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內酰胺類藥/β-內酰胺酶抑制劑）同上葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內酰胺類藥/β-內酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h如測試苯唑西林、甲氧西林時，孵育時間應增至24h12/29/202237紙片擴散散法藥物物敏感試試驗質量量控制連續(xù)質控控檢測1次/天天共30天，獲獲30個個檢測值值如：1、、≤3個個值超出出范圍，，可行每每周一次次質控2、≥4個值超超出范圍圍，繼續(xù)續(xù)做每天天一次質質控3、每當當試劑、、藥敏紙紙片、培培養(yǎng)基改改變時，，應重新新行30天的質質控4、每周周一次質質控時如如某周出出現(xiàn)一次次失控，，則應連連續(xù)做5次質控控。零失失控時作作每周一一次質控控，否則則行連續(xù)續(xù)30次次質控12/29/202238藥物敏感感試驗質質量控制制藥敏紙片片保存：：藥敏紙片片應在有有干燥劑劑的容器器內低溫溫（-20℃℃）保保存。少少量日常常工作用用紙片4℃保保存。藥藥敏紙片片從冰箱箱取出后后，應平平衡至室室溫，從從而減少少暖空氣氣與冷的的紙片接接觸產生生的冷凝凝。紙片片應在有有效期內內使用，，過期應應該丟棄棄。12/29/202239藥物敏感感試驗的的規(guī)則目前，我我國絕大大多數臨臨床微生生物實驗驗室均參參考美國國國家臨臨床實驗驗室標準準委員會會(CLSI)出版的的對各類類細菌進進行常規(guī)規(guī)藥敏試試驗和報報告時的的選藥指指南12/29/202240CLSICLSI(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)-美國臨床床實驗室室標準化化研究所所-已被被我國衛(wèi)衛(wèi)生部指指定為部頒標準準-每年年有新版版12/29/202241實驗室室應該該認真真瀏覽覽CLSIM100內容容，將將新的的推薦薦內容容融入入到實實驗室室的常常規(guī)測測試中中，使使之形形成可可行的的操作作規(guī)范范M100每每年更更新一一次M02,M07每三三年更更新一一次12/29/2022422011年年CLSI主要要變化化修正-腸桿桿菌科科—頭頭孢唑唑啉折折點-腸桿桿菌科科—碳碳青霉霉烯類類折點點-銅綠綠—氨氨曲南南和頭頭孢菌菌素折折點（（再評評價））-附錄錄A——罕見見AST結結果的的核實實增加-表格格—β溶血血鏈球球菌組組可誘誘導克克林霉霉素耐耐藥-厭氧氧菌表表格-腸桿桿菌科科細菌菌天然然耐藥藥12/29/202243腸桿菌菌科-頭孢孢唑林林折點點的修修訂

藥物紙片擴散法（mm）MIC法（ug/ml)SIRSIR頭孢唑林2009>=1815-17<=14<=816>=32頭孢唑林2010---<=12>=4頭孢唑林2011*>=2320-22<=19<=24>=8*頭孢唑唑啉的的新折折點是是建立立在每每8小小時2克的的給藥藥劑量量上12/29/202244腸桿菌科-碳青霉烯烯類折點的的修訂

藥物紙片擴散法（mm）CLSIM100S-19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南--->=2320-22<=19厄他培南>=1916-18<=15>=2320-22<=19美洛培南>=1614-15<=13>=2320-22<=19亞胺培南>=1614-15<=13>=2320-22<=1912/29/202245腸桿菌科-碳青霉烯烯類折點的的修訂

藥物MIC法（ug/ml)CLSIM100S19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南---<=12>=4厄他培南<=24>=8<=0.250.5>=1亞胺培南<=48>=16<=12>=4美洛培南<=48>=16<=12>=412/29/202246分析后質量量控制12/29/202247分析后質量量控制報告的核對對與審核分級報告報告結果的的保存加強與臨床床的溝通交交流12/29/202248報告的核對對與審核在發(fā)出報告告前確保所所有室內質質控在控。。一般檢驗的的審核：檢測項目與與申請單內內容是否一一致。病人人基本信息息、檢測項項目與申請請單內容是是否一致。。細菌的分離離和鑒定流流程是否符符合標準。。鑒定的細菌菌和臨床標標本是否相相符。細菌的耐藥藥情況是否否合理？對于連續(xù)送送檢的患者者，結果是是否有變化化？12/29/202249報告的核核對與審審核異常檢驗驗結果的的審核：：如細菌菌鑒定結結果與藥藥敏實驗驗結果相相矛盾，，與臨床床基本信信息及診診斷有矛矛盾，檢檢驗結果果之間關關系不合合理，此此次結果果與近期期測定結結果不相相符，應應作如下下分析：：對檢驗過過程進行行審核，，如標本本編號是是否正確確、結果果錄入是是否準確確。分析是否否可能存存在標本本采集、、運輸及及保存中中的問題題，并及及時與臨臨床聯(lián)系系；分析是否否可能存存在與治治療及病病程進展展有關的的問題，，并及時時與臨床床聯(lián)系。。如對以上上情況無無法確認認應對標標本進行行必要的的復檢，，所有重重復或特特殊處理理均應在在備注欄欄中標明明。12/29/202250分級報告告一級報告告：血液液骨髓標標本培養(yǎng)養(yǎng)瓶發(fā)現(xiàn)現(xiàn)報警后后，立即即涂片做做革蘭染染色，將將涂片結結果電話話通知