雉科鳥類性別鑒定

題目：一種快速鑒定雉科鳥類的性別

的方法作者蘇浩宇完成日期2012年10月指導(dǎo)老師：彭確昆摘要:在參觀成都市觀鳥月的活動中，我發(fā)現(xiàn)動物園中很多雉科鳥類的顏色十分鮮艷且很相近，很難用肉眼進(jìn)行辨別它們的性別，比如雉鶉、鶴鶉等。尤其是這些鳥類在野外要對他們進(jìn)行性別辨別將是一件很困難的事情。通過文獻(xiàn)查閱，我清楚地了解到雉科鳥類中有很大一部分的動物，它們的雌雄個體的體態(tài)相似，羽毛顏色很接近，它們并不像我們在公園里見到的孔雀和家雞一樣很容易通過顏色和體態(tài)就可以進(jìn)行性別區(qū)分，這一類鳥叫單形態(tài)鳥。這一個問題引起了我極大的興趣，如果不能很好的區(qū)分這些鳥的性別對于我們的保護(hù)人員來說就不能很好的開展繁育保護(hù)工作。因此這一問題值得我們?nèi)ヌ骄?。高中教科書中介紹了關(guān)于鳥類性別的很多知識。我們知道鳥類的性別決定系統(tǒng)為ZW型（其中雄性為ZZ,雌性為ZW）,。在鳥類性別鑒定的歷史中，曾經(jīng)也出現(xiàn)過很多的技術(shù)，但是由于這些基因或者方法不夠穩(wěn)定，因此逐漸被人們舍棄。后來，人們就將目光轉(zhuǎn)移到?jīng)Q定鳥類性別的ZW染色體上，并找到了這樣一個可以很好區(qū)分雌雄個體的基因-CHD基因。CHD基因在鳥類中有兩個同源拷貝CHD-W和CHD-Z，雄雄鳥中只有CHD-Z，而雌性鳥類中同時具有CHD-W和CHD-Z，且CHD-Z基因的長度要小于CHD-W。因此，利用一對CHD基因引物同時去擴(kuò)增鳥類的CHD基因，那么在雄性鳥類中只會得到一個大小長度的基因片段，而在雌鳥中由于具有兩個不同長度的拷貝，再通過電泳將不同長度的CHD基因區(qū)分開，這樣就可以直觀的觀察到二者的差異。本實驗我們根據(jù)已有的CHD基因序列重新設(shè)計了一對CHD基因內(nèi)含子的引物對，這一對引物序列更短，擴(kuò)增效果更好。我們利用該引物對來自成都市動物園的四組（8個）雉科個體的CHD基因進(jìn)行了擴(kuò)增，電泳檢測結(jié)果顯示雄性CHD基因的長度和雌性存在差異，雌雄具有兩條帶大小不一的帶型，而雄性只有一條帶。這一方法能準(zhǔn)確無誤地區(qū)分雉科鳥類的性別，同時也說明CHD基因作為雉科鳥類性別鑒定的分子標(biāo)記是可靠的。這一實驗雖然簡單，但是可以幫我們的鳥類保護(hù)者很好對這些瀕危的鳥類進(jìn)行繁育和保護(hù)，有著非常重要的意義。關(guān)鍵詞：雉科，CHD基因，性別鑒定，PCR1引言去年夏天，我參加了學(xué)校組織的觀鳥愛鳥月活動，和來自成都高校的幾位老師和同學(xué)一起進(jìn)行了為期一個月的成都市鳥類觀察活動。整個活動內(nèi)容非常豐富，不僅讓我對鳥類有更多更新的認(rèn)識，還激勵了我將來積極投身于鳥類的保護(hù)行動中去。在參觀成都市動物園的過程中，我看到了很多非常美麗的鳥類，它們長著美麗的長羽毛，飛行能力不是很好，常常成雙成對結(jié)伴覓食，最后我詢問一道參觀的老師，才得知這些美麗的鳥兒都是屬于雉科的鳥類。對于一個高中生來說，“雉科”這個陌生的名字讓我對它們的身世產(chǎn)生了濃厚的興趣，此外，這些走起路來器宇軒昂的鳥兒似乎在向我們宣示“雙鳥傍地走，安能便是我雌雄？”這些長相酷似的鳥兒到底誰是雄性誰是雌性呢？帶著這些疑問，我決定去借助電子圖書館一查究竟。隨后，我登錄到四川大學(xué)電子圖書館利用這里豐富的電子資源查到了很多關(guān)于雉科鳥兒的知識，并著手找到一種能快速準(zhǔn)確鑒定這些鳥兒性別的方法。通過查閱文獻(xiàn)，我得知生物學(xué)家按照親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，將生物分為界、門、綱、目、科、屬、種這些不同的類，雉科其實是鳥類下面的一級分類單元。雉科在生物分類學(xué)上是鳥綱中的雞形目中的一個科，多達(dá)26屬166個物種。我國是世界上雉科鳥類最多的國家，擁有90%的雉科鳥類物種。在中國，特別是中國的西南地區(qū)種類非常豐富，擁有世界上雉科近1/3的種類，其中又有大約1/3是我國的特產(chǎn)種，有“雉類的王國”之稱。中國的雉科中有超過一半的種類是國家重點(diǎn)保護(hù)野生動物。雉科又有分為雉類和鶉類，雉類通常顏色較為鮮艷，且雌雄個體的顏色差異很大，通常是雄性的顏色較為鮮艷，而雌雄的顏色則較為暗淡。雉類中的鳥最為常見的有家雞，孔雀等，它們雌雄個體的顏色通?？梢酝ㄟ^肉眼就可以辨別。而鶉類中的很多鳥兒，比如鶴鶉、鷓鴣（圖1-1）等，它們雌雄個體羽毛的顏色都較為暗淡，差異很小，很難通過肉眼的方法鑒別它們的性別。此外，有一些雉科鳥類的成鳥的性別很容易判定，比如可以通過羽毛的顏色或個體大小來區(qū)分。但是對于幼鳥，作為性別標(biāo)記的成年鳥類羽色特征還未出現(xiàn)，因此如果保育員或者研究者們要對它們進(jìn)行標(biāo)記進(jìn)行人工性別選擇等就會帶來很大困難［1］同樣，性別問題也給從事鳥類研究的科研人員帶來了麻煩，在對鳥類性別劃分理論以及鳥類進(jìn)化理論等的研究中，由于雌雄個體在行為和生理上是有差別的，性別不能準(zhǔn)確判定，就會得出錯誤的研究結(jié)論。無論是為了人工繁育、保存物種還是科研,尤其是隨著一些野生珍稀鳥類的不斷滅絕，鳥類的性別鑒定技術(shù)的研究和建立都迫在眉睫。因此，為方便動物園的工作人員以后在雉科鳥類育種的時候進(jìn)行有效的鑒定和篩選，為我們的雉科鳥類繁育和保護(hù)貢獻(xiàn)自己的一點(diǎn)微薄之力，我決定借助于現(xiàn)在生物學(xué)的知識找到一種快速有效的鑒定方法。在四川大學(xué)的電子圖書館，我下載了很多關(guān)于雉科鳥類的文章，我發(fā)現(xiàn)其實關(guān)于鳥類性別鑒定的方法在上個世界90年代才陸續(xù)出現(xiàn)，這些方法鑒定地主要對象是平胸目鳥類，比如鴕鳥、白鸛等這些動物，而專門針對雉科鳥類性別堅定地方法并沒有。在鳥類性別鑒定的分子手段出現(xiàn)之前，外科手術(shù)，染色體等常作為單形態(tài)鳥類的性別鑒定的手段。但是這些手段常常由于對觀察對象要求高以及耗時耗力等因素，已經(jīng)逐漸被淘汰。比如，鳥類生殖器官通常位于體內(nèi)，要想?yún)^(qū)別它們性器官必須要捕獲它們才能進(jìn)行細(xì)致的鑒別，因此很多時候一些鳥類，尤其是野生鳥類常會受到驚嚇，從而影響它們的生活習(xí)性，甚至繁育，對鳥兒來說是一種傷害性的手段。此外，比如我們知道雌雄鳥類的性染色體的形態(tài)也有差別，我們可以將鳥兒的細(xì)胞染色體進(jìn)行區(qū)分，找到性染色體的差異也可以鑒定性別，但是這種方法需要我們從鳥的身上采集細(xì)胞，然后培養(yǎng)制作染色體標(biāo)本，并在顯微鏡下進(jìn)行觀察。很顯然，這種方法耗時耗力，且會給鳥的身體造成傷害，不能最活體鳥類進(jìn)行。中學(xué)生物教科書中有專門介紹鳥類的性別的內(nèi)容。鳥類的性別決定型和哺乳動物人是不一樣的，鳥類的性別決定是ZW型，性染色體有Z和W兩種，雄性為ZZ,雌性為ZW。因此，鳥類的性別差異就存在于性染色體上，性染色體上的基因就是我們?nèi)^(qū)分性別的出發(fā)點(diǎn)。在上個世紀(jì)，一些科學(xué)家在鳥類的性染色體上發(fā)現(xiàn)了一個在雌雄鳥類中有差異的基因，那就是CHD基因。CHD基因?qū)嶋H上是一個在染色質(zhì)轉(zhuǎn)變成染色體過程中起作用的一個蛋白質(zhì)編碼基因，它可以幫助細(xì)胞在分裂末期將染色質(zhì)包裝成染色體。CHD基因在鳥類中有兩個同源拷貝CHD-W和CHD-Z，雄雄鳥中只有CHD-Z，而雌性鳥類中同時具有CHD-W和CHD-Z，且CHD-Z基因的長度要小于CHD-W。因此，利用一對CHD基因引物同時去擴(kuò)增鳥類的CHD基因，那么在雄性鳥類中只會得到一個大小長度的基因片段，而在雌鳥中由于具有兩個不同長度的拷貝，再通過電泳將不同長度的CHD基因區(qū)分開，這樣就可以直觀的觀察到二者的差異。Griffiths等人在1996[3]設(shè)計了一對P2(5‘-TCTGCATCGCTAAATCCTTT-3’)和P3(5‘-AGATATTCCGGATCTGATAGTGA-3，）引物對擴(kuò)增了CHD-W和CHD-Z的部分片段，結(jié)果顯示擴(kuò)增產(chǎn)物大小是相同的，但他們發(fā)現(xiàn)CHD-W擴(kuò)增片斷有一個Hae酶切位點(diǎn),而CHD-Z卻沒有，于是，在PCR之后先用Hae處理，這樣雄性仍為一條帶，而雌性為45bp和65bp兩條帶，而且成功地對珍稀鳥類金剛鸚鵡⑷進(jìn)行了性別鑒定。四川大學(xué)的周鑫等［5］曾報導(dǎo)過利用CHD基因?qū)λ拇豉嚨男詣e鑒定，他們利用通用引物2550F/2718R擴(kuò)增四川雉鶉基因組CHD基因，其中雄性個體擴(kuò)增出約500bp的條帶，而雌性個體擴(kuò)增出500bp和750bp兩條條帶，從而可以鑒別出四川雉鶉的性別。然而，該研究僅探索了有限數(shù)量種群——四川雉鶉的性別鑒定方法，且擴(kuò)增出的片段較長，帶型不夠穩(wěn)定，尤其是雌性的兩條帶通產(chǎn)不能很好的同時顯示，不適合于DNA樣品質(zhì)量較差時的情況，如通過非損傷性取樣所獲得的DNA。本研究我在之前的研究基礎(chǔ)上，我從NCBI基因庫中找到了CHD基因的序列，并通過軟件參考前人設(shè)計的引物在CHD基因的中設(shè)計了一對擴(kuò)增片段更為短的引物，這一對引物橫跨了雌雄雉科鳥類CHD基因變異區(qū)的位置，不用經(jīng)過酶切直接通過電泳就可以區(qū)分開片段的大小。且片段的長度只有390bp左右，片段的擴(kuò)增效果更好，結(jié)果穩(wěn)定。在10個小時之內(nèi)可以快速準(zhǔn)確的鑒定出雉科鳥類的性別。這一方法也為動物園以及野外雉科鳥類保護(hù)工作者們提供了很好的便利，方便它們對雉科鳥類繁育和保護(hù)工作的開展。2材料和方法2.1材料本實驗所用的8個雉科鳥的血液樣本取自成都市動物園，并加入了ACD抗凝劑。剩余新鮮血液保存于液氮中。4種雉科鳥分別是白冠長尾雉(1^,1早)，紅腹錦雞(1^，1早)，勺雞(1&1早)和白馬雞(1^，1早)。2.2方法2.2.1血液基因組DNA的提?、湃〖s30^l雞血液樣品，放入1.5ml的離心管中；加入500|iL裂解緩沖液(10mmol/LTris-Cl；0.1mol/LEDTA；0.5%SDS；pH8.0)，加入蛋白酶K至終濃度100pg/ml，混合均勻；55oC水浴過夜，同時慢速振蕩，直到消化液變清亮為止；加入與消化液等體積的飽和酚，緩慢顛倒10min直至兩相混合成乳濁液，室溫13,200rpm離心10min，用小槍頭緩慢將黏滯的上清液移至另一離心管；加上清等體積的苯酚/氯仿異戊醇(25:24:1)，緩慢顛倒10min直至兩相混合成乳濁液，室溫13,200rpm離心10min，轉(zhuǎn)移上清；加上清等體積的氯仿，上下顛倒數(shù)分鐘，13,200rpm離心15min，轉(zhuǎn)移上清；加上清體積2倍的冰乙醇，1/5體積醋酸銨，上下顛倒數(shù)分鐘，然后-20oC放置30min；⑼12000rpm5min，用75%的乙醇洗滌沉淀2次，風(fēng)干，加適量的MiniQ溶解沉淀。2.2.2CHD基因引物的設(shè)計我們比對了已知的雉科鳥類的兩種Z特異及W特異的同源片段，根據(jù)兩端的保守序列設(shè)計出一對新的通用性強(qiáng)的引物對—CHD-L(5’-CGYCAGTTTCCYTTYCAG-3’Y=C/T)/CHD-R(5’-CCTTTTATTGATCCATCAAGTC-3’)。如圖2-1所示，CHD-L引物位于2550F引物的下游95bp處，CHD-R引物位于2718R引物的上游35bp處。CHD-L/CHD-R的擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別為約

465bp和約319bp。圖2-1引物設(shè)計模式圖2.2.3PCR擴(kuò)增CHD基因反應(yīng)體系為20四L,其中2四L10Xbuffer,0.2MmdNTPs,1UTag酶，10ng基因組DNA，引物各0.01mM。反應(yīng)條件為94°C,4min；34個循環(huán)包括94°C,30s；54C,45s；72C,45s；最終72C,延伸5min。PCR反應(yīng)在ThermalPCR上進(jìn)行。PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物直接用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，并根據(jù)產(chǎn)物的情況判定樣品的性別。3結(jié)果3.1基因組DNA的提取圖3-1基因組DNA檢測結(jié)果1-8號基因組DNA以依次為白冠長尾雉（1^,1早），紅腹錦雞（13,1早），勺雞（1^，1早）和白馬雞（1^，1早）。DNA質(zhì)量較好，無降解，為下一步CHD基因擴(kuò)增做好了準(zhǔn)備。3.2PCR產(chǎn)物電泳鑒定性別結(jié)果3-2CHD卒因部分廠|必01-8號DNA樣本代表8個雉科鳥類個體，依次分別是白冠長尾雉^，白冠長尾雉早；紅腹錦雞3,紅腹錦雞早；勺雞3,勺雞早；和白馬雞3,白馬雞早。不難看出，該引物能夠有效地鑒定所有樣品的性別，擴(kuò)增的產(chǎn)物大小分別為465bp和319bp，在電泳圖中表現(xiàn)為雄性只有一條465bp大小的條帶，如圖3-2中1,3,5,7四個個體。而雌性則有兩條長度分別為?465bp和?319bp的條帶，如圖3-2中的2,4,6,8四個個體，故根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳可以方便地分辨出樣品所屬個體的性別。所以的結(jié)果我們在同樣的條件下重復(fù)了三次，且結(jié)果都非常的穩(wěn)定和準(zhǔn)確。4討論4.1雉科鳥類性別鑒定的必要性雉科鳥類在世界上所有的鳥類中占有重要的一席之地，它們數(shù)量龐大，且與人類的關(guān)系極為密切。很多雉科鳥類已經(jīng)跟人們的日常生活密切聯(lián)系在一起。但是雉科比如原產(chǎn)于馬來西亞的紅原雞經(jīng)過人類長期的馴養(yǎng)已經(jīng)演化成了家雞，他們的肉質(zhì)和蛋為嫣然已經(jīng)成為人們生活的必需品。此外，還有鶴鶉等一些鶉類的鳥，它們也已經(jīng)逐步的被人類所馴化，所產(chǎn)的蛋可以為人們的生活提供蛋白質(zhì)。在我國四川省和西藏自治區(qū)的一些地方，有一種神圣的鳥兒叫做“四川雉鶉”，數(shù)千年來它們和我們藏族人們生活在一起繁衍生息，與藏族同胞的生活已經(jīng)密不可分。由此可見，雉科鳥類的動物已經(jīng)成為了人類的朋友，保護(hù)雉科這些珍貴的鳥兒就是保護(hù)我們自己。但是我們發(fā)現(xiàn)上面提到的兩種雉科鳥，鶴鶉和雉鶉，它們的雌雄成體的羽毛顏色非常接近，體太也很相似，因此很難僅從外表對它們進(jìn)行辨別。尤其是在動物園或者保護(hù)區(qū)，當(dāng)我們對一些雉科鳥兒進(jìn)行保護(hù)性繁育時，我們會有選擇性的增加雌性的個體，因此對雛鳥進(jìn)行有效的性別鑒定是由必要的。因此，如何準(zhǔn)確地進(jìn)行性別鑒定和篩選無論對于我們?nèi)斯わ曫B(yǎng)的還是野外保護(hù)的雉科鳥類來說都是有著重要的意義。4.2PCR鑒定方法在雉科鳥類性別鑒定中的重要作用雉科鳥類的物種非常豐富，很多鳥為單形態(tài)鳥，即成體的雄性和雌性的外觀形態(tài)幾乎完全一樣，加之他們的顏色異常的艷麗，因此很難用肉眼從外觀直接分辨雌雄，這給野外觀察以及人工配種鑒別帶來了一定的困難。尤其是人工飼養(yǎng)場所如動物園、飼養(yǎng)場等在進(jìn)行人工配種或者繁殖的時候，往往要篩選一定的優(yōu)勢雄性個體或者雌性個體作為種鳥，但是僅僅依靠肉眼的鑒別是不可靠的，因此其他的性別鑒定方法如外科手術(shù)，染色體，PCR等方法就具有更高的準(zhǔn)確性。但是，外科手術(shù)以及染色體鑒定方法［6］多壞死非常耗時耗力的工作，而且這兩種檢測方法會對鳥兒身體造成傷害，比如染色體鑒定，通常會抽取鳥兒的血液，而外科手術(shù)更是會對鳥而的身體造成極大的創(chuàng)傷，對于活體的標(biāo)本來說是一種極不合理的方法，往往會是鳥兒致殘、致傷甚至失去生育能力。因此，這些方法已經(jīng)逐步被淘汰，取而代之的是一些更為簡便有效的方法。PCR技術(shù)可以說是20世紀(jì)分子生物學(xué)最偉大的發(fā)明，它使得人類在體外進(jìn)行DNA的復(fù)制成為了可能。到目前為止，這一項技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟，且全世界廣泛使用。PCR鑒定動物的性別在上個世紀(jì)90年代已經(jīng)實現(xiàn)，后來逐步發(fā)展到了鳥類的性別鑒定中來。這種具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)：第一，實驗操作簡便，耗時很短。PCR的操作通常在普通分子實驗中就可以進(jìn)行，所用的試劑在生物公司都可以買到，且價格非常低，每一個樣本PCR的成本只有2-3元，所有的加樣和結(jié)果檢測工作只需要3-4個小時就可以順利完；第二，靈敏度高，重復(fù)性好。PCR的靈敏度非常高，只需痕量的DNA就可以在體外完成復(fù)制，且PCR條件非常成熟，所選基因在長期的進(jìn)化過程中比較保守，擴(kuò)增比較穩(wěn)定，在體外可以任意重復(fù)；第三，對樣本的需求極少，可以減少損傷性取樣°PCR所使用的DNA模板通常只有幾十個納克，甚至是非常痕量的DNA都可以作為擴(kuò)展擴(kuò)增的模板，比如說羽毛中的DNA以及糞便中的DNA等，因此我們通常不需要對鳥兒進(jìn)行抽血或者去組織，就可以完成性別的鑒定，這對于鳥兒的身體來說將傷害降到了最低。因此，借助PCR技術(shù)可以大大簡化雉科鳥類的性別鑒定。4.3CHD基因在雉科鳥類性別鑒定中的優(yōu)勢在鳥類性別鑒定的歷史中，曾經(jīng)也出現(xiàn)過很多的技術(shù)，比如RFLP（限制性酶切多態(tài)性）、ATP5A1基因等等［7］。但是由于這些基因或者方法不夠穩(wěn)定，因此在進(jìn)行擴(kuò)增的時候不能很好的區(qū)分雌雄個體，因此逐漸被人們舍棄。后來，人們就將目光轉(zhuǎn)移到?jīng)Q定鳥類性別的ZW染色體上，并找到了這樣一個可以很好區(qū)分雌雄個體的基因。Ellegren［8］首次從鳥類的W染色體上克隆到了CHD基因，它叫做染色體螺旋蛋白基因，它的功能是負(fù)責(zé)染色體的轉(zhuǎn)錄活動。CHD基因在鳥類中有兩個同源拷貝CHD-W和CHD-Z，雄雄鳥中只有CHD-Z，而雌性鳥類中同時具有CHD-W和CHD-Z，且CHD-Z基因的長度要小于CHD-W。因此，利用一對CHD基因引物同時去擴(kuò)增鳥類的CHD基因，那么在雄性鳥類中只會得到一個大小長度的基因片段，而在雌鳥中由于具有兩個不同長度的拷貝，再通過電泳將不同長度的CHD基因區(qū)分開，這樣就可以直觀的觀察到二者的差異。在鳥類CHD基因發(fā)現(xiàn)至今短暫的十年里，CHD基因性別鑒定已經(jīng)十分廣泛的應(yīng)用于在各種鳥類，并且已經(jīng)涉足于多項研究領(lǐng)域。從最初的對不同個體或不同種類的鳥類進(jìn)行性別鑒定，已經(jīng)向著更加深入、更加細(xì)微的方向發(fā)展。由于鳥類后代（雛鳥）的性比是此種鳥的性比最重要的決定因素，因此近些年，通過CHD基因?qū)B類后代的性比進(jìn)行研究已經(jīng)炙手可熱，許多學(xué)者圍繞著各種可能影響鳥類后代的性比及分化因素進(jìn)行了大量研究。當(dāng)然，目前CHD基因性別鑒定體系還不夠完善，有很多方面有待于進(jìn)一步發(fā)展，如還需另外開發(fā)一些目標(biāo)片段、設(shè)計一些新的引物以適用于一些特殊物種等。本實驗我們利用已知的通用引物擴(kuò)增了一種鳥類的CHD基因部分序列并測序，根據(jù)此序列我們自行設(shè)計了一個更短的引物對，擴(kuò)增長度為465bp，較之前的通用引物，該引物對具有以下的特點(diǎn)：第一，該引物對擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物更短，只有465bp。在PCR擴(kuò)增過程中，產(chǎn)物越小，擴(kuò)增效率越高，這樣就極大的提高了產(chǎn)物的濃度，同時也提高了鑒定的準(zhǔn)確性。其次，該引物的退火溫度較高，擴(kuò)增的特異性較高。相比起之前的通用引物對而言，此引物對的退火溫度更高。在之前的通用引物檢測中，我們發(fā)現(xiàn)利用之前的通用引物對在擴(kuò)增雉科鳥類的CHD基因時，出現(xiàn)了太多的非特異性條帶，且很難通過提高溫度去除，這給我們的電泳檢測帶來了一定的干擾。而新設(shè)計的引物對特異性高，在測試的十幾個個體中都沒有出現(xiàn)非特異性的條帶，DNA樣本檢測條帶非常單一，清晰可辨。此外，CHD-W和CHD-Z這兩條帶的亮度都較之前的擴(kuò)增有所提高，很容易區(qū)分。這些都充分說明我們新設(shè)計的引物對具有更好的特異性和更高的擴(kuò)增效率。本實驗所鑒定的雉科鳥類的個體全部來自成都市動物園，且我們所鑒定的個體都是單形態(tài)鳥，雌雄個體的外觀形態(tài)幾乎一模一樣，很難從外觀來鑒定它們的性別。此前已有專業(yè)的飼養(yǎng)員通過其他途徑對這些鳥進(jìn)行了性別的鑒定，即在已知的情況下，我們利用自身設(shè)計的新引物對它們進(jìn)行了分子水平的二次鑒定，其鑒定的結(jié)果完全和之前的鑒定結(jié)果一致。這也充分說明，我們的實驗方案（引物）完全可以用作動物園鳥類性別鑒定的手段之一，其結(jié)果真實可靠。同時，我們也希望其他研究者也可以試圖將這一方法推廣到其他鳥類的鑒定之中，為其他鳥類的性別鑒定帶來便捷。4.4雉科鳥類性別鑒定的意義雉科鳥類是人類的朋友。它們是一類非常美麗和重要的鳥類，它們已經(jīng)和人們的生活密不可分了，正是因為它們的存在我們的生活才會如此的豐富多彩！如果沒有它們，我們生活中就沒有提如此鮮美的肉質(zhì)和蛋；如果沒有它們，公園里和保護(hù)區(qū)里就沒有了它們的美麗身影；如果沒有了它們，我們的生態(tài)系統(tǒng)就會遭到其他害蟲或者動物的破壞，我們的家園就不會如此安寧。有了性別鑒定的方法，我們的保育員們利用該技術(shù)可以進(jìn)行有效的雉科鳥類繁殖，增加它們的數(shù)量，改善它們的品種，對于一些瀕危的物種可以及時有效的進(jìn)行保護(hù)，讓它們又重新進(jìn)入人們的視野。所以我們研究工作雖然很簡單，但是對于雉科鳥類的保護(hù)有著重要的意義。5本實驗創(chuàng)新點(diǎn)：