廣藥藥物分析復(fù)習(xí)概要(提煉版)1下載

PAGEPAGE411.藥典概況現(xiàn)行《中國(guó)藥典》：2010版（第9版）一部：收載中藥材及飲片、植物油脂和提取物、成方制劑等；二部：兩部分，第一部分收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射藥品；第二部分收載藥用輔料；三部：收載生物制品2.藥典組成：凡例，正文，附錄，索引3.各國(guó)藥典簡(jiǎn)寫美國(guó)藥典：USP；英國(guó)藥典：BP；歐洲藥典：EP；日本藥局方：JP4.藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的原則（一）安全有效性（二）先進(jìn)性（三）規(guī)范性（四）針對(duì)性5.鑒別法選用原則（1）方法應(yīng)有一定的專屬性、靈敏性，且便于推廣。（2）化學(xué)法與儀器法相結(jié)合。（3）首選藥典中收載的方法。6.選擇含量測(cè)定方法的基本原則（1）原料藥首選容量分析法。（2）制劑首選色譜法。（3）酶類藥物首選酶法，抗生素類藥物首選 HPLC法或微生物檢定法，放射性藥品首選放射性藥品檢定法。（4）新藥應(yīng)選用原理不同的兩種方法進(jìn)行對(duì)照性測(cè)定。7.藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范GLP藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范GMP藥物臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范GCP藥物經(jīng)營(yíng)質(zhì)量管理規(guī)范GSP中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范GAP8.藥品檢驗(yàn)工作的基本程序：藥品檢驗(yàn)工作的基本程序一般為：取樣、性狀觀察、樣品制備、物理常數(shù)測(cè)定、鑒別、檢查、含量測(cè)定、檢驗(yàn)報(bào)告。9.鑒別方法：（1）化學(xué)鑒別方法化學(xué)鑒別法操作簡(jiǎn)便、快速，實(shí)驗(yàn)成本低，應(yīng)用廣，有一定的專屬性和靈敏度，但專屬性比儀器分析法差。（2）光譜鑒別法a.紫外光譜法本法有一定專屬性，應(yīng)用范圍廣、使用頻率高。同時(shí)，紫外-可見分光光度計(jì)的普及率高，操作也比較簡(jiǎn)便，在藥檢工作中易于為大家接受。b.紅外光譜鑒別法藥物的紅外光譜能反映藥物分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，具有專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，是驗(yàn)證已知藥物的有效方法，應(yīng)用較廣，主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，亦可用于制劑的鑒別。用本法鑒別藥物時(shí)，中國(guó)藥典要求按指定條件繪制供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜，與《藥品紅外光譜集》中的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)比，如果峰位、峰形、相對(duì)強(qiáng)度都一致時(shí)，即為同一種藥物。（3）色譜鑒別法利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。（4）生物學(xué)方法是利用微生物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物進(jìn)行鑒別，主要用于抗生素和生化藥物的鑒別10.化學(xué)原料藥分析樣品的制備方法通?？煞譃槿箢悾褐苯尤芙夥?，化學(xué)分解法，有機(jī)破壞法。11.氧瓶燃燒法：適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。（1）本法是將分子中含有鹵素或硫等元素的有機(jī)藥物在充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒產(chǎn)物吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校俨捎眠m宜的分析方法來(lái)檢查或測(cè)定鹵素或硫等元素的含量。（2）鉑絲燃燒時(shí)起催化作用。（3）正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能。測(cè)定含氟有機(jī)藥物時(shí)，用石英制燃燒瓶（4）燃燒分解操作a.燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，并將瓶口用水濕潤(rùn)小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。b.樣品的準(zhǔn)備取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。c.樣品的燃燒點(diǎn)燃濾紙包尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃燒完畢（應(yīng)無(wú)黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗(yàn)。按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行檢查或測(cè)定。附：吸收液的選擇：氟：水氯：NaOH溶液溴：H2O2-NaOH或NaOH-硫酸肼飽和溶液碘：NaOH－硫酸肼飽和溶液硫：NaOH或H2O2硒：硝酸溶液 12.生物樣品的種類與制備選取樣品的原則：1.應(yīng)根據(jù)不同的分析目的與要求進(jìn)行選?。?.所取樣品應(yīng)能夠正確反映藥物濃度與效應(yīng)之間的關(guān)系；3.樣品應(yīng)易于獲得，便于處理、分析。（一）血樣取血方式—分布均勻后取樣血樣的主要成分區(qū)別成分血漿血清全血纖維蛋白原有無(wú)有血細(xì)胞無(wú)無(wú)有血樣的保存血樣采集后應(yīng)及時(shí)分離血漿或血清，最好馬上分析；短期保存時(shí)應(yīng)置于冰箱冷藏室（4℃）中;長(zhǎng)期保存時(shí)應(yīng)置于冰箱冷凍室（-20℃）中（二）蛋白質(zhì)的去除1.目的使結(jié)合型藥物釋放出來(lái)預(yù)防提取過(guò)程中蛋白質(zhì)的干擾保護(hù)儀器性能，延長(zhǎng)使用期限2.方法（1）加熱法（2）加入脫水劑法（飽和中性鹽溶液，與水混溶的有機(jī)劑）（3）加入蛋白沉淀劑法（強(qiáng)酸類沉淀劑，重金屬沉淀劑）（4）酶解法（5）綴合物水解法（6）萃取法13.氣相與高效液相色譜鑒別法使用氣相色譜儀或高效液相色譜儀測(cè)定。一般采用對(duì)照品比較法，規(guī)定按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。要求供試品和對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）色譜峰的保留時(shí)間（tR）應(yīng)一致。含量測(cè)定方法為內(nèi)標(biāo)法時(shí)，可要求供試品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖中藥物峰的保留時(shí)間與內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間的比值應(yīng)相同。特點(diǎn)：1.靈敏度高、專屬性強(qiáng)、分析速度快。2.操作時(shí)應(yīng)按各品種項(xiàng)下要求對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，使理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子符合要求。3.氣相色譜法適合于高溫下穩(wěn)定、容易氣化藥物的鑒別。4.高效液相色譜法不受藥物氣化和熱穩(wěn)定性的限制，適合于大多數(shù)藥物的鑒別。14.藥品只有兩個(gè)等級(jí)：合格或不合格。15.百分之幾：無(wú)危害雜質(zhì)（%）百萬(wàn)分之幾：危害人體健康的雜質(zhì)，如砷鹽、重金屬等16、雜質(zhì)限量檢查方法1.對(duì)照法（關(guān)鍵要注意平行原則。）特點(diǎn)：需要對(duì)照品，不需知雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量2.靈敏度法（直接在供試品中加入試劑，在一定條件下反應(yīng)，觀察有無(wú)正反應(yīng)出現(xiàn)。）特點(diǎn)：不需對(duì)照物質(zhì)。3.比較法特點(diǎn)：可準(zhǔn)確測(cè)雜質(zhì)含量，不需對(duì)照17.一般雜質(zhì)及其檢查方法一、氯化物檢查法（一）原理：Cl-樣+Ag+→AgCl↓白Cl-標(biāo)+Ag+→AgCl↓白比濁（二）條件1.比色范圍標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液：10ug/ml的Cl-在測(cè)定條件下，氯化物的濃度以50ml中含50~80ug的Cl-為合適，此范圍內(nèi)氯化物所顯渾濁梯度明顯，便于比較；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5~8ml。2.硝酸酸性（1）避免弱酸鹽（碳酸銀磷酸銀）或氧化物即氧化銀的生成（2）加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁3.試劑硝酸銀4.供試液和對(duì)照液稀釋后，再加硝酸銀溶液，使生成白色渾濁而不是白色沉淀5.避光、暗處放置5分鐘后比濁，避免光線使單質(zhì)銀析出（三）干擾及排除1.溶液不澄清以HNO3溶液洗凈濾紙中的Cl-，再以濾紙過(guò)濾供試品溶液。2.溶液有顏色（1）外消色法利用藥物的化學(xué)性質(zhì)外加試劑使溶液的顏色消除。（2）內(nèi)消色法（倍量法）書本P132如：枸櫞酸鐵銨中氯化物的檢查3.藥物與硝酸銀反應(yīng)（如碘化物中Cl-的檢查）二、硫酸鹽檢查法（一）原理：SO42-樣+Ba2+→BaSO4↓白SO42-標(biāo)+Ba2+→BaSO4↓白比濁（二）條件1.比色范圍標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：0.1mg/ml的SO42-，在測(cè)定條件下，硫酸根的濃度以50ml中含0.1~0.5mg為合適，此范圍內(nèi)所顯渾濁梯度明顯，便于比較；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1~5ml。2.鹽酸酸性以50ml中含稀鹽酸2ml，PH值為1為宜（1）避免碳酸鋇與磷酸鋇生成（2）酸度影響硫酸鋇的溶解度，從而影響靈敏度3.沉淀劑25%的氯化鋇溶液，稀釋后加入沉淀劑，立即充分搖勻，保證生成為白色渾濁而非沉淀。4.比色方法在黑色背景上，從上向下觀察，比較濁度。（三）干擾及排除1.溶液不澄清以HCl溶液洗凈濾紙中的SO42-，再以濾紙過(guò)濾供試品溶液2.溶液有顏色（處理同氯化物）三、鐵鹽檢查法1.原理：鐵鹽在鹽酸酸性中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子。Fe3++6SCN-HCl[Fe(SCN)6]3-2.條件：標(biāo)準(zhǔn)溶液：FeNH4(SO4)2·12H2O（10μgFe／ml）加硫酸防止水解在測(cè)定條件下，50ml溶液中含有10~50ug的Fe3+時(shí)顯色梯度明顯，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液1~5ml。（2）顯色劑：過(guò)量硫氰酸銨（3）鹽酸酸性防止水解，以50mL溶液中含4ml稀鹽酸為宜。（4）比色方法在白色背景上，從上向下觀察，比較顏色。5）過(guò)硫酸銨氧化Fe2+為Fe3+防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色4.干擾及其排除（1）供試液若與對(duì)照液色調(diào)不一致，或生成物顏色淺不便比較時(shí)，可用正丁醇將生成物提取后比較。（2）具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，需經(jīng)700～800℃熾灼破壞，使鐵鹽成三氧化二鐵處理后再依法檢查。（3）干擾離子的影響三、硫酸鹽檢查法（一）原理：SO42-樣+Ba2+→BaSO4↓白SO42-標(biāo)+Ba2+→BaSO4↓白比濁（二）條件標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液：0.1mg/ml的SO42-在測(cè)定條件下，硫酸根的濃度以50ml中含0.1~0.5mg為合適，此范圍內(nèi)所顯渾濁梯度明顯，便于比較；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1~5ml。2.鹽酸酸性以50ml中含稀鹽酸2ml，PH值為1為宜（1）避免碳酸鋇與磷酸鋇生成（2）酸度影響硫酸鋇的溶解度，從而影響靈敏度3.沉淀劑25%的氯化鋇溶液稀釋后加入沉淀劑，立即充分搖勻，保證生成為白色渾濁而非沉淀。4.比色方法在黑色背景上，從上向下觀察，比較濁度。（三）干擾及排除1.溶液不澄清以HCl溶液洗凈濾紙中的SO42-，再以濾紙過(guò)濾供試品溶液2.溶液有顏色（處理同氯化物）四、重金屬檢查法原理：Pb2++S2-——PbS↓重金屬檢查法（Ch.P.）：共三法（一）第一法（硫代乙酰胺法）取藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加醋酸鹽緩沖液（PH3.5）2ml與水適量使成25ml，加硫代乙酰胺試液2ml，放置2分鐘后，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛同法制成的對(duì)照液比較。檢查重金屬，除供試管、對(duì)照管外、還應(yīng)有監(jiān)控管同時(shí)進(jìn)行比較。監(jiān)控管：供試品+標(biāo)準(zhǔn)鉛比較方法：供試管不得深于對(duì)照管，監(jiān)控管應(yīng)深于或等于對(duì)照管。條件：1.PH3.5CH3CSNH2+H2O——CH3CONH2+H2S；H2S+Pb2+——PbS↓+2H+酸度大：硫化鉛呈色變淺甚至不呈色酸度小：不易生成硫化氫2.標(biāo)準(zhǔn)鉛硝酸鉛：10ug/ml的Pb3.比色范圍27ml中含10~20ug的Pb，顯色梯度最為明顯；相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鉛1~2ml。4.干擾及排除：1.樣品有色（1）外消色法：對(duì)照液中加稀焦糖溶液調(diào)色（2）內(nèi)消色法：供試液等分為兩份；一份加硫代乙酰胺，過(guò)濾，加標(biāo)準(zhǔn)鉛，為對(duì)照液2.微量高鐵鹽存在（在弱酸性溶液中可氧化硫化氫析出硫，產(chǎn)生渾濁影響比色）可加抗壞血酸或鹽酸羥胺，使高鐵離子還原為亞鐵離子。3.藥物本身可生成不溶硫化物（二）第二法（熾灼殘?jiān)ǎ┯糜谠谒?、乙醇中難溶，或能與重金屬離子形成配位化合物的有機(jī)藥物。操作步驟：1.碳化2.硫酸處理3.高溫灰化溫度越高，重金屬損失越多，一般控制500~600oC即可使完全灰化。4.熾灼殘?jiān)酉跛峒訜崽幚硎褂袡C(jī)物進(jìn)一步分解破壞完全5.蒸干除盡氧化氮，防止亞硝酸氧化硫化氫析出硫6.加鹽酸，使樣品成為氯化物7.水浴加熱除去鹽酸，加水溶解后以氨水調(diào)PH至對(duì)酚酞顯中性，加醋酸鹽緩沖液8.依一法檢查注意：對(duì)照溶液要平行操作含鈉鹽或氟的有機(jī)物在熾灼時(shí)可腐蝕坩堝而引入重金屬，應(yīng)改用鉑坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿。（三）第三法（硫化鈉法）三種方法的比較：

PH顯色劑適用范圍第一法3~3.5硫代乙酰胺溶于水、稀酸乙醇藥物第二法3~3.5硫代乙酰胺不溶于水、稀酸的藥物第三法NaOH硫化鈉溶于堿的藥物五、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法1.原理：金屬鋅與酸作用生成新生態(tài)的氫，與藥物中的微量砷鹽生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，判斷藥物中砷鹽的含量。條件：（1）比色范圍0.002mgAs3＋/33ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：As2O3（1μgAs/ml）藥典規(guī)定用2ml制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑。（2）鹽酸酸性HCl（5mlHCl／33ml）（3）碘化鉀與氯化亞錫作用a.還原As5+為As3+，加快反應(yīng)速度；b.碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行；c.氯化亞錫與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生；d.可抑制微量Sb的干擾，在實(shí)驗(yàn)條件下，100mgSb存在不干擾。4）鋅粒應(yīng)無(wú)砷（5）醋酸鉛棉花樣品中硫化物生成的硫化氫氣體干擾顯色，以醋酸鉛棉花吸收消除干擾。藥典規(guī)定：醋酸鉛棉花60mg，裝管高度為60~80mg。6）溴化汞試紙溴化汞試紙生成砷斑的靈敏度較氯化汞高，但所生成的砷斑不夠穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)干燥避光，并在反應(yīng)后立即進(jìn)行比較。4.干擾及排除1）供試品為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽干擾：生成硫化氫或二氧化硫排除：加硝酸處理使成硫酸鹽（2）供試品為鐵鹽干擾：消耗碘化鉀、氯化亞錫等還原劑，影響測(cè)定條件，氧化砷化氫排除：先加酸性氯化亞錫試液，將高鐵離子還原為低價(jià)鐵離子后再檢查3）有機(jī)砷需進(jìn)行有機(jī)破壞4）供試品為含銻藥物干擾：銻還原為銻化氫，與溴化汞試紙反應(yīng)生成銻斑干擾的排除：改用白田道夫法古蔡氏法適用于不含Sb或含Sb量小于100mg的供試品（三）二乙基二硫代氨基甲酸銀—Ag-DDC法原理：砷化氫與Ag(DDC)溶液作用，使Ag(DDC)中的銀還原為紅色膠態(tài)銀。直接比色或于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，進(jìn)行比較。銻化氫與Ag（DDC）的反應(yīng)靈敏度較低。此方法中，含量500ug以下的銻不干擾測(cè)定。六、溶液顏色檢查法一）第一法目視比色法二）第二法分光光度法三）第三法色差計(jì)法恒重：供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異在0.3mg以下。熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30min后進(jìn)行。熾灼殘?jiān)鼨z查法一般加熱恒重的溫度為700～800℃熾灼殘?jiān)鼨z查后，將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查時(shí)，熾灼溫度應(yīng)為500～600℃干燥失重測(cè)定的方法有B．常壓恒溫干澡法C．減壓干燥法D．干燥劑干燥法E．減壓干燥劑干燥法特殊雜質(zhì)及其檢查方法色譜分析法一）TLC（1）雜質(zhì)對(duì)照品法判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點(diǎn)不得超過(guò)相應(yīng)的雜質(zhì)對(duì)照斑點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度高、直觀性強(qiáng)；缺點(diǎn)：需要雜質(zhì)對(duì)照品。2）供試品溶液自身稀釋對(duì)照法判斷：控制雜質(zhì)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)；供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于對(duì)照溶液的主斑點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：以供試品的稀溶液作為對(duì)照液，不需要雜質(zhì)對(duì)照品，簡(jiǎn)單、價(jià)廉，還可配成幾種限量的對(duì)照溶液缺點(diǎn)：不同物質(zhì)，不同Rf值比較，準(zhǔn)確度差、直觀性差。二）HPLC1）外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)的量供試品→供試品溶液雜質(zhì)對(duì)照品→對(duì)照品溶液進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算雜質(zhì)的含量缺點(diǎn)：需要對(duì)照品；不易準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量2）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定法方法：內(nèi)標(biāo)物+雜質(zhì)對(duì)照品→對(duì)照溶液，進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算校正因子。供試品+內(nèi)標(biāo)→供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定雜質(zhì)和內(nèi)標(biāo)峰面積或峰高，計(jì)算雜質(zhì)含量。（3）不加校正因子的主成分自身對(duì)照法方法：分別進(jìn)樣，測(cè)定供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積及其總和，與對(duì)照溶液主成分峰面積比較，控制供試品中雜質(zhì)的量。優(yōu)點(diǎn)：不需雜質(zhì)對(duì)照品，可同時(shí)控制各個(gè)雜質(zhì)及其總量限度。缺點(diǎn)：檢測(cè)波長(zhǎng)處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強(qiáng)度可能有差異，準(zhǔn)確度差；不易準(zhǔn)確控制進(jìn)樣量。4）加校正因子的主成分自身對(duì)照法方法：待測(cè)成分對(duì)照品+雜質(zhì)對(duì)照品→溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算雜質(zhì)的校正因子（5）峰面積歸一化法取一定量供試品溶液進(jìn)樣，測(cè)定各雜質(zhì)及藥物的峰面積，計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和占總峰面積的百分率，不能超過(guò)限量。注意：溶劑峰不應(yīng)計(jì)算在總峰面積內(nèi)。優(yōu)點(diǎn)：不需雜質(zhì)對(duì)照品，簡(jiǎn)便易行。缺點(diǎn)：檢測(cè)波長(zhǎng)處，各雜質(zhì)和藥物的吸收強(qiáng)度可能有差異，控制雜質(zhì)峰面積百分率不一定就是雜質(zhì)限量，準(zhǔn)確度差。藥物的含量測(cè)定容量法用于常量組分測(cè)定。雖專屬性不高，但由于其具有準(zhǔn)確度較高（一般相對(duì)誤差可達(dá)0.2%以下）、精密度好、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、試驗(yàn)成本低及操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，廣泛用于原料藥的含量測(cè)定。是化學(xué)原料藥含量測(cè)定首選。（一）高效液相色譜法HPLC1.對(duì)儀器的一般要求一般為反相色譜，即流動(dòng)相極性大于固定相極性。固定相：多為十八烷基硅烷健合硅膠（C18柱）或辛烷基硅烷健合硅膠（C8柱）；檢測(cè)器：多為紫外檢測(cè)器；流動(dòng)相：多為甲醇-水或乙腈-水。藥品分析方法的驗(yàn)證需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量檢查或限度檢查；3.原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定；4.制劑中其它成分（如防腐劑等）的測(cè)定；5.溶出度、釋放度等檢查中的溶出量等的測(cè)試方法。驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。鑒別雜質(zhì)測(cè)定含量測(cè)定定量限度準(zhǔn)確度－+－+精密度－+－+專屬性++++檢測(cè)限－－+－定量限－+－－線性－+－+范圍－+－+耐用性++++芳酸類藥物的分析一、苯甲酸類二、水楊酸類三、苯丙酸類鑒別1.與水楊酸類反應(yīng)—三氯化鐵反應(yīng)現(xiàn)象：生成紫堇色的配位化合物。弱酸性（pH4~6）：強(qiáng)酸中配位物分解。反應(yīng)靈敏度高，應(yīng)用稀溶液。酯類應(yīng)水解后再反應(yīng)。堿性或中性FeCl3丙磺舒鈉堿性或中性FeCl3丙磺舒鈉pH5~6FeCl3米黃色沉淀赭色沉淀苯甲酸2.與苯甲酸類反應(yīng)二、水解反應(yīng)三、重氮化偶合反應(yīng)為具有芳伯氨基、潛在芳伯氨基藥物的特征反應(yīng)。四、氧化反應(yīng)1.K1.K2Cr2O72.五、分解產(chǎn)物的反應(yīng)232頁(yè)苯甲酸鹽+硫酸加熱苯丙酸（氣體）丙磺舒NaOH亞硫酸鈉HNO3硫酸鹽；丙磺舒加熱二氧化硫（臭味）六、酮基的反應(yīng)：芳酸類藥物特殊雜質(zhì)檢查一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查檢查項(xiàng)目：水楊酸，溶液澄清度，易炭化物，有關(guān)物質(zhì)（HPLC不加校正因子的主成分自身對(duì)照法）二、對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)檢查（一）雜質(zhì)來(lái)源（間氨基酚）生產(chǎn)過(guò)程中引入或貯藏過(guò)程中分解。二）檢查方法1.雙相滴定法-Ch.P（2005有關(guān)物質(zhì)檢查——Ch.P（2010）HPLC法1.間氨基酚（外標(biāo)法）2.其他雜質(zhì)（不帶校正因子的主成份自身對(duì)照法）三、貝諾酯中特殊雜質(zhì)的檢查Ch.P（2010）中要求檢查：1.對(duì)氨基酚（比色法）2.游離水楊酸（比色法）3.有關(guān)物質(zhì)（HPLC）芳酸類藥物含量測(cè)定阿司匹林一、酸堿滴定法阿司匹林（一）直接滴定法中性乙醇中性乙醇酚酞NaOH滴定反應(yīng)摩爾比為1∶1注意：1）用中性乙醇溶液溶解樣品;（2）滴定時(shí)應(yīng)不斷振搖，防止局部堿度過(guò)大而促使樣品水解;（3）不適用于水楊酸含量超出限量的樣品與制劑。（二）水解后剩余滴定法1.阿司匹林含量測(cè)定過(guò)量的NaOH以酸回滴反應(yīng)摩爾比為1∶2優(yōu)點(diǎn)：消除了酯鍵水解的干擾缺點(diǎn)：酸性雜質(zhì)干擾（四）雙相滴定法原理：滴定在水相與水不相混溶的有機(jī)溶劑兩相中進(jìn)行，反應(yīng)生成的苯甲酸不斷地被萃取入有機(jī)溶劑層，減少苯甲酸在水中濃度，使滴定反應(yīng)完全。苯甲酸鈉+HCl苯甲酸↓+NaCl（用乙醚萃取除去干擾）（1）在滴定方法中使用有機(jī)相除去芳酸：萃取反應(yīng)生成的苯甲酸，使水相中的中和反應(yīng)進(jìn)行到底。析出的游離酸水溶性差，使水溶液渾濁，妨礙終點(diǎn)的觀察。（2）滴定過(guò)程中應(yīng)不斷振搖。該方法適用于芳酸堿金屬鹽的含量測(cè)定。在中性條件下，可與三氯化鐵試液反應(yīng)，生成赭色沉淀的藥物是苯甲酸鈉胺類藥物的分析對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物典型藥物:苯佐卡因、鹽酸普魯卡因，鹽酸丁卡因鑒別堿性β堿性β萘酚偶氮染料NaNO偶氮染料NaNO2H+重氮鹽適用范圍：具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基。二）三氯化鐵反應(yīng)酚羥基+三氯化鐵呈藍(lán)紫色鹽酸利多卡因氯仿鹽酸利多卡因氯仿黃色鹽酸利多卡因+CoCl2酸性亮綠色藍(lán)紫色Na2CO3+CuSO41.與銅和鈷離子反應(yīng)紫紅色→紫紅色→暗棕色→棕黑色2.羥肟酸鐵鹽反應(yīng)（芳酰胺）鹽酸普魯卡因胺+H2O2氧化△羥肟酸FeCl3雜質(zhì)檢查（一）對(duì)乙酰氨基酚的雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)乙醇溶液的澄清度與顏色對(duì)氨基酚及有關(guān)物質(zhì)對(duì)氯苯乙酰胺五、含量測(cè)定（一）亞硝酸鈉滴定法（適用具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基。）原理：芳伯胺基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)。1.測(cè)定條件（1）溴化鉀的加入溴化鉀起催化劑的作用（2）酸度一般采用鹽酸酸性:酸度加大：加快重氮化反應(yīng)速度重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定防止生成偶氮氨基化合物酸度過(guò)大：阻礙芳伯氨基的游離亞硝酸易分解N樣:N鹽酸=1:2.5~6（3）溫度在室溫下（10℃—30℃）進(jìn)行滴定（4）滴定速度過(guò)快：終點(diǎn)提前過(guò)慢：HNO2的分解逸失為了避免滴定過(guò)程中HNO2的分解逸失，可采用快速滴定法。2.終點(diǎn)指示永停滴定法到終點(diǎn)溶液中開始有亞硝酸，電極起氧化還原反應(yīng)，電流計(jì)偏轉(zhuǎn)，為終點(diǎn)。苯乙胺類藥物的分析鑒別(一)三氯化鐵呈色(二)甲醛_硫酸呈色(三)氧化反應(yīng)(四)UV、IR五）亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)脂肪伯氨基亞硝基鐵氰化鈉，△無(wú)醛丙酮，NaHCO3紅紫色脂肪族伯胺專屬反應(yīng)，如重酒石酸間羥胺脂肪族伯胺專屬反應(yīng)，如重酒石酸間羥胺（六）雙縮脲反應(yīng)（氨基醇結(jié)構(gòu)）含量測(cè)定：非水溶液滴定法，溴量法巴比妥類藥物的分析1.弱酸性1,3-二酰亞胺基團(tuán)，可發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu)，2.水解反應(yīng)其酰亞胺結(jié)構(gòu)，與堿共沸產(chǎn)生氨氣。3.與重金屬離子的反應(yīng)（1）與銀鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物巴比妥類藥物AgNO3Na2CO3可溶性一銀鹽二銀鹽沉淀AgNO3Cu2+水–Cu2+水–吡啶含硫巴比妥類藥物紫堇色或難溶性紫色物質(zhì)綠色Cu2+水–吡啶巴比妥類藥物含量測(cè)定一、銀量法巴比妥類藥物在適當(dāng)?shù)膲A性溶液中，可與重金屬離子定量形成鹽，可用銀量法測(cè)定含量。條件：1.溶劑甲醇+3%無(wú)水碳酸鈉2.終點(diǎn)指示自身指示終點(diǎn)（反應(yīng)摩爾比為1：1）電位法二、溴量法取代基含雙鍵的巴比妥類藥物（司可巴比妥）可與溴定量發(fā)生加成反應(yīng)。可用剩余溴量法進(jìn)行含量測(cè)定。注意事項(xiàng)（1）操作中要防止溴和碘的逸失（2）平行條件進(jìn)行空白試驗(yàn)可減少溴和碘逸失帶來(lái)的誤差（三）差示紫外分光光度法1.原理（1）供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。（2）干擾物的吸收不受測(cè)定時(shí)化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x、y表示：2.應(yīng)用1）于波長(zhǎng)240nm處，測(cè)定pH10與pH2溶液的吸收度差3.特點(diǎn)保留了通常的分光光度法簡(jiǎn)易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，又無(wú)需事先分離，并能消除干擾。生物堿類藥物的分析苯烴胺類（鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，秋水仙堿）托烷類（硫酸阿托品，氫溴酸山莨菪堿，氫溴酸東莨菪堿）喹啉類（硫酸奎寧，硫酸奎寧丁）異喹啉類（鹽酸嗎啡，磷酸可待因）吲哚類（利血平，麥角新堿）黃嘌呤類(咖啡因，茶堿)鑒別試驗(yàn)一、特征鑒別反應(yīng)△A=A2-A1△A=A2-A1=A樣與C樣成正比pH10：A2=A樣+A雜pH2：A1=A雜（二）Vitaili反應(yīng)（托烷生物堿特征反應(yīng)）（阿托品，山莨菪堿，東莨菪酸）△乙醇、△乙醇、KOH深紫色深紫色NH3-H2ONH3-H2O翠綠色（四）Marquis反應(yīng)（嗎啡，可待因，納洛酮）含酚羥基的異喹啉類生物堿與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成具有醌式結(jié)構(gòu)的有色化合物。五）紫脲酸銨反應(yīng)—黃嘌呤特征鑒別二、一般鑒別試驗(yàn)1.沉淀反應(yīng)弱堿性，與生物堿沉淀試劑生成沉淀。常見沉淀劑：重金屬鹽：碘化鉍鉀、碘化汞鉀、碘化鉀-碘、二氯化汞等大分子酸：磷鉬酸、硅鎢酸、苦味酸等2.顯色反應(yīng)薄層色譜分析生物堿的問(wèn)題及解決：生物堿鹽用TLC分析時(shí)，由于鹽極性較大，易被硅膠吸附，從而造成斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象。預(yù)防措施：1.展開劑中加入堿性試劑（如氨水、二乙胺、吡啶）2.用硅膠鋪板時(shí)加堿液（如氫氧化鈉）3.改用其他吸附劑（如堿性氧化鋁）含量測(cè)定一、非水堿量法（半微量測(cè)定法）一）原理有機(jī)堿藥物堿性很弱，在水溶液中以酸直接滴定沒(méi)有明顯的突躍，但在非水酸性介質(zhì)中相對(duì)堿性增強(qiáng)，可滴定。1.溶劑：冰醋酸、乙酸酐等PKb=8-10：冰醋酸PKb=10-12：冰醋酸、乙酸酐混合液PKb＜10-12：乙酸酐2.滴定劑：高氯酸的冰醋酸溶液冰醋酸具有揮發(fā)性和膨脹系數(shù)大的特點(diǎn)，受溫度影響大。溫差10度以內(nèi)校正濃度，超過(guò)10度則重新標(biāo)定。3.終點(diǎn)指示電位法玻璃-甘汞電極。指示終點(diǎn)準(zhǔn)確，但操作不便指示劑結(jié)晶紫、喹哪啶紅等最常用指示劑：結(jié)晶紫：酸色式（黃色），堿色式（紫色）二、提取酸堿滴定法原理：堿性較強(qiáng)的藥物（Kb為10-6-10-9）可利用其游離堿不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；鹽類易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，經(jīng)堿化、有機(jī)溶劑提取后，采用酸堿滴定法測(cè)定含量。1.堿化最常用氨水2.有機(jī)溶劑提?。?）提取溶劑選擇的原則（2）常用的提取溶劑最常用三氯甲烷（3）提取溶劑的用量及提取次數(shù)（4次，溶液體積的一半/次）（1）直接滴定法–用于堿性較強(qiáng)的有機(jī)堿2）剩余滴定法-用于堿性較弱的有機(jī)堿3）酸滴定液返提后剩余滴定法-用于對(duì)熱不穩(wěn)定的有機(jī)堿特點(diǎn)：儀器簡(jiǎn)單、試劑常用，但操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、精密度差、準(zhǔn)確度差，主要用于堿性較強(qiáng)的生物堿制劑的含量測(cè)定。三）酸性染料比色法水相中反應(yīng)，有機(jī)相中萃取影響定量分析主要因素：1，水相的PHpH↓H++In-→HIn沒(méi)有足夠的In-與BH+結(jié)合pH↑BH+→B＋H+沒(méi)有足夠的H+與B結(jié)合，B進(jìn)入有機(jī)相2.酸性染料能與有機(jī)堿定量結(jié)合離子對(duì)在有機(jī)相中溶解度大染料在有機(jī)相中不溶或少溶離子對(duì)吸收靈敏度高常用酸性染料：溴麝香草酚藍(lán)（BTB）、甲基橙溴甲酚綠（BCG）（如托烷生物堿的含量測(cè)定）、溴甲酚紫3.有機(jī)溶劑的選擇與離子對(duì)形成氫鍵，提取率高溶液的吸光度高不與或幾乎不與水混溶4.水分的影響干擾：混入有色染料；混入有機(jī)相使渾濁消除：加脫水劑濾紙過(guò)濾5.有色雜質(zhì)的排除生物堿加染料前預(yù)先提取一次除去脂溶性有色染料雜質(zhì)。特點(diǎn)：選擇性高（選用適當(dāng)pH緩沖液可消除干擾）2.靈敏度高、供試品用量少3.準(zhǔn)確度差，不能用于原料藥的測(cè)定，只能用于制劑分析。高效液相色譜法主要問(wèn)題（反相）：堿性藥物如果以電離形式存在，極性大，與固定相吸附強(qiáng)，易造成色譜峰拖尾，分離效能下降，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，甚至長(zhǎng)期地保留在色譜柱上。解決方法：1.加掃尾劑法分離依據(jù)物質(zhì)的極性及溶解性。在流動(dòng)相中加入掃尾劑，常用的掃尾劑有醋酸銨、二乙胺、三乙胺、乙腈等。2.離子抑制色譜法3.離子對(duì)高效液相色譜法4.采用覆蓋度大的固定相雜環(huán)藥物的分析吡啶類藥物的分析尼可剎米尼可剎米異煙肼硝苯地平鑒別實(shí)驗(yàn)（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)1.戊烯二醛反應(yīng)（適用于吡啶環(huán)α、α’位未取代，以及β或γ位為烷基或羧基衍生物。）吡啶環(huán)CNBr芳伯胺戊烯二醛衍生物2.二硝基氯苯反應(yīng)2，2，4-二硝基氯苯△或熔融紫紅色醇制KOH吡啶環(huán)異煙肼異煙酸[O]尼可剎米煙酸水解（二）吡啶環(huán)的沉淀反應(yīng)（三）二氫吡啶的解離反應(yīng)氫吡啶類藥物的丙酮或甲醇溶液與堿作用，二氫吡啶環(huán)發(fā)生解離發(fā)生顏色變化。（五）酰肼基團(tuán)的反應(yīng)黑色渾濁銀鏡氣泡（黑色渾濁銀鏡氣泡（N2）異煙肼異煙肼氨制硝酸銀2.縮合反應(yīng)異煙肼+芳醛腙（測(cè)熔點(diǎn)）（六）分解產(chǎn)物反應(yīng)縮合尼可剎米縮合尼可剎米NaOH△二乙胺↑臭味堿性CaOH或NaCO3（臭氣）異煙肼尼可剎米碘解磷定（一）溴酸鉀法（二）鈰量法（二氫吡啶類藥物）二氫吡啶類藥物在酸性介質(zhì)中有還原性，用鄰二氮菲指示液指示終點(diǎn)。終點(diǎn)時(shí)微過(guò)量的Ce4+將指示液中的Fe2+氧化為Fe2+橙紅色變?yōu)榈{(lán)或無(wú)色。（三）非水堿量法（四）HPLC法吩噻嗪類藥物硫氮雜蒽母核硫氮雜蒽母核二價(jià)S具有還原性，易氧化呈色，由不同取代基顯色不同，可用于不同藥物的區(qū)別。吩噻嗪吩噻嗪（二價(jià)S）有色絡(luò)合物有色絡(luò)合物金屬離子測(cè)定藥物含量時(shí)氧化物無(wú)干擾檢查方法：多為HPLC的不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。四、含量測(cè)定（一）鈰量法吩噻嗪吩噻嗪紅色自由基Ce（SO4）2-eCe（SO4）2-e紅色消退（終點(diǎn)）自身指示終點(diǎn)法。也可用電位法，永停滴定法指示終點(diǎn)。反應(yīng)摩爾比：吩噻嗪：Ce（SO4）2=1:2（二）紫外分光光度法（吩噻嗪類三環(huán)共軛π體系）萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法AλAλ1=Aλ1樣+Aλ1干Aλ2=Aλ2樣+Aλ2干?A=Aλ2－Aλ1=Aλ2樣－Aλ1樣=（Eλ2－Eλ1）·c·l干擾組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相等，Aλ1干=Aλ2干。待測(cè)組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相差足夠大。與差示分光光度法比較：均為一定條件下雜質(zhì)吸收度相同來(lái)消除雜質(zhì)的干擾雙波長(zhǎng)法：同一溶液中，不同波長(zhǎng)下雜質(zhì)吸收度相同。差示法：不同處理的溶液，同一波長(zhǎng)下雜質(zhì)的吸收度相同。喹諾酮類藥物的分析典型藥物：諾氟沙星，司帕沙星，環(huán)丙沙星，哌啶酸苯并二氮雜卓類藥物鑒別（一）沉淀反應(yīng)氯氮唑氯氮唑橙紅色硅鎢酸K3硅鎢酸K3BiI4鹽酸氟西泮、氯硝西泮橙紅色顏色變深阿普唑侖白色沉淀放置K3BiI4（二）水解產(chǎn)物的反應(yīng)氯氮唑氯氮唑奧沙西泮HCl水解芳伯氨基△△藍(lán)紫色（三）硫酸-熒光反應(yīng)母核的特征反應(yīng)365nm365nm黃綠色黃色亮綠色淡藍(lán)色（四）氯原子的鑒別氧瓶燃燒法維生素藥物的分析脂溶性：VitA、VitD、VitE、VitK水溶性：VitB、泛酸、VitC（抗壞血酸）VitM（葉酸）、VitPP（煙酸）維生素A一、結(jié)構(gòu)維生素A1為具有共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯結(jié)構(gòu)Ch.P中維生素A指全反式維生素A1醋酸酯。天然維生素主要為全反式維生素A（生理活性最高）。VitA+無(wú)水三氯化銻VitA+無(wú)水三氯化銻無(wú)醇三氯甲烷紫紅色紫紅色反應(yīng)條件：無(wú)水無(wú)醇三氯化銻水解與正碳離子作用（二）紫外吸收法（三）TLC三、檢查酸值，過(guò)氧化值四、含量測(cè)定（一）UV法–三點(diǎn)校正法在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，根據(jù)校正公式計(jì)算吸光度A校正值后再計(jì)算含量。1）維生素A及共存雜質(zhì)的吸收具加和性（2）雜質(zhì)在310~340nm處的吸收可視為直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度變?。ㄒ唬┲苯訙y(cè)定法（等波長(zhǎng)差法）中國(guó)藥典第一法測(cè)定維生素A醋酸酯時(shí)，規(guī)定l1＝328nm，l2＝316nm，l3＝340nm。步驟：（1）取樣品加環(huán)己烷制成9~15單位/ml溶液，分別測(cè)300、316、328、340、360nm下的吸收值。判斷最大波長(zhǎng)是否在326~329nm之間：3）當(dāng)所有比值與規(guī)定比值的差小于±0.02，取A328進(jìn)行計(jì)算；當(dāng)任一比值與規(guī)定比值的差超過(guò)了±0.02，計(jì)算A328(校正)。A328（校正）=3.52（2A328–A316–A340）（4）計(jì)算d值：A328(校正)-A328A328d=-3%<d<3%：以A328計(jì)算-15%<d<-3%：以A328（校正）計(jì)算+3%<d或d<-15%：皂化4）計(jì)算紫外法進(jìn)行含量測(cè)定中：A=ECL；C=A/（EL）維生素A小家（IU/g）*內(nèi)容物平均丸重*100%標(biāo)示量%=標(biāo)示量（二）皂化法（等吸收比法）6/7A法（二）高效液相色譜法三）三氯化銻法優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、迅速缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定，溫度影響大，無(wú)水介質(zhì)中進(jìn)行，三氯化銻有強(qiáng)腐蝕性，反應(yīng)的專屬性差維生素B1堿性堿性還原性PbS↓反應(yīng)UV鑒別（一）硫色素反應(yīng)HH+熒光消失OH-熒光重現(xiàn)正丁醇水層醇層（藍(lán)色熒光）SOH-鐵氰化鉀硫色素可逆反應(yīng)（二）沉淀反應(yīng)VitB1VitB1+AgNO3AgClHNO3VitB1+NaOHNa2SPbS△PbAc2二、雜質(zhì)檢查不加校正因子的主成份自身對(duì)照法離子對(duì)色譜法三、含量測(cè)定（一）非水堿量法原理：含氮，弱堿性（二）UV法共軛雙鍵結(jié)構(gòu)可用差示分光光度法來(lái)消除背景及輔料的干擾。（三）硫色素?zé)晒夥ǚ椒坝?jì)算：+NaOH++NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇SdAb對(duì)照液供試液優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，代謝產(chǎn)物不干擾，適合臨床體液分析。缺點(diǎn)：操作繁瑣；熒光受干擾因素多維生素C是一種不飽和的多羥基內(nèi)酯化合物，類糖結(jié)構(gòu)。烯醇基烯醇基1.UV2.酸性PKa：C34.17C211.57二烯醇基：還原性內(nèi)酯：水解手性L-(+)-抗壞血酸鑒別（一）還原性1.硝酸銀反應(yīng)VitC+AgNO3去氫VitC+Ag2.2,6-二氯靛酚反應(yīng)VitC+2,6-二氯靛酚玫瑰紅變?yōu)闊o(wú)色（二）糖類結(jié)構(gòu)VitCVitC戊糖藍(lán)色糠醛三氯醋酸脫羧水解-H2O吡咯50°C（三）光譜法（四）色譜法四、含量測(cè)定（一）碘量法淀粉指示劑VitC+VitC+I2去氫VitC+HI（1）加新沸冷水減少水中氧對(duì)VitC的氧化干擾（2）加稀醋酸酸性介質(zhì)中VitC不易被空氣中氧所氧化（3）滴定速度要快（4）附加劑的干擾片劑：溶解后過(guò)濾注射液：加甲醛或丙酮掩蔽處方中的抗氧劑亞硫酸氫鈉（二）2,6-二氯靛酚滴定法指示劑：自身指示終點(diǎn)法維生素E 消旋-α-生育酚醋酸酯脂溶性，紫外吸收，還原性，水解性，旋光性鑒別（一）HNO3反應(yīng)生育紅生育紅HNO3，△[O]橙紅色VitE生育酚（二）三氯化鐵-聯(lián)吡啶反應(yīng)△△Fe2+聯(lián)吡啶血紅色+Fe3+（三）IR（四）GC檢查（一）酸度（游離醋酸，酸堿滴定法）（二）游離生育酚檢查原理：硫酸鈰滴定法生育酚生育酚+2Ce4+生育醌+2Ce3+指示劑二苯胺由還原型變?yōu)檠趸土咙S變?yōu)榛易希ㄈ┯嘘P(guān)物質(zhì)GC-不加校正因子的主成份自身對(duì)照法（四）殘留溶劑–正己烷GC-外標(biāo)法（一）氣相色譜法（加校正因子的內(nèi)標(biāo)法）。固定相：硅酮（OV-17）內(nèi)標(biāo)：正三十二烷甾體激素類藥物的分析分類：腎上腺皮質(zhì)激素腎上腺皮質(zhì)激素性激素雄性激素及蛋白同化激素雌激素孕激素環(huán)戊烷并多氫菲母核112345671191112891415161720211813ABCD一、腎上腺皮質(zhì)激素（氫可的松，醋酸地塞米松，地塞米松磷酸鈉，曲安奈德）△4-3-酮基：（1）酮基可與羰基試劑如2，4-二硝基苯肼、硫酸苯肼、異煙肼生成黃色的腙（2）酮基可與氨基脲縮合反應(yīng)，生成衍生物測(cè)熔點(diǎn)；（3）共軛系統(tǒng)，在240nm處紫外吸收。17-α-醇酮基：具有還原性，與堿性酒石酸銅、氨制硝酸銀、四氮唑試液反應(yīng)。二、雄性激素與蛋白同化激素（甲睪酮，丙酸睪酮，苯丙酸諾龍）△4-3-酮基：（同腎上腺皮質(zhì)激素）羥基（酯鍵）：水解特性三、孕激素（黃體酮，甲地孕酮）△4-3-酮基D-17-甲基酮：與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯、芳香醛顯色。四、雌激素（雌二醇，炔雌醇）苯環(huán)與酚羥基：苯環(huán)有紫外吸收，酚羥基有顯色反應(yīng)。分類活性官能團(tuán)性質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素同化激素雌激素孕激素與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)△分類活性官能團(tuán)性質(zhì)腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素同化激素雌激素孕激素與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)△4-3-酮基UV，可與羰基試劑反應(yīng)△4-3-酮基UV，可與羰基試劑反應(yīng)UV，可與羰基試劑反應(yīng)還原性UV，呈色反應(yīng)+AgNO3→↓白甲酮基乙炔基苯環(huán)及酚羥基△4-3-酮基C17-α-醇酮基鑒別一、物理常數(shù)的測(cè)定二、化學(xué)鑒別法（一）與強(qiáng)酸呈色（母核反應(yīng)）優(yōu)點(diǎn)：靈敏度較高，操作簡(jiǎn)便，可根據(jù)不同顯色結(jié)果互相區(qū)別。缺點(diǎn)：操作條件不易掌握，專屬性不強(qiáng)二）官能團(tuán)反應(yīng)1.酮基（C3-，C20-）-呈色反應(yīng)2.C17-α-醇酮基–還原性（只適用于皮質(zhì)激素）3.甲酮基（只適用于孕激素）甲酮基或活潑亞甲基，可與亞硝基鐵氰化鈉顯色。NHNH4AC4.酚羥基的呈色反應(yīng)（只適用于雌激素）（1）三氯化鐵呈色（2）重氮苯磺酸呈色5.炔基（沉淀反應(yīng)）6.鹵素有機(jī)氯有機(jī)氯Clˉ有機(jī)氟Fˉ有機(jī)破壞硝酸亞鈰藍(lán)紫色茜素氟藍(lán)AgCl↓白AgNO3HNO3特殊雜質(zhì)檢查一、有關(guān)物質(zhì)的檢查Ch.P（2000）多用TLC法，一般為自身稀釋對(duì)照法Ch.P（2005），Ch.P（2010）多用HPLC法，一般采用不加校正因子的主成分自身對(duì)法。黃體酮，尼可剎米用內(nèi)容量移液管量取含量測(cè)定（一）四氮唑比色法（對(duì)照法）原理：皮質(zhì)激素在C17上的α-醇酮基，具有強(qiáng)還原性，在堿性溶液中可將四氮唑鹽定量還原為有色產(chǎn)物。常見四氮唑鹽：四氮唑紅（RT），四氮唑藍(lán)（BT）1.取代基的影響2.溶劑與水分的影響一般采用無(wú)水、無(wú)醛的醇為溶劑。3.堿的種類及加入順序皮質(zhì)激素與堿長(zhǎng)時(shí)間接觸發(fā)生副反應(yīng)，應(yīng)先加四氮唑鹽后再加入堿液。4.光氧的影響避光反應(yīng)、充氮?dú)狻?.溫度與時(shí)間25℃下反應(yīng)40~45min二）異煙肼比色法原理：C3-酮基及其他位置的酮基在酸性條件下與異煙肼縮合，形成黃色的腙。反應(yīng)條件：1.專屬性主要對(duì)D4-3-酮基適用2.溶劑的選擇溶劑一般采用無(wú)水甲醇或無(wú)水乙醇（對(duì)異煙肼鹽酸鹽的溶解度好）。3.酸的種類和濃度及異煙肼濃度當(dāng)CH+:C異煙肼=2:1時(shí)，可獲得最大吸收，一般采用鹽酸。4.水分、溫度、光線、氧的影響水分的增大易導(dǎo)致腙的分解溫度增大，反應(yīng)加速光、氧：具塞密閉系統(tǒng)中不影響反應(yīng)三）Kober反應(yīng)比色法雌激素與硫酸-乙醇反應(yīng)呈色，在515nm附近有最大吸收?？捎糜诖萍に氐谋壬y(cè)定。四、硝酸銀-氫氧化鈉滴定法含炔基的藥物，其炔基遇硝酸銀試液，生成白色的炔銀沉淀和硝酸，生成的硝酸可用氫氧化鈉滴定，從而測(cè)定藥物含量。抗生素類藥物的分析β-內(nèi)酰胺類抗生素（青霉素類，頭孢素類）鑒別一）色譜法TLC，HPLC二）光譜法IR法.UV法三）呈色反應(yīng)1.羥肟酸鐵反應(yīng)（內(nèi)酰胺）青霉素和頭孢素在堿性溶液中與羥胺反應(yīng)，β-內(nèi)酰胺開環(huán)生成羥羥肟酸，在烯酸與高鐵離子成色反應(yīng)。2.茚三酮反應(yīng)△△3.三氯化鐵反應(yīng)（酚