全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范參考模板

49/49全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范第一章樣品的采集和處理1范圍

本章規(guī)定了用于艾滋病病毒（HIV）檢測的血清、血漿和全血樣品的采集和處理方法，適用于HIV抗體檢測、抗原檢測、核酸檢測、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測定和HIV分離培養(yǎng)。2規(guī)范性引用文件

GuidelinesforUsingHIVTestingTechnologiesinSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/2001.16UNAIDS/01.22EISBN9713-92-063-7.3操作步驟

3.1樣品的采集和處理

艾滋病檢測最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時也可作為測試樣品。常用的血液樣品的采集和處理方法如下：

3.1.1血清樣品采集和處理

用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量靜脈血，室溫下自然放置12h，待血液凝固、血塊收縮后再用3、000r/min離心15min，吸出血清備用。

如用濾紙片采樣，則手指或耳垂局部嚴(yán)格按常規(guī)進(jìn)行消毒，在刺破皮膚后，迅速把濾紙片沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后要待血樣干燥后再包裝送檢。

3.1.2抗凝血樣品采集和處理

用加有抗凝劑的真空采血管（或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管），反復(fù)輕搖，分離血漿和血細(xì)胞備用。

應(yīng)根據(jù)實驗要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測定可選用K3EDTA或肝素或枸櫞酸鈉，HIV病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用K3EDTA或枸櫞酸鈉。

用于核酸定性檢測時，采集的抗凝全血應(yīng)在48h內(nèi)分離PBMC和血漿，否則應(yīng)在2448h內(nèi)分離血漿和血細(xì)胞。病毒載量測定不同方法對樣品的要求見第四章4.1中表2；CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測定樣品采集要求見第五章4.1。

3.1.3采集樣品注意事項

采集樣品原則上應(yīng)按臨床采血技術(shù)規(guī)范操作（試劑盒說明書有特殊要求除外）。

采集樣品時應(yīng)注意安全，建議采用真空采血管及蝶形針具，以避免直接接觸血液；直接接觸HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/體液的操作,應(yīng)戴雙層手套。

3.2樣品的保存

3.2.1用于抗體檢測的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的樣品可存放于2-8℃。

3.2.2用于抗原和核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品應(yīng)凍存于-20℃以下，進(jìn)行病毒RNA檢測的樣品如需保存3個月以上應(yīng)置于-80℃。

3.2.3用于CD4+/CD8+

T淋巴細(xì)胞測定的樣品不能長期保存，樣品采集時間超過48h則不可檢測。

3.3樣品的運送

3.3.1實驗室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運送全血。

3.3.2應(yīng)采用WHO提出的三級包裝系統(tǒng)

第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置。

第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理。

第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內(nèi)，應(yīng)易于消毒。在第三層容器外面要貼標(biāo)簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。

3.3.3血清和血漿樣品應(yīng)在28℃條件下由專人運送。用于CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測定的樣品應(yīng)在室溫下18?23℃運送。每一包裝的體積以不超過50ml為宜。

3.3.4運送感染性材料必須有記錄。

3.3.5如分離血漿仍有困難，可直接將抗凝血-20℃以下凍存，采用冰壺冷藏運輸，避免凍融。

3.3.6特殊情況下如需對個別樣品進(jìn)行復(fù)測，可以用特快專遞形式投寄，但必須按三級包裝系統(tǒng)將盛樣品的試管包扎好，避免使用玻璃容器，以保證不會破碎和溢漏。

3.4樣品的接收

3.4.1含有感染性樣品的包裹必須在具有處理感染源設(shè)備的實驗室內(nèi)由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣的工作人員打開，用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。

3.4.2核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告有關(guān)領(lǐng)導(dǎo)和專家。

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第二章HIV抗體檢測1范圍

本章規(guī)定了HIV抗體的檢測方法、檢測程序、檢測報告及檢測策略，適用于各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、檢驗檢疫機(jī)構(gòu)、采供血機(jī)構(gòu)及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷IV感染者/AIDS病人的診斷、報告和處理的實驗室依據(jù)。2規(guī)范性引用文件

RevisedrecommendationsfortheselectionanduseofHIVantibodytests.WHO/UNAIDSRevisedversion2001.

實驗室生物安全通用要求（GB19489-2004）。3HIV抗體檢測實驗室

應(yīng)符合《全國艾滋病檢測工作規(guī)范（1997年版）》中對檢測實驗室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件的要求。

應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）對II級生物安全實驗室（BSL-2）的各項要求。

實驗室的質(zhì)量保證按本規(guī)范第八章規(guī)定執(zhí)行。

實驗室安全防護(hù)按本規(guī)范第七章規(guī)定執(zhí)行。4HIV抗體檢測的目的和要點

4.1HIV抗體檢測的目的

4.1.1HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。

4.1.2以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢而進(jìn)行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。

4.1.3以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。

4.1.4以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。

4.2HIV抗體檢測的要點

4.2.1篩查試驗陽性不能出陽性報告。

4.2.2嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。

4.2.3嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

4.2.4注意防止樣品間交叉污染。5常規(guī)HIV抗體檢測的方法和程序

HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗。

5.1HIV抗體檢測篩查試驗

5.1.1篩查試劑

必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。

5.1.2篩查方法

常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）

目前國內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑，少數(shù)使用第二代試劑。血源篩查仍以第三代ELISA為主，國際上有些國家和地區(qū)已將線性免疫酶測定（第四代ELISA試劑）用于血源篩查。第四代ELISA試劑是最近發(fā)展起來的HIV抗原抗體聯(lián)合測定試劑，可同時檢測P24抗原和抗HIV-1/2抗體。與第三代抗HIV-1/2試劑相比，檢出時間提前了4~9.1d。其優(yōu)點在于能同時檢測抗原抗體，降低血源篩查的殘余危險度。

快速檢測（RT）及其它檢測

隨著對HIV感染者和AIDS病人抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的進(jìn)展，及對無癥狀HIV感染者提供自愿咨詢檢測（VCT）的迫切需求，簡便、快速的HIV檢測方法被廣泛應(yīng)用。常用的主要有以下幾種：

（1）明膠顆粒凝集試驗（PA）：PA是HIV血清抗體檢測的一種簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊批準(zhǔn)；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏的PA試劑（SERODIA-HIV-1/2）可初步區(qū)分HIV-1型和HIV-2型，目前我國尚未引進(jìn)。

（2）斑點EIA或稱斑點ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應(yīng)時間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。

（3）斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：與斑點EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體，而代之以紅色的膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩(wěn)定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設(shè)備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測、門診急診個體檢測。目前已有在國內(nèi)被SFDA批準(zhǔn)注冊的國外進(jìn)口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品。一般可在10?30min內(nèi)判讀結(jié)果。

（4）艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。但樣品預(yù)處理時間長且售價較高。以唾液為樣品測定HIV抗體的ELISA、免疫印跡法（WB）試劑已經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)。

（5）其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測（HomeAccessSystem）等。

尿液HIV抗體檢測

1996年美國FDA首次批準(zhǔn)HIV-1尿液ELISA試劑，我國也正在研制尿液HIV抗體檢測試劑。主要適用于靜脈注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面積流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)測。篩查陽性者仍需采血做確認(rèn)試驗才能確定。

5.1.3篩查試驗

根據(jù)檢測目的選用符合要求的篩查試劑對樣品進(jìn)行初篩和重復(fù)檢測（復(fù)檢）。

初篩試驗：以第三代ELISA（雙抗原夾心法）為例。

（1）實驗準(zhǔn)備：試驗開始前將試劑和樣品放置在室溫(18?23℃),按實驗室SOP做好試劑準(zhǔn)備。

磷酸鹽緩沖液：若液體內(nèi)有結(jié)晶,應(yīng)放置在37℃直至溶解，用蒸餾水1：25稀釋濃縮液，4℃保存2周。

TMB底物液：使用前配制，TMB液和過氧化脲液等量混勻。

1M硫酸終止液：85ml蒸餾水中加入5ml濃硫酸。

備好試劑盒、待檢樣品和外部對照質(zhì)控血清后，按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護(hù)要求進(jìn)行篩查檢測。

（2）實驗操作

①裝好所需使用數(shù)目的孔條,每孔均加入100μl樣品稀釋液。設(shè)3個陰性對照孔，1個HIV-1陽性對照孔，若需要可再設(shè)1個HIV-2陽性對照孔。

②每孔加入50μl待檢樣品及對照（對照要后加），未用孔用樣品稀釋液加滿以溶解結(jié)合物球，以免堵塞洗板機(jī)孔?？烧饟u15S，37±2℃孵育60±5min。

③置洗板機(jī)上洗滌6遍（用洗液將反應(yīng)孔完全加滿,靜置30?60S,共洗滌6遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體,禁止在濾紙上拍干）。

④每孔加入100μl底物液，勿攪動，室溫避光孵育30±2min。

⑤每孔加入100μl1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。

⑥在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。

（3）實驗結(jié)果

①陰性對照（NC），HIV-1陽性對照（PC1），HIV-2陽性對照（PC2）

NC必須＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，計算NC平均值。

NC界限范圍：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。

②符合以下條件的實驗成立：

兩個以上的NC可用。

PC1-NC均值≥0.4，PC2-NC均值≥0.4

③Cutoff值=陰性對照均值+0.100

小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性

5.1.4初篩試驗結(jié)果的報告

對HIV抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報告（可用附表1）；對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告（附表1）。

5.1.5初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送

如需送上級實驗室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”（附表2），經(jīng)1名檢驗人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實驗室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實驗室，或在本實驗室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實驗室。

5.1.6對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。

5.2HIV抗體確認(rèn)試驗

5.2.1確認(rèn)試驗的試劑

必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。

5.2.2確認(rèn)試驗方法

包括免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內(nèi)常用的確認(rèn)試驗方法是WB。

5.2.3確認(rèn)檢測流程

有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測，如果呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIV抗體檢測結(jié)果不確定。如果出現(xiàn)HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認(rèn)試驗，呈陰性反應(yīng)，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應(yīng)則報告HIV-2抗體血清學(xué)陽性,并將樣品送國家參比實驗室進(jìn)行核酸序列分析，見圖2。

5.2.5確認(rèn)試驗結(jié)果的判定

下面是我國使用WB確認(rèn)HIV感染的判定標(biāo)準(zhǔn)和判定結(jié)果的基本原則。在實際工作中還應(yīng)參照所用試劑盒說明書綜合判定，遇疑難情況應(yīng)報上級實驗室解決。

HIV-1抗體陽性（+）

至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)。

HIV-2抗體血清學(xué)陽性（+）

同時符合以下2條標(biāo)準(zhǔn)可判為HIV-2抗體血清學(xué)陽性：

（1）符合WHO陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，即出現(xiàn)至少2條env帶（gp36和gp140/gp105）。

（2）符合試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

HIV抗體陰性（-）

無HIV抗體特異帶出現(xiàn)。

HIV抗體不確定（±）

出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性。

注：①HIV-1抗體特異帶包括：env帶：gp160/gp120、gp41；gag帶：p55、p24、p17（或p18）；pol帶：p66（或p65）、p51、p31。②HIV-2抗體特異條帶包括：env帶：gp140/gp105、gp36；gag帶：p56、p26、p16；pol帶：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2env帶也可為gp125/gp80、gp36）。

5.2.5HIV抗體確認(rèn)試驗結(jié)果報告

確認(rèn)試驗由確認(rèn)實驗室根據(jù)檢測結(jié)果出具“HIV抗體確認(rèn)檢測報告單”（附表3），報告HIV抗體陽性（+）、HIV抗體陰性（-）及HIV抗體不確定（±）。

符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV-1抗體陽性（+）”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢、保密和疫情報告工作。

符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體陰性（-）”。如果近期有高危行為，如性亂、注射毒品等，或有急性流感樣癥狀等情況，為排除因“窗口期”而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果，建議高危行為后3個月時再做抗體檢測。也可進(jìn)行HIV-1P24抗原或HIV核酸檢測，作為輔助診斷。

符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體不確定（±）”，在備注中應(yīng)注明“3個月后復(fù)檢”，同時進(jìn)行以下處理：

(1)隨訪復(fù)檢：每3個月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個月。如果檢測時暴露時間已超過3個月，則在3個月后隨訪1次即可。將前后2份樣品同時檢測，仍呈不確定或陰性則報告HIV抗體陰性，如果在隨訪期間發(fā)生帶型進(jìn)展，符合HIV抗體陽性判定標(biāo)準(zhǔn)則報告HIV-1或HIV-2抗體陽性。

(2)必要時可做HIV-1P24抗原或HIV核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認(rèn)報告要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。

5.2.6發(fā)出確認(rèn)報告的同時要做好檢測后咨詢。

5.2.7HIV抗體確認(rèn)報告由1名具有高級衛(wèi)生技術(shù)職稱的人員復(fù)核簽字，按原送檢程序反饋。如確認(rèn)對象戶口不屬于本轄區(qū)，確認(rèn)報告應(yīng)同時抄送HIV感染者戶口所在地的省艾滋病確認(rèn)中心實驗室。其它系統(tǒng)確認(rèn)的地方人員（包括本地和外地），也應(yīng)及時向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門和省艾滋病確認(rèn)中心實驗室報告。

5.2.8省艾滋病確認(rèn)中心實驗室難以確認(rèn)的樣品，送國家艾滋病參比實驗室確認(rèn)。同一受檢對象的樣品在不同實驗室得到不一致的確認(rèn)結(jié)果時，由國家艾滋病參比實驗室和艾滋病確認(rèn)實驗室審評及技術(shù)指導(dǎo)專家組予以仲裁。

6HIV抗體檢測的替代策略

除上述常規(guī)檢測程序以外，可以根據(jù)不同的目的，對HIV流行強(qiáng)度不同的地區(qū)和不同人群采用不同的替代策略，見表1。表1HIV抗體檢測的替代策略目的地區(qū)人群替代策略艾滋病疫情報告任何地區(qū)任何人群替代策略ⅠVCT高流行地區(qū)高危人群替代策略Ⅱ高流行地區(qū)一般人群替代策略Ⅲ其它地區(qū)任何人群替代策略Ⅲ

6.1替代策略Ⅰ（HIV感染疫情報告檢測策略）

6.1.1適用范圍

全國HIV感染疫情報告。

6.1.2檢測程序及結(jié)果報告

先用一種篩查試劑檢測，出現(xiàn)陰性反應(yīng)則報告“HIV抗體陰性（-）”。出現(xiàn)陽性反應(yīng)則用兩種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)測（其中包括進(jìn)口第三代ELISA試劑）。

兩種試劑復(fù)測均為陽性，且其中第三代ELISA試劑復(fù)測樣品OD值與臨界值（Cutoff）的比值（S/CO）≥6.0者可作陽性考慮，上報疫情（附表4）。兩種試劑復(fù)測結(jié)果均為陽性，但第三代ELISA試劑復(fù)測S/CO比值在1.0?5.9之間，或兩種試劑復(fù)測結(jié)果呈一陰一陽，應(yīng)進(jìn)一步作確認(rèn)試驗，按照確認(rèn)試驗的標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果（圖3）。

6.2.1適用范圍

HIV感染高流行地區(qū)高危人群的VCT。應(yīng)在確認(rèn)中心實驗室和確認(rèn)實驗室或以上實驗室指定的篩查實驗室進(jìn)行，用高質(zhì)量篩查試劑檢測及判斷結(jié)果（見6.2.2）。使用該策略判斷結(jié)果，陽性報告須由確認(rèn)中心實驗室和確認(rèn)實驗室或以上實驗室認(rèn)可的篩查實驗室出具。

6.2.2檢測程序及結(jié)果報告

先用第一種篩查試劑（ELISA-1）檢測，出現(xiàn)陰性反應(yīng)報告HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性反應(yīng)則報告“HIV抗體待復(fù)查”，并用第一種酶聯(lián)試劑（ELISA-1）和第二種酶聯(lián)試劑（ELISA-2）復(fù)檢。

兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陰性則報告HIV抗體陰性；兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性，且S/CO比值均大于或等于6.0者，用第三種篩查試劑（高特異性篩查試劑）檢測，如果第三種試劑檢測結(jié)果為陽性，在符合使用該策略條件的地區(qū)和人群中可以出具“HIV-1抗體陽性（+）”報告，使用“HIV抗體替代策略檢測報告單”（附表5）。

下列情況均需做確認(rèn)試驗，按照確認(rèn)試驗的結(jié)果出報告：兩種ELISA試劑檢測結(jié)果一陰一陽、兩種ELISA試劑檢測結(jié)果均陽性但一種或二種S/CO在1.0～5.9之間、第三種篩查試劑檢測結(jié)果為可疑或陰性。

圖4替代策略Ⅱ（高危人群VCT檢測策略）檢測流程6.2.3在發(fā)放檢測報告的同時上報疫情。

6.2.4做好檢測后咨詢。

6.3替代策略Ⅲ（一般人群VCT檢測策略，圖5）

6.3.1適用范圍

HIV高流行地區(qū)一般人群檢測及其它地區(qū)各類人群的VCT檢測。

6.3.2檢測程序及結(jié)果報告

先用一種高敏感性篩查試劑檢測，出現(xiàn)陰性反應(yīng)報告HIV抗體陰性；出現(xiàn)陽性則用第二種篩查試劑（高特異性）復(fù)檢。

第二種篩查試劑檢測陰性則用第三種篩查試劑（另一種高特異性試劑）檢測；第二種篩查試劑檢測為陽性則按疑似陽性咨詢，建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗，按確認(rèn)試驗的結(jié)果報告。

第三種篩查試劑檢測為陰性則報告HIV抗體陰性；第三種試劑檢測為陽性按疑似陽性咨詢，建議進(jìn)一步做確認(rèn)試驗，按確認(rèn)試驗的結(jié)果報告。6.3.3發(fā)放檢測報告的同時上報疫情。

6.3.4對報告陽性者做好檢測后咨詢。

7HIV抗體檢測情況季報的時間和程序（圖6）

7.1艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點應(yīng)于每季度首月5日前填寫“HIV抗體檢測數(shù)季報表”（附表6），向艾滋病篩查中心實驗室報告上季度檢測情況。沒有艾滋病篩查中心實驗室的地區(qū)可直接向艾滋病確認(rèn)中心實驗室報告。

7.2艾滋病篩查中心實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將本實驗室和本轄區(qū)內(nèi)各篩查實驗室上季度報告的檢測情況（附表6）匯總，報告艾滋病確認(rèn)中心實驗室。

7.3艾滋病確認(rèn)實驗室應(yīng)于每季度首月10日前將上季度檢測情況匯總后（附表6），報告當(dāng)?shù)匕滩〈_認(rèn)中心實驗室和同級衛(wèi)生行政部門。

7.4艾滋病確認(rèn)中心實驗室應(yīng)及時收集、整理和分析轄區(qū)內(nèi)HIV抗體檢測情況，于每季首月15日前向省級衛(wèi)生行政部門和中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心（簡稱中國疾控中心性艾中心）參比實驗室報告。同時，按艾滋病疫情報告的有關(guān)規(guī)定上報疫情。

7.5在非送檢樣品中（如專項調(diào)查與研究等）發(fā)現(xiàn)的艾滋病病毒抗體陽性者，應(yīng)向所在地的省疾病預(yù)防控制中心報告,并填寫“HIV抗體確認(rèn)檢測報告單”（附表3），報中國疾控中心性艾中心參比實驗室。

7.6實驗室上報檢測結(jié)果的同時，應(yīng)隨時報同級監(jiān)測人員，以便及時隨訪調(diào)查。第三章HIV核酸定性檢測1范圍

本章規(guī)定了核酸檢測、核酸序列測定的實驗室條件、檢測方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，適用于HIV核酸的定性檢測2規(guī)范性引用文件

衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理暫行辦法》的通知（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]第10號）

ButcherA,SpadoroJ:UsingPCRfordetectionofHIV-1Infection.ClinImmNewsletter,12:73:76,1992./daids/vir_manual/full_vir_manual.pdf3實驗室條件

3.1實驗室功能分區(qū)

3.1.1實驗室原則上應(yīng)分為4個獨立工作區(qū)

試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。各區(qū)的功能是：

試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。

樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。套式PCR的第二輪加樣不能在此區(qū)。

擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、序列測定、結(jié)果分析、登記及報告。

3.1.2擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔距離。

3.1.3使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制。

3.1.4在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下，樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：

在生物安全柜內(nèi)操作。

每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。

盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。

用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進(jìn)行清潔及消毒。

推薦的實驗室處理程序是：

（1）實驗前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。

（2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進(jìn)行試驗。

（3）一個實驗區(qū)域在同一時間段只進(jìn)行一種實驗。

（4）實驗結(jié)束后移出個人專用材料至個人專用區(qū)域；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。

3.1.5產(chǎn)物分析使用相對封閉的系統(tǒng)時，如特定的檢測系統(tǒng)或全自動分析儀，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)。

3.1.6各區(qū)域的儀器、設(shè)備、器具和試劑為該區(qū)專用，不得交叉使用。

3.2人員

進(jìn)行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病檢測實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室生物安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn)。

3.3設(shè)施和設(shè)備

3.3.1根據(jù)檢測項目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備。

3.3.2各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備：

試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、廢棄物容器、紫外燈。

樣品處理區(qū)：冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、紫外燈。

擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增設(shè)備、冰箱、離心機(jī)、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱、離心機(jī)、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、紫外透射儀、攝影/像設(shè)備、上下水設(shè)備、廢棄物容器、核酸污染物處理設(shè)備，紫外燈等。

測定HIVRNA應(yīng)配備-80℃冰箱，上述其它冰箱為2-8℃和-20℃4方法和試劑

4.1方法

4.1.1檢測血漿或血清樣品使用RT-PCR方法，檢測血細(xì)胞樣品使用PCR方法，一般使用套式PCR方法擴(kuò)增兩輪。

4.1.2除待測樣品外，還應(yīng)設(shè)立陽性、陰性對照。

陽性對照：與待測樣品同質(zhì)、含有目的基因片段的標(biāo)本。

陰性對照：與待測樣品同質(zhì)、不含有目的基因片段的標(biāo)本。

空白對照：不含模板的擴(kuò)增試劑。

4.2試劑

每個實驗室使用的方法不盡相同，下面所列試劑供參考。

4.2.1引物

以檢測為目的一般使用HIVgag和/或pol和/或env和/或其它基因區(qū)的引物、進(jìn)行HIV-1的基因亞型測定常使用HIV-1gag和/或pol和/或env基因區(qū)的引物。在進(jìn)行RNA逆轉(zhuǎn)錄時可使用擴(kuò)增的下游特異性引物或隨機(jī)引物，可參考文獻(xiàn)的引物序列或自行設(shè)計引物，應(yīng)盡量涵蓋常見的HIV毒株，也可使用復(fù)合引物。

4.2.2其它試劑

包括核酸提取純化、逆轉(zhuǎn)錄、PCR所需的試劑。

主要有：DNA/RNA提取試劑盒、細(xì)胞裂解緩沖液、蛋白酶K、TAE緩沖液、逆轉(zhuǎn)錄酶及其緩沖液、RNA酶抑制劑、PCR反應(yīng)緩沖液、DNTPs、Taq酶。5擴(kuò)增目的基因片段

5.1樣品的采集和處理

見第一章“樣品的采集和處理”。

5.2核酸提取

嚴(yán)格按照商業(yè)用試劑盒說明書操作。提取RNA時應(yīng)注意防止RNA降解。DNA于-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應(yīng)凍存在-80℃冰箱。

5.3逆轉(zhuǎn)錄

將RNA模板、逆轉(zhuǎn)錄引物、dNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、緩沖液和適量無RNA酶的超純水加入反應(yīng)管中，在適宜溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA。

6擴(kuò)增產(chǎn)物分析及結(jié)果報告

6.1常用的擴(kuò)增產(chǎn)物分析

常用的擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法是電泳法，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較，判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有酶切、雜交、序列分析等。

6.2結(jié)果判定和報告

6.2.1試驗成立的條件

所有的標(biāo)本都應(yīng)做雙份平行檢測，陽性結(jié)果還要用擴(kuò)增另外一個基因區(qū)的一對引物進(jìn)行進(jìn)一步檢測。每一次檢測都至少同時做兩個陽性對照和兩個陰性對照，只有在陽性對照擴(kuò)增出預(yù)期的片段、陰性對照沒有擴(kuò)增片段、雙份平行標(biāo)本結(jié)果一致的情況下，實驗才成立。標(biāo)本的任何兩個基因區(qū)（env和gag，或env和pol，或gag和pol或其它兩種基因組合）呈陽性才能判定為陽性結(jié)果。

6.2.2HIV核酸檢測陰性

只可報告本次實驗結(jié)果陰性。

6.2.3HIV核酸檢測陽性

可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo)，不單獨用于HIV感染的診斷。7實驗室管理

HIV核酸檢測實驗室應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規(guī)定并嚴(yán)格遵照執(zhí)行。

7.1生物安全

必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。

7.2嚴(yán)格執(zhí)行分區(qū)制度

7.2.1按照要求嚴(yán)格進(jìn)行實驗室分區(qū)。

7.2.2各區(qū)域只用于特定的操作，不得從事其它工作。

7.3儀器和材料的專用制度

儀器、設(shè)備、材料、設(shè)施均應(yīng)按工作區(qū)域進(jìn)行標(biāo)識，不得交叉混用。

7.4單向流向制度

7.4.1實驗材料[包括：樣品及其擴(kuò)增產(chǎn)物、實驗器材（容器、板架、實驗服、帽子、口罩、手套、鞋套）、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等]只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。

7.4.2實驗室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動。

7.4.3盡量減少人員由擴(kuò)增后區(qū)返回擴(kuò)增前區(qū)的頻度。

7.5廢棄物處理制度

7.5.1所有廢棄物應(yīng)按照HIV污染物品處理。

7.5.2由專人按特定程序和方法進(jìn)行清潔和消毒。第四章HIVRNA定量測定（病毒載量測定）1范圍

本章規(guī)定了測定HIV病毒載量常用方法的實驗室條件、方法、結(jié)果判定以及應(yīng)用,適用于血漿中HIV病毒載量的測定。2規(guī)范性引用文件

GuidelinesfortheUseofAntiretroviralHIV-InfectedAdultsandAdolescentsMMWR

RecommendationsandReportsApril24,1998/47(RR-5);42-82.

Chiron?Productinsert(Quantiplex?HIV-RNA),L6170rev5.0,June1994RocheAMPLICORHIVMONITOR?TESTProcedureManual.

FractionsofHIV-1SeropositivePersonsbyTwoNucleicAcidAmplificationAssays,AIDS.

ResearchandHumanRetrovirus1993;(9):259-265.

/daids/vir_manual/full_vir_manual.pdf3實驗室條件

3.1實驗室功能分區(qū)

3.1.1實驗室原則上應(yīng)分為4個獨立工作區(qū)

試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。各區(qū)的功能是：

試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。

樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。

擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報告。

3.1.2擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間最好有一定的間隔。

3.1.3使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制。

3.1.4在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)：

在生物安全柜內(nèi)操作。

每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。

盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。

用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進(jìn)行清潔及消毒。推薦的程序是：

（1）實驗前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。

（2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進(jìn)行試驗。

（3）一個實驗區(qū)域在同一時間段只進(jìn)行一種實驗。

（4）實驗結(jié)束后，移出個人專用材料至個人專用區(qū)域保管；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。

3.1.5各區(qū)域的儀器、設(shè)備、器具、工作服和試劑應(yīng)為該區(qū)專用，不得交叉使用。

3.2人員

進(jìn)行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn)。

3.3設(shè)施和設(shè)備

3.3.1根據(jù)檢測項目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備。

3.3.2各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性專用，開展特定試驗時應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置專用設(shè)備。以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備：

試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。

樣品處理區(qū)：冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器。

擴(kuò)增區(qū)：核酸擴(kuò)增設(shè)備、冰箱、離心機(jī)、加樣器、廢棄物容器。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱、離心機(jī)、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、核酸污染物處理設(shè)備等。

配備-80℃冰箱。

4方法和試劑

4.1方法

常用的HIVRNA定量測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）。不同病毒載量檢測方法的比較見表2（JohnG.BartlettM.D.andJoelE.GallantM.D.,MedicalManagementofHIVInfection2004Editionp1-5）。表2不同病毒載量檢測方法的比較

RocheBayerbioMerieux商品名AmplicorVersantNucliSens技術(shù)原理RT-PCRbDNANASBA結(jié)果比較RT-PCR試驗的結(jié)果近似于2.0或3.0版bDNA試驗的結(jié)果bDNA2.0版或3.0版的試驗結(jié)果與RocheRT-PCR實驗的結(jié)果具有可比性結(jié)果與RT-PCR和bDNA具有可比性，但支持性資料少于前者優(yōu)點/缺點與Bayer的方法相比假陽性較少。已獲FDA批準(zhǔn)。需要時間較短。動態(tài)范圍廣。已獲FDA批準(zhǔn)。能夠使用組織或體液樣品，例如陰道分泌物。動態(tài)范圍最大。已獲FDA批準(zhǔn)。動態(tài)范圍標(biāo)準(zhǔn)：（1.5版）400-750,000c/ml超敏：（1.5版）50-75,000c/mlbDNA3.0版：75-500,000c/mlNuclisensHIV-1QT：176-3,500,000c/ml取決于標(biāo)本量擴(kuò)增的亞型1.0版：只有B亞型1.5版：B-GA-HA-G標(biāo)本量Amplicor-0.2ml超敏-0.5ml1ml10μl-2ml抗凝劑EDTAEDTAEDTA、肝素、全血、任何體液、PBMC、精液、組織等要求6小時之內(nèi)分離血漿，運輸前在-20℃或-704小時之內(nèi)分離血漿，運輸前在-20℃或-704小時之內(nèi)分離血清或血漿，運輸前在-20℃或-70

4.2試劑

HIVRNA定量檢測包括bDNA、RT-PCR、NASBA試劑。5實驗室管理

HIV核酸檢測實驗室應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度，工作人員必須充分了解各項規(guī)定并嚴(yán)格遵照執(zhí)行。

5.1生物安全

必須符合艾滋病實驗室的通用生物安全要求。

5.2嚴(yán)格執(zhí)行分區(qū)制度

5.2.1按照要求嚴(yán)格進(jìn)行實驗室分區(qū)。

5.2.2各區(qū)域只用于特定的操作，不得從事其它工作。

5.3儀器和材料的專用制度

儀器、設(shè)備、材料、設(shè)施均應(yīng)按工作區(qū)域進(jìn)行標(biāo)識，不得交叉混用。

5.4單向流向制度

5.4.1實驗材料,包括：樣品及其擴(kuò)增產(chǎn)物、實驗器材（容器、板架、個人護(hù)具）、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品處理區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。

5.4.2實驗室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動。

5.4.3盡量減少人員由擴(kuò)增后區(qū)返回擴(kuò)增前區(qū)的頻度。

5.5廢棄物處理制度

5.5.1所有廢棄物應(yīng)按照HIV污染物品處理。

5.5.2由專人按特定程序和方法進(jìn)行清潔和消毒。

5.6質(zhì)量控制和評價

5.6.1制訂質(zhì)量保證計劃，包括內(nèi)部質(zhì)量控制和參加室間質(zhì)量評價的程序。

5.6.2建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度，每次需加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)對照。

5.6.3定期接受室間質(zhì)量評價。6HIV核酸定量檢測的意義

6.1輔助診斷

在一般情況下，HIV抗體檢測足以對HIV感染與否做出正確診斷，但在特殊情況下，單純抗體檢測不足以完成明確的判定，如出現(xiàn)某些非典型的抗體反應(yīng)形式，特別是不確定反應(yīng)時，RNA的測定可提供非常有用的證據(jù)。雖然單純使用RNA測定不能完全確定感染與否，但當(dāng)RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時（>3，000c/ml），感染發(fā)生的可能性非常大。

需要指出的是，每一種RNA定量系統(tǒng)都有其最低檢測限，即可以測出的最低拷貝數(shù)，通常在50?100c/ml以上，RNA定量檢測時未測出不等于樣品中不含有病毒RNA。另外，許多AIDS病人/HIV感染者在接受抗病毒治療后其病毒載量可降至非常低的水平，還有少數(shù)HIV感染者在感染后長期處于病毒水平非常低的狀態(tài)，進(jìn)行RNA測定時往往測不出來。因此，使用此指標(biāo)應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷。

6.2早期診斷

在HIV感染的窗口期無法使用抗體檢測進(jìn)行診斷。而在感染早期，在抗原峰出現(xiàn)前后通常出現(xiàn)一個病毒載量的高峰，此高峰通常高于發(fā)病時的血漿病毒水平，并且有證據(jù)表明這個時期的病毒具有很高的感染能力。這個高峰在免疫系統(tǒng)產(chǎn)生反應(yīng)后，尤其是在細(xì)胞免疫出現(xiàn)后開始下降。因此早期病毒RNA測定具有特殊的意義。該方法也可用于HIV感染孕婦所生嬰兒的早期輔助診斷。

目前國際上正在嘗試使用這種檢測對采供血樣品進(jìn)行多個樣品混合后的RNA檢測以減少窗口期危險（降低“殘余危險度”）。

6.3病程監(jiān)控

根據(jù)HIV感染發(fā)生后病毒載量具有一定的變化規(guī)律，并且這種變化與疾病的進(jìn)程有著密切的相關(guān)性。因此定期進(jìn)行病毒載量的檢測有助于確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。

通常在HIV感染后無癥狀期內(nèi)發(fā)生的感染或其它臨床癥狀很難與AIDS發(fā)病時的癥狀區(qū)別，為確定一個剛發(fā)生的癥狀是否與HIV的感染有關(guān)，醫(yī)生往往需要觀察病人的實驗室指標(biāo)，病毒載量就是一個非常重要的指標(biāo)。

6.4指導(dǎo)治療方案及療效判定

臨床實踐證明，并非在任何情況下HIV感染者都應(yīng)該進(jìn)行抗病毒治療。這不單是經(jīng)濟(jì)上的原因，更重要的是由于抗病毒藥物的副作用和療效原因。通常在病毒載量達(dá)到一定水平后（如>35，000?50，000c/ml）抗病毒治療才具有良好的效果。

在進(jìn)行治療后，通過病毒水平的檢測才能確定治療是否有效，通常在治療前后病毒水平降低0.5log以上才被認(rèn)為臨床有效。

6.5預(yù)測疾病進(jìn)程

HIV感染后疾病進(jìn)程與病毒載量的關(guān)系十分密切，觀察HIV感染者病毒RNA水平可大致預(yù)測其發(fā)病的可能。病毒載量與6年發(fā)病率的關(guān)系為：<500c/ml時5.4%;501?3，000c/ml時16.6%;3，001?10，000c/ml時31.7%;10，001?30，000c/ml時55.2%;>30，000c/ml時則為80%。

當(dāng)HIV感染者CD4+T細(xì)胞計數(shù)＜200/μl時，病毒載量與3?6個月發(fā)展至AIDS的危險為：＜10，000c/ml為4.9%;10，000?29，999c/ml為12.7%;30，000?99，990c/ml為17.7%;＞100，000c/ml為22.4%。在CD4+細(xì)胞數(shù)相同的情況下，年紀(jì)大的比年輕患者發(fā)展至AIDS的危險更大（AIDS2004；18：51-58.）。第五章CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測1范圍

本章規(guī)定了用多平臺三級程序法和單平臺一步法檢測全血中的CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞。2規(guī)范性引用文件

1997RevisedGuidelinesforPerformingCD4+T-CellDeterminationsinPersonsInfectedwithHumanImmunodeficiencyVirus(HIV)MMWR46(RR-2);1-29Publicationdate:01/10/1997。3實驗室條件

3.1人員

進(jìn)行HIV感染者CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn)。

3.2設(shè)施和設(shè)備

3.2.1樣品處理區(qū)：生物安全柜、離心機(jī)、冰箱、水浴箱、旋轉(zhuǎn)振蕩器、精確移液器（5μl?50μl、20μl?200μl、200μl?1000μl）。

3.2.2流式細(xì)胞儀檢測區(qū)：流式細(xì)胞儀

3.3功能分區(qū)

實驗室原則上應(yīng)分為樣品處理區(qū)和流式細(xì)胞儀檢測區(qū),各區(qū)的功能是：

3.3.1樣品處理區(qū)應(yīng)達(dá)到生物安全Ⅱ級（BSL-2）實驗室要求，用于樣品處理、流式檢測樣品制備。

3.3.2流式細(xì)胞儀檢測區(qū)用于制備好的樣品上機(jī)檢測。4樣品采集、運輸和接收

4.1樣品的采集

4.1.1選擇合適的抗凝劑，分別用于血液學(xué)檢測和流式細(xì)胞儀的免疫表型檢測。

用于血液學(xué)檢測的抗凝劑

（1）EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。

（2）在血球分析儀生產(chǎn)商允許的時間范圍內(nèi)檢測，不超過30h，不檢測超出抗凝時間范圍的樣品。

用于流式細(xì)胞儀免疫表型檢測的抗凝劑

（1）用K3EDTA抗凝，收集樣品應(yīng)在30h以內(nèi)，盡早（8h以內(nèi)）處理。

（2）用ACD或肝素抗凝，收集樣品在48h以內(nèi)，盡早（8h以內(nèi)）處理。

4.1.2靜脈采血收集血樣，將血液注入一個事先加入適當(dāng)抗凝劑的試管（有條件者最好用真空試管）。

當(dāng)收集兒童樣品時，采用兒童用注射器、小試管。

采血后立即握住試管兩端，顛倒混勻數(shù)次，將血液與抗凝劑混勻，以防止凝固。

4.1.3準(zhǔn)備適當(dāng)數(shù)量的樣品管

當(dāng)同一樣品的血球檢測和流式細(xì)胞儀免疫表型檢測在同一個實驗室內(nèi)進(jìn)行時，用1個裝有K3EDTA的試管即可。

在所有其它條件下用2個試管（用K3EDTA作血球檢測，用K3EDTA、ACD或肝素作流式細(xì)胞儀免疫表型檢測）。

4.1.4對所有樣品編號，并寫明日期和收集時間。

4.2樣品運輸

4.2.1在室溫下（18?23℃）保存和運輸樣品，避免極端溫度（冷凍或過熱）。超過37℃的溫度會破壞細(xì)胞，對血液學(xué)和流式細(xì)胞儀的檢測有影響。天氣熱時，需要用一個隔熱的容器裝樣品，并且把這個容器放于另一個有冰袋和吸熱物質(zhì)的容器中。這種方法有助樣品的保存。

4.2.2盡可能快地將樣品送至免疫表型檢測實驗室。

4.2.3如需運送樣品到其它地點時，應(yīng)將裝樣品的試管放于一個防漏的容器中，并將此容器放于一個裝有充足的吸水性物質(zhì)的紙罐中，以防止震動并可吸收所有因試管破裂漏出的血液。蓋緊紙罐，用橡皮帶系緊。

4.2.4應(yīng)選擇特定的方案，并且安排合適的時間收集和運輸樣品。

4.3樣品接收

4.3.1樣品到達(dá)以后立即檢查試管及其所裝的血樣。

4.3.2如有以下現(xiàn)象發(fā)生，采取正確的方法處理：

如果樣品較熱或較冷，但沒有明顯的溶血或結(jié)冰，可以處理樣品，但要在工作表的報告上注明溫度條件。不要馬上加熱和冷凍樣品以使其達(dá)到室溫，因為這樣會對免疫表型檢測的結(jié)果產(chǎn)生不利的影響，散射光模式的不正常會顯示出所受到的影響。

不可檢測溶血或結(jié)冰的樣品。

不可檢測凝血的樣品。

5方法

目前用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)的檢測方法分為自動檢測方法和手工操作法。自動檢測方法包括流式細(xì)胞儀（主要有多平臺三級程序法和單平臺一步法）和專門的細(xì)胞計數(shù)儀，手工操作法包括幾種手工操作試驗，需要顯微鏡或酶聯(lián)免疫試驗設(shè)備。6實驗資料的記錄

6.1實驗應(yīng)及時、準(zhǔn)確地記錄結(jié)果。

6.2實驗記錄中應(yīng)包括以下內(nèi)容：日期、操作者、所有樣品、實驗內(nèi)容、過程（步驟）、結(jié)果及有無事故等。

6.3整個實驗室的實驗資料要統(tǒng)一有專人負(fù)責(zé)，按固定格式記錄在案。

6.4計算機(jī)生成的實驗結(jié)果，存檔備案；定期拷貝計算機(jī)結(jié)果文檔，備案保存。7結(jié)果報告

7.1按照實驗結(jié)果填寫CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測報告單，檢測人員簽字。

7.2根據(jù)CD命名標(biāo)準(zhǔn)報告數(shù)據(jù)，用一個簡短的描述解釋命名的意義。注意：CD4+T細(xì)胞是指輔助性T細(xì)胞。正確的報告CD4+T細(xì)胞應(yīng)該是那些CD4+和CD3+雙陽性的細(xì)胞。同樣地，CD8+T細(xì)胞是T-suppressor/cytotoxic細(xì)胞，為CD3+和CD8+雙陽性的細(xì)胞。在CD4+和CD8+的判定中重要的是排除其它細(xì)胞（非T細(xì)胞）的干擾。

7.3以全部淋巴細(xì)胞的百分比報告數(shù)據(jù)，并且修正門內(nèi)淋巴細(xì)胞純度。例如，如果淋巴細(xì)胞純度是94%，而CD3值為70%，可以通過0.7除以0.94乘以100得到74%，修正CD3的值。

7.4為檢測免疫亞群而取血的同時，用該血樣作自動測定全血細(xì)胞（CBC）計數(shù)白細(xì)胞（WBC）及分類測定，報告淋巴細(xì)胞亞群絕對數(shù)值。

7.4.1用淋巴細(xì)胞的總數(shù)（來自于WBC及分類）乘以淋巴細(xì)胞亞群的百分率（從流式細(xì)胞儀的數(shù)據(jù)中得到），計算絕對數(shù)值。

7.4.2如可能，應(yīng)報告計數(shù)的百分率和絕對值。

7.5單平臺一步法由計算機(jī)軟件直接出結(jié)果并打印出報告單，報告單的內(nèi)容包括如下結(jié)果：CD45+AbsCnt；CD3+AbsCnt；CD3+CD4+%TLym；CD3+CD4+AbsCnt；CD3+CD8+%TLym；CD3+CD8+AbsCnt；Th/Ts及其正常參考值范圍(BD公司建立的正常參考值范圍見表3)，檢測人員簽字。表3BD公司應(yīng)用單平臺一步法建立的正常參考值范圍表項目單位參考正常值范圍CD3+/CD45+%56%~85%CD3+絕對數(shù)個/μl1027~2086CD3++CD8+/CD45+%15%~34%CD3++CD8+絕對數(shù)個/μl323~836CD3++CD4+/CD45+%30%~54%CD3++CD4+絕對數(shù)個/μl706~1125CD4+/CD8+比值

1~2*

*另有報告:①0.68-2.47（中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2003，26（2）：123-125）

②0.71-2.87（中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，1998，21（4）：223-227）

③1.38±0.34(中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，1998，21（2）：98)

7.6應(yīng)報告所有相關(guān)數(shù)據(jù)的正常值范圍（如CD4＋T淋巴細(xì)胞百分率和絕對數(shù)）。每個實驗室都應(yīng)測定參考數(shù)值。應(yīng)分別建立成人和兒童的正常值參考范圍，在對病人樣品檢測時應(yīng)使用合適的參考值。

7.7報告單經(jīng)復(fù)核人復(fù)核簽字及簽發(fā)，加蓋檢驗專用公章后發(fā)出。

7.8報告發(fā)放時，可經(jīng)掛號郵寄或直接交給送檢人。

8質(zhì)量控制和評價

制定質(zhì)量保證計劃，建立內(nèi)部質(zhì)量控制制度。參加室間質(zhì)量評價。正常參考數(shù)據(jù)見7.5。

9檢測CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的意義

T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一群細(xì)胞。在正常機(jī)體內(nèi)各淋巴細(xì)胞亞群相互作用，維持著機(jī)體正常免疫功能。當(dāng)不同淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時，可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列病理變化。因此，Ｔ淋巴細(xì)胞亞群的免疫分型能夠提供有關(guān)患者免疫狀態(tài)的重要信息。AIDS是由HIV引起的一組綜合征，HIV主要侵犯人CD4+T淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致其數(shù)量上的減少和功能缺陷，使機(jī)體免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最終導(dǎo)致各種機(jī)會感染和腫瘤。因而，對HIV感染者和AIDS病人定期進(jìn)行CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測具有十分重要的意義。主要表現(xiàn)在以下幾個方面：

9.1了解機(jī)體的免疫狀態(tài)以進(jìn)行疾病分期，如美國CDC就是以此為基礎(chǔ)制訂了HIV感染者/AIDS病人的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)（見表4），目前國內(nèi)外仍被采納應(yīng)用。表41993年修訂的HIV感染的分類系統(tǒng)和青少年及成人擴(kuò)展的AIDS監(jiān)測病例定義CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)范圍臨床分類A無癥狀，急性（原發(fā)）HIV或PGLB有癥狀，非（A）或（C）C艾滋病指征性疾病1．≥500/μl（≥29%）A1B1C12．200~499/μl（14%~28%）A2B2C23．200/μl（<14%）A3B3C3

備注：A、B、C的解釋請參考《艾滋病病毒感染的診斷與治療》邵一鳴、蔣巖、欒文民主譯，

科學(xué)出版社，2002年。

9.2長期監(jiān)測CD4+T淋巴細(xì)胞絕對數(shù)的變化，有助于了解患者的病情發(fā)展，決定正確的治療方案，并觀察對治療的反應(yīng)。如判斷HIV感染者的臨床合并癥（當(dāng)CD4+T淋巴細(xì)胞細(xì)胞＜200/ul時，很容易發(fā)生卡氏肺孢子蟲肺炎；當(dāng)CD4+T淋巴細(xì)胞<50時，易發(fā)生CMV感染）。

9.3幫助確定抗HIV藥物治療及預(yù)防機(jī)會性感染治療的適應(yīng)癥，如當(dāng)CD4+T淋巴細(xì)胞＜200/ul時，應(yīng)給予抗卡氏肺孢子蟲肺炎的預(yù)防性治療。

9.4是用來評價一些新的、針對HIV的治療方法和治療藥物療效的重要指標(biāo)。第六章HIV抗原檢測1范圍

本章規(guī)定了P24抗原的檢測方法適用于HIV-1P24抗原的檢測。2規(guī)范性引用文件

GuidelinesfortheBLOODTRANSFUSIONSERVICESINTHEUNITEDKINGDOM.ThirdEdition.

MMWR45(RR-2);1-9，Publicationdate:03/01/1996.Vironostika?HIV-1AntigenMicroelisaSystemAssaypackageinsertandallreferenceswithin.

/daids/vir_manual/full_vir_manual.pdf3實驗條件

3.1人員

從事HIV-1抗原檢測的人員須具有艾滋病實驗室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn)。

3.2設(shè)施和設(shè)備

生物安全柜（生物安全I(xiàn)I級）、離心機(jī)、加樣器、冰箱、酶標(biāo)儀；洗板機(jī)。

3.3防護(hù)用具

專用的工作服、隔離衣、帽子、鞋套、防護(hù)眼鏡、口罩及手套。

3.4實驗材料

HIV-1P24抗原檢測試劑盒、酶標(biāo)板、移液器。4抗原檢測

4.1適用范圍

4.1.1HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷。

4.1.2HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷。

4.1.3第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷。

4.1.4監(jiān)測病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。

4.2試劑

一般用ELISA雙抗體夾心法試劑，必須經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)注冊、在有效期內(nèi)的試劑。5HIVP24抗原檢測方法

P24抗原的檢測通常是采用ELISA夾心法，已知抗體包被固相反應(yīng)板孔底，加入待測血清，若血清中含有P24抗原則與包被抗體形成抗原-抗體復(fù)合物，再加入酶（HRP）標(biāo)記的HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果。

為了提高檢測血清中P24抗原的敏感性，需先將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測定，目前已發(fā)展了ICDP24抗原（immun-complexdisassociate，免疫復(fù)合物解離，ICD）測定試劑，用于HIV-1P24抗原測定。即使將復(fù)合物解離，敏感性提高，也只能在大約50%無癥狀感染者中檢出P24抗原。

5.1試驗準(zhǔn)備

5.1.1將待檢樣品從冰箱中取出，核對樣品編號，放室溫自然融化。

5.1.2將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30min，試劑盒應(yīng)通過國際標(biāo)準(zhǔn)，通過國家批批檢。

5.1.3準(zhǔn)備好試驗所需的廢物缸、加樣器、吸頭等物品。

5.1.4調(diào)好水浴箱、恒溫箱的溫度。

5.1.5檢查酶標(biāo)儀洗板機(jī)是否正常。

5.1.6根據(jù)所選試劑盒確定試驗操作步驟。

5.2試驗操作

5.2.1計算試驗所需的檢測孔數(shù)，每次試驗設(shè)陰性對照3孔，陽性對照1孔，內(nèi)部對照1孔。

5min內(nèi)，每孔加入25?l裂解液，含對照孔。

5.2.2加入100?l待測樣品及對照，用膠紙封好。

5.2.3置于水浴箱或溫箱37±2?C孵育60±5min。

5.2.4洗滌6遍。

5.2.5加入100?l酶標(biāo)抗體，勿攪動，室溫孵育1h。

5.2.6重復(fù)步驟5。

5.2.7加入100?l底物液，勿封閉板條，室溫放置30min。

5.2.8加入100?l1M硫酸終止反應(yīng)，于15min內(nèi)置酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450nm/630nm測OD值。

5.3試驗結(jié)果

5.3.1填寫好試驗操作記錄，

5.3.2檢測樣品及對照結(jié)果，

5.3.3試劑廠家、批號、效期，

5.3.4檢測人、復(fù)核人簽名，

5.3.5試驗日期，

5.3.6將試驗結(jié)果存檔保留，處理試驗廢物，擦凈實驗臺。

5.4結(jié)果報告和解釋

5.4.1HIV-1P24抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗確認(rèn)，若陽性標(biāo)本的OD值比中和反應(yīng)前減少50%以上，才確定為HIVP24抗原結(jié)果陽性。

5.4.2HIV-1P24抗原陽性僅作為HIV感染窗口期的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。

5.4.3HIV-1P24抗原檢測的敏感性為30?90％，低于病毒載量測定。HIV-1P24抗原陰性結(jié)果只表示在本試驗中無反應(yīng)，不能排除HIV感染。

5.4.4嬰幼兒經(jīng)過胎盤或哺乳從母親獲得的HIV抗體不能用于診斷是否經(jīng)母嬰傳播感染HIV。嬰幼兒體內(nèi)從母親得到的HIV抗體持續(xù)存在時間最長不超過18個月。在18月齡以前可以用多種不同的非抗體依賴性的檢驗方法對新生兒HIV感染進(jìn)行輔助診斷，包括：HIVP24抗原檢測、病毒分離培養(yǎng)、RNA或DNA測定。

第七章艾滋病實驗室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防1范圍

本章規(guī)定了艾滋病實驗室安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防。

本規(guī)范適用于全國各級各類艾滋病實驗室的安全防護(hù)和職業(yè)暴露預(yù)防。2規(guī)范性引用文件

《醫(yī)務(wù)人員艾滋病病毒職業(yè)暴露防護(hù)工作指導(dǎo)原則（試行）》中華人民共和國衛(wèi)生部，2004年5月31日頒布，2004年6月1日起實施。

《實驗室生物安全通用要求》GB19489-2004，2004年10月1日起實施。

《微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則（WS233-2002）》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，2002-12-03發(fā)布，2003-08-01實施。

GuidelinesfortheSafeTransportofInfectiousSubstancesandDiagnosticSpecimens.WHO1997.

BiosafetyinMicrobiologicalandBiomedicalLaboratories,CDC/NIH,FourthEdition,1999.

Update:ProvisionalrecommendationsforchemoprophylaxisafteroccupationalexposuretoHumanImmunodeficiencyVirusMMWR.1996;45:468-472,andfromBSchoub.VirusSA.1997.GuidelinestotheManagementofOccupationalExposuretoHIV.NationalInstituteofVirology.

《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》中華人民共和國衛(wèi)生部2002-11-15發(fā)布，3實驗室生物安全級別

3.1艾滋病血清學(xué)檢測

艾滋病血清學(xué)檢測（包括篩查和確認(rèn)實驗室）、免疫學(xué)和核酸檢測應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進(jìn)行。

3.2HIV分離、研究

HIV分離、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作應(yīng)在Ⅲ級生物安全實驗室（BSL-3）中進(jìn)行。4實驗室安全防護(hù)

4.1個人防護(hù)及保健

艾滋病實驗室所用的個人防護(hù)裝備均應(yīng)符合國家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

4.1.1防護(hù)服

艾滋病實驗室應(yīng)為每個工作人員配備足夠的防護(hù)服，包括白大衣、隔離衣或一次性工作服。平時應(yīng)將清潔的防護(hù)服置于實驗室清潔區(qū)內(nèi)專用存放處。

離開實驗室時，應(yīng)脫去防護(hù)服。每次穿過的污染的防護(hù)服應(yīng)及時放入污衣袋中，待消毒后方可洗滌或廢棄。

當(dāng)含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）及有可能濺到工作人員時，應(yīng)使用防滲透性的（如塑料）圍裙。

當(dāng)發(fā)現(xiàn)防護(hù)服已被污染時，應(yīng)立即更換。

4.1.2艾滋病實驗室應(yīng)配備一次性手套、一次性口罩、安全防護(hù)眼鏡及沖洗眼睛的裝置。

4.1.3艾滋病實驗室應(yīng)配備實驗室專用的工作鞋，鞋面覆蓋足背，鞋底防滑。

4.1.4個人保健

高標(biāo)準(zhǔn)的個人保健對于減少感染的危險性很重要。皮膚受損、患病都會增加感染的危險。皮膚的任何傷口和擦傷都應(yīng)以防水敷料覆蓋。

進(jìn)實驗室前要摘除首飾，修剪長的帶刺的指甲，以免刺破手套。

進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣，戴手套。如果接觸物傳染危險性大，則應(yīng)戴雙層手套和防護(hù)眼鏡。

離開實驗室前必須脫去隔離衣，并洗手。

嚴(yán)禁在艾滋病實驗室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。

4.2實驗室管理要求

4.2.1建立安全制度

實驗室的儀器設(shè)備、建筑和設(shè)施的安全性應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》GB19489-2004和本《規(guī)范》要求。

根據(jù)本《規(guī)范》制訂本實驗室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S-SOP），該制度或程序應(yīng)適用于現(xiàn)有的實驗條件，并與實驗室其它規(guī)定相一致。

無論是否發(fā)生意外事故，每年都要對安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序及其實施情況進(jìn)行檢查和修訂，并有記錄。

制定意外事故處理預(yù)案。建立意外事故的登記和報告制度。

實驗室主任負(fù)責(zé)組織對突發(fā)事件和職業(yè)暴露事故進(jìn)行調(diào)查、登記、處理和報告。

4.2.2人員培訓(xùn)和管理

向管理人員和所有檢測人員提供并完成與工作相關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)。強(qiáng)化全員安全培訓(xùn)和“普遍性防護(hù)原則”安全意識。所有工作人員必須經(jīng)過HIV檢測技術(shù)和省級以上艾滋病實驗室安全培訓(xùn)，包括上崗培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受實驗室管理人員的監(jiān)督。實驗室的安全責(zé)任人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。

必須告知新上崗人員實驗室工作的潛在危險，進(jìn)行安全教育，直至有能力后方可單獨工作。

實驗室主任應(yīng)了解所有工作人員。在安排工作區(qū)域時，要根據(jù)人員的工作種類和所涉及的生物材料，對實驗室環(huán)境做好安全檢查。

新調(diào)入人員、外來合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員在進(jìn)入實驗室之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準(zhǔn)。非實驗室人員和非實驗室物品不得進(jìn)入實驗室。

嚴(yán)格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測HIV抗體和備案制度，工作人員血清應(yīng)長期保留。實驗室工作人員從事工作前必須進(jìn)行HIV抗體和乙肝、丙肝等肝炎病毒標(biāo)記物的檢測；注射乙肝疫苗；每半年至1年進(jìn)行1次HIV抗體檢測，并保留血清樣品。

4.2.3建立嚴(yán)格的保密制度并定期檢查

與HIV/AIDS相關(guān)檢測項目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密，包括送檢單與檢測記錄的保管、報告單的發(fā)放和工作人員年度采血檢測等。

艾滋病檢測實驗室所有人員應(yīng)具有高度的保密意識。不可對無關(guān)人員透露檢測結(jié)果。

保密制度納入年度考核，發(fā)現(xiàn)問題及時處理并根據(jù)情況修訂保密制度。

4.2.4嚴(yán)格質(zhì)量管理

按要求做好安全操作的管理以及檢測試劑的選擇、檢測工作的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評。

對所有檢測報告嚴(yán)格把關(guān)，杜絕漏報、誤報現(xiàn)象的發(fā)生。

4.2.5對存放試劑和有毒物區(qū)域的監(jiān)控

冷藏柜、冰箱、培養(yǎng)箱和存放生物試劑、化學(xué)危險品、放射性物質(zhì)的容器置于工作人員視線之外的地點時應(yīng)上鎖。

應(yīng)設(shè)有專門儲存陽性血清、質(zhì)控品的低溫冰柜和/或血清庫毒種庫，并應(yīng)上鎖，專人管理。

各級實驗室血清庫/毒種庫的設(shè)置按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。

4.2.6建立應(yīng)付突發(fā)事件的措施

在緊急預(yù)案中要包括在緊急事件發(fā)生時通知實驗室主任、設(shè)備管理員、實驗室工作人員和設(shè)備安全員。

實驗室主任和設(shè)備安全員要遵循有關(guān)規(guī)定，報告、調(diào)查和處理突發(fā)事件以及可能發(fā)生的意外職業(yè)暴露。

4.3實驗室的安全操作

4.3.1在安排工作人員的實驗室區(qū)域時，要根據(jù)其工作的種類和所涉及的生物試劑，對實驗室環(huán)境做好安全檢查。

4.3.2進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣、戴手套，必要時（如對初篩陽性標(biāo)本進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)時，或直接對HIV毒種進(jìn)行操作時）戴防護(hù)眼鏡，以防污染暴露的皮膚和衣物。不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。

4.3.2進(jìn)入實驗室應(yīng)穿隔離衣、戴手套，必要時（如對初篩陽性標(biāo)本進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)時，或直接對HIV毒種進(jìn)行操作時）戴防護(hù)眼鏡，以防污染暴露的皮膚和衣物。不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。

4.3.3如接觸物傳染性危險大，可戴雙層（兩付）手套以增加保護(hù)。操作時手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并戴上新手套。

4.3.4禁止采用口腔吸液管，必須使用移液器來操作實驗室的所有液體。

4.3.5操作中有標(biāo)本、檢測試劑外濺時應(yīng)及時消毒。對大量濺出的濃度高的傳染物在清潔之前應(yīng)先用1%次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。

4.3.6工作完畢，要對工作臺面消毒。工作臺面應(yīng)當(dāng)用0.1%?0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；

4.3.7工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作衣，用肥皂和流動水洗手。

4.3.8血清及其它體液樣品均應(yīng)嚴(yán)格按要求妥善保存，HIV抗體陽性樣品應(yīng)做好標(biāo)記單獨保存。

4.4避免利器的使用

4.4.1盡量避免在實驗室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對用過的物品進(jìn)行消毒處理。

4.4.2盡量使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以降低直接接觸血液和刺傷的危險性。

4.4.3應(yīng)將用過的銳器直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，針頭直接放入堅固的容器內(nèi)，消毒后廢棄。禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。

4.5樣品的采集

所有的血液、血清、未固定的組織和組織液樣品，均應(yīng)視為有潛在傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。

4.5.1應(yīng)象操作未知傳染風(fēng)險樣品一樣，小心存放、拿取和使用所有可能有傳染性的質(zhì)量控制和參考物質(zhì)。用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。

4.5.2