《細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)》課件

第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)一、T細(xì)胞功能檢測(cè)二、B細(xì)胞功能檢測(cè)三、NK細(xì)胞活性測(cè)定第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)1精選課件ppt第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)1精第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)一、中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測(cè)的臨床應(yīng)用思考題小結(jié)2精選課件ppt第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)思考題2精選課件ppt對(duì)淋巴細(xì)胞群，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等功能測(cè)定可以有效評(píng)價(jià)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能。3精選課件ppt對(duì)淋巴細(xì)胞群，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等功能第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能測(cè)定可分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)主要是間接了解淋巴細(xì)胞對(duì)抗原、半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外實(shí)驗(yàn)主要包括淋巴細(xì)胞對(duì)抗原或有絲分裂原刺激后的增殖反應(yīng)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)及淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)物的測(cè)定4精選課件ppt第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能測(cè)定可分為體內(nèi)實(shí)淋巴細(xì)胞T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）B細(xì)胞（執(zhí)行體液免疫功能）NK和K細(xì)胞（非特異性免疫作用）5精選課件ppt淋巴細(xì)胞T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）5精選課件ppt一、T細(xì)胞功能的檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)6精選課件ppt一、T細(xì)胞功能的檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)6精選課件ppt（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)1.原理：淋巴細(xì)胞DNA合成分化母細(xì)胞刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴(kuò)大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松7精選課件ppt（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)1.原理：淋巴細(xì)胞DNA合成分化母

未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞淋巴母細(xì)胞過渡型細(xì)胞大小(直徑μm)12～2012～166～8核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4個(gè)有或無(wú)無(wú)有絲分裂有或無(wú)無(wú)無(wú)胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色漿內(nèi)空泡有或無(wú)有或無(wú)無(wú)偽足有或無(wú)有或無(wú)無(wú)8精選課件ppt未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：PHA------T細(xì)胞ConA-------T細(xì)胞PWM-------T、B細(xì)胞LPS-------B細(xì)胞特異性刺激物：異種抗原同種組織抗原

9精選課件ppt2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：9精選課件ppt3.檢測(cè)方法

形態(tài)法：刺激物淋巴細(xì)胞（4-6天）母細(xì)胞化同位素法：PHA淋巴細(xì)胞（54h）DNA合成期+3HTdR摻入

收集細(xì)胞

檢測(cè)β射線

測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的3H－TdR10精選課件ppt3.檢測(cè)方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的3H－TdR10精選課件ppt（1）形態(tài)學(xué)檢查法11精選課件ppt（1）形態(tài)學(xué)檢查法11精選課件ppt方法學(xué)評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法簡(jiǎn)便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。缺點(diǎn)：是依靠肉眼觀察形態(tài)學(xué)變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性較差。12精選課件ppt方法學(xué)評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法簡(jiǎn)便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察（2）3H-TdR摻入法優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強(qiáng)，重復(fù)性好。缺點(diǎn)：但需一定設(shè)備條件，同時(shí)還存在放射性核素污染問題。13精選課件ppt（2）3H-TdR摻入法優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR摻入法敏感性高，客(二)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后,分泌各種細(xì)胞因子,可借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平，以反映T細(xì)胞功能。

14精選課件ppt(二)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)1.原理：靶細(xì)胞抗原T細(xì)胞觀察殺傷活力致敏CTL靶細(xì)胞15精選課件ppt（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)1.原理：靶細(xì)胞抗原T細(xì)胞觀察殺形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞同位素法：淋巴細(xì)胞（CTL）+含51Cr的腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞破壞51Cr釋放測(cè)定γ射線2.方法意義：腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力

16精選課件ppt形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞2.方法意圖15-2T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗(yàn)示意圖17精選課件ppt圖15-2T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗(yàn)示意圖17精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)特異性抗原皮膚試驗(yàn)PHA皮膚試驗(yàn)18精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)特異性抗原皮膚試驗(yàn)18精選課件ppt二、B細(xì)胞功能檢測(cè)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)體內(nèi)試驗(yàn)19精選課件ppt二、B細(xì)胞功能檢測(cè)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)19精選課件ppt(一)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)抗IgM細(xì)菌脂多糖SAC的SPA

B細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)3H－TdR摻入法20精選課件ppt(一)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)抗IgMB細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)3H－Td(二)溶血空斑試驗(yàn)1.原理：21精選課件ppt(二)溶血空斑試驗(yàn)1.原理：21精選課件ppt2.方法學(xué)：經(jīng)典溶血空斑形成試驗(yàn)被動(dòng)溶血空斑試驗(yàn)

22精選課件ppt2.方法學(xué)：經(jīng)典溶血空斑形成試驗(yàn)22精選課件ppt3．臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)溶血空斑試驗(yàn)主要用于測(cè)定藥物和手術(shù)等因素對(duì)體液免疫功能的影響評(píng)價(jià)免疫治療或免疫重建后機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力。

23精選課件ppt3．臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)溶血空斑試驗(yàn)主要用于測(cè)定藥物和手術(shù)等因素對(duì)(三)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)

——酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法1.原理：24精選課件ppt(三)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)

——酶聯(lián)免疫斑2．應(yīng)用與方法學(xué)評(píng)價(jià)：該方法既可檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞，又可檢測(cè)抗體分泌量。優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定、特異、抗原用量少；可同時(shí)檢測(cè)不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌，并可定量；可檢測(cè)組織切片中分泌抗體的單個(gè)細(xì)胞。25精選課件ppt2．應(yīng)用與方法學(xué)評(píng)價(jià)：該方法既可檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞，又可檢測(cè)抗(四)體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素、多價(jià)肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測(cè)定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價(jià)，判斷受檢者體內(nèi)B細(xì)胞的功能。26精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)染色計(jì)數(shù)離心取上清測(cè)LDH或AKP離心取沉淀測(cè)活細(xì)胞熒光測(cè)發(fā)光強(qiáng)度測(cè)CPM值形態(tài)法酶釋法熒光法同位素法化學(xué)發(fā)光法三、NK細(xì)胞活性測(cè)定靶細(xì)胞溶解常用靶細(xì)胞:

K562細(xì)胞株27精選課件ppt染色計(jì)數(shù)離心取上清離心取沉淀測(cè)發(fā)光強(qiáng)度測(cè)CPM值形態(tài)法三、N第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)吞噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用三個(gè)階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測(cè)方法。一、中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)28精選課件ppt第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)吞噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)大體分為趨吞噬細(xì)胞的功能：趨化

吞噬胞內(nèi)殺滅作用

29精選課件ppt吞噬細(xì)胞的功能：29精選課件ppt一、中性粒細(xì)胞功能的檢測(cè)細(xì)胞趨化功能的檢測(cè)吞噬和殺菌功能的檢測(cè)30精選課件ppt一、中性粒細(xì)胞功能的檢測(cè)細(xì)胞趨化功能的檢測(cè)30精選課件pp(一)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能——趨化功能檢測(cè)1.原理：31精選課件ppt(一)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能——趨化功能檢測(cè)1.原理：31精選課件p2.方法學(xué)：瓊脂糖平板法

濾膜滲透法（Boyden小室法）32精選課件ppt2.方法學(xué)：瓊脂糖平板法濾膜滲透法（Boyden小室法(二)吞噬和殺菌功能測(cè)定1．顯微鏡檢查法：33精選課件ppt(二)吞噬和殺菌功能測(cè)定1．顯微鏡檢查法：33精選課件p2.溶菌法3．NBT還原試驗(yàn)

34精選課件ppt2.溶菌法3．NBT還原試驗(yàn)34精選課件ppt二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)(一)炭粒廓清試驗(yàn)正常小鼠肝中枯否細(xì)胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血，測(cè)定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。35精選課件ppt二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)(一)炭粒廓清試驗(yàn)正常小鼠肝中枯(二)吞噬功能檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)顆粒性抗原物質(zhì)具有很強(qiáng)的吞噬功能，常用雞紅細(xì)胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細(xì)胞。36精選課件ppt(二)吞噬功能檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)顆粒性抗原物質(zhì)具有很強(qiáng)的(三)巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定1．酸性磷酸酶的測(cè)定硝酸鉛法偶氮法2．非特異性酯酶的測(cè)定常用α-萘醋酸法37精選課件ppt(三)巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定1．酸性磷酸酶的測(cè)定37精選課件(四)細(xì)胞毒作用測(cè)定用IFN-γ激活小鼠巨噬細(xì)胞，觀察其對(duì)125I-UdR標(biāo)記的DBA/2小鼠肥大細(xì)胞瘤P815的殺傷活性。38精選課件ppt(四)細(xì)胞毒作用測(cè)定用IFN-γ激活小鼠巨噬細(xì)胞，(五)巨噬細(xì)胞促凝血活性測(cè)定激活的巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常兔血漿和CaCl2混合液，加入經(jīng)粘附有單層巨噬細(xì)胞的試管中，移置37℃，即時(shí)記錄血漿凝固時(shí)間。39精選課件ppt(五)巨噬細(xì)胞促凝血活性測(cè)定激活的巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生一反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)。腫瘤、免疫缺陷病等疾病的診斷和疾病預(yù)后監(jiān)測(cè)。組織器官移植后對(duì)受者的細(xì)胞免疫學(xué)功能監(jiān)測(cè)則有利于排斥反應(yīng)的早期發(fā)現(xiàn)，以便及時(shí)采取有效措施。第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測(cè)的臨床應(yīng)用40精選課件ppt反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)。第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測(cè)的臨床應(yīng)用40思考題T細(xì)胞功能檢測(cè)內(nèi)容有哪些？什么是T細(xì)胞增殖試驗(yàn)的原理、刺激物及方法學(xué)？何謂T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)的原理和方法學(xué)？何謂結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)？B細(xì)胞功能檢測(cè)的方法學(xué)有哪些？何謂溶血空斑試驗(yàn)的原理和方法學(xué)？NK細(xì)胞活性測(cè)定的方法學(xué)有哪些？中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)方法學(xué)及相應(yīng)原理。巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)方法學(xué)及相應(yīng)原理。免疫細(xì)胞功能檢測(cè)的臨床應(yīng)用有哪些？41精選課件ppt思考題T細(xì)胞功能檢測(cè)內(nèi)容有哪些？41精選課件ppt小結(jié)免疫細(xì)胞功能試驗(yàn)包括體內(nèi)和體外試驗(yàn)。免疫細(xì)胞功能體外試驗(yàn)主要根據(jù)免疫細(xì)胞的增殖活性、分泌活性和殺傷活性等特性而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。具體免疫細(xì)胞功能檢測(cè)內(nèi)容包括：①淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)，包括T細(xì)胞增殖試驗(yàn)、T細(xì)胞分泌功能測(cè)定、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)以及體內(nèi)試驗(yàn)；B細(xì)胞增殖試驗(yàn)、溶血空斑試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法以及體內(nèi)試驗(yàn)；NK細(xì)胞活性檢測(cè)方法：酶釋放法、放射性核素釋放法、化學(xué)發(fā)光法、流式細(xì)胞術(shù)法等。②吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)，方法有趨化功能檢測(cè)、吞噬和殺菌功能測(cè)定等。42精選課件ppt小結(jié)免疫細(xì)胞功能試驗(yàn)包括體內(nèi)和體外試驗(yàn)。免疫細(xì)胞功能體外第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)一、T細(xì)胞功能檢測(cè)二、B細(xì)胞功能檢測(cè)三、NK細(xì)胞活性測(cè)定第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)43精選課件ppt第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)1精第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)一、中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)第三節(jié)免疫細(xì)胞功能檢測(cè)的臨床應(yīng)用思考題小結(jié)44精選課件ppt第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)思考題2精選課件ppt對(duì)淋巴細(xì)胞群，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等功能測(cè)定可以有效評(píng)價(jià)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能。45精選課件ppt對(duì)淋巴細(xì)胞群，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等功能第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能測(cè)定可分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)主要是間接了解淋巴細(xì)胞對(duì)抗原、半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外實(shí)驗(yàn)主要包括淋巴細(xì)胞對(duì)抗原或有絲分裂原刺激后的增殖反應(yīng)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)及淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)物的測(cè)定46精選課件ppt第一節(jié)淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能測(cè)定可分為體內(nèi)實(shí)淋巴細(xì)胞T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）B細(xì)胞（執(zhí)行體液免疫功能）NK和K細(xì)胞（非特異性免疫作用）47精選課件ppt淋巴細(xì)胞T細(xì)胞（負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能）5精選課件ppt一、T細(xì)胞功能的檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)體內(nèi)試驗(yàn)48精選課件ppt一、T細(xì)胞功能的檢測(cè)T細(xì)胞增殖試驗(yàn)6精選課件ppt（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)1.原理：淋巴細(xì)胞DNA合成分化母細(xì)胞刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴(kuò)大空泡核仁明顯核染色質(zhì)疏松49精選課件ppt（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)1.原理：淋巴細(xì)胞DNA合成分化母

未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞淋巴母細(xì)胞過渡型細(xì)胞大小(直徑μm)12～2012～166～8核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4個(gè)有或無(wú)無(wú)有絲分裂有或無(wú)無(wú)無(wú)胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿極少、天青色漿內(nèi)空泡有或無(wú)有或無(wú)無(wú)偽足有或無(wú)有或無(wú)無(wú)50精選課件ppt未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：PHA------T細(xì)胞ConA-------T細(xì)胞PWM-------T、B細(xì)胞LPS-------B細(xì)胞特異性刺激物：異種抗原同種組織抗原

51精選課件ppt2.淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物非特異性刺激物：9精選課件ppt3.檢測(cè)方法

形態(tài)法：刺激物淋巴細(xì)胞（4-6天）母細(xì)胞化同位素法：PHA淋巴細(xì)胞（54h）DNA合成期+3HTdR摻入

收集細(xì)胞

檢測(cè)β射線

測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的3H－TdR52精選課件ppt3.檢測(cè)方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的3H－TdR10精選課件ppt（1）形態(tài)學(xué)檢查法53精選課件ppt（1）形態(tài)學(xué)檢查法11精選課件ppt方法學(xué)評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法簡(jiǎn)便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察結(jié)果，適于基層實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。缺點(diǎn)：是依靠肉眼觀察形態(tài)學(xué)變化，判斷結(jié)果易受主觀因素影響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性較差。54精選課件ppt方法學(xué)評(píng)價(jià)：優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)學(xué)方法簡(jiǎn)便易行，普通光學(xué)顯微鏡便能觀察（2）3H-TdR摻入法優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR摻入法敏感性高，客觀性強(qiáng)，重復(fù)性好。缺點(diǎn)：但需一定設(shè)備條件，同時(shí)還存在放射性核素污染問題。55精選課件ppt（2）3H-TdR摻入法優(yōu)點(diǎn)：3H-TdR摻入法敏感性高，客(二)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲裂原或抗原刺激后,分泌各種細(xì)胞因子,可借助免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞因子含量、生物學(xué)活性或基因表達(dá)水平，以反映T細(xì)胞功能。

56精選課件ppt(二)T細(xì)胞分泌功能測(cè)定體外培養(yǎng)的T細(xì)胞經(jīng)各種絲（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)1.原理：靶細(xì)胞抗原T細(xì)胞觀察殺傷活力致敏CTL靶細(xì)胞57精選課件ppt（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)1.原理：靶細(xì)胞抗原T細(xì)胞觀察殺形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞同位素法：淋巴細(xì)胞（CTL）+含51Cr的腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞破壞51Cr釋放測(cè)定γ射線2.方法意義：腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的能力

58精選課件ppt形態(tài)學(xué)方法：淋巴細(xì)胞+腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞2.方法意圖15-2T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗(yàn)示意圖59精選課件ppt圖15-2T細(xì)胞細(xì)胞毒試驗(yàn)示意圖17精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)特異性抗原皮膚試驗(yàn)PHA皮膚試驗(yàn)60精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)特異性抗原皮膚試驗(yàn)18精選課件ppt二、B細(xì)胞功能檢測(cè)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)溶血空斑試驗(yàn)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)體內(nèi)試驗(yàn)61精選課件ppt二、B細(xì)胞功能檢測(cè)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)19精選課件ppt(一)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)抗IgM細(xì)菌脂多糖SAC的SPA

B細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)3H－TdR摻入法62精選課件ppt(一)B細(xì)胞增殖能力的試驗(yàn)抗IgMB細(xì)胞增殖形態(tài)學(xué)3H－Td(二)溶血空斑試驗(yàn)1.原理：63精選課件ppt(二)溶血空斑試驗(yàn)1.原理：21精選課件ppt2.方法學(xué)：經(jīng)典溶血空斑形成試驗(yàn)被動(dòng)溶血空斑試驗(yàn)

64精選課件ppt2.方法學(xué)：經(jīng)典溶血空斑形成試驗(yàn)22精選課件ppt3．臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)溶血空斑試驗(yàn)主要用于測(cè)定藥物和手術(shù)等因素對(duì)體液免疫功能的影響評(píng)價(jià)免疫治療或免疫重建后機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力。

65精選課件ppt3．臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)溶血空斑試驗(yàn)主要用于測(cè)定藥物和手術(shù)等因素對(duì)(三)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)

——酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法1.原理：66精選課件ppt(三)B細(xì)胞抗體形成功能的檢測(cè)

——酶聯(lián)免疫斑2．應(yīng)用與方法學(xué)評(píng)價(jià)：該方法既可檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞，又可檢測(cè)抗體分泌量。優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定、特異、抗原用量少；可同時(shí)檢測(cè)不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌，并可定量；可檢測(cè)組織切片中分泌抗體的單個(gè)細(xì)胞。67精選課件ppt2．應(yīng)用與方法學(xué)評(píng)價(jià)：該方法既可檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞，又可檢測(cè)抗(四)體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素、多價(jià)肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分別采血，分離血清，測(cè)定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價(jià)，判斷受檢者體內(nèi)B細(xì)胞的功能。68精選課件ppt(四)體內(nèi)試驗(yàn)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風(fēng)染色計(jì)數(shù)離心取上清測(cè)LDH或AKP離心取沉淀測(cè)活細(xì)胞熒光測(cè)發(fā)光強(qiáng)度測(cè)CPM值形態(tài)法酶釋法熒光法同位素法化學(xué)發(fā)光法三、NK細(xì)胞活性測(cè)定靶細(xì)胞溶解常用靶細(xì)胞:

K562細(xì)胞株69精選課件ppt染色計(jì)數(shù)離心取上清離心取沉淀測(cè)發(fā)光強(qiáng)度測(cè)CPM值形態(tài)法三、N第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)吞噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)大體分為趨化、吞噬和胞內(nèi)殺滅作用三個(gè)階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測(cè)方法。一、中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)70精選課件ppt第二節(jié)吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)吞噬細(xì)胞的吞噬活動(dòng)大體分為趨吞噬細(xì)胞的功能：趨化

吞噬胞內(nèi)殺滅作用

71精選課件ppt吞噬細(xì)胞的功能：29精選課件ppt一、中性粒細(xì)胞功能的檢測(cè)細(xì)胞趨化功能的檢測(cè)吞噬和殺菌功能的檢測(cè)72精選課件ppt一、中性粒細(xì)胞功能的檢測(cè)細(xì)胞趨化功能的檢測(cè)30精選課件pp(一)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能——趨化功能檢測(cè)1.原理：73精選課件ppt(一)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能——趨化功能檢測(cè)1.原理：31精選課件p2.方法學(xué)：瓊脂糖平板法

濾膜滲透法（Boyden小室法）74精選課件ppt2.方法學(xué)：瓊脂糖平板法濾膜滲透法（Boyden小室法(二)吞噬和殺菌功能測(cè)定1．顯微鏡檢查法：75精選課件ppt(二)吞噬和殺菌功能測(cè)定1．顯微鏡檢查法：33精選課件p2.溶菌法3．NBT還原試驗(yàn)

76精選課件ppt2.溶菌法3．NBT還原試驗(yàn)34精選課件ppt二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)(一)炭粒廓清試驗(yàn)正常小鼠肝中枯否細(xì)胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10%炭粒。據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血，測(cè)定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。77精選課件ppt二、巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)(一)炭粒廓清試驗(yàn)正常小鼠肝中枯(二)吞噬功能檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)顆粒性抗原物質(zhì)具有很強(qiáng)的吞噬功能，常用雞紅細(xì)胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母細(xì)胞等作為吞噬顆粒，用斑蟊敷貼法收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔滲出液獲得鼠巨噬細(xì)胞。78精選課件ppt(二)吞噬功能檢測(cè)