半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件

半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究蔣鋒利半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究蔣鋒利1研究背景半夏瀉心湯出自《傷寒雜病論》，具有降逆止嘔，消痞散結(jié)的作用，因其在治療胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙性疾病方面有可靠療效，不僅受到眾多傷寒名家的推崇，而且也一直是中醫(yī)學(xué)方藥實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)之一。研究背景半夏瀉心湯出自《傷寒雜病論》，具有降逆止嘔，消痞散結(jié)2我校名老，傷寒大家劉渡舟先生曾對其這樣描述：“半夏、干姜辛開而溫，以散脾氣之寒；黃芩、黃連苦泄而寒，以降胃氣之熱；人參、甘草、大棗甘溫調(diào)補(bǔ)，和脾胃，補(bǔ)中氣，以復(fù)中焦升降功能，此即辛開苦降甘補(bǔ)之法”。我校名老，傷寒大家劉渡舟先生曾對其這樣描述：“半夏、干姜辛開3拆方思路——“法依病機(jī)，拆方依法”分組藥味辛開組半夏、干姜苦降組黃連、黃芩甘補(bǔ)組人參、甘草、大棗拆方思路——“法依病機(jī)，拆方依法”分組藥味辛開組半夏、干姜苦4半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件5半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件6半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件7半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件8主要研究內(nèi)容前期研究表明：半夏瀉心湯及其拆方可通過ICC調(diào)節(jié)胃腸的運(yùn)動(dòng)功能，而平滑肌細(xì)胞（smoothmusclecell，SMC）與胃腸神經(jīng)以及ICC之間，存在著網(wǎng)絡(luò)狀連接。這種細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可以產(chǎn)生慢波和傳導(dǎo)電興奮，并介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)，對揭示多種胃腸道功能障礙性疾病的發(fā)病機(jī)制具有重要作用。主要研究內(nèi)容前期研究表明：半夏瀉心湯及其拆方可通過ICC調(diào)節(jié)9在胃腸道中，GJ是介導(dǎo)SMC間電化學(xué)信息交流，保證肌肉活動(dòng)的協(xié)調(diào)性和同步性的特殊通道。這為探討胃腸肌電活動(dòng)及胃腸動(dòng)力的關(guān)鍵機(jī)制提供了線索：阻斷胃腸SMC之間的縫隙連接可以阻礙胃腸的運(yùn)動(dòng)功能在胃腸道中，GJ是介導(dǎo)SMC間電化學(xué)信息交流，保證肌肉活動(dòng)的10據(jù)此，我們提出半夏瀉心湯具有通過胃腸細(xì)胞間縫隙連接通訊調(diào)節(jié)胃動(dòng)力作用的假說。并以縫隙連接蛋白Cx43為切入點(diǎn)來展開研究工作，以期從細(xì)胞間通訊角度，進(jìn)一步揭示“心下痞”的內(nèi)涵及半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的分子機(jī)制。據(jù)此，我們提出半夏瀉心湯具有通過胃腸細(xì)胞間縫隙連接通訊調(diào)節(jié)胃11技術(shù)路線半夏瀉心湯及其拆方藥物血清的制備對SMC細(xì)胞間通訊的直接影響對SMC細(xì)胞間通訊受抑制模型的影響SLDT法檢測SMC的GJIC情況及激光共聚焦顯微鏡觀察SMC內(nèi)的[Ca2+]含量采用ELISA法檢測含藥血清對SMC細(xì)胞的肌鈣蛋白、NO、nNOS分泌的影響Westernblot、SABC法檢測Cx43、PKC、PKA、MPA的表達(dá)MTT法測SMC增殖、流式細(xì)胞法測SMC凋亡及周期變化實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測Cx43、PKC、PKA、MPA實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測SMC依賴型[Ca2+]釋放通道受體IP3R、PyR的mRNA表達(dá)利用RNA細(xì)胞干擾技術(shù)將構(gòu)建好的CX43-siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染致SMC技術(shù)路線半夏瀉心湯及其拆方藥物血清的制備對SMC細(xì)胞間通訊的12預(yù)計(jì)成果構(gòu)建CX43-siRNA質(zhì)粒，觀察CX43表達(dá)受抑制時(shí)，對SMC間細(xì)胞通訊的影響。從細(xì)胞間通訊角度，進(jìn)一步揭示“心下痞”的內(nèi)涵，以及半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的分子機(jī)制。發(fā)表文章，2篇。預(yù)計(jì)成果13人員組成簡介編號姓名工作單位項(xiàng)目分工1陳萌北京中醫(yī)藥大學(xué)研究思路及總體設(shè)計(jì)指導(dǎo)2李麗娜北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物血清制備及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)3張冬梅北京中醫(yī)藥大學(xué)質(zhì)粒構(gòu)建與細(xì)胞轉(zhuǎn)染指導(dǎo)4王淑艷北京中醫(yī)藥大學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)指導(dǎo)5李翠北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物血清制備6李超慧北京中醫(yī)藥大學(xué)質(zhì)粒構(gòu)建與細(xì)胞轉(zhuǎn)染7謝得慧北京中醫(yī)藥大學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)8強(qiáng)興北京中醫(yī)藥大學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)人員組成簡介編號姓名工作單位項(xiàng)目分工1陳萌北京中醫(yī)藥大學(xué)研究14經(jīng)費(fèi)使用說明項(xiàng)目申請經(jīng)費(fèi)具體說明材料費(fèi)0.5萬孕鼠，細(xì)胞培養(yǎng)用試劑和耗材，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)所需試劑盒、抗體等測試化驗(yàn)加工費(fèi)0.3萬激光共聚焦電鏡、PCR儀、質(zhì)粒測序、酶標(biāo)儀檢測費(fèi)出版/文獻(xiàn)/信息傳播/知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)費(fèi)0.4萬期刊版面費(fèi)經(jīng)費(fèi)使用說明項(xiàng)目申請經(jīng)費(fèi)具體說明材料費(fèi)0.5萬孕鼠，細(xì)胞培養(yǎng)15謝謝謝謝16半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究蔣鋒利半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究蔣鋒利17研究背景半夏瀉心湯出自《傷寒雜病論》，具有降逆止嘔，消痞散結(jié)的作用，因其在治療胃腸運(yùn)動(dòng)功能障礙性疾病方面有可靠療效，不僅受到眾多傷寒名家的推崇，而且也一直是中醫(yī)學(xué)方藥實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)之一。研究背景半夏瀉心湯出自《傷寒雜病論》，具有降逆止嘔，消痞散結(jié)18我校名老，傷寒大家劉渡舟先生曾對其這樣描述：“半夏、干姜辛開而溫，以散脾氣之寒；黃芩、黃連苦泄而寒，以降胃氣之熱；人參、甘草、大棗甘溫調(diào)補(bǔ)，和脾胃，補(bǔ)中氣，以復(fù)中焦升降功能，此即辛開苦降甘補(bǔ)之法”。我校名老，傷寒大家劉渡舟先生曾對其這樣描述：“半夏、干姜辛開19拆方思路——“法依病機(jī)，拆方依法”分組藥味辛開組半夏、干姜苦降組黃連、黃芩甘補(bǔ)組人參、甘草、大棗拆方思路——“法依病機(jī)，拆方依法”分組藥味辛開組半夏、干姜苦20半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件21半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件22半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件23半夏瀉心湯及其拆方調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的縫隙連接機(jī)制研究課件24主要研究內(nèi)容前期研究表明：半夏瀉心湯及其拆方可通過ICC調(diào)節(jié)胃腸的運(yùn)動(dòng)功能，而平滑肌細(xì)胞（smoothmusclecell，SMC）與胃腸神經(jīng)以及ICC之間，存在著網(wǎng)絡(luò)狀連接。這種細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可以產(chǎn)生慢波和傳導(dǎo)電興奮，并介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)，對揭示多種胃腸道功能障礙性疾病的發(fā)病機(jī)制具有重要作用。主要研究內(nèi)容前期研究表明：半夏瀉心湯及其拆方可通過ICC調(diào)節(jié)25在胃腸道中，GJ是介導(dǎo)SMC間電化學(xué)信息交流，保證肌肉活動(dòng)的協(xié)調(diào)性和同步性的特殊通道。這為探討胃腸肌電活動(dòng)及胃腸動(dòng)力的關(guān)鍵機(jī)制提供了線索：阻斷胃腸SMC之間的縫隙連接可以阻礙胃腸的運(yùn)動(dòng)功能在胃腸道中，GJ是介導(dǎo)SMC間電化學(xué)信息交流，保證肌肉活動(dòng)的26據(jù)此，我們提出半夏瀉心湯具有通過胃腸細(xì)胞間縫隙連接通訊調(diào)節(jié)胃動(dòng)力作用的假說。并以縫隙連接蛋白Cx43為切入點(diǎn)來展開研究工作，以期從細(xì)胞間通訊角度，進(jìn)一步揭示“心下痞”的內(nèi)涵及半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的分子機(jī)制。據(jù)此，我們提出半夏瀉心湯具有通過胃腸細(xì)胞間縫隙連接通訊調(diào)節(jié)胃27技術(shù)路線半夏瀉心湯及其拆方藥物血清的制備對SMC細(xì)胞間通訊的直接影響對SMC細(xì)胞間通訊受抑制模型的影響SLDT法檢測SMC的GJIC情況及激光共聚焦顯微鏡觀察SMC內(nèi)的[Ca2+]含量采用ELISA法檢測含藥血清對SMC細(xì)胞的肌鈣蛋白、NO、nNOS分泌的影響Westernblot、SABC法檢測Cx43、PKC、PKA、MPA的表達(dá)MTT法測SMC增殖、流式細(xì)胞法測SMC凋亡及周期變化實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測Cx43、PKC、PKA、MPA實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測SMC依賴型[Ca2+]釋放通道受體IP3R、PyR的mRNA表達(dá)利用RNA細(xì)胞干擾技術(shù)將構(gòu)建好的CX43-siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染致SMC技術(shù)路線半夏瀉心湯及其拆方藥物血清的制備對SMC細(xì)胞間通訊的28預(yù)計(jì)成果構(gòu)建CX43-siRNA質(zhì)粒，觀察CX43表達(dá)受抑制時(shí)，對SMC間細(xì)胞通訊的影響。從細(xì)胞間通訊角度，進(jìn)一步揭示“心下痞”的內(nèi)涵，以及半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的分子機(jī)制。發(fā)表文章，2篇。預(yù)計(jì)成果29人員組成簡介編號姓名工作單位項(xiàng)目分工1陳萌北京中醫(yī)藥大學(xué)研究思路及總體設(shè)計(jì)指導(dǎo)2李麗娜北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物血清制備及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)3張冬梅北京中醫(yī)藥大學(xué)質(zhì)粒構(gòu)建與細(xì)胞轉(zhuǎn)染指導(dǎo)4王淑艷北京中醫(yī)藥大學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)指導(dǎo)5李翠北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物血清制備6李超慧北京中醫(yī)藥大學(xué)質(zhì)粒構(gòu)建與細(xì)胞轉(zhuǎn)染7謝得慧北京中醫(yī)藥大學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)8強(qiáng)興北京中醫(yī)藥大學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)人員組成簡介編號姓名工作單位項(xiàng)目分工1陳