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文檔簡介

第二十五章

病毒感染的檢查與防治原則第二十五章

病毒感染的檢查與防治原則1第一節(jié)病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集根據(jù)臨床評估及病期采集不同的標(biāo)本。如呼吸道感染一般采集鼻咽洗漱液或痰液;腸道感染采集糞便;腦內(nèi)感染取腦脊液;病毒血癥時(shí)期取血液;作病毒分離或病毒抗原的標(biāo)本,應(yīng)在發(fā)病初期或急性期采集,因此時(shí)病毒在體內(nèi)大量增殖,檢出率高。病毒分離標(biāo)本的采取,最好在發(fā)病1-2天進(jìn)行。血清學(xué)檢查的標(biāo)本應(yīng)采取雙份血清送檢即以發(fā)病初期和病后2-3周分別采取血清標(biāo)本。雙份血清同時(shí)進(jìn)行檢查,如抗體滴度有4倍以上升高才有診斷意義。第一節(jié)病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢2第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本處理標(biāo)本采取必須嚴(yán)格無菌操作。對于本身帶有雜菌的標(biāo)本,如糞便、咽嗽液、痰液等,應(yīng)加入高濃度青霉素、鏈霉素、慶大霉素等處理。大多數(shù)病毒對甘油有抵抗力,送檢組織、糞便標(biāo)本等可置于含抗生素的50%甘油緩沖鹽水中,低溫保存送檢。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢3第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本處理3.標(biāo)本送檢與保存病毒在室溫下很快滅活,標(biāo)本采集后應(yīng)立即送到病毒實(shí)驗(yàn)室,如實(shí)驗(yàn)室距離較遠(yuǎn)或一時(shí)無法立即送檢時(shí),應(yīng)將標(biāo)本放入裝有冰塊的冰壺內(nèi),最好在1-2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室,立即進(jìn)行檢查或分離培養(yǎng)。暫時(shí)不能檢查或分離培養(yǎng)時(shí),應(yīng)將標(biāo)本存放在-70℃低溫冰箱內(nèi)保存。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢4第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢(二)病毒的形態(tài)學(xué)檢查1.光學(xué)顯微鏡檢查用光學(xué)顯微鏡可直接觀察痘類病毒的單個(gè)病毒體;也可直接被某些病毒受染的組織細(xì)胞中的包涵體。根據(jù)包涵體的特點(diǎn),作出輔助診斷。2.電子顯微鏡檢查1)電鏡直接檢查法:用于從皰疹液、糞便或血清標(biāo)本中直接檢查皰疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒顆粒等;2)免疫電鏡檢查法:將病毒標(biāo)本制成懸液,加入特異性抗體混合,可使標(biāo)本中的病毒顆粒凝聚成團(tuán)。再用電鏡,可提高病毒的檢出率。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢5第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢(二)病毒的形態(tài)學(xué)檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種2.雞胚培養(yǎng)3、組織細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢6第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:是最原始的病毒培養(yǎng)方法。目前對某些病毒分離仍然應(yīng)用。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等。接種途徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等。根據(jù)病毒種類不同,選擇敏感的動(dòng)物及適宜接種部位。如嗜神經(jīng)病毒(乙腦病毒、狂犬病毒)可選用小鼠腦內(nèi)接種,以使病毒增殖,并根據(jù)動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀特征幫助診斷。2.雞胚培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)7第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:2.雞胚培養(yǎng):是一種經(jīng)濟(jì)簡便的方法。一般采用孵化9-12天的雞胚,根據(jù)病毒的特性將病毒標(biāo)本接種于雞胚的不同部位。如皰疹病毒接種于絨毛尿囊上,流感病毒初次分離接種于羊膜腔,傳代培養(yǎng)接種于尿囊內(nèi)。3、組織細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)8第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:2.雞胚培養(yǎng):3、組織細(xì)胞培養(yǎng)將離體活組織塊或分散的活細(xì)胞加以培養(yǎng),統(tǒng)稱為組織培養(yǎng)。后者雙稱為單層細(xì)胞培養(yǎng)。是目前分離培養(yǎng)病毒的主要方法。通常用人胚腎細(xì)胞、人胎盤羊膜細(xì)胞、人胚二培體細(xì)胞、雞胚等原代細(xì)胞以及傳代細(xì)胞等制備單層細(xì)胞培養(yǎng)。病毒感染細(xì)胞后,大多數(shù)能引起細(xì)胞病變,無需染色即可直接在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。有的細(xì)胞不產(chǎn)生病變,但能改變培養(yǎng)液的PH,或出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附及血凝現(xiàn)象(流感病毒),有時(shí)還可用免疫熒光技術(shù)檢查細(xì)胞中的病毒和細(xì)胞變化。組織培養(yǎng)多用于病毒分離培養(yǎng)和檢測中和抗體,制備疫苗等。第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)9雞胚接種雞胚接種10(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查應(yīng)用血清學(xué)方法診斷病毒感染或進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查就是利用抗原抗體能特異性結(jié)合的原理,用已知的病毒和特異性抗體檢測病人標(biāo)本新分離的病毒株制備的抗原,或用已知的病毒抗原檢查病人血清中有無相應(yīng)抗體。病人恢復(fù)期血清的抗體效價(jià)必須比急性期增高4倍以上才有診斷意義。常用的方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)休結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散及熒光素、酶、放射性核素標(biāo)記技術(shù)等。2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應(yīng)(四)其他檢查方法11(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、應(yīng)用面廣的診斷技術(shù)和研究手段。原理是根據(jù)雙股DNA具有解離和重新組合的特性,用一條已知的單鏈DNA,標(biāo)記上放射性核素作探針與固定在硝酸纖維膜上的待測單股DNA進(jìn)行雜交,再用放射自顯影技術(shù)檢測,以確定有無病原體存在。3.聚合酶鏈反應(yīng)(四)其他檢查方法12(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種快速體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù),能在一至數(shù)小時(shí)內(nèi)通過簡單的酶促反應(yīng)使待測的DNA擴(kuò)增至數(shù)百萬倍,然后取反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,即可觀察到核酸條帶,不需放射性核素標(biāo)記。該技術(shù)可用于病毒、細(xì)菌等微生物疾病的診斷。(四)其他檢查方法13用于病毒培養(yǎng)的細(xì)胞單層用于病毒培養(yǎng)的細(xì)胞單層14人胚肺成纖維細(xì)胞單層(MRC),呈棱形人胚肺成纖維細(xì)胞單層(MRC),呈棱形15非洲綠猴腎細(xì)胞單層(Vero)非洲綠猴腎細(xì)胞單層(Vero)16第二十五章病毒感染的檢查及防治原則課件17

正常細(xì)胞細(xì)胞病變(CPE)正常細(xì)胞細(xì)18雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞19第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免疫目前應(yīng)用各種滅活疫苗或減毒活疫苗進(jìn)行人工自動(dòng)免疫。滅活疫苗常用的有流腦疫苗、狂犬疫苗、流感滅活疫苗等。減毒活疫苗常用的有脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流感疫苗、流行性腮腺炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、黃熱病疫苗以及上些聯(lián)合疫苗(如麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎聯(lián)合疫苗)等。滅活疫苗是用甲醛滅活劑滅活病毒核酸,但不影響病毒的抗原性。減毒活疫苗是用自然或人工選擇法對人無毒或弱毒的變異株來制備?;钜呙缑庖咝Ч?,但可能返祖,恢復(fù)毒力而致病,也可激活潛伏病毒引起持續(xù)性感染,故有潛在危險(xiǎn)性。為提高疫苗的安全性,目前正試用于人體的還有亞單位疫苗(流感疫苗等)和基因工程疫苗,也稱多肽疫苗(乙肝疫苗)第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防20第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免疫2.人工被動(dòng)免疫常用的免疫制劑有免疫血清、胎盤球蛋白、人血球蛋白,以及與細(xì)胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子等。注入人免疫球蛋白對甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等具有緊急預(yù)防作用,可使接觸者不出現(xiàn)癥狀或僅出現(xiàn)輕微癥狀。近年來已應(yīng)用含有高滴度抗-HBs的乙肝免疫球蛋白來預(yù)防乙肝,有一定療效。第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防21第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防(二)病毒感染的治療1.干擾素是機(jī)體受到病毒或其他干擾素誘生劑刺激,由巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及體細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白。(1)種類:α、β、γα、β又稱I型干擾素,γ又稱Ⅱ型干擾素。Ⅱ型干擾素對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于I型干擾素,而抗病毒作用I型干擾素強(qiáng)于Ⅱ型干擾素。第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防22第二節(jié)病毒感染的防治原則(二)病毒感染的治療1.干擾素(1)種類:α、β、γ(2)作用機(jī)理:干擾素作用于鄰近的正常細(xì)胞,使之合成抗病毒蛋白,抑制病毒蛋白的合成,影響病毒的組裝和釋放??共《镜鞍字蛔饔糜诓《?,對宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成沒有影響,故其副作用小。(3)生物學(xué)活性:廣譜抗病毒作用(治療病毒感染-乙肝、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、水痘等)、免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤作用第二節(jié)病毒感染的防治原則(二)病毒感染的治療23第二節(jié)病毒感染的防治原則(二)病毒感染的治療1.干擾素2.化學(xué)藥物由于病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)增殖,故對病毒有效的化學(xué)治療劑多對機(jī)體細(xì)胞有一定損傷作用。目前療效好,毒性小的藥物有鹽酸金剛烷胺、阿糖腺苷、無環(huán)鳥苷、丙氧鳥苷及皰疹凈等。金剛烷胺對甲型流感病毒感染有預(yù)防和治療效果。其他幾種藥物對皰疹病毒有一定療效。3.中草藥板藍(lán)根、大青葉,甘草甜素等能抑制多種病毒,蒼術(shù)、艾葉在組織培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)能抑制腺病毒、鼻病毒、皰疹病毒和流感病毒等。第二節(jié)病毒感染的防治原則(二)病毒感染的治療24IFN的作用IFN的作用25第二十五章

病毒感染的檢查與防治原則第二十五章

病毒感染的檢查與防治原則26第一節(jié)病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集根據(jù)臨床評估及病期采集不同的標(biāo)本。如呼吸道感染一般采集鼻咽洗漱液或痰液;腸道感染采集糞便;腦內(nèi)感染取腦脊液;病毒血癥時(shí)期取血液;作病毒分離或病毒抗原的標(biāo)本,應(yīng)在發(fā)病初期或急性期采集,因此時(shí)病毒在體內(nèi)大量增殖,檢出率高。病毒分離標(biāo)本的采取,最好在發(fā)病1-2天進(jìn)行。血清學(xué)檢查的標(biāo)本應(yīng)采取雙份血清送檢即以發(fā)病初期和病后2-3周分別采取血清標(biāo)本。雙份血清同時(shí)進(jìn)行檢查,如抗體滴度有4倍以上升高才有診斷意義。第一節(jié)病毒感染的檢查一、標(biāo)本的采集與送檢27第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本處理標(biāo)本采取必須嚴(yán)格無菌操作。對于本身帶有雜菌的標(biāo)本,如糞便、咽嗽液、痰液等,應(yīng)加入高濃度青霉素、鏈霉素、慶大霉素等處理。大多數(shù)病毒對甘油有抵抗力,送檢組織、糞便標(biāo)本等可置于含抗生素的50%甘油緩沖鹽水中,低溫保存送檢。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢28第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢1.標(biāo)本采集2.標(biāo)本處理3.標(biāo)本送檢與保存病毒在室溫下很快滅活,標(biāo)本采集后應(yīng)立即送到病毒實(shí)驗(yàn)室,如實(shí)驗(yàn)室距離較遠(yuǎn)或一時(shí)無法立即送檢時(shí),應(yīng)將標(biāo)本放入裝有冰塊的冰壺內(nèi),最好在1-2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室,立即進(jìn)行檢查或分離培養(yǎng)。暫時(shí)不能檢查或分離培養(yǎng)時(shí),應(yīng)將標(biāo)本存放在-70℃低溫冰箱內(nèi)保存。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢29第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢(二)病毒的形態(tài)學(xué)檢查1.光學(xué)顯微鏡檢查用光學(xué)顯微鏡可直接觀察痘類病毒的單個(gè)病毒體;也可直接被某些病毒受染的組織細(xì)胞中的包涵體。根據(jù)包涵體的特點(diǎn),作出輔助診斷。2.電子顯微鏡檢查1)電鏡直接檢查法:用于從皰疹液、糞便或血清標(biāo)本中直接檢查皰疹病毒、甲肝病毒、乙肝病毒顆粒等;2)免疫電鏡檢查法:將病毒標(biāo)本制成懸液,加入特異性抗體混合,可使標(biāo)本中的病毒顆粒凝聚成團(tuán)。再用電鏡,可提高病毒的檢出率。第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢30第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢(二)病毒的形態(tài)學(xué)檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種2.雞胚培養(yǎng)3、組織細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(一)標(biāo)本的采集與送檢31第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:是最原始的病毒培養(yǎng)方法。目前對某些病毒分離仍然應(yīng)用。常用的動(dòng)物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔和猴等。接種途徑有鼻內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等。根據(jù)病毒種類不同,選擇敏感的動(dòng)物及適宜接種部位。如嗜神經(jīng)病毒(乙腦病毒、狂犬病毒)可選用小鼠腦內(nèi)接種,以使病毒增殖,并根據(jù)動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀特征幫助診斷。2.雞胚培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)32第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:2.雞胚培養(yǎng):是一種經(jīng)濟(jì)簡便的方法。一般采用孵化9-12天的雞胚,根據(jù)病毒的特性將病毒標(biāo)本接種于雞胚的不同部位。如皰疹病毒接種于絨毛尿囊上,流感病毒初次分離接種于羊膜腔,傳代培養(yǎng)接種于尿囊內(nèi)。3、組織細(xì)胞培養(yǎng)第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)33第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)1.動(dòng)物接種:2.雞胚培養(yǎng):3、組織細(xì)胞培養(yǎng)將離體活組織塊或分散的活細(xì)胞加以培養(yǎng),統(tǒng)稱為組織培養(yǎng)。后者雙稱為單層細(xì)胞培養(yǎng)。是目前分離培養(yǎng)病毒的主要方法。通常用人胚腎細(xì)胞、人胎盤羊膜細(xì)胞、人胚二培體細(xì)胞、雞胚等原代細(xì)胞以及傳代細(xì)胞等制備單層細(xì)胞培養(yǎng)。病毒感染細(xì)胞后,大多數(shù)能引起細(xì)胞病變,無需染色即可直接在普通光學(xué)顯微鏡下觀察。有的細(xì)胞不產(chǎn)生病變,但能改變培養(yǎng)液的PH,或出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附及血凝現(xiàn)象(流感病毒),有時(shí)還可用免疫熒光技術(shù)檢查細(xì)胞中的病毒和細(xì)胞變化。組織培養(yǎng)多用于病毒分離培養(yǎng)和檢測中和抗體,制備疫苗等。第一節(jié)病毒感染的檢查(三)病毒的分離培養(yǎng)34雞胚接種雞胚接種35(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查應(yīng)用血清學(xué)方法診斷病毒感染或進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查就是利用抗原抗體能特異性結(jié)合的原理,用已知的病毒和特異性抗體檢測病人標(biāo)本新分離的病毒株制備的抗原,或用已知的病毒抗原檢查病人血清中有無相應(yīng)抗體。病人恢復(fù)期血清的抗體效價(jià)必須比急性期增高4倍以上才有診斷意義。常用的方法有中和試驗(yàn)、補(bǔ)休結(jié)合試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散及熒光素、酶、放射性核素標(biāo)記技術(shù)等。2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應(yīng)(四)其他檢查方法36(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、應(yīng)用面廣的診斷技術(shù)和研究手段。原理是根據(jù)雙股DNA具有解離和重新組合的特性,用一條已知的單鏈DNA,標(biāo)記上放射性核素作探針與固定在硝酸纖維膜上的待測單股DNA進(jìn)行雜交,再用放射自顯影技術(shù)檢測,以確定有無病原體存在。3.聚合酶鏈反應(yīng)(四)其他檢查方法37(四)其他檢查方法1.病毒感染的血清學(xué)檢查2.病毒核酸雜交技術(shù)3.聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)是一種快速體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù),能在一至數(shù)小時(shí)內(nèi)通過簡單的酶促反應(yīng)使待測的DNA擴(kuò)增至數(shù)百萬倍,然后取反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,即可觀察到核酸條帶,不需放射性核素標(biāo)記。該技術(shù)可用于病毒、細(xì)菌等微生物疾病的診斷。(四)其他檢查方法38用于病毒培養(yǎng)的細(xì)胞單層用于病毒培養(yǎng)的細(xì)胞單層39人胚肺成纖維細(xì)胞單層(MRC),呈棱形人胚肺成纖維細(xì)胞單層(MRC),呈棱形40非洲綠猴腎細(xì)胞單層(Vero)非洲綠猴腎細(xì)胞單層(Vero)41第二十五章病毒感染的檢查及防治原則課件42

正常細(xì)胞細(xì)胞病變(CPE)正常細(xì)胞細(xì)43雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞雞紅細(xì)胞吸附于流感病毒感染的細(xì)胞44第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免疫目前應(yīng)用各種滅活疫苗或減毒活疫苗進(jìn)行人工自動(dòng)免疫。滅活疫苗常用的有流腦疫苗、狂犬疫苗、流感滅活疫苗等。減毒活疫苗常用的有脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗、流感疫苗、流行性腮腺炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、黃熱病疫苗以及上些聯(lián)合疫苗(如麻疹、風(fēng)疹、腮腺炎聯(lián)合疫苗)等。滅活疫苗是用甲醛滅活劑滅活病毒核酸,但不影響病毒的抗原性。減毒活疫苗是用自然或人工選擇法對人無毒或弱毒的變異株來制備?;钜呙缑庖咝Ч?,但可能返祖,恢復(fù)毒力而致病,也可激活潛伏病毒引起持續(xù)性感染,故有潛在危險(xiǎn)性。為提高疫苗的安全性,目前正試用于人體的還有亞單位疫苗(流感疫苗等)和基因工程疫苗,也稱多肽疫苗(乙肝疫苗)第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防45第二節(jié)病毒感染的防治原則(一)病毒感染的預(yù)防1.人工自動(dòng)免疫2.人工被動(dòng)免疫常用的免疫制劑有免疫血清、胎盤球蛋白、人血球蛋白,以及與細(xì)胞免疫有關(guān)的轉(zhuǎn)移因子等。注入人免疫球蛋白對甲肝、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等具有緊急預(yù)防作用,可使接觸者不

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