液相基礎(chǔ)知識(shí)課件

液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)一：定義利用組分在兩項(xiàng)間分配系數(shù)不同而進(jìn)行分離的技術(shù)移動(dòng)相：攜帶樣品流過(guò)整個(gè)系統(tǒng)的流體，也稱作流動(dòng)相流程圖進(jìn)樣器

溶劑輸液泵柱溫箱檢測(cè)器數(shù)據(jù)處理（最早所用的是積分以）流動(dòng)相流動(dòng)相選擇注意事項(xiàng):1純度:采用HPLC級(jí)溶劑2:避免使用會(huì)引起柱效損失或保留特性變化的溶劑3:對(duì)試樣要有適宜的溶解度，氣體易揮發(fā)，先溶后析，不能保證其重現(xiàn)性4:溶劑的粘度要小，異丙醇1.2-1.3ml/min,粘度相對(duì)較大，柱壓很高，損壞柱效，所以一般用甲醇-水5:要與檢測(cè)器相匹配6:溶劑的PH要恰當(dāng)，不能過(guò)大或太小，否則容易破壞柱子正相液相色譜固定相極性〉流動(dòng)相極性異丙醇過(guò)濾作為溶劑，水的極性較大，一般不作為正相色譜溶劑過(guò)濾的方式和目的1:過(guò)濾所用濾膜:0.45um或更小孔徑的濾膜2:過(guò)濾的目的:除去溶劑中的細(xì)小顆粒，避免堵塞色譜柱，尤其是使用無(wú)機(jī)鹽配制的磷酸鹽緩沖液3:過(guò)濾的方式:先混合再過(guò)濾和分別過(guò)濾再混合溶劑的脫氣處理1:目的:除去流動(dòng)相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡2:氣泡對(duì)測(cè)定的影響：2.1:柱流量不穩(wěn)，柱壓力不穩(wěn)造成保留時(shí)間不穩(wěn)，因此很難對(duì)樣品進(jìn)行定性分析2.2:檢測(cè)器基線波動(dòng)，基線不穩(wěn)，甚至發(fā)生噪音，易發(fā)生尖峰、小峰

脫氣注意事項(xiàng)1:無(wú)在線脫氣機(jī)時(shí)，要每天進(jìn)行脫氣2:混合溶劑脫氣時(shí)間不需太長(zhǎng)3:脫氣方式:3.1:在線脫氣:效果最好，液相色譜儀需配備在線脫氣機(jī)。3.2:通He脫氣:效果較好，但成本太高3.3:加熱脫氣:加熱使氣體的溶解度減小，從而達(dá)到脫氣的目的3.4:超聲脫氣:只能除去混合產(chǎn)生的氣泡，不能除去溶劑里溶解的氣體VP系列輸液泵1:D泵:并聯(lián)式微體積往復(fù)式泵2:T泵:串聯(lián)式微體積往復(fù)式泵區(qū)別與聯(lián)系:密封圈的使用壽命不同D泵比T泵壽命短，T泵有非凡的耐用所有的單元泵均可做高壓梯度又可做低壓梯度洗脫柱溫箱柱溫箱控制優(yōu)點(diǎn):1:溶劑管路先在柱溫箱中預(yù)熱，然后才進(jìn)入柱子，保證了溫度的穩(wěn)定性2:保留時(shí)間的重現(xiàn)性需要穩(wěn)定的溫度3:分析不同的組分,應(yīng)使用不同的分析溫度,利用柱溫箱可以控制實(shí)驗(yàn)溫度LC常用檢測(cè)器1:紫外檢測(cè)器2:二極管陣列檢測(cè)器3:示差折光檢測(cè)器4:電導(dǎo)檢測(cè)器紫外檢測(cè)器1:原理:基于被分析組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光選擇性吸收2:定量基礎(chǔ):朗伯比爾定律A=KLC3:優(yōu)點(diǎn):3.1:對(duì)溫度和流速不敏感3.2:可用于梯度洗脫島津VP系列紫外檢測(cè)器功能1:可設(shè)定時(shí)間程序（切換不同時(shí)間的檢測(cè)波長(zhǎng)）2:雙波長(zhǎng)檢測(cè)，通過(guò)光柵切換來(lái)實(shí)現(xiàn)，光柵切換，得到所需波長(zhǎng)。3:比例色譜:初步判斷峰的純度4:停泵掃描，確定組分最大吸收波長(zhǎng)示差折光檢測(cè)器1:原理:連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率來(lái)測(cè)定試樣中各組分濃度2:優(yōu)點(diǎn):通用性檢測(cè)器，有需要時(shí)，可和其它檢測(cè)器連用，但是不耐壓，所以要放在最后。3:缺點(diǎn):3.1:對(duì)溫度變化敏感3.2:不能用于梯度檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題及其對(duì)策1:壓力異常2:漏液3:保留時(shí)間漂移，重現(xiàn)性不好4:基線問(wèn)題（漂移、噪聲等）5:峰形異常，峰萎縮、出現(xiàn)尖峰壓力偏高或持續(xù)上升（一）1:流速設(shè)定過(guò)高2:保護(hù)柱或柱子篩板堵塞，會(huì)吸附雜質(zhì)，可更換保護(hù)柱，有的色譜柱沒(méi)有篩板，但是有濾芯，被污染后，超聲作用不大，需更換濾芯，有的篩板是焊死的，篩板臟了，報(bào)廢，需全部更換。3:流動(dòng)相使用不當(dāng)或有緩沖鹽析出，拿錯(cuò)、配錯(cuò)流動(dòng)相的，前天用了沒(méi)有沖洗干凈的，壓力升高，用熱水沖洗可能起作用。壓力偏高或持續(xù)上升（二）4:色譜柱選用不當(dāng)，C18與C8的色譜柱不一樣5:進(jìn)樣閥損壞，如是定量換堵塞，把六通閥4號(hào)位置拆下進(jìn)行清洗。6:線路過(guò)濾器（管道過(guò)濾器）堵塞，排空閥上方有類似進(jìn)樣閥的東西，再次進(jìn)行過(guò)濾，此處若堵塞，需更換管道過(guò)濾器濾芯。壓力波動(dòng)1:泵頭中有氣泡，脫氣不充分，泵頭里有臟東西吸附氣泡。2:單向閥損壞，使用緩沖鹽，可能減少其壽命，用后要沖洗。3:柱塞密封圈損壞，造成輸液不均勻。4:系統(tǒng)漏液。5:使用了梯度洗脫。接頭處漏液1:接頭處松動(dòng)。2:接頭處磨損。3:接頭被污染。4:部件不匹配。對(duì) Waters來(lái)講，Peek頭更長(zhǎng)，與色譜柱連用不合適。進(jìn)樣閥漏液1:轉(zhuǎn)子密封圈損壞，更換密封圈。2:定量環(huán)堵塞。3:進(jìn)樣口密封松動(dòng)。4:進(jìn)樣針尺寸不合適。5:廢液管產(chǎn)生虹吸。6:廢液管堵塞，所以廢液管不能拖的太長(zhǎng)，太長(zhǎng)后面的壓力過(guò)高，但也不宜太短，太短，則易產(chǎn)生虹吸。檢測(cè)器漏液1:流通池墊片損壞。2:流通池透鏡破碎，廢液管如果太臟，會(huì)堵塞廢液管，造成檢測(cè)器內(nèi)部壓力過(guò)高，會(huì)壓碎透鏡，造成氣泡，給與檢測(cè)器一定的背壓，壓碎檢測(cè)器透鏡。保留時(shí)間漂移（一）1:柱溫變化，上午下午的溫度不同，若無(wú)柱溫箱時(shí)，用脫脂棉包起來(lái)，有則恒溫，同時(shí)避免空調(diào)出風(fēng)口直接對(duì)著色譜柱，盡量避免接近窗口的地方。2:流動(dòng)相組分的變化。3:色譜柱沒(méi)有平衡好，保留時(shí)間不能重現(xiàn)。4:流速變化。基線漂移（一）1:溫度波動(dòng)，對(duì)檢測(cè)器控溫。2:流動(dòng)相不均勻，脫氣或者使用純度更高的溶劑。3:流通池被污染或有氣泡，流通池臟了，用異丙醇沖洗流通池。4:檢測(cè)池背壓過(guò)高或拆卸過(guò)程中操作不當(dāng)，造成流通池窗口破裂，更換新透鏡。5:流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化?；€漂移（二）6:色譜柱不平衡,低波長(zhǎng),所需平衡時(shí)間較長(zhǎng).7:流動(dòng)相污染，要用高品質(zhì)溶劑，用二次蒸餾水。8:樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭樣峰波洗出,純的甲醇進(jìn)上若干針，進(jìn)行洗脫。9:檢測(cè)器波長(zhǎng)沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。規(guī)則的基線噪聲1:流動(dòng)相、輸液泵、檢測(cè)器中有氣泡，且大小一致。2:有地方漏液。3:流動(dòng)相混合不均勻。4:受溫度的影響。5:其他電子設(shè)備的影響，一個(gè)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，基線有噪聲，電信號(hào)有影響帶來(lái)噪聲。不規(guī)則的噪聲1:流動(dòng)相被污染2:漏液。3:流通池被污染。前延峰、拖尾峰（一）1:柱篩板堵塞。2:色譜柱塌陷。3:柱外效應(yīng)，死體積的影響。4:干擾峰:有雜質(zhì)，分不開(kāi)。5:緩沖不足或不合適，濃度不夠。6:重金屬污染,EDTA螯合劑，影響柱效。前延峰、拖尾峰（二）7:化學(xué)或次級(jí)保留（硅羥基效應(yīng)）,加三乙胺,處理拖尾會(huì)很好,是一個(gè)很好的掃尾劑。加1‰的冰CH3COOH，會(huì)很好的改善酸性物拖尾,氫離子與硅羥基結(jié)合，掃除拖尾.8:樣品溶劑選擇不當(dāng)。9:樣品過(guò)載，拖尾特別厲害。10:柱溫過(guò)低，分離效果差。峰形異?！绶?:保護(hù)柱或分析柱污染，拿到色譜柱要先測(cè)柱效，若是色譜柱被污染，沖洗色譜柱，可能會(huì)有效率。2:樣品溶劑不溶解于流動(dòng)相中。峰形變寬1:進(jìn)樣體積過(guò)大。2:流動(dòng)相粘度過(guò)高。3:檢測(cè)池體積過(guò)大。4:保留時(shí)間太長(zhǎng)。5:柱外體積過(guò)大。6:樣品過(guò)載。出現(xiàn)鬼峰1:進(jìn)樣閥殘余峰，進(jìn)樣針有殘留，出峰一次比一次小。2:樣品中未知物，保留時(shí)間重復(fù)，大小一樣,強(qiáng)保留物質(zhì)。3:柱子未平衡。4: