糖原磷酸化酶 b (GPb)活性檢測試劑盒說明書- 紫外分光光度法UPLC-MS-4183

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁bGPb)活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法貨號：UPLC-MS-4183規(guī)格：50T/24S產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體30mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×1支2-8℃保存試劑三粉劑×1支2-8℃保存試劑四粉劑×1支-20℃保存試劑五粉劑×3支-20℃保存試劑六粉劑×3支-20℃保存試劑七粉劑×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分混勻；2-8℃保存2個月；2、試劑三：臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；3、試劑四：臨用前加入1.25mL蒸餾水，充分混勻；可分裝后-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融；41mL-20℃451mL-20℃46、試劑七：臨用前加入4mL蒸餾水，充分混勻后-20分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；7、工作液的配制：臨用前根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需用量，按照試劑一：試劑二：試劑三：試劑四=740μL:20μL:20μL:20μL（1T的量）的比例，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：糖原磷酸化酶是糖原分解代謝中的關(guān)鍵酶，催化糖原的磷酸化反應(yīng)。該酶分為有活性的糖原磷酸化酶a（Glycogenphosphorylasea,phosphorylaseb,aa1-6-NADPNADPH，340nm下測定NADPHa活性。添加激活劑測定GP（GPa和GPa活性，GP-GPa活性得到GPb在340nm下測定NADPH上升速率，即可反映糖原磷酸化酶a活性。Glycogen

Gpa(withoutactivator)(Gpa+Gpb)(addactivator)

Glucose1-Phosphate

Phosphoglucomutase

Glucose6-PhosphateGlucose6-Phosphate

G6PDHNADP+

6-Phosphogluconolactone+NADPH(340nm)2-3紫外分光光度計、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、電子天平、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1(mL)︰5~100.1g1mL提取液）8000g，4℃10min2、血清（漿）：直接檢測。若有渾濁可以離心后取上清進(jìn)行測定。35001mL200W3s10s30）。8000g，4℃10min二、測定步驟1、紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。2、工作液置于37℃預(yù)熱5min。3GPa活性50μL50μL50μL50μL蒸餾水800μL340nm10s時吸光值A(chǔ)110minA2ΔAGPa=A2-A1。4GP活性:50μL50μL50μL50μL試劑七、800μL340nm10s時吸光值A(chǔ)110minA2ΔAGP=A4-A3。三、糖原磷酸化酶b(GPb)活性計算單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。GPb（U/mgprot）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷Cpr單位定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。GPb（U/g鮮重）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)÷WmL1nmolNADPHGPa（U/mL）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=321.54×(ΔAGP-ΔAGPa)單位定義：每1萬個細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。GPa（U/104cell）=[(ΔAGP-ΔAGPa)×V反總÷