植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與生長量的測定課件_第1頁
植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與生長量的測定課件_第2頁
植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與生長量的測定課件_第3頁
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文檔簡介

實驗三、植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與生長量的測定植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)（Suspensionculture）特點：細(xì)胞可以不斷增殖，形成高密度的細(xì)胞群體，適于大規(guī)模培養(yǎng)；能夠提供大量較為均勻的細(xì)胞，為研究細(xì)胞的生長、分化創(chuàng)造方法和條件。必須指出：懸浮培養(yǎng)中既有單細(xì)胞，也有小細(xì)胞團。概念：是指一種在受到不斷搖動的液體培養(yǎng)基里，培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞團的組織培養(yǎng)系統(tǒng)。實驗?zāi)康牧私饧?xì)胞懸浮系建立的全過程，掌握細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)及生長量的測定方法。1、起始懸浮液的制備愈傷組織液體培養(yǎng)基搖床振蕩懸浮培養(yǎng)質(zhì)地疏松，細(xì)胞分散程度大；質(zhì)地緊密，細(xì)胞分散程度小，不適于懸浮培養(yǎng)轉(zhuǎn)速30～150rpm防細(xì)胞破裂（2）培養(yǎng)細(xì)胞的生長量測定①鮮重測定采用直接測量法，將懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞用細(xì)胞篩過濾，過濾后用水沖洗，除去培養(yǎng)基，然后離心除去水分。將獲得的沉淀細(xì)胞稱量即為懸浮細(xì)胞的鮮重。②干重測定將鮮重測定得到的細(xì)胞置于60℃烘箱內(nèi)烘12～24h（因材料大小、數(shù)量多少而定）取出，冷卻后立即稱量，即為懸浮細(xì)胞干重。2、細(xì)胞生長曲線在整個培養(yǎng)過程中，細(xì)胞數(shù)目不斷發(fā)生變化，呈現(xiàn)出明顯的由慢到快，再到慢，最后增長停止的細(xì)胞周期。

細(xì)胞的生長呈S形曲線滯后期

(lagphase)指數(shù)生長期(exponentialphase)直線生長期(linearphase)減慢期(progressivedecelerationphase)靜止期(stationaryphase)培養(yǎng)時間培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)目1234512345細(xì)胞很少分裂，其時間長短取決于在繼代時原種培養(yǎng)細(xì)胞所處的生長期和轉(zhuǎn)入細(xì)胞數(shù)量的多少細(xì)胞分裂活躍，細(xì)胞數(shù)目迅速增加細(xì)胞生長和發(fā)育最快的時期由于培養(yǎng)基中某些營養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)耗盡，或是由于有毒代謝產(chǎn)物的積累，細(xì)胞

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