藥物分析芳酸及其酯類藥物的分析課件

芳酸及其酯類藥物的分析

典型藥物鑒別試驗含量測定體內(nèi)藥分

返回主目錄練習(xí)與思考雜質(zhì)檢查第六章基本要求芳酸及其酯類藥物的分析典型藥物鑒1基本要求

一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸類藥物的鑒別和含量測定的基本原理與方法。二、熟悉其他方酸類藥物鑒別和含量測定的基本原理與方法。。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。返回基本要求一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸2

一、水揚(yáng)酸類

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（salycylicacid）第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（saly3阿司匹林（aspirin)阿司匹林（aspirin)4

對氨基水楊酸鈉（sodiumaminosalicylate)對氨基水楊酸鈉5雙水楊酯（salsalate)雙水楊酯（salsalate)6貝諾酯（benorilate)貝諾酯（benorilate)7

1.酸性

SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、雙水楊酯均有酸性。

2.溶解性:

均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

3.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

4.芳伯氨基和酚羥基特性：5.水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸,對氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。（二）主要理化性質(zhì)1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.48

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicacid）二、苯甲酸類（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicaci9羥苯乙酯(ethylparoben)羥苯乙酯(ethylparoben)10丙磺舒(probenecid)丙磺舒(probenecid)11甲芬那酸(mefenamicacid)甲芬那酸(mefenamicacid)12（二）主要理化性質(zhì)

1.溶解性:

均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

3.具有酚羥基特性：

4.分解反應(yīng)特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸；丙磺舒分解為SO2

5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游離的羧基，可用NaOH直接滴定測定其含量。（二）主要理化性質(zhì)1.溶解性:均為固體，有一定溶點13三、其他芳酸類

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)氯貝丁酯（clofibrate）三、其他芳酸類氯貝丁酯（clofibrate）14布洛芬（ibuprofen）布洛芬（ibuprofen）15

(二)主要理化性質(zhì)

1.溶解性：水中不溶，有機(jī)溶劑溶解，氯貝丁酯為液體；布洛芬為固體，有一定熔點。

2.UV和IR特征吸收光譜：基于分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和特征基團(tuán)。返回(二)主要理化性質(zhì)返16

一、與三氯化鐵反應(yīng)

含有酚羥基藥物可與FeCl3反應(yīng)；能與FeCl3反應(yīng)不一定含酚羥基.第二節(jié)鑒別試驗Ar-OH+FeCl3紫堇色鐵配位化合物pH4~6一、與三氯化鐵反應(yīng)第二節(jié)鑒別試驗Ar-OH+171.直接反應(yīng)

SA在中性或弱酸性條件下，與FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl31.直接反應(yīng)赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl18

丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中與FeCl3生成米黃色布洛芬與高氯酸羥胺，N，N’-雙環(huán)基己羧二亞胺及高氯酸鐵反應(yīng)，即顯紫色[JP（14）方法]?；诜肿又?COOH的結(jié)構(gòu)。2.水解或分解后與三氯化鐵反應(yīng)ASA水解成SA后與FeCl3

反應(yīng)，成紫堇色丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中19二、重氮化-偶合反應(yīng)

凡是分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物均可反應(yīng)。二、重氮化-偶合反應(yīng)20

1.直接反應(yīng)

對氨基水楊酸鈉

2.水解后反應(yīng)

貝諾酯具有潛在芳伯氨基

3.甲芬那酸與對-硝基苯重氮鹽在NaOH介質(zhì)中偶合產(chǎn)生橙紅色。1.直接反應(yīng)對氨基水楊酸鈉21

+K2Cr2O7

深藍(lán)色

棕綠色甲芬那酸+H2SO4

黃色

綠色熒光[JP(14)△三、氧化反應(yīng)△三、氧化反應(yīng)22

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為156℃～161℃。

2.雙水楊酯水解生成SA：SA的mp為158℃。

3.氯貝丁酯堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥肟酸鹽，在弱酸條件下再與三氯化鐵反應(yīng)生成紫色的異羥肟酸鐵。四、水解反應(yīng)1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為23

1.苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物，可用于鑒別。

2.丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3,經(jīng)硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加熱分解，生成SO2氣體，有臭味五、分解產(chǎn)物反應(yīng)五、分解產(chǎn)物反應(yīng)24

1.測定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。

2.在λmax處測定一定濃度供試液的吸收度A。

例如：羥苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax處測定供試液的百分吸收系數(shù)。

例如：貝諾酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光譜法六、紫外吸收光譜法25

4.在規(guī)定的波長測定吸收度比值（即雙波長吸收度比值法）

例如：對氨基水楊酸鈉10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

4.在規(guī)定的波長測定吸收度比值（即雙波長吸收26七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜3700~2900cm27返回3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O對氨基水楊酸鈉的紅外吸收圖譜返回3700~2900cm-1N-H、O-H128第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查

1.溶液的澄清度

主要檢查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水楊酸苯酯；乙酰水楊酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液應(yīng)澄清。

2.游離水楊酸檢查

利用SA可與FeCl3呈色，用比色法檢查。

3.易炭化物檢查

主要檢查ASA中能被硫酸炭化顯色的低分子有機(jī)雜質(zhì)。采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法檢查。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查29

主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴(yán)格控制。

雙向滴定法：利用間氨基酚溶于乙醚，取3.0g樣品用乙醚提取0.02mol/LHCl測定方法滴定V＜0.3ml。

HPLC法：采用內(nèi)標(biāo)法，以磺胺作內(nèi)標(biāo)（USP）

二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查30THANKYOUSUCCESS2022/12/1231可編輯THANKYOUSUCCESS2022/12/11三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不清，故采用TLC法中的供試品自身對照法：固定相：GF254C18化學(xué)鍵合硅膠展開劑：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不32

甲芬那酸是以鄰-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下縮合而成，因此成品藥物中要檢查銅鹽及有關(guān)物質(zhì)。分光光度法：利用Cu2+與Na-DDC呈色后測定A

1.銅鹽檢查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有關(guān)物質(zhì)的檢查主要檢查的是酰胺、二甲基苯胺和鄰氯苯甲酸各國藥典均采用TLC法中的自身高低濃度對照法。四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查33五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚原料和揮發(fā)性雜質(zhì)GC-FID法HPLC法：以對-羥乙基酚作內(nèi)標(biāo)，用正相HPLC2.揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查方法

GC法1.對氯酚檢查返回五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚34

一、酸堿滴定法（一）直接滴定法

基于本類藥物-COOH；可用堿直接滴定，如ASA的含量測定，其原理如下：第四節(jié)含量測定1.原理：2.條件：在中性乙醇中，以酚酞作指示劑；摩爾比為1:1。3.應(yīng)用：多國藥典用于雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定；USP和BP還用于甲芬那酸的測定。一、酸堿滴定法第四節(jié)含量測定1.原理：2.條35（二）水解后剩余滴定法

1.ASA含量測定原理：條件：水溶液（二）水解后剩余滴定法原理：條件：水溶液36具體試驗：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于ASA消耗

硫酸的ml數(shù)ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%具體試驗：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于A372.羥苯乙酯的含量測定2.羥苯乙酯的含量測定38（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測定第一步為中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解產(chǎn)物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性穩(wěn)定劑+NaOH中性鹽第二步為水解與測定（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測定第一步為中和AS39

2.氯貝丁酯含量測定

第一步：中和酸性雜質(zhì)

第二步：水解與測定2.氯貝丁酯含量測定40二、亞硝酸鈉滴定法

對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在HCl中與NaNO2發(fā)生重氮化反應(yīng)Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亞硝酸鈉滴定法測定其含量，此法在下章重點討論。二、亞硝酸鈉滴定法對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在41三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相中的滴定。如苯甲酸鈉的含量測定：

生成的苯甲酸不溶于水，終點pH突躍不明顯，不易觀察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚將滴定中產(chǎn)生的苯甲酸萃取入醚層。因此用雙相滴定可使反應(yīng)完全終點明顯。三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相42（一）直接紫外分光光度法

丙磺舒片的測定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系數(shù)法。

BP(1998)再鹽酸-乙醇,采用百分吸收系數(shù)法.

USP(24)用氯仿提取后，采用對照品比較法。四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法四、紫外分光光度法43（二）離子交換-紫外分光光度法

氯貝丁酯及其制劑Ch.P(2000)采用酸堿滴定法；當(dāng)含有酸性雜質(zhì)對氯酚時，可采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質(zhì)后，在甲醇溶液中，226nm波長處，采用對照品比較法。

具體計算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（二）離子交換-紫外分光光度法氯貝丁酯及其制劑44（三）柱分配色譜-紫外分光光度法

USP(24)采用此法同時測定ASA膠囊中ASA和SA。

1.SA的限量測定

色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備。（三）柱分配色譜-紫外分光光度法USP45供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3洗脫液2：HAC-

乙醚硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供試品液：CHCl3-HCl液洗脫液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脫液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-雜質(zhì)先洗脫2-SA后洗脫max=306nmAu＜As1-雜質(zhì)先洗脫2-ASA后洗脫max=280nmASA(mg)=C(Au/As)供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3硅藻土，F(xiàn)eCl346

2.ASA的含量測定色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備。2.ASA的含量測定47

Ch.P(2000)ASA的膠囊劑的含量測定采用此法。

USP（24）ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑，采用此法。五、HPLC法五、HPLC法48（一）ASA栓劑的含量測定色譜條件：色譜柱ODSC18；流動相為甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);檢測波長280nm；內(nèi)標(biāo)物為咖啡因。系統(tǒng)適用性試驗：

n＞2000;ASA與SA與內(nèi)標(biāo)物的R＞1.5具體計算：

Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW測=1250×Cx標(biāo)示量%=W測/W×W平/標(biāo)示量×100%

=Cx×1250×W平/W×標(biāo)示量×100%（一）ASA栓劑的含量測定色譜條件：色譜柱ODSC18；流動49

色譜條件：色譜柱苯基硅膠柱；流動相為NaH2PO3

0.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);檢測波長254nm。

系統(tǒng)適用性試驗：

n＞3900;T＞2.3;重復(fù)性RSD＜1.5%

具體計算：（二）丙磺舒原料的含量測定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C

供試品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回色譜條件：色譜柱苯基硅膠柱；流動相為NaH2PO3050

一、血清中ASA和SA濃度的HPLC法

色譜條件：色譜柱為ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)

流動相為甲醇-水-正丁醇(30:20:1)檢測波長為237nm；內(nèi)標(biāo)物為苯甲酸。

血清樣品預(yù)處理

血清100μl+HClO450μl+不同濃度ASA和SA+內(nèi)標(biāo)液渦旋混合2min離心5min取上清液20μl進(jìn)樣。

第五節(jié)體內(nèi)藥物分析一、血清中ASA和SA濃度的HPLC法第五節(jié)體內(nèi)藥物51回歸方程：以峰高比（H標(biāo)/H內(nèi)）對濃度回歸ASA的回歸方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回歸方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的線性范圍分別為：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五種不同濃度測定，ASA為96.0%～106.0%;SA為92.0%～119.5%;（五種不同濃度均應(yīng)在線性范圍內(nèi)）回歸方程：以峰高比（H標(biāo)/H內(nèi)）對濃度回歸52色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。檢測波長為254nm；內(nèi)標(biāo)物為依他尼酸。尿樣品預(yù)處理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸餾水活化。2.0ml尿樣+內(nèi)標(biāo)300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脫生物雜質(zhì)再用甲醇0.5ml洗脫保留在柱上的丙磺舒和內(nèi)標(biāo)。洗脫液0.45μm浸濾膜濾過，取5μl直接進(jìn)樣分析。

二、尿中丙磺舒的固相萃取凈化-HPLC法(運(yùn)動員違禁藥物)色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125m53線性關(guān)系和回收率：

取空白尿樣2.0ml+不同濃度丙磺舒+內(nèi)標(biāo)液按上述方法分析(濃度范圍為0.1μg/ml～100μg/ml);A丙/A內(nèi)對C丙回歸。回收率：丙磺舒為100%±3%(n=14)；內(nèi)標(biāo)為101%±3%(n=12)；人尿樣測定：丙磺舒(單劑量500mg)尿排泄藥-時曲線(見P136)線性關(guān)系和回收率：54

三、HPLC法測定人血漿中布洛芬含量

色譜條件：色譜柱為Shim-packCLC-ODS(150mm×6mm,10μm)

預(yù)柱為YWG-C18；流動相為甲醇-20mol/L磷酸二氫鉀沖溶液(70:30,pH=4.0);流速為1.0ml/min;

檢測波長為221nm；內(nèi)標(biāo)物為肉桂酸。

樣品預(yù)處理：取肝素抗凝血漿0。24ml+內(nèi)標(biāo)液+甲醇0.5ml,振蕩混勻，離心(1000r/min)15min,取上清液10μl直接進(jìn)樣分析。布洛芬和肉桂酸t(yī)R為5.15和2.85min。三、HPLC法測定人血漿中布洛芬含量55回歸方程：以對照品與內(nèi)標(biāo)的峰高比對濃度回歸，其回歸方程為：

Y=4.05×10-2C–2.0×10-3,r=0.9999?；厥章蕼y定：空白血漿+布洛芬對照品高、中、低三種濃度，按樣品處理項下測定，測得平均回收率為99.2±1.6%。精密度：日內(nèi)精密度為RSD＝1.8%；日間精密度為2.8%。回歸方程：以對照品與內(nèi)標(biāo)的峰高比對濃度回歸，其回歸方程為：56

1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0h自肘靜脈取血1.5ml，肝素抗凝，按“樣品處理方法”項下操作，求算血藥濃度，結(jié)果見P137表6－1。

試驗結(jié)果：

1.血漿用甲醇除蛋白后，直接進(jìn)樣，經(jīng)預(yù)柱凈化，再進(jìn)分析柱

回收率高，分析速度快(6min完成)，分離效果好。2.口服一次后Tmax=30min～90min；體內(nèi)維持4h～6h。與文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致。3.本法可用于臨床治療藥物濃度檢測和藥代動力學(xué)研究。

人血漿樣品測定：受試者8人；給藥劑量600mg，給藥后0.5，0.75返回1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.057練習(xí)與思考[A型題]

1．阿司匹林中檢查的特殊雜質(zhì)是A.水楊醛B.砷鹽C.水楊酸D.苯甲酸E.苯酚2．對氨基水楊酸鈉中檢查的特殊雜質(zhì)是A.水楊醛B.間氨基酚C.水楊酸D.苯甲酸E.苯酚練習(xí)與思考[A型題]1．阿司匹林中檢查58[B型題]FeCl3反應(yīng)B.水解后FeCl3反應(yīng)C.AgNO3反應(yīng)D.重氮化-偶合反應(yīng)E.麥芽酚反應(yīng)1.阿司匹林2.水楊酸3.SMZ4.苯甲酸鈉BADA[B型題]FeCl3反應(yīng)B.水解后FeCl3反應(yīng)59A.直接酸堿滴定法B.兩步酸堿滴定法

C.亞硝酸鈉溶液滴定法

D.HPLC法E.雙相滴定法

5.苯甲酸鈉

6.阿司匹林

7.阿司匹林栓劑

8.對氨基水楊酸鈉

EBDCA.直接酸堿滴定法B.兩步酸堿滴定法

6061寫在最后成功的基礎(chǔ)在于好的學(xué)習(xí)習(xí)慣Thefoundationofsuccessliesingoodhabits61寫在最后成功的基礎(chǔ)在于好的學(xué)習(xí)習(xí)慣結(jié)束語當(dāng)你盡了自己的最大努力時，失敗也是偉大的，所以不要放棄，堅持就是正確的。WhenYouDoYourBest,FailureIsGreat,SoDon'TGiveUp,StickToTheEnd演講人：XXXXXX

時間：XX年XX月XX日

結(jié)束語62

芳酸及其酯類藥物的分析

典型藥物鑒別試驗含量測定體內(nèi)藥分

返回主目錄練習(xí)與思考雜質(zhì)檢查第六章基本要求芳酸及其酯類藥物的分析典型藥物鑒63基本要求

一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸類藥物的鑒別和含量測定的基本原理與方法。二、熟悉其他方酸類藥物鑒別和含量測定的基本原理與方法。。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。返回基本要求一、掌握水揚(yáng)酸類、苯甲酸64

一、水揚(yáng)酸類

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（salycylicacid）第一節(jié)典型藥物分類與理化性質(zhì)水楊酸（saly65阿司匹林（aspirin)阿司匹林（aspirin)66

對氨基水楊酸鈉（sodiumaminosalicylate)對氨基水楊酸鈉67雙水楊酯（salsalate)雙水楊酯（salsalate)68貝諾酯（benorilate)貝諾酯（benorilate)69

1.酸性

SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、雙水楊酯均有酸性。

2.溶解性:

均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

3.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

4.芳伯氨基和酚羥基特性：5.水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸,對氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。（二）主要理化性質(zhì)1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.470

（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicacid）二、苯甲酸類（一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽(benzoicaci71羥苯乙酯(ethylparoben)羥苯乙酯(ethylparoben)72丙磺舒(probenecid)丙磺舒(probenecid)73甲芬那酸(mefenamicacid)甲芬那酸(mefenamicacid)74（二）主要理化性質(zhì)

1.溶解性:

均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。

2.UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。

3.具有酚羥基特性：

4.分解反應(yīng)特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸；丙磺舒分解為SO2

5.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游離的羧基，可用NaOH直接滴定測定其含量。（二）主要理化性質(zhì)1.溶解性:均為固體，有一定溶點75三、其他芳酸類

(一)典型藥物結(jié)構(gòu)氯貝丁酯（clofibrate）三、其他芳酸類氯貝丁酯（clofibrate）76布洛芬（ibuprofen）布洛芬（ibuprofen）77

(二)主要理化性質(zhì)

1.溶解性：水中不溶，有機(jī)溶劑溶解，氯貝丁酯為液體；布洛芬為固體，有一定熔點。

2.UV和IR特征吸收光譜：基于分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和特征基團(tuán)。返回(二)主要理化性質(zhì)返78

一、與三氯化鐵反應(yīng)

含有酚羥基藥物可與FeCl3反應(yīng)；能與FeCl3反應(yīng)不一定含酚羥基.第二節(jié)鑒別試驗Ar-OH+FeCl3紫堇色鐵配位化合物pH4~6一、與三氯化鐵反應(yīng)第二節(jié)鑒別試驗Ar-OH+791.直接反應(yīng)

SA在中性或弱酸性條件下，與FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl31.直接反應(yīng)赭色苯甲酸（中性或堿性水溶液）+FeCl80

丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中與FeCl3生成米黃色布洛芬與高氯酸羥胺，N，N’-雙環(huán)基己羧二亞胺及高氯酸鐵反應(yīng)，即顯紫色[JP（14）方法]?；诜肿又?COOH的結(jié)構(gòu)。2.水解或分解后與三氯化鐵反應(yīng)ASA水解成SA后與FeCl3

反應(yīng)，成紫堇色丙磺舒與NaOH成鈉鹽后，在pH5.0~6.0中81二、重氮化-偶合反應(yīng)

凡是分子結(jié)構(gòu)中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物均可反應(yīng)。二、重氮化-偶合反應(yīng)82

1.直接反應(yīng)

對氨基水楊酸鈉

2.水解后反應(yīng)

貝諾酯具有潛在芳伯氨基

3.甲芬那酸與對-硝基苯重氮鹽在NaOH介質(zhì)中偶合產(chǎn)生橙紅色。1.直接反應(yīng)對氨基水楊酸鈉83

+K2Cr2O7

深藍(lán)色

棕綠色甲芬那酸+H2SO4

黃色

綠色熒光[JP(14)△三、氧化反應(yīng)△三、氧化反應(yīng)84

1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為156℃～161℃。

2.雙水楊酯水解生成SA：SA的mp為158℃。

3.氯貝丁酯堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥肟酸鹽，在弱酸條件下再與三氯化鐵反應(yīng)生成紫色的異羥肟酸鐵。四、水解反應(yīng)1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp為85

1.苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物，可用于鑒別。

2.丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO3,經(jīng)硝酸氧化成Na2SO4。

3.丙磺舒加熱分解，生成SO2氣體，有臭味五、分解產(chǎn)物反應(yīng)五、分解產(chǎn)物反應(yīng)86

1.測定λmax；λmin。

例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。

2.在λmax處測定一定濃度供試液的吸收度A。

例如：羥苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.48

3.在λmax處測定供試液的百分吸收系數(shù)。

例如：貝諾酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760

六、紫外吸收光譜法六、紫外吸收光譜法87

4.在規(guī)定的波長測定吸收度比值（即雙波長吸收度比值法）

例如：對氨基水楊酸鈉10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56

再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30

4.在規(guī)定的波長測定吸收度比值（即雙波長吸收88七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H七、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜3700~2900cm89返回3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O對氨基水楊酸鈉的紅外吸收圖譜返回3700~2900cm-1N-H、O-H190第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查

1.溶液的澄清度

主要檢查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水楊酸苯酯；乙酰水楊酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液應(yīng)澄清。

2.游離水楊酸檢查

利用SA可與FeCl3呈色，用比色法檢查。

3.易炭化物檢查

主要檢查ASA中能被硫酸炭化顯色的低分子有機(jī)雜質(zhì)。采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法檢查。第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、ASA中特殊雜質(zhì)的檢查91

主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴(yán)格控制。

雙向滴定法：利用間氨基酚溶于乙醚，取3.0g樣品用乙醚提取0.02mol/LHCl測定方法滴定V＜0.3ml。

HPLC法：采用內(nèi)標(biāo)法，以磺胺作內(nèi)標(biāo)（USP）

二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查92THANKYOUSUCCESS2022/12/1293可編輯THANKYOUSUCCESS2022/12/11三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不清，故采用TLC法中的供試品自身對照法：固定相：GF254C18化學(xué)鍵合硅膠展開劑：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP收載的方法，由于雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)不94

甲芬那酸是以鄰-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下縮合而成，因此成品藥物中要檢查銅鹽及有關(guān)物質(zhì)。分光光度法：利用Cu2+與Na-DDC呈色后測定A

1.銅鹽檢查法

原子吸收分光光度法：BP（2000）

2.有關(guān)物質(zhì)的檢查主要檢查的是酰胺、二甲基苯胺和鄰氯苯甲酸各國藥典均采用TLC法中的自身高低濃度對照法。四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查95五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚原料和揮發(fā)性雜質(zhì)GC-FID法HPLC法：以對-羥乙基酚作內(nèi)標(biāo)，用正相HPLC2.揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查方法

GC法1.對氯酚檢查返回五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查

主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚96

一、酸堿滴定法（一）直接滴定法

基于本類藥物-COOH；可用堿直接滴定，如ASA的含量測定，其原理如下：第四節(jié)含量測定1.原理：2.條件：在中性乙醇中，以酚酞作指示劑；摩爾比為1:1。3.應(yīng)用：多國藥典用于雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定；USP和BP還用于甲芬那酸的測定。一、酸堿滴定法第四節(jié)含量測定1.原理：2.條97（二）水解后剩余滴定法

1.ASA含量測定原理：條件：水溶液（二）水解后剩余滴定法原理：條件：水溶液98具體試驗：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于ASA消耗

硫酸的ml數(shù)ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%具體試驗：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相當(dāng)于A992.羥苯乙酯的含量測定2.羥苯乙酯的含量測定100（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測定第一步為中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解產(chǎn)物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性穩(wěn)定劑+NaOH中性鹽第二步為水解與測定（三）兩步滴定法

1.ASA片的含量測定第一步為中和AS101

2.氯貝丁酯含量測定

第一步：中和酸性雜質(zhì)

第二步：水解與測定2.氯貝丁酯含量測定102二、亞硝酸鈉滴定法

對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在HCl中與NaNO2發(fā)生重氮化反應(yīng)Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O

因此可用亞硝酸鈉滴定法測定其含量，此法在下章重點討論。二、亞硝酸鈉滴定法對氨基水楊酸鈉有芳伯氨基,在103三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相中的滴定。如苯甲酸鈉的含量測定：

生成的苯甲酸不溶于水，終點pH突躍不明顯，不易觀察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚將滴定中產(chǎn)生的苯甲酸萃取入醚層。因此用雙相滴定可使反應(yīng)完全終點明顯。三、雙相滴定法

是指在水相和有機(jī)相104（一）直接紫外分光光度法

丙磺舒片的測定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系數(shù)法。

BP(1998)再鹽酸-乙醇,采用百分吸收系數(shù)法.

USP(24)用氯仿提取后，采用對照品比較法。四、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法四、紫外分光光度法105（二）離子交換-紫外分光光度法

氯貝丁酯及其制劑Ch.P(2000)采用酸堿滴定法；當(dāng)含有酸性雜質(zhì)對氯酚時，可采用強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質(zhì)后，在甲醇溶液中，226nm波長處，采用對照品比較法。

具體計算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（二）離子交換-紫外分光光度法氯貝丁酯及其制劑106（三）柱分配色譜-紫外分光光度法

USP(24)采用此法同時測定ASA膠囊中ASA和SA。

1.SA的限量測定

色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備。（三）柱分配色譜-紫外分光光度法USP107供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3洗脫液2：HAC-

乙醚硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供試品液：CHCl3-HCl液洗脫液1：HAC-CHCl3

(1:10)10ml洗脫液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml

1-雜質(zhì)先洗脫2-SA后洗脫max=306nmAu＜As1-雜質(zhì)先洗脫2-ASA后洗脫max=280nmASA(mg)=C(Au/As)供試品液：CHCl3液洗脫液1：CHCl3硅藻土，F(xiàn)eCl3108

2.ASA的含量測定色譜柱的制備；對照品溶液的制備；供試品溶液的制備。2.ASA的含量測定109

Ch.P(2000)ASA的膠囊劑的含量測定采用此法。

USP（24）ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑，采用此法。五、HPLC法五、HPLC法110（一）ASA栓劑的含量測定色譜條件：色譜柱ODSC18；流動相為甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);檢測波長280nm；內(nèi)標(biāo)物為咖啡因。系統(tǒng)適用性試驗：

n＞2000;ASA與SA與內(nèi)標(biāo)物的R＞1.5具體計算：

Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW測=1250×Cx標(biāo)示量%=W測/W×W平/標(biāo)示量×100%

=Cx×1250×W平/W×標(biāo)示量×100%（一）ASA栓劑的含量測定色譜條件：色譜柱ODSC18；流動111

色譜條件：色譜柱苯基硅膠柱；流動相為NaH2PO3

0.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);檢測波長254nm。

系統(tǒng)適用性試驗：

n＞3900;T＞2.3;重復(fù)性RSD＜1.5%

具體計算：（二）丙磺舒原料的含量測定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C

供試品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回色譜條件：色譜柱苯基硅膠柱；流動相為NaH2PO30112

一、血清中ASA和SA濃度的HPLC法

色譜條件：色譜柱為ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)

流動相為甲醇-水-正丁醇(30:20:1)檢測波長為237nm；內(nèi)標(biāo)物為苯甲酸。

血清樣品預(yù)處理

血清100μl+HClO450μl+不同濃度ASA和SA+內(nèi)標(biāo)液渦旋混合2min離心5min取上清液20μl進(jìn)樣。

第五節(jié)體內(nèi)藥物分析一、血清中ASA和SA濃度的HPLC法第五節(jié)體內(nèi)藥物113回歸方程：以峰高比（H標(biāo)/H內(nèi)）對濃度回歸ASA的回歸方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回歸方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的線性范圍分別為：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五種不同濃度測定，ASA為96.0%～106.0%;SA為92.0%～119.5%;（五種不同濃度均應(yīng)在線性范圍內(nèi)）回歸方程：以峰高比（H標(biāo)/H內(nèi)）對濃度回歸114色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125mm×4mm,5μm)

流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。檢測波長為254nm；內(nèi)標(biāo)物為依他尼酸。尿樣品預(yù)處理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后用0.5ml蒸餾水活化。2.0ml尿樣+內(nèi)標(biāo)300μl(10μg/ml)上柱1.0ml水洗脫生物雜質(zhì)再用甲醇0.5ml洗脫保