DB61-T 1521.8-2021奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范 第8部分：奶山羊胚胎移植

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DB61陜 西 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB61/T1521.8—20218TechnicalSpecificationsforDairyGoatFarming—Part8:Embryotransferofdairygoat20212021121720220117陜西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB61/T1521.8DB61/T1521.8—2021DB61/T1521.8DB61/T1521.8—2021目??次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語和定義 1供體羊選擇與飼養(yǎng)管理 1供體羊超數(shù)排卵和人工授精 2胚胎的采集 2胚胎冷凍保存及解凍 3受體羊選擇與飼養(yǎng)管理 4奶山羊胚胎移植 4妊?羊飼養(yǎng)管理 4附錄B（規(guī)范性）奶山羊胚胎移植程序 7I附錄附錄B（規(guī)范性）奶山羊胚胎移植程序 7I前??言DB61/T1521《奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范》分為如下部分：1部分：關(guān)中奶山羊良種鑒定；2部分：引進(jìn)奶山羊良種鑒定；3部分：雙基因良種選育；4部分：種公羊飼養(yǎng)管理；——第5部分：后備羊培育；——第6部分：泌乳奶山羊健康養(yǎng)殖；7部分：人工授精；8部分：胚胎移植；——第9部分：苜蓿半干青貯；10部分：疫病防控；11部分：機(jī)器擠奶。本文件根據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起草。本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)提出。本部分由陜西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本文件根據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起草。本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)提出。本部分由陜西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。本部分由西北農(nóng)林科技大學(xué)負(fù)責(zé)解釋。本部分首次發(fā)布。聯(lián)系信息如下：?jiǎn)挝唬何鞅鞭r(nóng)林科技大學(xué)電話址：陜西楊凌示范區(qū)西農(nóng)路22號(hào)郵編：712100II奶山羊養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范第8部分：胚胎移植范圍本部分規(guī)定了奶山羊胚胎移植供體羊選擇與飼養(yǎng)管理，供體羊超數(shù)排卵和人工授精，胚胎的采集、冷凍保存及解凍，受體羊選擇與飼養(yǎng)管理，奶山羊胚胎移植，妊辰羊飼養(yǎng)與管理的要求和方法。本部分適應(yīng)于奶山羊胚胎移植、胚胎冷凍保存等。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB20557 山羊冷凍精液術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本部分。3.1奶山羊胚胎移植embryotransferofdairygoat奶山羊胚胎移植embryotransferofdairygoat將通過體內(nèi)或體外受精及其他方式得到的奶山羊早期胚胎，移植到處于相似生理狀態(tài)的母羊體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的方法。3.2供體donor提供胚胎的母羊。3.3受體receptor接受胚胎的母羊。4供體羊選擇與飼養(yǎng)管理供體羊的選擇品種優(yōu)良，系譜清楚，遺傳性能穩(wěn)定，生產(chǎn)性能突出；體質(zhì)健康，無傳染性疾病，繁殖機(jī)能正常；體重60kg，泌乳期產(chǎn)奶量超過800kg，經(jīng)產(chǎn)1胎～3胎，產(chǎn)后90d以上的母羊作為供體。供體羊飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，舍內(nèi)溫度控制在10℃～26℃，圈舍衛(wèi)生、干燥。根據(jù)膘情調(diào)整飼料配方，保持中等以上膘情。1供體羊超數(shù)排卵和人工授精超數(shù)排卵超數(shù)排卵所用激素9月～11(FSH)，氯前列烯醇(pGF2α類似物)，促黃體素釋放激素A3（LHRH-A3），用于超數(shù)排卵。激素劑量按照產(chǎn)品說明使用。超排程序第0天供體母羊陰道內(nèi)放置羊用硅膠陰道栓，同時(shí)肌肉注射氯前列烯醇，第16天肌肉注射FSH，每天早晚間隔12h注射1次3d～41次注射FSH供體羊發(fā)情鑒定在撤除陰道栓后的12h～72h，對(duì)超排供體羊進(jìn)行發(fā)情觀察，以接受公羊爬跨作為配種起始時(shí)間。配種供體羊選擇供體羊選擇本交供體羊每8h交配一次，直至發(fā)情結(jié)束。常規(guī)人工授精0.5mL8h3次～5次。腹腔鏡子宮輸精36h～48h進(jìn)行，借助腹腔鏡觀察母羊子宮、卵巢、10.1mL～0.20.5×108個(gè)。30h～36h2次，注入精液0.2mL，有效精子數(shù)不低3.5×107個(gè)，間隔8h～12h再輸精一次。2胚胎的采集藥品、試劑器械器材(帶乳膠管、手術(shù)刀片、縫合針、鑷子、表面皿（120mm）、頭皮針（尖端磨鈍、硅膠管雙路通管（8mm）、螺旋回收針、注射器（10mL，20mL）、玻璃管（8mm）和培養(yǎng)皿（5mm）等。沖胚所需藥品杜氏磷酸鹽緩沖液(PBS)、胚胎培養(yǎng)液、75%酒精、碘伏、新潔爾滅、0.9%生理鹽水、獸用麻醉藥和解麻藥等。供體羊胚胎采集麻醉與保定供體羊首次配種后的第5天空腹24h進(jìn)行麻醉，仰臥保定。選擇鼠蹊部作為手術(shù)部位并剃毛（20cm×20cm）。胚胎采集3cm～5cm從雙側(cè)子宮角回收胚胎。胚胎回收時(shí)可用長(zhǎng)柄腸鉗（齒槽外套乳膠管）夾于子宮角基部，將12號(hào)針30mL專用沖胚液，刺入宮管結(jié)合部進(jìn)行沖胚，將含有胚胎的沖胚液回收到專用集胚杯內(nèi)。胚胎收集20℃～25℃，采用體式顯微鏡在集胚杯中仔細(xì)查找并收集胚胎。將檢出的胚胎收集到盛有保存液的培養(yǎng)皿中。3次～4次后再進(jìn)行質(zhì)量鑒定。胚胎質(zhì)量鑒定A、B、C、D四個(gè)等級(jí)：AB級(jí)：胚胎發(fā)育階段與胚齡相符，卵裂球均勻緊湊，透明度好，無畸形；CD級(jí)：胚胎發(fā)育階段與胚齡相符，卵裂球已分散開或細(xì)胞已破裂，失去了繼續(xù)發(fā)育的潛力。ABBC級(jí)為不可用于胚胎移植。3創(chuàng)口處理用37℃的生理鹽水將子宮及卵巢沖洗干凈以后送入腹腔，給腹腔注入適量抗菌素預(yù)防感染。創(chuàng)口采用兩層縫合法縫合，其中腹膜連同肌肉進(jìn)行縫合,皮膚進(jìn)行節(jié)結(jié)縫合，針孔間距1cm。胚胎冷凍保存及解凍胚胎冷凍保存及解凍按附錄A進(jìn)行。受體羊選擇與飼養(yǎng)管理受體羊的選擇選擇健康、體況中等偏上，年齡在2胎～4胎的中低產(chǎn)經(jīng)產(chǎn)奶山羊（產(chǎn)后90d以上）作為受體羊。嚴(yán)禁用患有子宮、卵巢、乳房疾病及發(fā)情周期不正常個(gè)體作為受體羊。受體羊的飼養(yǎng)管理受體羊統(tǒng)一打號(hào)、建檔，保持飼養(yǎng)管理穩(wěn)定，避免各種應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)做好預(yù)防注射和驅(qū)蟲工作。常規(guī)飼養(yǎng)管理，保持中等以上體況，嚴(yán)禁與公羊混群飼養(yǎng)。奶山羊胚胎移植受體羊同期發(fā)情處理受體羊同期發(fā)情處理見附錄B表B.1。受體羊發(fā)情鑒定從撤除陰道栓后的12h～36h開始，觀察受體羊發(fā)情情況，每6h記錄發(fā)情1次。胚胎移植移植時(shí)間受體羊在發(fā)情后5d～6d之間進(jìn)行胚胎移植。移植方法24h12h后麻醉。術(shù)前母羊仰臥保定在專用手術(shù)架。（12cm×12用套管針在腹中線兩側(cè)分別刺入腹腔開孔，將腹腔鏡經(jīng)套管插入腹腔右孔，通過腹腔鏡觀察1/3處避開血管扎孔，將裝有胚胎的移植針從此針眼進(jìn)入子宮腔注入胚胎，子宮送入腹腔，縫合創(chuàng)口。術(shù)后護(hù)理，無感染羊一周后拆線，感染羊進(jìn)行外科消毒處理。45d～60dB超進(jìn)行懷孕診斷。4妊娠羊飼養(yǎng)管理55附錄A（規(guī)范性）胚胎冷凍保存和解凍胚胎的冷凍保存儀器、器械實(shí)體顯微鏡、胚胎冷凍儀、吸胚管、0.25ml麥管、麥管塞、裝管器、細(xì)菌濾器(0.22μm針頭式)、培養(yǎng)皿等。溶液0.4牛血清蛋白的PBS1010%1.5mol/L乙二醇冷凍液：用保存液配制含1.5mol/L乙二醇和0.1mol/L蔗糖的冷凍保護(hù)液。甘油胚胎冷凍法冷凍方法第一步，胚胎在保存液中清洗5次～10次后移入1/310%甘油冷凍液再加入2/3保存液平衡5min～7min；第二步，胚胎移入2/310%甘油冷凍液再加入1/3保存液平衡5min～7min；第三步，胚胎移入10%甘油冷凍液平衡5min～7min。冷凍程序胚胎經(jīng)三步預(yù)處理后裝入細(xì)管(在10min～20min內(nèi)完成)，然后放入胚胎冷凍儀中冷凍。冷凍程序：以1℃/min速率降溫，在-6℃～-7℃下平衡5min，在-7℃～-7.5℃下平衡10min，以0.3℃/min速率降溫，在-36℃～-38℃下平衡10min；最后浸入液氮中保存。乙二醇胚胎冷凍法冷凍方法胚胎在保存液沖洗5次～10次，然后將胚胎轉(zhuǎn)移到含有0.5mol/L、1.0mol/L乙二醇冷凍液中各平衡5min，轉(zhuǎn)入1.5moL/L乙二醇冷凍液常溫條件下平衡15min?20min，并將胚胎裝入細(xì)管(在10min～20min內(nèi)完成)，然后放入胚胎冷凍儀中進(jìn)行冷凍。冷凍程序按照A.1.3.2甘油胚胎冷凍法進(jìn)行胚胎冷凍。胚胎的解凍器械實(shí)體顯微鏡溫度計(jì)解凍用水杯0.25mL麥管吸卵管細(xì)管推桿裝管器細(xì)菌濾器(0.22 m針頭式)、4個(gè)100mm塑料培養(yǎng)皿。6溶液10甘油的保存液、1.5mol/L乙二醇的保存液。1mol/L蔗糖溶液。0.4PBS液。胚胎解凍方法103011/3解凍液,2/35min～7min；1/3解凍液,1/3冷凍液,1/35～7min；1/3解凍液,2/35min～7min2次～3次，轉(zhuǎn)移到顯微鏡下進(jìn)行鑒定。77附錄B（規(guī)范性）奶山羊胚胎移植程序B.1奶山羊胚胎移植移程序奶山羊胚胎移植程序見表B.1。表B.1奶山羊胚胎移植移程序處理時(shí)間供體處理方法處理時(shí)間受體處理方法第0d8:00肌注PGF2α，放置硅膠栓第0d肌注PGF2α，放硅膠栓第12d8:00肌注FSH；換栓。第12d20:00肌注FSH。第13d8:00肌注FSH。第13d20:00肌注FSH。第13d7:00肌注PMSG第14d8:00肌注FSH。第14d20:00撤栓，肌注PGF2α,第14d20:00肌注FSH。第15d8:00肌注FSH，肌注PGF2α