復(fù)方氨酚那敏顆粒微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案

復(fù)方氨酚那敏顆粒微生物限度檢查方法適用性驗(yàn)證方案.概述.驗(yàn)證目的和范圍.組織及職責(zé).驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表.驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn).驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn).驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法試驗(yàn)菌株需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證的菌液制備需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證一常規(guī)傾注平皿法控制菌檢查方法驗(yàn)證一常規(guī)傾注平皿法.偏差與漏項(xiàng)控制.驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審.概述我公司生產(chǎn)品種復(fù)方氨酚那敏顆粒，產(chǎn)品微生物限度檢查項(xiàng)目為需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、以及大腸埃希菌檢查和沙門菌檢查。參照《中國藥典》2015版四部附錄1105：微生物計(jì)數(shù)法，以及1106：控制菌檢查法的規(guī)定，本公司對該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法予以驗(yàn)證。通過驗(yàn)證以確認(rèn)所采用的微生物限度檢查方法適用。本驗(yàn)證方案根據(jù)樣品特性制定微生物限度檢查方法和檢驗(yàn)條件，按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。.驗(yàn)證目的和范圍驗(yàn)證該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法的適用性，對其有效性進(jìn)行評價(jià)，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本驗(yàn)證方案采用3批按GMP要求組織生產(chǎn)的復(fù)方氨酚那敏顆粒，進(jìn)行微生物限度檢查方法的驗(yàn)證。3.組織及職責(zé)驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告的起草、審核、批準(zhǔn)驗(yàn)證方案由質(zhì)量部QC組負(fù)責(zé)起草，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)。驗(yàn)證方案實(shí)施完成后，由QC組負(fù)責(zé)匯總微生物限度檢查法驗(yàn)證的結(jié)果、撰寫報(bào)告，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)報(bào)告。驗(yàn)證方案實(shí)施過程中的變更和偏差驗(yàn)證方案實(shí)施過程中如有變更和偏差，質(zhì)量部經(jīng)理應(yīng)當(dāng)組織進(jìn)行評估并采取相應(yīng)的控制措施。3.3驗(yàn)證工作小組成員表姓名部門及職務(wù)職責(zé)質(zhì)量部經(jīng)理負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的批準(zhǔn)質(zhì)量部QC組長負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案審核、實(shí)施、匯總報(bào)告及培訓(xùn)工作質(zhì)量部QC負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案起草、具體實(shí)施、報(bào)告工作.驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表本次微生物限度檢查方法驗(yàn)證的計(jì)劃安排時(shí)間是 年月至年月。.驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備及相關(guān)文件的確認(rèn)5.1.主要檢驗(yàn)儀器設(shè)備確認(rèn)表序號(hào)儀器設(shè)備名稱型號(hào)編號(hào)校準(zhǔn)單位校準(zhǔn)日期有效期至1電熱恒溫培養(yǎng)箱12電熱恒溫培養(yǎng)箱23霉菌培養(yǎng)箱4高壓蒸汽滅菌鍋

5生化培養(yǎng)箱檢查人/日期： 復(fù)核人/日期:5.2.驗(yàn)證所需文件的確認(rèn)表文件名稱是否有效版本文件保存處《中國藥典》2015年版四部□是□否質(zhì)量部檢查人/日期： 復(fù)核人/日期:6.驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)6.1.試驗(yàn)菌種檢查表序號(hào)菌種名稱代碼凍干菌種批號(hào)來源1金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003中國食品藥品檢定研究院2銅綠假單胞菌CMCC（B）10104中國食品藥品檢定研究院3枯草芽抱桿菌CMCC（B）63501中國食品藥品檢定研究院4白色念珠菌CMCC（F）98001中國食品藥品檢定研究院5黑曲霉CMCC（F）98003中國食品藥品檢定研究院6大腸埃希菌CMCC（B）44102中國食品藥品檢定研究院檢查人/日期： 復(fù)核人/日期:6.2試驗(yàn)所需的培養(yǎng)基檢查序號(hào)名稱生產(chǎn)廠家是否通過培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)批號(hào)01胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基北京奧博星生物公司□是□否02胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司□是□否03沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司□是□否04麥康凱液體培養(yǎng)基北京奧博星生物公司□是□否05麥康凱瓊脂培養(yǎng)基北京奧博星生物公司□是□否檢查人/日期： 復(fù)核人/日期:6.3.檢驗(yàn)樣品確認(rèn)表序號(hào)品名生產(chǎn)廠家批號(hào)規(guī)格是否按GMP要求生產(chǎn)1復(fù)方氨酚那敏顆粒*****有限公司復(fù)方口是口否2復(fù)方氨酚那敏顆粒*****有限公司復(fù)方口是口否3復(fù)方氨酚那敏顆粒*****有限公司復(fù)方口是口否檢查人/日期： 復(fù)核人/日期:.驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法試驗(yàn)菌株復(fù)方氨酚那敏顆粒需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證所用的菌株為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉；控制菌檢查方法驗(yàn)證所用的菌株為大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌。試驗(yàn)菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證的菌液制備分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml,采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5?10-7,制成50?100cfu/ml的菌懸液備用。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至100ml沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，20?25℃培養(yǎng)2?3天，取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml,采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5?10-7,制成50?100cfu/ml的菌懸液備用。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，20?25℃培養(yǎng)5?7天，直到獲得豐富的抱子。加入3?5ml含有0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫，吸至無菌試管中，取1ml加含有0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液9ml,采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5?10-7,制成50?100cfu/m的抱子懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2?8℃,可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉抱子懸液可保存在2?8c,在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。驗(yàn)證時(shí)，對各試驗(yàn)菌的回收率逐一進(jìn)行驗(yàn)證。.需氧菌總數(shù)檢查、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查方法驗(yàn)證--常規(guī)傾注平皿法供試液的制備取供試品10.0g，加PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，振搖，制成1：10的供試液。試驗(yàn)組取1：10的供試液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50?100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置30?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌），或培養(yǎng)5天（白色念珠菌、黑曲霉），點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取1：10的供試液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50?100cfu的白色念珠菌、黑曲霉，分別注入平皿中，立即傾注不超過45℃的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置20?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。供試品對照組取1：10的供試液1ml注入平皿中，立即傾注不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，平行制備2個(gè)平皿。置30?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取1：10的供試液1ml注入平皿中，立即傾注不超過45℃的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基20ml混勻，平行制備2個(gè)平皿。置20?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。菌液對照組取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50?100cfu的試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置30?35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌），或培養(yǎng)5天（白色念珠菌、黑曲霉），點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。另取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液1ml和7.2項(xiàng)下制備的50?100cfu的白色念珠菌、黑曲霉，分別注入平皿中，立即傾注不超過45℃的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基20ml混勻，每株試驗(yàn)菌株平行制備2個(gè)平皿。置20?25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。常規(guī)傾注平皿法方法驗(yàn)證的接受標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值（即試驗(yàn)菌的回收率）應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。常規(guī)傾注平皿法方法驗(yàn)證的結(jié)果常規(guī)傾注平皿法測定需氧菌總數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):;胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào);培養(yǎng)溫度：;培養(yǎng)時(shí)長：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值

金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):;胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào)；培養(yǎng)溫度：；培養(yǎng)時(shí)長：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)3：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):；胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào)；培養(yǎng)溫度：；培養(yǎng)時(shí)長：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期:常規(guī)傾注平皿法測定霉菌與酵母菌總數(shù)方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1：

復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):;沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào)；培養(yǎng)溫度：；培養(yǎng)時(shí)長：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)2：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào)；培養(yǎng)溫度：；培養(yǎng)時(shí)長：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期：試驗(yàn)次數(shù)3：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配制批號(hào)：培養(yǎng)箱型號(hào)編號(hào)；培養(yǎng)溫度：；培養(yǎng)時(shí)長：5天試驗(yàn)菌株菌種代數(shù)試驗(yàn)組供試品對照組菌液對照組試驗(yàn)菌的回收率12均值12均值12均值白色念珠菌黑曲霉試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期:常規(guī)傾注平皿法測定需氧菌總數(shù)、霉菌與酵母菌總數(shù)方法驗(yàn)證小結(jié).控制菌檢查方法驗(yàn)證一常規(guī)傾注平皿法試驗(yàn)菌株復(fù)方氨酚那敏顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的控制菌為大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌，所以選擇這兩種菌株進(jìn)行控制菌檢查的方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性?？刂凭鷻z查方法驗(yàn)證的菌液制備分別接種大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9%無菌氯化鈉溶液9ml,采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5?10-7,制成50?100cfu/ml的菌懸液備用。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在2?8℃,可在24小時(shí)內(nèi)使用。驗(yàn)證時(shí)，對各試驗(yàn)菌的回收率逐一進(jìn)行驗(yàn)證。大腸埃希菌檢查方法驗(yàn)證供試液的制備取供試品10.0g,加PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml,振搖，制成1：10的供試液。.試驗(yàn)組取供試液101^,加入7.4.2項(xiàng)下制備的50?100cfu的大腸埃希菌接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中,42?44℃培養(yǎng)24?48小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30?35℃培養(yǎng)18?72小時(shí)。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有大腸埃希菌典型菌落生長。陽性對照組照7.4.2項(xiàng)下菌液制備方法，以0.9%無菌氯化鈉為稀釋液，將大腸埃希菌液稀釋至含菌50?100cfu/ml,取菌液1ml,接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)。取上述增菌培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中,42?44℃培養(yǎng)24?48小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，30?35℃培養(yǎng)18?72小時(shí)。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上應(yīng)有大腸埃希菌典型菌落生長。陰性對照組取PH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml,接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，30?35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)。陰性對照應(yīng)無菌生長。常規(guī)傾注平皿法測定大腸埃希菌方法驗(yàn)證結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)1：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):大腸埃希菌對照菌來源批號(hào)（菌種編號(hào)）過程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷母親苴培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃型號(hào) 編號(hào)—溫度 ℃型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃培養(yǎng)時(shí)間開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)試驗(yàn)組陽性對照組

陰性對照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期:試驗(yàn)次數(shù)2：復(fù)方氨酚那敏顆粒批號(hào):大腸埃希菌對照菌來源批號(hào)（菌種編號(hào)）過程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷母親苴培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃型號(hào) 編號(hào)—溫度 ℃型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃培養(yǎng)時(shí)間開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始—月一日一時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)試驗(yàn)組陽性對照組陰性對照組試驗(yàn)人/日期： 復(fù)核人/日期:試驗(yàn)人/日期：7.4.3.6大腸埃希菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果小結(jié)試驗(yàn)人/日期：7.4.3.6大腸埃希菌檢查方法驗(yàn)證結(jié)果小結(jié)過程增菌培養(yǎng)選擇培養(yǎng)分離培養(yǎng)結(jié)果判斷母親苴培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱液體培養(yǎng)基配制批號(hào) 麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板配制批號(hào) 培養(yǎng)箱型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃型號(hào) 編號(hào)—溫度 ℃型號(hào) 編號(hào) 溫度 ℃培養(yǎng)時(shí)間開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—時(shí)開始一月一日—時(shí)結(jié)束一月一日—