培養(yǎng)基灌裝課件

無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)諾華疫苗王董明內(nèi)容培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求培養(yǎng)基灌裝實(shí)施要點(diǎn)結(jié)果解釋和偏差調(diào)查無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)定義無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)Process

Simulation

Testing（PST）培養(yǎng)基灌裝Media

Fill采用培養(yǎng)基代替藥品進(jìn)行無(wú)菌灌裝對(duì)無(wú)菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。此模擬工藝稱(chēng)之為“培養(yǎng)基灌裝”培養(yǎng)基灌裝測(cè)試的頻率初始驗(yàn)證：每班次連續(xù)做3批驗(yàn)證隨后每半年針對(duì)不同班次/工藝進(jìn)行一次再驗(yàn)證所有日常操作人員每年都必須參加一次培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)當(dāng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)偏差調(diào)查的手段培養(yǎng)基灌裝測(cè)試的頻率影響無(wú)菌灌裝過(guò)程中無(wú)菌保證水平的重大變更需要進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝判斷：灌裝層流改造膠塞進(jìn)料裝置變更終端無(wú)菌過(guò)濾器改變位置滅菌程序變更培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)當(dāng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)當(dāng)至少等于產(chǎn)品的批量批次量<5000瓶，全批量批次量>5000瓶，通常5000~10000瓶手工灌裝VS隔離器無(wú)菌生產(chǎn)工藝跨班次生產(chǎn)，大批量生產(chǎn)灌裝數(shù)量例1：某凍干產(chǎn)品，凍干機(jī)容量為30,000瓶，分布在九個(gè)層板上，請(qǐng)問(wèn)：較合理的一次培養(yǎng)基灌裝數(shù)量為多少？如是初始驗(yàn)證，如何考慮不同層板的分布？例2：某凍干產(chǎn)品為人工灌裝，共有三個(gè)操作人員具有無(wú)菌灌裝資格，批量為3000瓶，請(qǐng)問(wèn)：此種情況較為合理的一次培養(yǎng)基灌裝數(shù)量為多少？灌裝速度、瓶子尺寸、灌裝量原則速度慢，產(chǎn)品暴露時(shí)間長(zhǎng)；速度快，有時(shí)造成較多的干擾瓶子大（包括敞口大?。嘌b速度慢盡量按產(chǎn)品實(shí)際灌裝體積，如不可行，體積應(yīng)能充分接觸所有表面、并足夠支持微生物生長(zhǎng)舉例：多規(guī)格的瓶子共線生產(chǎn)：最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格;最小的瓶子規(guī)格，最快的速度單一規(guī)格的瓶子–正?；蚵月俣?2最長(zhǎng)允許的灌裝時(shí)間（如考察操作人員疲勞操作風(fēng)險(xiǎn)）有代表性的正常性操作活動(dòng)的數(shù)量、種類(lèi)和復(fù)雜性，非常規(guī)的干擾和各類(lèi)突發(fā)事件（如維修、灌裝中斷等）凍干過(guò)程生產(chǎn)線速度和模具的規(guī)格（換模具）最差條件挑戰(zhàn)14應(yīng)當(dāng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基TSB或FTM（澄清）某些情況下應(yīng)該考慮使用厭氧性培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行促菌生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株環(huán)境分離菌支持革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性、酵母菌和霉菌的生長(zhǎng)培養(yǎng)基選擇15在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃下7天(培養(yǎng)細(xì)菌)確保其內(nèi)壁和瓶塞充分接觸培養(yǎng)基無(wú)密封缺陷的瓶均應(yīng)該培養(yǎng)，任何不作培養(yǎng)的瓶子都應(yīng)說(shuō)明不作培養(yǎng)的原因如果有書(shū)面規(guī)程規(guī)定，灌裝過(guò)程由于進(jìn)行干擾操作而丟棄的培養(yǎng)基可以不培養(yǎng)灌裝過(guò)程丟棄程序必須與實(shí)際生產(chǎn)一致培養(yǎng)及讀數(shù)16培養(yǎng)后進(jìn)行促生長(zhǎng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)密封性微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)應(yīng)由有資質(zhì)的人員進(jìn)行檢查（QC參與）要進(jìn)行物料平衡計(jì)算培養(yǎng)及讀數(shù)過(guò)程的丟棄應(yīng)有很明確的理由（應(yīng)盡量避免）培養(yǎng)及讀數(shù)2.培養(yǎng)基灌裝實(shí)施要點(diǎn)培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設(shè)備的驗(yàn)證狀態(tài)確認(rèn)經(jīng)過(guò)重大維修或變更后進(jìn)行了生產(chǎn)線的運(yùn)行確認(rèn)或性能確認(rèn)參與培養(yǎng)基灌裝的人員接受了培訓(xùn)無(wú)菌操作潔凈室行為培養(yǎng)基灌裝方案明文規(guī)定的工藝過(guò)程及最差條件灌裝過(guò)程流程圖灌裝部件裝配管道排液正式灌裝灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員進(jìn)出班次輪換設(shè)置灌裝參數(shù)停機(jī)維修環(huán)境監(jiān)測(cè)收集轉(zhuǎn)移凍干壓塞暫存壓蓋人員操作人員操作時(shí)間時(shí)間風(fēng)險(xiǎn)因素灌裝速度灌裝時(shí)間長(zhǎng)短干擾操作及次數(shù)人員數(shù)量停機(jī)操作……轉(zhuǎn)移操作時(shí)間暫存位置時(shí)間干擾操作種類(lèi)：任何進(jìn)入百級(jí)層流的操作都為干擾操作，應(yīng)包括所有類(lèi)型的干擾操作，常規(guī)的（灌裝線裝配，稱(chēng)量調(diào)節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測(cè)）非常規(guī)的（設(shè)備故障，灌裝線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）數(shù)量：干擾的次數(shù)應(yīng)該不少于正常生產(chǎn)時(shí)發(fā)生的次數(shù)環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃，綜合形成書(shū)面方案如何制定環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃其他一些因素的考慮方案的批準(zhǔn)制定培養(yǎng)基灌裝過(guò)程的微生物負(fù)荷的監(jiān)控計(jì)劃,便于偏差調(diào)查環(huán)境監(jiān)控方案應(yīng)用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法確定關(guān)鍵監(jiān)控點(diǎn)給產(chǎn)品構(gòu)成最大風(fēng)險(xiǎn)的位置，如產(chǎn)品暴露位置、直接接觸表面人員按實(shí)際需要選擇合適的監(jiān)測(cè)方法空氣浮游菌沉降菌接觸碟/棉簽法合理制定控制標(biāo)準(zhǔn)體現(xiàn)全面監(jiān)控、動(dòng)態(tài)監(jiān)控干熱隧道膠塞漏斗灌裝站例如：在左、中、右各設(shè)置一個(gè)連續(xù)粒子監(jiān)測(cè)點(diǎn)在灌裝站左右設(shè)置兩個(gè)浮游菌取樣點(diǎn)在左、中、右各設(shè)置一個(gè)沉降菌取樣點(diǎn)在軌道、灌裝針頭、膠塞盤(pán)各處設(shè)置多個(gè)表面取樣點(diǎn)可以參考ISO1464427文件記錄：過(guò)程控制檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果環(huán)境和人員監(jiān)測(cè)結(jié)果設(shè)備功能（批報(bào)警記錄，過(guò)濾器完整性測(cè)試）人員干擾操作、偏差、中斷等--發(fā)生時(shí)間和持續(xù)時(shí)間培養(yǎng)基報(bào)廢記錄生產(chǎn)線清場(chǎng)記錄培養(yǎng)基灌裝過(guò)程記錄28QA觀察：整個(gè)培養(yǎng)基灌裝過(guò)程應(yīng)該有QA部門(mén)的全程觀察所有培養(yǎng)基應(yīng)按時(shí)間順序進(jìn)行標(biāo)記，便于一旦有污染時(shí)追逐發(fā)生時(shí)間段灌裝過(guò)程任何的干擾行為，QA觀察員需要進(jìn)行詳細(xì)記錄，以便識(shí)別可能的污染來(lái)源培養(yǎng)基灌裝過(guò)程記錄30無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)域管道系統(tǒng)凍干機(jī)過(guò)程中的培養(yǎng)基泄漏培養(yǎng)基的撤出和報(bào)廢培養(yǎng)基灌裝過(guò)程/灌裝前不得故意設(shè)計(jì)不具代表性的大清場(chǎng)，消毒應(yīng)當(dāng)采取措施保證驗(yàn)證不能對(duì)生產(chǎn)造成不良影響培養(yǎng)基灌裝結(jié)束后的清場(chǎng)和清洗風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)解釋控制方法配制溶液的注射用水溫度高于7０℃高溫會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)將配制培養(yǎng)基的注射用水冷卻到室溫，在室溫下（20-25℃）配制正常生產(chǎn)溶液ｐＨ值偏高或偏低酸性或堿性環(huán)境不利于微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基的pH調(diào)整到適合微生物生長(zhǎng)的范圍配制好的溶液在低溫下保存低溫會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基在儲(chǔ)存容器中常溫保存抑菌影響分析---物料準(zhǔn)備，儲(chǔ)存過(guò)程抑菌因素影響分析風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)解釋控制方法生產(chǎn)過(guò)程中使用惰性氣體（如氮?dú)猓┍Ｗo(hù)產(chǎn)品大多數(shù)需氧微生物，惰性氣體有一定的抑菌作用用壓縮空氣或空氣來(lái)代替惰性氣體培養(yǎng)基灌裝量偏少西林瓶?jī)?nèi)壁不能被完全接觸，微生物不能生長(zhǎng)

10ml西林瓶灌裝至少2-4ml培養(yǎng)基，以保證足夠量培養(yǎng)基用于培養(yǎng)抑菌影響分析---灌裝抑菌因素影響分析風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)解釋控制方法對(duì)設(shè)備的清洗、消毒和滅菌消毒劑會(huì)殺滅或微生物避免設(shè)備上的消毒劑殘留正常生產(chǎn)時(shí)消毒劑（如噴灑消毒酒精，對(duì)操作人員手部消毒）的使用，消毒劑會(huì)殺滅微生物對(duì)于模擬試驗(yàn)過(guò)程中消毒劑（如噴灑消毒酒精）的使用，應(yīng)該注意不能超出正常生產(chǎn)時(shí)的使用頻率，不能將消毒劑直接接觸到培養(yǎng)基上。班次輪換，清場(chǎng)消毒消毒劑會(huì)殺滅微生物對(duì)于兩班次灌裝輪換期間不進(jìn)行消毒清場(chǎng)抑菌影響分析---中間過(guò)程抑菌因素影響分析風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)解釋控制方法抽真空過(guò)低真空度有抑菌作用。過(guò)低真空度還會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基失水。灌裝好的西林瓶放入凍干機(jī)，放置數(shù)小時(shí)以上模擬凍干過(guò)程。使用輕微真空（500mbar以上），模擬氣流流動(dòng)低溫冷凍低溫會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)不進(jìn)行冷凍操作，保持常溫抑菌影響分析---凍干抑菌因素影響分析培養(yǎng)基灌裝方案設(shè)計(jì)總結(jié)設(shè)計(jì)的方案需要具有代表性建立書(shū)面的規(guī)程，SOP指定如何進(jìn)行方案設(shè)計(jì)必要時(shí)設(shè)計(jì)多次培養(yǎng)基灌裝可以考慮穿插在生產(chǎn)過(guò)程中進(jìn)行，挑戰(zhàn)整個(gè)生產(chǎn)時(shí)限3.結(jié)果解釋和偏差調(diào)查培養(yǎng)基灌裝的接受標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)的目標(biāo)是不出現(xiàn)長(zhǎng)菌，且遵循以下原則：灌裝少于5000支時(shí)，不應(yīng)檢出污染品；2.灌裝在5000至10000時(shí)：(1)有1支污染需進(jìn)行調(diào)查，并考慮重復(fù)培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)(2)2支污染需進(jìn)行調(diào)查，并可即視作再驗(yàn)證的理由3.灌裝超過(guò)10000支時(shí)：(1)1支污染需進(jìn)行調(diào)查(2)2支污染需進(jìn)行調(diào)查，并可即視作再驗(yàn)證的理由4.發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性調(diào)查當(dāng)培養(yǎng)基灌裝出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，不管是否符合合格標(biāo)準(zhǔn)，都必須進(jìn)行調(diào)查制定的CAPA需要針對(duì)污染的原因或不良無(wú)菌操作行為分離到的微生物應(yīng)鑒別到種。調(diào)查過(guò)程中應(yīng)詳細(xì)分析可能的產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果的原因。科學(xué)評(píng)估工藝的可靠性以及上市產(chǎn)品可能存在的風(fēng)險(xiǎn)對(duì)于超出標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)在調(diào)查清楚原因后再次進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝。培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性調(diào)查如果未達(dá)到接受標(biāo)準(zhǔn):

在明確糾偏行動(dòng)前，需考慮暫停生產(chǎn)。在工藝重新確認(rèn)前的產(chǎn)品不得放行。在本次培養(yǎng)基灌裝之后生產(chǎn)的到下一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品都需要被進(jìn)行回顧，評(píng)估其無(wú)菌失敗的風(fēng)險(xiǎn)。（培養(yǎng)基灌裝結(jié)果出來(lái)之前就進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)生產(chǎn)）在該次培養(yǎng)基灌裝和上一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品也需要被進(jìn)行回顧，評(píng)估其無(wú)菌失敗的風(fēng)險(xiǎn)。必要時(shí)，需制定糾偏和預(yù)防性措施，并進(jìn)行工藝的重新確認(rèn)。污染調(diào)查舉例

發(fā)現(xiàn)污染瓶的調(diào)查應(yīng)該從人、機(jī)、料、法、環(huán)各個(gè)方面進(jìn)行調(diào)查。（1）生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)（粒子、浮游菌、沉降碟等）（2）對(duì)人員的監(jiān)測(cè)結(jié)果（3）高效過(guò)濾器的完整性檢測(cè)數(shù)據(jù)（4）層流臺(tái)性能數(shù)據(jù)（氣流流速、壓差記錄等）（5）生產(chǎn)房間監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)（空氣流向、工作臺(tái)面氣流方向速度）（6）人員培訓(xùn)情況，操作資質(zhì)和能力（7）干擾模擬的執(zhí)行情況（8）無(wú)菌室生產(chǎn)用具和其他相關(guān)物品的滅菌儲(chǔ)存情況污染調(diào)查舉例

（9）微生物鑒定結(jié)果，以幫助確定來(lái)源（10）清潔消毒流程的執(zhí)行情況（11）設(shè)備儀器的校驗(yàn)結(jié)果（12）生產(chǎn)前后產(chǎn)品過(guò)濾器的完整性測(cè)試數(shù)據(jù)（13）生產(chǎn)過(guò)程發(fā)生的偏差（14）設(shè)備的CIP/SIP的情況（15）培養(yǎng)基的培養(yǎng)能力研究（16）生產(chǎn)線和培養(yǎng)基灌裝的歷史數(shù)據(jù)分析污染調(diào)查舉例根據(jù)調(diào)查分析確定可能引起污染的原因，針對(duì)性制定有效措施。所有調(diào)查行動(dòng)、改進(jìn)措施和結(jié)果都應(yīng)當(dāng)形成正式文件記錄。培養(yǎng)基灌裝失效培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)結(jié)果被認(rèn)作無(wú)效的情況不應(yīng)該頻繁發(fā)生，更不能直接將失敗的培養(yǎng)基灌裝結(jié)果視為無(wú)效在符合明確的書(shū)面規(guī)程要求的情況下才能做出試驗(yàn)無(wú)效的判定，此時(shí)，應(yīng)給出支持文件并充分說(shuō)明理由，并且在實(shí)際生產(chǎn)中遇到類(lèi)似情況時(shí)也應(yīng)同樣處理。失效=無(wú)測(cè)試