抗生素類藥物分析課件

在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類氨基糖苷類四環(huán)素類大環(huán)內酯類多烯大環(huán)類多肽類1.抗生素（antibiotics）2.分類一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差3.來源4.抗生素的特點化學合成半合成生物合成（發(fā)酵）生產工藝復雜發(fā)酵過程不易控制，易受污染原因一、概述化學純度較低3.來源4.抗生素的特鑒別：物理化學方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內毒素、降壓物質等含量/效價測定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時；

理化方法：

準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質量分析一、概述5.抗生素質量分析一、概述1.

化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6酸性較強（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個手性碳旋光性青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構UV（共軛）干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定穩(wěn)定性(內酰胺)2、主要理化性質降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素二、β–內酰胺類酸性較強（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個手性碳旋1）羥肟酸鐵反應：

β–內酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應

α-氨基藍紫色3）雙縮脲反應

β–內酰胺類紫紅色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應3、鑒別二、β–內酰胺類1）羥肟酸鐵反應：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸二、β–內酰胺類4、檢查聚合物有關物質和異構體吸光度殘留溶劑結晶性二、β–內酰胺類4、檢查聚合物5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定二、β–內酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）反應分兩步進行：水解反應(按化學計算量進行)氧化-還原反應(無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定)5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）反5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿。空白試驗:空白試驗與經典空白試驗不同：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）因5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應條件、實驗操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應時間、滴定速度相同特點：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）含5、含量測定

-----------電位配位滴定法（汞量法）原理：青霉素不與汞鹽反應，其堿性降解產物可與Hg2+絡和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗5、含量測定-----------電位配位滴定法（汞量法）原5、含量測定

-----------其他常用方法酸堿滴定法：應用廣泛硫醇汞鹽法HPLC法：應用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽5、含量測定-----------其他常用方法酸堿滴定法：應1.

化學結構三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結構中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素1.化學結構三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖臨床應用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強酸、堿條件均可水解穩(wěn)定性(苷)2、主要理化性質三、氨基糖苷類臨床應用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個手性碳旋光性(糖)3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應：具羥基胺類，α-氨基酸性質鏈霉素+

水和茚三酮藍紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應：紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應：具羥基胺類，α-氨基酸OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍

橙紅硫酸鹽反應或α-萘酚OH-Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-坂口（Sak4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產生BP:薄層色譜法（雜質對照品法）要求：NC2≥2000，C2a峰和C2峰的分離度應符合要求，重復進樣RSD<2.0%三、氨基糖苷類鏈霉素中鏈霉素B的檢查慶大霉素C組分測定（系統(tǒng)適用性試驗）色譜柱：ODS流動相：

H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時調節(jié)甲醇的含量。檢測波長：

330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產生B4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法、HPLC法等4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法四、四環(huán)素類1.

化學結構四、四環(huán)素類1.化學結構四、四環(huán)素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽臨床多用鹽酸鹽兩性旋光性易發(fā)生異構化，降解等反應，性質不穩(wěn)定穩(wěn)定性酚羥基、烯醇基與Ca2+、Mg2+絡合顯色與金屬離子絡合2、主要理化性質UV和熒光四、四環(huán)素類-OH：酸性兩性旋光性易發(fā)生異構化，降解等反應四、四環(huán)素類

2.

主要理化性質堿性C環(huán)開環(huán)，形成內酯異四環(huán)素弱酸性（pH2-6）A環(huán)C-4異構化差向四環(huán)素酸性（pH<2）C環(huán)脫水脫水四環(huán)素四、四環(huán)素類2.主要理化性質堿性四、四環(huán)素類AApH2.0~6.0差向異構體DDDCBBCBC脫水四環(huán)素類四、四環(huán)素類AApH2.0~6.0差向異構體DDDCBBCB異四環(huán)素OH-四、四環(huán)素類異四環(huán)素OH-四、四環(huán)素類四、四環(huán)素類

3.

鑒別1）濃硫酸反應2）FeCl3反應：（酚羥基）顯紅色~褐色3）TLC、HPLC4）熒光：（含共軛雙鍵）紫外燈照射下產生不同顏色熒光HPLC法

4.

檢查TLC、HPLC法雜質吸收度（降解產物顏色較深）殘留溶劑

5.

含量四、四環(huán)素類3.鑒別1）濃硫酸反應HPLC法五、高分子雜質的檢查內源性：藥物自身聚合物來源于生產過程、貯存過程、使用不當外源性：蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結合物來源于發(fā)酵過程臨床應用其硫酸鹽高分子雜質凝膠色譜法：葡聚糖凝膠SephadexG-10雜質控制方法五、高分子雜質的檢查內源性：藥物自身聚合物高分子雜質凝膠感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內容來源于網絡，如有侵權請及時聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內容來源于網絡，在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學物質的總稱β–內酰胺類氨基糖苷類四環(huán)素類大環(huán)內酯類多烯大環(huán)類多肽類1.抗生素（antibiotics）2.分類一、概述在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活

化學純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差3.來源4.抗生素的特點化學合成半合成生物合成（發(fā)酵）生產工藝復雜發(fā)酵過程不易控制，易受污染原因一、概述化學純度較低3.來源4.抗生素的特鑒別：物理化學方法、微生物法檢查：水分、異常毒性、熱原、細菌內毒素、降壓物質等含量/效價測定：

微生物法：與臨床療效吻合，靈敏度高，但操作復雜費時；

理化方法：

準確度與專屬性較高，且操作簡便，但與臨床療效有偏差5.抗生素質量分析一、概述5.抗生素質量分析一、概述1.

化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6-APA為母核頭孢菌素類：7-ACA為母核中國藥科大學藥學院藥分教研室二、β–內酰胺類1.化學結構包括青霉素類和頭孢菌素類青霉素類：6酸性較強（pKa2.5-2.8）臨床常用其堿金屬鹽（水溶性好）酸性(羧基)有多個手性碳旋光性青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有共軛結構UV（共軛）干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定穩(wěn)定性(內酰胺)2、主要理化性質降解失效氧化劑、酸、堿酶、金屬離子、Δ青霉素二、β–內酰胺類酸性較強（pKa2.5-2.8）酸性(羧基)有多個手性碳旋1）羥肟酸鐵反應：

β–內酰胺類羥肟酸顯色2）茚三酮反應

α-氨基藍紫色3）雙縮脲反應

β–內酰胺類紫紅色4）光譜法（UV、NMR）5）色譜法（HPLC、TLC）NH2OH·HClNaOHFe3+H+茚三酮Δ

堿性酒石酸銅呈色反應3、鑒別二、β–內酰胺類1）羥肟酸鐵反應：NH2OH·HClFe3+茚三酮堿性酒石酸二、β–內酰胺類4、檢查聚合物有關物質和異構體吸光度殘留溶劑結晶性二、β–內酰胺類4、檢查聚合物5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）二、β–內酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本身不與碘反應，但其堿性降解產物可消耗碘青霉素族頭孢菌素族NaOH水解4I2H+8I-I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6定量過量剩余5、含量測定二、β–內酰胺類原理：青霉素與頭孢菌素本5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）反應分兩步進行：水解反應(按化學計算量進行)氧化-還原反應(無定量關系，受溫度、pH值和時間等因素影響，應嚴格控制反應條件并采用標準品平行對照測定)5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）反5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）因樣品中雜質會消耗碘，故應作空白試驗。加入樣品，不加堿；其余試劑（醋酸鹽緩沖液，碘液，硫代硫酸鈉）都要加堿?？瞻自囼?空白試驗與經典空白試驗不同：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）因5、含量測定

-----------碘量法（ChP2000）含量％＝×

×對照品％V樣空-V樣W對V對空-

V對W樣靈敏度高：樣品:碘=1:8反應條件、實驗操作要求高1份含量V對、V對空V樣、V樣空加試劑次序、反應時間、滴定速度相同特點：5、含量測定-----------碘量法（ChP2000）含5、含量測定

-----------電位配位滴定法（汞量法）原理：青霉素不與汞鹽反應，其堿性降解產物可與Hg2+絡和。Hg++2R-SH(RS)2Hg+2H+方法說明：

a、空白試驗與碘量法類似，加樣品，不加NaOHb、與碘量法相比，汞量法不需對照試驗5、含量測定-----------電位配位滴定法（汞量法）原5、含量測定

-----------其他常用方法酸堿滴定法：應用廣泛硫醇汞鹽法HPLC法：應用廣泛咪唑HgCl2（λmax324～345nm）青霉素青霉烯酸硫醇汞鹽5、含量測定-----------其他常用方法酸堿滴定法：應1.

化學結構三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖縮合而成的苷；分子結構中都含有多羥基；均為堿性抗生素；鏈霉素1.化學結構三、氨基糖苷類都是以氨基環(huán)醇與氨基糖臨床應用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個手性碳旋光性(糖)水溶性溶解度(氨基、羥基)強酸、堿條件均可水解穩(wěn)定性(苷)2、主要理化性質三、氨基糖苷類臨床應用其硫酸鹽堿性(氨基)（糖）：有多個手性碳旋光性(糖)3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應：具羥基胺類，α-氨基酸性質鏈霉素+

水和茚三酮藍紫色鏈霉素N-甲基葡萄糖胺N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反應：紅色水解對二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮OH-3、鑒別三、氨基糖苷類茚三酮反應：具羥基胺類，α-氨基酸OH-重排Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-水解坂口（Sakaguchi）反應：(鏈霉胍特有）麥芽酚（Maltol)反應：(鏈霉糖特有）三、氨基糖苷類-------鑒別鏈霉素麥芽酚紫紅色鏈霉素鏈霉胍

橙紅硫酸鹽反應或α-萘酚OH-Fe3+8-羥基喹啉NaOBrOH-坂口（Sak4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產生BP:薄層色譜法（雜質對照品法）要求：NC2≥2000，C2a峰和C2峰的分離度應符合要求，重復進樣RSD<2.0%三、氨基糖苷類鏈霉素中鏈霉素B的檢查慶大霉素C組分測定（系統(tǒng)適用性試驗）色譜柱：ODS流動相：

H2O-HAc-MeOH配制的庚烷磺酸鈉溶液(0.2M)，必要時調節(jié)甲醇的含量。檢測波長：

330nm（鄰苯二甲醛柱前衍生）4、檢查-------------來源：發(fā)酵中產生B4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法、HPLC法等4、含量檢測三、氨基糖苷類氨基糖苷類含量檢測微生物法四、四環(huán)素類1.

化學結構四、四環(huán)素類1.化學結構四、四環(huán)素類-OH：酸性N(CH3)2：堿性與酸、堿均可成鹽