實驗室存在問題及解決措施課件

1PCR實驗室存在問題及解決措施

上海市臨床檢驗中心肖艷群1PCR實驗室存在問題及解決措施

2回顧1990年：PCR技術(shù)在國內(nèi)開始用于臨床檢測90年代中期：假陽性？（假陰性？）《關(guān)于暫停臨床基因擴增檢驗的通知》（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[1998]第9號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》的通知（衛(wèi)醫(yī)政〔2009〕18號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)[2010]194號）2回顧1990年：PCR技術(shù)在國內(nèi)開始用于臨床檢測3醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法

（分類分級管理、審核）第一類：安全性、有效性確切，醫(yī)療機構(gòu)通過常規(guī)管理在臨床應用中能確保其安全性、有效性的技術(shù)—醫(yī)療機構(gòu)自行組織實施第二類：安全性、有效性確切，涉及一定倫理問題或者風險較高，衛(wèi)生行政部門應當加以控制管理的醫(yī)療技術(shù)—省級衛(wèi)生行政部門指定或者組建的技術(shù)機構(gòu)負責技術(shù)審核第三類：具有下列情形之一，需要衛(wèi)生行政部門加以嚴格控制管理的醫(yī)療技術(shù)—衛(wèi)生部或衛(wèi)生部委托省級衛(wèi)生行政組織負責對指定的第三類醫(yī)療技術(shù)進行審核

（一）涉及重大倫理問題

（二）高風險

（三）安全性、有效性尚需經(jīng)規(guī)范的臨床試驗研究進一步驗證

（四）需要使用稀缺資源

（五）衛(wèi)生部規(guī)定的其他需要特殊管理的醫(yī)療技術(shù)

3醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法

4

上海市第二類醫(yī)療技術(shù)目錄首批（18項）（2009.8.24）第二批（6項）（2012.1.4）冠心病介入診療技術(shù)體外沖擊波碎石/經(jīng)輸尿管鏡碎石取石術(shù)先天性心臟病介入診療技術(shù)人工椎間盤置換術(shù)心臟導管消融技術(shù)經(jīng)尿道前列腺汽化消融術(shù)起搏器介入診療技術(shù)內(nèi)科胸腔鏡診療技術(shù)心室輔助裝置植入技術(shù)急性腦梗死溶栓術(shù)擴大全胰腺切除術(shù)直腸癌根治術(shù)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影診療技術(shù)髖、膝關(guān)節(jié)置換技術(shù)角膜移植技術(shù)白內(nèi)障超聲乳化技術(shù)準分子激光角膜屈光手術(shù)口腔種植診療技術(shù)輸尿管鏡技術(shù)面部輪廓整形技術(shù)血液透析技術(shù)臨床基因擴增檢驗技術(shù)醫(yī)用高壓氧治療技術(shù)本市首次開展（未納入衛(wèi)生部規(guī)定的第三類醫(yī)療技術(shù)目錄）的醫(yī)療技術(shù)4上海市第二類醫(yī)療技術(shù)目錄首批（18項）（2005衛(wèi)生部公布第三類醫(yī)療技術(shù)目錄同種器官移植、變性手術(shù)、心室輔助裝置應用技術(shù)、基因芯片診斷技術(shù)（2011年5.3日由三類調(diào)整為二類）等共19項5衛(wèi)生部公布第三類醫(yī)療技術(shù)目錄同種器官移植、變性手術(shù)6滬臨檢辦〔2011〕29號關(guān)于印發(fā)《上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗技術(shù)審核辦法》和《上海市醫(yī)療機構(gòu)基因芯片診斷技術(shù)審核辦法》的通知附件1：《臨床基因擴增檢驗及分子診斷相關(guān)技術(shù)審核專家?guī)烀麊巍犯郊?：《上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗技術(shù)審核辦法》附件3：《上海市醫(yī)療機構(gòu)基因芯片技術(shù)診斷審核辦法》附件4:《上海市醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請書》附件5：《上海市臨床基因擴增檢驗及分子診斷相關(guān)技術(shù)審核流程》（首頁醫(yī)療技術(shù)準入專欄中下載）6滬臨檢辦〔2011〕29號7基本要求（1）醫(yī)療機構(gòu)基本要求（2）人員基本要求（3）臨床應用基本規(guī)范和管理要求（4）實驗室設置基本要求（5）人員管理（6）設備管理（7）標本管理（8）質(zhì)量管理（9）檢測要求等7基本要求（1）醫(yī)療機構(gòu)基本要求8醫(yī)療機構(gòu)要求二級及以上醫(yī)院獨立實驗室（公司）實驗室應集中設置、統(tǒng)一管理實驗室必須通過上海市臨床檢驗中心技術(shù)審核合格并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所備案后方可開展檢測項目，以后每3年必須進行復審實驗室通過審核后應根據(jù)其核定的技術(shù)審核項目開展檢測工作。如需要增加檢測項目，應向上海市臨床檢驗中心提出擴項申請，并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所準入后方可開展檢測項目

實驗室開展分子診斷新技術(shù)，應向上海市臨床檢驗中心提出新技術(shù)申請，并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所準入后方可開展新技術(shù)的檢測項目

8醫(yī)療機構(gòu)要求二級及以上醫(yī)院9臨床應用基本規(guī)范和管理要求

以科研為目的的臨床基因擴增檢驗項目，不得向臨床出具檢驗報告，不得向病人收取任何費用9臨床應用基本規(guī)范和管理要求以科研為目的的臨床基因擴增檢10檢測要求項目：新開展檢測項目應有相應臨床科室出具的評估報告儀器：必須三證齊全試劑：必須SFDA批準新開展項目在技術(shù)審核前應進行方法學驗證儀器、試劑、方法更新時應進行方法學驗證

10檢測要求項目：新開展檢測項目應有相應臨床科室出具的評11

分包有外送檢驗項目的實驗室應與委托實驗室簽訂相關(guān)協(xié)議，有委托實驗室資質(zhì)和質(zhì)量保證的證明文件實驗室有外送檢驗項目的要求和規(guī)定，并做好外送樣品的登記和記錄，有委托實驗室標本運送和交接過程的監(jiān)控和記錄定期評審委托實驗室檢測質(zhì)量，并有相關(guān)記錄分包后自行開展，需確認具備開展相關(guān)檢測的能力11分包有外送檢驗項目的實驗室應與委托實驗室簽訂相關(guān)協(xié)12

審核前準備工作實驗室按要求設置、裝修儀器、人員到位完成質(zhì)量手冊、程序文件、操作規(guī)程編寫完成方法學驗證參加至少一次室間質(zhì)評，成績合格檢驗前、中、后流程暢通12審核前準備工作實驗室按要求設置、裝修13

申請技術(shù)審核需遞交的材料《上海市臨床技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請書》醫(yī)療機構(gòu)基本情況申請單位相關(guān)學科基本情況項目負責人基本情況學科人員基本情況項目所在地實驗室的專用設備、設施及工作基礎(chǔ)擬開展檢驗項目開展該技術(shù)的目的、意義和實施方案該項醫(yī)療技術(shù)的基本概況技術(shù)路線國內(nèi)外應用情況與同種疾病的其他檢測技術(shù)的特點及費用比較質(zhì)量控制措施13

申請技術(shù)審核需遞交的材料《上海市臨床技術(shù)臨床應14

技術(shù)審核需遞交的材料醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證副本復印件技術(shù)人員相關(guān)資格證書復印件與該技術(shù)有關(guān)的實驗室平面圖醫(yī)療機構(gòu)醫(yī)學倫理審查報告儀器、試劑三證復印件方法學性能驗證報告室間質(zhì)評成績質(zhì)量手冊、程序文件、操作規(guī)程申請在本市首次開展的醫(yī)療技術(shù)還需遞交：國內(nèi)外有關(guān)該技術(shù)研究和使用情況的檢索報告及技術(shù)資料14技術(shù)審核需遞交的材料醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證副本復印件15PCR審核流程（初審、復審、擴項、新技術(shù)）醫(yī)療機構(gòu)提出技術(shù)審核申請申請資料審查受理、登記、編號發(fā)出《技術(shù)審核受理通知書》文件內(nèi)容審查確定審核專家組成員書面通知專家、醫(yī)療機構(gòu)組織專家現(xiàn)場審核匯總專家組審核意見醫(yī)療機構(gòu)就專家意見整改完成技術(shù)審核結(jié)論報告送達醫(yī)療機構(gòu)補充資料不予受理退回修改啟動回避程序1個月內(nèi)提交整改報告現(xiàn)場確認整改效果報衛(wèi)生行政部門15醫(yī)療機構(gòu)提出技術(shù)審核申請申請資料審查發(fā)出《技術(shù)審核受理通16審核結(jié)果合格基本合格不合格，12個月后重新申請16審核結(jié)果合格17不合格重新申請時間依據(jù)《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[2009]18號）第二十三條：有下列情形之一的，醫(yī)療機構(gòu)不得向技術(shù)審核機構(gòu)提出醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請（三）申請的醫(yī)療技術(shù)距上次同一醫(yī)療技術(shù)未通過臨床應用能力技術(shù)審核時間未滿12個月的第二十四條：未通過審核的醫(yī)療技術(shù)，醫(yī)療機構(gòu)技術(shù)不得在12個月內(nèi)向其他技術(shù)審核機構(gòu)申請同一醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力再審核17不合格重新申請時間依據(jù)《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)18一票否決項

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》

第四章第二十條開展的臨床基因擴增檢驗項目超出市衛(wèi)生行政部門核定范圍的使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的臨床試劑開展臨床擴增檢驗的在臨床基因擴增檢驗中未開展室內(nèi)質(zhì)控的在臨床基因擴增檢驗中未參加室間質(zhì)評的在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的使用未經(jīng)培訓合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的使用非本院技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的嚴重違反國家實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定或不具備實驗室生物安全保障條件的現(xiàn)場標本考核成績（該項目的可接受結(jié)果數(shù)/該項目的總的測定結(jié)果數(shù)×100）<80%的18一票否決項

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》

19實驗室設置與設備存在問題整改措施各緩沖間相通未安裝沖眼器移動紫外車缺或已壞未及時更換19實驗室設置與設備存在問題整改措施各緩沖間相通未安裝沖眼器20設施與環(huán)境存在問題整改措施溫、濕度超出實驗規(guī)定范圍，未見糾正措施安裝獨立空調(diào)檢測前、后標本放置同一冰箱，未見標識加以區(qū)分標本分區(qū)放置，并用標識加以區(qū)分1、進入和使用實驗室各區(qū)域未見相應措施加以限制和控制2、科研人員進出管理混亂1、安裝門禁或貼標識加以限制和控制2、非檢測人員進出登記不同工作區(qū)域內(nèi)物品混用（移液器、手套、記錄未按要求分區(qū)放置）各區(qū)物品貼區(qū)域標識加以區(qū)分1、清潔用具混用或共用2、未對相關(guān)人員培訓1、各區(qū)專用清潔用具；2、指定人員；3、培訓；4、記錄雜交在擴增區(qū)、雜交膜存放在擴增區(qū)；雜交在產(chǎn)物分析區(qū)，雜交膜存放在產(chǎn)物分析20設施與環(huán)境存在問題整改措施溫、濕度超出實驗規(guī)定范圍，未見21操作規(guī)程存在問題整改措施1、內(nèi)容不詳細，缺可操作性（方法學驗證、耗材試劑質(zhì)檢、室內(nèi)質(zhì)控、分析前措施、設備校準參數(shù)及判斷標準等）2、操作規(guī)程不是現(xiàn)行有效3、實驗室各區(qū)未放置相關(guān)SOP4、試劑重要參數(shù)修改后SOP未及時更新5、內(nèi)部校準、無EQA的室間比對缺SOP

8、標本運送、保存、處理與SOP規(guī)定不一致1、檢驗項目操作規(guī)程應參照《臨床檢驗操作規(guī)程編寫要求》（WS/T227-2002和說明書編寫2、更換試劑批號時仔細閱讀試劑說明書3、SOP為操作指導性文件，應具可操作性4、寫、做、記一致21操作規(guī)程存在問題整改措施1、內(nèi)容不詳細，缺可操作性（方法22人員存在問題整改措施1、缺培訓計劃、或計劃缺乏針對性；2、未見培訓記錄3、有培訓記錄未見效果評估記錄1、計劃制定應有針對性，每年有重點2、培訓形式可以多樣：講座（包括小組教學）、計算機相關(guān)的練習、自學、觀看示例-現(xiàn)場或視頻、實踐監(jiān)督、實踐結(jié)果的自我評估、特殊樣品的檢驗或鑒定3、效果評估形式：口頭提問、筆試、現(xiàn)場操作演示、獲取合格證、填寫培訓小結(jié)等初審實驗室大多數(shù)缺員工是否能勝任其崗位的記錄1、實驗室應制定員工能力評審的內(nèi)容和方法（新進、轉(zhuǎn)崗）2、定期評審員工的工作能力，并保存勝任的證據(jù)：直接觀察常規(guī)工作過程和程序、直接觀察設備維護和功能檢查、監(jiān)控檢驗結(jié)果的記錄和報告過程、核查工作記錄、評估解決問題的技能、使用特殊材料執(zhí)行一個給定程序1、實驗室技術(shù)人員檔案內(nèi)容過于簡單：只有學歷、職稱、PCR上崗證書復印件，其余缺2、未及時更新實驗室應分冊建立技術(shù)人員技術(shù)檔案，檔案至少應包括以下內(nèi)容：學歷、職稱、臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證書復印件；培訓、能力評審等資料，并定期更新22人員存在問題整改措施1、缺培訓計劃、或計劃缺乏針對性23儀器、試劑和方法存在問題整改措施1、冰箱溫度缺允許范圍2、冰箱溫度非檢測日不記錄3、冰箱溫度計缺或壞，仍在記錄1、根據(jù)試劑說明書要求規(guī)定試劑儲存要求，2、每日實施監(jiān)控并有記錄檢測、科研儀器無標識加以區(qū)分每件設備均應有唯一性標簽、標記或其他識別方式，有明顯的標識表明儀器的狀態(tài)儀器設備檔案內(nèi)容不全應保存主要設備的檔案，檔案內(nèi)容應包括：設備標識、型號、序號或其它唯一性識別、到貨日期和投入運行日期、目前放置地點、接收時的狀態(tài)、儀器使用說明書或其存放處、證實設備可以使用的設備驗證報告、校準和/或檢定報告、維護、損壞、故障或維修的記錄23儀器、試劑和方法存在問題整改措施1、冰箱溫度缺允許范圍124存在問題整改措施1、儀器投入使用前未進行校準2、部分儀器未定期校準3、校準未覆蓋檢測常用量程（移液器、恒溫金屬?。?、校準報告不規(guī)范，缺原始記錄5、校準報告中校準數(shù)據(jù)錯誤未發(fā)現(xiàn)6、校準不符合要求的設備仍在使用（移液器、高速冷凍離心機）7、未引用校準出現(xiàn)的校準因子（、溫度計、恒溫金屬?。?、內(nèi)部校準存在問題：用于校準恒溫金屬浴的溫度計未校準；且最小刻度為1℃，不適用于金屬浴校準；內(nèi)部比對（溫度計）無記錄或記錄信息不全1、校準SOP中制定儀器校準參數(shù)、判斷標準2、實驗室檢測人員提出校準要求3、實驗室審核校準報告4、內(nèi)部比對記錄信息最少應包括：比對設備編號、用于比對設備的校準信息（校準日期、校準有效期、校準單位）、比對時間、標準設備實測數(shù)據(jù)、比對設備實測數(shù)據(jù)、判斷標準、結(jié)論、比對人、比對日期、科室負責人24存在問題整改措施1、儀器投入使用前未進行校準1、校準SO25存在問題整改措施1、未對不同試劑批號進行質(zhì)檢2、未對耗材進行質(zhì)檢定性試劑質(zhì)檢定量試劑質(zhì)檢抑制物質(zhì)檢（除非標明不含抑制物）使用上一次的擴增曲線判斷結(jié)果每次擴增應都做標準曲線1、更換儀器只做部分項目的驗證2、驗證參數(shù)不全、標本數(shù)量不足3、參比方法選擇有缺陷，無法比較4、標本類型更換未做驗證5、不是實驗室獨自完成，很難反應實際情況如未對試劑或方法進行重要修改，應對所采用的試劑或方法進行性能驗證，實驗室應獨自完成驗證試驗定量：精密度、準確度、檢測下限、線性范圍定性：精密度、符合率25存在問題整改措施1、未對不同試劑批號進行質(zhì)檢定性試劑質(zhì)檢26CLSI:相關(guān)文件項目名稱內(nèi)容123456789CLSIC24-A2CLSIC28-A2CLSIEP5-ACLSIEP6-ACLSIEP7-ACLSIEP9-A2CLSIEP10-A2CLSIEP13RCLSIGP10-A定量測定統(tǒng)計質(zhì)量控制：原理和定義如何確定臨床檢驗的參考區(qū)間臨床化學設備精密性能的評價定量分析方法現(xiàn)行的評價臨床化學中的干擾物檢測方法用患者標本進行方法比對及偏倚估計定量臨床檢驗方法的初步評價實驗室統(tǒng)計量-標準差使用ROC曲線評價臨床試驗的準確度：批準指南26CLSI:相關(guān)文件項目名稱內(nèi)容1CLSIC24-A2性能驗證前的準備應熟悉待驗證的檢測系統(tǒng)應熟悉驗證方案的步驟(PCR檢測項目成本高、陽性標本來源困難,精密度和正確度驗證建議采用EP15-A2文件)制定質(zhì)量保證措施確保足夠的樣本數(shù)量和覆蓋較寬檢測范圍確定比較方法27性能驗證前的準備應熟悉待驗證的檢測系統(tǒng)27精密度驗證（EP5-A2）重復性:指在相同條件(時間、校準、操作者、儀器)下獲得的精密度,也稱批內(nèi)精密度實驗室內(nèi)精密度:同一實驗室內(nèi)，使用相同的設備,由不同的操作者在不同時間內(nèi)獲得的精密度,也稱總精密度.(不包括大的設備維護、儀器校準和更換試劑批號等)28精密度驗證（EP5-A2）重復性:指在相同條件(時間、校準實驗要求試劑:同一批號實驗樣本:以前分析過的病人樣本其他已知值的物質(zhì)濃度要求:醫(yī)學決定水平廠家說明書精密度指標所用濃度內(nèi)容:重復性實驗室內(nèi)精密度29實驗要求試劑:同一批號29實驗步驟5天,每日一分析批,每日2個濃度水平,每一水平上同一樣本4次重復測定.每天做室內(nèi)質(zhì)控,如果失控,剔除數(shù)據(jù),重新進行測定按照廠家說明書規(guī)定進行校準計算結(jié)果判斷：與廠家申明比較30實驗步驟5天,每日一分析批,每日2個濃度水平,每一水平上同一正確度驗證（EP9-A2）比對方法:利用臨床病人樣本,比較兩個測量程序間的結(jié)果參考物質(zhì)31正確度驗證（EP9-A2）比對方法:利用臨床病人樣本,比較兩比對方法檢測20份患者樣本,其濃度水平覆蓋方法的可報告范圍在實驗室以常規(guī)操作方式檢測新鮮患者標本在3-4天時間內(nèi),每天由實驗和可比較方法測定5-7份樣本每天做室內(nèi)質(zhì)控,如果失控,剔除,重新測定檢查比較數(shù)據(jù)識別任何差異的結(jié)果出現(xiàn)單個樣本異常(兩個測量方法之間結(jié)果偏差很大)時:

用兩個測量方法對樣本進行重復測定,以區(qū)分:

特異性導致的誤差其他偶然或儀器的系統(tǒng)誤差棄去偏差異常大樣本,重新測定另一樣本32比對方法檢測20份患者樣本,其濃度水平覆蓋方法的可報告范圍3計算：偏移、相關(guān)系數(shù)結(jié)果判斷：與廠家（實驗室）申明比較33計算：偏移、相關(guān)系數(shù)33使用參考物質(zhì)的正確度方案參考物質(zhì)

有證參考物質(zhì)能力驗證計劃中具有指定值的參考物質(zhì)廠家具有指定值的物質(zhì)

EQA計劃中的物質(zhì)由幾家實驗室分析具有指定值來自第三方的物質(zhì)制備的已知濃度的標準物質(zhì)34使用參考物質(zhì)的正確度方案參考物質(zhì)34實驗步驟至少2個物質(zhì),濃度為可報告范圍中高和低的決定性濃度在3-5天內(nèi)每天測定一次,每次重復2次計算每個濃度測定結(jié)果的均值和標準差,以及置信區(qū)間幫助指定值的驗證35實驗步驟至少2個物質(zhì),濃度為可報告范圍中高和低的決定性濃度3結(jié)果判斷如果驗證區(qū)間包括定值數(shù)字,驗證通過驗證區(qū)間包括定值,但偏倚較大,可增加2-5個樣本進行檢測,用所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計以增加統(tǒng)計效能如果驗證區(qū)間未能包括定值數(shù)字,驗證不通過計算偏倚和允許總誤差是否符合臨床需要或者實驗室要求聯(lián)系廠家協(xié)助36結(jié)果判斷如果驗證區(qū)間包括定值數(shù)字,驗證通過36定量檢出限的驗證(EP-17A)概念能可靠檢出分析物的最低實際濃度,并在該濃度下的總誤差符合準確度要求總誤差目標來源:實驗室的需求、室間質(zhì)評結(jié)果、廠家的申明37定量檢出限的驗證(EP-17A)概念37實驗樣本低濃度參考物質(zhì)已知濃度的樣品適當稀釋成3-5個低濃度實驗樣品38實驗樣本低濃度參考物質(zhì)38實驗步驟至少25個重復測量每個樣品重復測量的結(jié)果與該樣品的參考值比較,以確定是否超出目標誤差,超過誤差目標的結(jié)果數(shù)量可用于評價此方法在該濃度是否合適39實驗步驟至少25個重復測量39

20-1000個檢測值符合超出LoB預期95%比例的下限檢測數(shù)觀察比例的下限(%)檢測數(shù)觀察比例的下限(%）20853087408850886088708980899090100901509120092250923009240093500931000944020-1000個檢測值符合超出LoB預期95%比例的下限分析測量范圍（EP6-A）分析測量范圍(線性范圍):指患者樣本未經(jīng)任何處理(稀釋、濃縮或其他預處理),由檢測系統(tǒng)直接測量得到的可靠結(jié)果范圍,在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的測量值與其實際濃度(真值)呈線性比例關(guān)系.臨床可報告范圍:指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍,患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預處理.線性:檢測樣本時,在一定范圍內(nèi)可以直接按比例關(guān)系得出分析物含量的能力.41分析測量范圍（EP6-A）分析測量范圍(線性范圍):指患者樣實驗樣品準備選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì),不含干擾物質(zhì);

或廠家推薦的產(chǎn)品數(shù)量驗證實驗:5-7個不同濃度的樣本,高值樣本應高于線性上限30%,低值樣本低于線性下限42實驗樣品準備選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì),不含干擾物質(zhì);實驗方法實驗方法：上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度,按試劑說明書操作,將每一濃度樣本重復檢測2次,計算線性相關(guān)系數(shù)結(jié)果判斷：線性范圍應符合制造商規(guī)定的要求,且線性相關(guān)系數(shù)|r|≥0.9743實驗方法實驗方法：上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度定性檢測項目的性能驗證診斷明確的定性檢測性能評估:靈敏度、特異性診斷不明確的定性檢測性能評估:結(jié)果的一致性,Kappa值表示44定性檢測項目的性能驗證診斷明確的定性檢測性能評估:靈敏度、特診斷明確的定性檢測比較方法:目前正在使用的、”金標準”方法、某種定量方法或臨床診斷樣本要求:量足夠大,穩(wěn)定樣本數(shù)量:取決于評價者的目的結(jié)果不一樣標本的處理:用金標準或參考方法明確結(jié)果45診斷明確的定性檢測比較方法:目前正在使用的、”金標準”方法、檢測方法與明確診斷比較2*2列聯(lián)表檢測方法明確診斷陽性陰性總數(shù)陽性陰性AＣBＤA+ＢＣ＋Ｄ總數(shù)Ａ＋ＣＢ＋ＤＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ46靈敏度=100%[A/(A+C)]特異性=100%[B/(B+D)]陽性預測值=100%[A/(A+B)]陰性預測值=100%[A/(A+C)]檢驗效能=100%[(A+D)/N]檢測方法與明確診斷比較2*2列聯(lián)表檢測方法明確診斷陽性陰性總診斷不明確的定性檢測項目性能評估

檢測方法、可比較方法一致程度比較檢測方法可比較方法陽性陰性總計陽性陰性ＡＣＢＤＡ＋ＢＣ＋Ｄ總計Ａ＋ＣＢ＋Ｄ

n47一致程度百分比=100%(A+D)/nKappa值>0.75，一致性優(yōu)秀Kappa值：0.4-0.75，一致性較好Kappa值<0.4，一致性差診斷不明確的定性檢測項目性能評估

檢測方法、可比較個體化檢測系統(tǒng)性能驗證的特殊性驗證性能參數(shù)：精密度/重復性、正確度（突變型的檢測能力）、分析特異性（如正常野生型基因組與突變型之間的區(qū)分能力）、檢出限（每個反應能檢出的最小突變拷貝數(shù)）、選擇性（突變型與野生型不同比例設定）覆蓋標本的范圍（如不同的基因型）標本的類型（血液、尿液、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織）性能驗證存在難點：患病率低或罕見病其陽性標本少缺乏金標準48個體化檢測系統(tǒng)性能驗證的特殊性驗證性能參數(shù)：精密度/重復性、49標本管理存在問題整改措施HCVRNA檢測項目未按操作規(guī)程要求及時送達實驗室應監(jiān)控標本運送到實驗室的過程，標本運送應符合時間、溫度、生物安全的要求接收標本時標本狀態(tài)信息記錄不完善應記錄收到標本的日期和時間，同時應記錄標本接收時的詳細狀態(tài)分泌物標本、分子病理標本是否符合要求，缺記錄實驗室應確定標本是否符合檢測要求,拒收標本原因要明確實驗室對標本拒收原因缺定期分析及整改措施定期評估，制定切實可行的整改措施，提高工作效率1、標本保存時間短于規(guī)定時間；2、標本保存時間與溫度無法確保其性狀穩(wěn)定標本應按相關(guān)規(guī)定保存（應結(jié)合檢測報告復核的提示時間49標本管理存在問題整改措施HCVRNA檢測項目未按操作規(guī)程50質(zhì)量控制存在問題整改措施對暫無室間質(zhì)評的項目缺驗證其結(jié)果可靠性的措施或規(guī)定實驗室應制定質(zhì)量控制文件，編寫對暫無室間質(zhì)評的項目驗證其結(jié)果可靠性的措施或規(guī)定的SOP初審實驗室方法學驗證時有時不做室內(nèi)質(zhì)控理解室內(nèi)質(zhì)控的作用室內(nèi)質(zhì)控未監(jiān)控核酸提取、擴增整個過程應監(jiān)控核酸提取、擴增、產(chǎn)物分析等標本檢測全過程擴增條件相同的不同檢測項目只做其中一個項目室內(nèi)質(zhì)控應分別做室內(nèi)質(zhì)控內(nèi)標未出現(xiàn)，陰性結(jié)果仍發(fā)出內(nèi)標應符合要求50質(zhì)量控制存在問題整改措施對暫無室間質(zhì)評的項目缺驗證其結(jié)果51存在問題整改措施擴增漏做室內(nèi)質(zhì)控每次擴增都應做室內(nèi)質(zhì)控實驗室未根據(jù)統(tǒng)計學質(zhì)控方法建立實驗室自身檢測項目的控制限定量項目：實驗室應根據(jù)統(tǒng)計學質(zhì)控方法建立檢測項目的控制限定性項目：根據(jù)試劑說明書要求判斷失控未見原因分析，或分析滯后，或原因分析缺乏針對性失控及時查找原因，采取糾正措施，填寫失控分析報告失控時大多數(shù)實驗室只重做室內(nèi)質(zhì)控，未評估對檢測結(jié)果的影響如遇失控，應對已測標本進行抽樣檢測進行質(zhì)量偏差評估室間質(zhì)評樣品特殊對待，無法反應實際情況應與臨床標本同等對待室間質(zhì)評結(jié)果原因分析流于形式，缺乏針對性分析室間質(zhì)評反饋結(jié)果，對不合格項目，應及時查找原因，采取糾正措施51存在問題整改措施擴增漏做室內(nèi)質(zhì)控每次擴增都應做室內(nèi)質(zhì)控52室間比對實驗室無相關(guān)資質(zhì)；比對標本濃度選擇單一無EQA項目應定期（每年至少2次）進行實驗室間比對：比對樣品數(shù)量至少5份，濃度包括正常和異常水平，判定標準應有≥80%的結(jié)果滿足要求無EQA項目使用標本為非原始標本，而是提取產(chǎn)物應使用臨床標本監(jiān)測檢測全過程當實驗室間比對不可行或不適用時，缺其它方法及判斷檢測結(jié)果的可接受性實驗室應制定評價方法，確保檢測結(jié)果的可接受性（留樣檢測、人員比對、方法比對、與臨床診斷的符合性等）對室間比對不一致的標本，未見原因分析及糾正措施應有措施進行結(jié)果確認（其他試劑、其它方法、第三家實驗室等）缺實驗室負責人監(jiān)控室間比對或其它活動的結(jié)果實驗室負責人應監(jiān)控室間比對或其它活動的結(jié)果結(jié)果有效性判斷未關(guān)注標準曲線的相關(guān)系數(shù)或內(nèi)參是否滿足試劑說明書的要求結(jié)果有效性判斷除室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控外，還應判斷標準曲線的相關(guān)系數(shù)或內(nèi)參是否滿足試劑說明書的要求擴增條件相同的不同檢測項目擴增時共用標準曲線應使用各自的標準曲線判斷結(jié)果52無EQA項目應定期（每年至少2次）進行實驗室間比對：比對53報告存在問題整改措施1、采集時間、接收時間、檢測時間、報告時間不完整；2、樣品采集時間、樣品接收時間、

結(jié)果報告時間未顯示實時性3、檢測結(jié)果計量單位與檢測下限與試劑說明書不一致；4、個體化檢測項目檢測結(jié)果報告不客觀5、檢測人、審核人與實際不符；6、缺少對客戶必要的提示1、每份報告信息完整、準確2、樣品采集時間、樣品接收時間、

結(jié)果報告時間應顯示實時性3、個體化檢測報告明確的臨床意義可在結(jié)果解釋中體現(xiàn)4、關(guān)注檢測方法的局限性53報告存在問題整改措施1、采集時間、接收時間、檢測時1、每54分包存在問題整改措施1、未見委托實驗室保證檢測質(zhì)量的支持性文件；2、未見相關(guān)質(zhì)量評審的記錄定期評審委托實驗室檢測質(zhì)量，并有相關(guān)記錄實驗室缺外送檢驗項目的要求和規(guī)定，無外送樣品的登記和記錄，無委托實驗室標本運送和交接過程的監(jiān)控和記錄有外送檢驗項目的要求和規(guī)定，并做好外送樣品的登記和記錄，有委托實驗室標本運送和交接過程的監(jiān)控和記錄54分包存在問題整改措施1、未見委托實驗室保證檢測質(zhì)量的支持55投訴存在問題整改措施記錄簡單、或5年未見投訴記錄應將投訴資料及處理投訴所采取的措施及結(jié)果記錄歸檔保存55投訴存在問題整改措施記錄簡單、或5年未見投訴記錄應將投訴56記錄

存在問題整改措施記錄表格設計或簡單或復雜實驗室應有適合自身實際情況又符合現(xiàn)行規(guī)章制度的記錄管理制度及記錄表格無儀器打印結(jié)果的檢驗項目缺原始記錄或記錄不全無儀器打印結(jié)果的檢驗項目記錄信息至少應包括檢測項目、試劑品牌、批號、有效期、標本唯一編號、檢測結(jié)果、檢測者、檢測日期雜交項目記錄保存有缺陷建議電子版保留儀器壞，數(shù)據(jù)丟失原始記錄應定期備份，至少保留3年56記錄

存在問題整改措施記錄表格設計或簡單或復雜實驗室應57

小結(jié)材料準備不充分：人員資質(zhì)不符合要求、方法學驗證未做、SOP拷貝別家實驗室資料操作規(guī)程成為擺設實驗室主管、操作人員相關(guān)知識欠缺人員內(nèi)部培訓欠缺或流于形式，缺培訓效果的評估和員工能力的評價儀器校準不規(guī)范分析前質(zhì)量控制問題較多成本原因，質(zhì)控措施不規(guī)范檢驗報告信息不全，報告單上標本采集、接收時間與實際時間不符記錄雜、亂外送實驗室無資質(zhì)，結(jié)果差異大57小結(jié)材料準備不充分：人員資質(zhì)不符合要求、方法學驗證未58不符合項整改整改報告規(guī)范書寫

不符合/觀察項事實描述、原因分析、糾正措施、預防措施、糾正措施效果確認整改到位、整改材料有相應佐證材料如何整改，提供證據(jù)整改效果如何？負責人認可確認58不符合項整改整改報告規(guī)范書寫595960PCR實驗室存在問題及解決措施

上海市臨床檢驗中心肖艷群1PCR實驗室存在問題及解決措施

61回顧1990年：PCR技術(shù)在國內(nèi)開始用于臨床檢測90年代中期：假陽性？（假陰性？）《關(guān)于暫停臨床基因擴增檢驗的通知》（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[1998]第9號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》的通知（衛(wèi)醫(yī)政〔2009〕18號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)[2010]194號）2回顧1990年：PCR技術(shù)在國內(nèi)開始用于臨床檢測62醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法

（分類分級管理、審核）第一類：安全性、有效性確切，醫(yī)療機構(gòu)通過常規(guī)管理在臨床應用中能確保其安全性、有效性的技術(shù)—醫(yī)療機構(gòu)自行組織實施第二類：安全性、有效性確切，涉及一定倫理問題或者風險較高，衛(wèi)生行政部門應當加以控制管理的醫(yī)療技術(shù)—省級衛(wèi)生行政部門指定或者組建的技術(shù)機構(gòu)負責技術(shù)審核第三類：具有下列情形之一，需要衛(wèi)生行政部門加以嚴格控制管理的醫(yī)療技術(shù)—衛(wèi)生部或衛(wèi)生部委托省級衛(wèi)生行政組織負責對指定的第三類醫(yī)療技術(shù)進行審核

（一）涉及重大倫理問題

（二）高風險

（三）安全性、有效性尚需經(jīng)規(guī)范的臨床試驗研究進一步驗證

（四）需要使用稀缺資源

（五）衛(wèi)生部規(guī)定的其他需要特殊管理的醫(yī)療技術(shù)

3醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法

63

上海市第二類醫(yī)療技術(shù)目錄首批（18項）（2009.8.24）第二批（6項）（2012.1.4）冠心病介入診療技術(shù)體外沖擊波碎石/經(jīng)輸尿管鏡碎石取石術(shù)先天性心臟病介入診療技術(shù)人工椎間盤置換術(shù)心臟導管消融技術(shù)經(jīng)尿道前列腺汽化消融術(shù)起搏器介入診療技術(shù)內(nèi)科胸腔鏡診療技術(shù)心室輔助裝置植入技術(shù)急性腦梗死溶栓術(shù)擴大全胰腺切除術(shù)直腸癌根治術(shù)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影診療技術(shù)髖、膝關(guān)節(jié)置換技術(shù)角膜移植技術(shù)白內(nèi)障超聲乳化技術(shù)準分子激光角膜屈光手術(shù)口腔種植診療技術(shù)輸尿管鏡技術(shù)面部輪廓整形技術(shù)血液透析技術(shù)臨床基因擴增檢驗技術(shù)醫(yī)用高壓氧治療技術(shù)本市首次開展（未納入衛(wèi)生部規(guī)定的第三類醫(yī)療技術(shù)目錄）的醫(yī)療技術(shù)4上海市第二類醫(yī)療技術(shù)目錄首批（18項）（20064衛(wèi)生部公布第三類醫(yī)療技術(shù)目錄同種器官移植、變性手術(shù)、心室輔助裝置應用技術(shù)、基因芯片診斷技術(shù)（2011年5.3日由三類調(diào)整為二類）等共19項5衛(wèi)生部公布第三類醫(yī)療技術(shù)目錄同種器官移植、變性手術(shù)65滬臨檢辦〔2011〕29號關(guān)于印發(fā)《上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗技術(shù)審核辦法》和《上海市醫(yī)療機構(gòu)基因芯片診斷技術(shù)審核辦法》的通知附件1：《臨床基因擴增檢驗及分子診斷相關(guān)技術(shù)審核專家?guī)烀麊巍犯郊?：《上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗技術(shù)審核辦法》附件3：《上海市醫(yī)療機構(gòu)基因芯片技術(shù)診斷審核辦法》附件4:《上海市醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請書》附件5：《上海市臨床基因擴增檢驗及分子診斷相關(guān)技術(shù)審核流程》（首頁醫(yī)療技術(shù)準入專欄中下載）6滬臨檢辦〔2011〕29號66基本要求（1）醫(yī)療機構(gòu)基本要求（2）人員基本要求（3）臨床應用基本規(guī)范和管理要求（4）實驗室設置基本要求（5）人員管理（6）設備管理（7）標本管理（8）質(zhì)量管理（9）檢測要求等7基本要求（1）醫(yī)療機構(gòu)基本要求67醫(yī)療機構(gòu)要求二級及以上醫(yī)院獨立實驗室（公司）實驗室應集中設置、統(tǒng)一管理實驗室必須通過上海市臨床檢驗中心技術(shù)審核合格并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所備案后方可開展檢測項目，以后每3年必須進行復審實驗室通過審核后應根據(jù)其核定的技術(shù)審核項目開展檢測工作。如需要增加檢測項目，應向上海市臨床檢驗中心提出擴項申請，并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所準入后方可開展檢測項目

實驗室開展分子診斷新技術(shù)，應向上海市臨床檢驗中心提出新技術(shù)申請，并報上海市衛(wèi)生監(jiān)督所準入后方可開展新技術(shù)的檢測項目

8醫(yī)療機構(gòu)要求二級及以上醫(yī)院68臨床應用基本規(guī)范和管理要求

以科研為目的的臨床基因擴增檢驗項目，不得向臨床出具檢驗報告，不得向病人收取任何費用9臨床應用基本規(guī)范和管理要求以科研為目的的臨床基因擴增檢69檢測要求項目：新開展檢測項目應有相應臨床科室出具的評估報告儀器：必須三證齊全試劑：必須SFDA批準新開展項目在技術(shù)審核前應進行方法學驗證儀器、試劑、方法更新時應進行方法學驗證

10檢測要求項目：新開展檢測項目應有相應臨床科室出具的評70

分包有外送檢驗項目的實驗室應與委托實驗室簽訂相關(guān)協(xié)議，有委托實驗室資質(zhì)和質(zhì)量保證的證明文件實驗室有外送檢驗項目的要求和規(guī)定，并做好外送樣品的登記和記錄，有委托實驗室標本運送和交接過程的監(jiān)控和記錄定期評審委托實驗室檢測質(zhì)量，并有相關(guān)記錄分包后自行開展，需確認具備開展相關(guān)檢測的能力11分包有外送檢驗項目的實驗室應與委托實驗室簽訂相關(guān)協(xié)71

審核前準備工作實驗室按要求設置、裝修儀器、人員到位完成質(zhì)量手冊、程序文件、操作規(guī)程編寫完成方法學驗證參加至少一次室間質(zhì)評，成績合格檢驗前、中、后流程暢通12審核前準備工作實驗室按要求設置、裝修72

申請技術(shù)審核需遞交的材料《上海市臨床技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請書》醫(yī)療機構(gòu)基本情況申請單位相關(guān)學科基本情況項目負責人基本情況學科人員基本情況項目所在地實驗室的專用設備、設施及工作基礎(chǔ)擬開展檢驗項目開展該技術(shù)的目的、意義和實施方案該項醫(yī)療技術(shù)的基本概況技術(shù)路線國內(nèi)外應用情況與同種疾病的其他檢測技術(shù)的特點及費用比較質(zhì)量控制措施13

申請技術(shù)審核需遞交的材料《上海市臨床技術(shù)臨床應73

技術(shù)審核需遞交的材料醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證副本復印件技術(shù)人員相關(guān)資格證書復印件與該技術(shù)有關(guān)的實驗室平面圖醫(yī)療機構(gòu)醫(yī)學倫理審查報告儀器、試劑三證復印件方法學性能驗證報告室間質(zhì)評成績質(zhì)量手冊、程序文件、操作規(guī)程申請在本市首次開展的醫(yī)療技術(shù)還需遞交：國內(nèi)外有關(guān)該技術(shù)研究和使用情況的檢索報告及技術(shù)資料14技術(shù)審核需遞交的材料醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證副本復印件74PCR審核流程（初審、復審、擴項、新技術(shù)）醫(yī)療機構(gòu)提出技術(shù)審核申請申請資料審查受理、登記、編號發(fā)出《技術(shù)審核受理通知書》文件內(nèi)容審查確定審核專家組成員書面通知專家、醫(yī)療機構(gòu)組織專家現(xiàn)場審核匯總專家組審核意見醫(yī)療機構(gòu)就專家意見整改完成技術(shù)審核結(jié)論報告送達醫(yī)療機構(gòu)補充資料不予受理退回修改啟動回避程序1個月內(nèi)提交整改報告現(xiàn)場確認整改效果報衛(wèi)生行政部門15醫(yī)療機構(gòu)提出技術(shù)審核申請申請資料審查發(fā)出《技術(shù)審核受理通75審核結(jié)果合格基本合格不合格，12個月后重新申請16審核結(jié)果合格76不合格重新申請時間依據(jù)《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[2009]18號）第二十三條：有下列情形之一的，醫(yī)療機構(gòu)不得向技術(shù)審核機構(gòu)提出醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力技術(shù)審核申請（三）申請的醫(yī)療技術(shù)距上次同一醫(yī)療技術(shù)未通過臨床應用能力技術(shù)審核時間未滿12個月的第二十四條：未通過審核的醫(yī)療技術(shù)，醫(yī)療機構(gòu)技術(shù)不得在12個月內(nèi)向其他技術(shù)審核機構(gòu)申請同一醫(yī)療技術(shù)臨床應用能力再審核17不合格重新申請時間依據(jù)《醫(yī)療技術(shù)臨床應用管理辦法》（衛(wèi)醫(yī)77一票否決項

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》

第四章第二十條開展的臨床基因擴增檢驗項目超出市衛(wèi)生行政部門核定范圍的使用未經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的臨床試劑開展臨床擴增檢驗的在臨床基因擴增檢驗中未開展室內(nèi)質(zhì)控的在臨床基因擴增檢驗中未參加室間質(zhì)評的在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的以科研為目的的基因擴增檢驗項目向患者收取費用的使用未經(jīng)培訓合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的使用非本院技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗工作的嚴重違反國家實驗室生物安全有關(guān)規(guī)定或不具備實驗室生物安全保障條件的現(xiàn)場標本考核成績（該項目的可接受結(jié)果數(shù)/該項目的總的測定結(jié)果數(shù)×100）<80%的18一票否決項

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》

78實驗室設置與設備存在問題整改措施各緩沖間相通未安裝沖眼器移動紫外車缺或已壞未及時更換19實驗室設置與設備存在問題整改措施各緩沖間相通未安裝沖眼器79設施與環(huán)境存在問題整改措施溫、濕度超出實驗規(guī)定范圍，未見糾正措施安裝獨立空調(diào)檢測前、后標本放置同一冰箱，未見標識加以區(qū)分標本分區(qū)放置，并用標識加以區(qū)分1、進入和使用實驗室各區(qū)域未見相應措施加以限制和控制2、科研人員進出管理混亂1、安裝門禁或貼標識加以限制和控制2、非檢測人員進出登記不同工作區(qū)域內(nèi)物品混用（移液器、手套、記錄未按要求分區(qū)放置）各區(qū)物品貼區(qū)域標識加以區(qū)分1、清潔用具混用或共用2、未對相關(guān)人員培訓1、各區(qū)專用清潔用具；2、指定人員；3、培訓；4、記錄雜交在擴增區(qū)、雜交膜存放在擴增區(qū)；雜交在產(chǎn)物分析區(qū)，雜交膜存放在產(chǎn)物分析20設施與環(huán)境存在問題整改措施溫、濕度超出實驗規(guī)定范圍，未見80操作規(guī)程存在問題整改措施1、內(nèi)容不詳細，缺可操作性（方法學驗證、耗材試劑質(zhì)檢、室內(nèi)質(zhì)控、分析前措施、設備校準參數(shù)及判斷標準等）2、操作規(guī)程不是現(xiàn)行有效3、實驗室各區(qū)未放置相關(guān)SOP4、試劑重要參數(shù)修改后SOP未及時更新5、內(nèi)部校準、無EQA的室間比對缺SOP

8、標本運送、保存、處理與SOP規(guī)定不一致1、檢驗項目操作規(guī)程應參照《臨床檢驗操作規(guī)程編寫要求》（WS/T227-2002和說明書編寫2、更換試劑批號時仔細閱讀試劑說明書3、SOP為操作指導性文件，應具可操作性4、寫、做、記一致21操作規(guī)程存在問題整改措施1、內(nèi)容不詳細，缺可操作性（方法81人員存在問題整改措施1、缺培訓計劃、或計劃缺乏針對性；2、未見培訓記錄3、有培訓記錄未見效果評估記錄1、計劃制定應有針對性，每年有重點2、培訓形式可以多樣：講座（包括小組教學）、計算機相關(guān)的練習、自學、觀看示例-現(xiàn)場或視頻、實踐監(jiān)督、實踐結(jié)果的自我評估、特殊樣品的檢驗或鑒定3、效果評估形式：口頭提問、筆試、現(xiàn)場操作演示、獲取合格證、填寫培訓小結(jié)等初審實驗室大多數(shù)缺員工是否能勝任其崗位的記錄1、實驗室應制定員工能力評審的內(nèi)容和方法（新進、轉(zhuǎn)崗）2、定期評審員工的工作能力，并保存勝任的證據(jù)：直接觀察常規(guī)工作過程和程序、直接觀察設備維護和功能檢查、監(jiān)控檢驗結(jié)果的記錄和報告過程、核查工作記錄、評估解決問題的技能、使用特殊材料執(zhí)行一個給定程序1、實驗室技術(shù)人員檔案內(nèi)容過于簡單：只有學歷、職稱、PCR上崗證書復印件，其余缺2、未及時更新實驗室應分冊建立技術(shù)人員技術(shù)檔案，檔案至少應包括以下內(nèi)容：學歷、職稱、臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證書復印件；培訓、能力評審等資料，并定期更新22人員存在問題整改措施1、缺培訓計劃、或計劃缺乏針對性82儀器、試劑和方法存在問題整改措施1、冰箱溫度缺允許范圍2、冰箱溫度非檢測日不記錄3、冰箱溫度計缺或壞，仍在記錄1、根據(jù)試劑說明書要求規(guī)定試劑儲存要求，2、每日實施監(jiān)控并有記錄檢測、科研儀器無標識加以區(qū)分每件設備均應有唯一性標簽、標記或其他識別方式，有明顯的標識表明儀器的狀態(tài)儀器設備檔案內(nèi)容不全應保存主要設備的檔案，檔案內(nèi)容應包括：設備標識、型號、序號或其它唯一性識別、到貨日期和投入運行日期、目前放置地點、接收時的狀態(tài)、儀器使用說明書或其存放處、證實設備可以使用的設備驗證報告、校準和/或檢定報告、維護、損壞、故障或維修的記錄23儀器、試劑和方法存在問題整改措施1、冰箱溫度缺允許范圍183存在問題整改措施1、儀器投入使用前未進行校準2、部分儀器未定期校準3、校準未覆蓋檢測常用量程（移液器、恒溫金屬?。?、校準報告不規(guī)范，缺原始記錄5、校準報告中校準數(shù)據(jù)錯誤未發(fā)現(xiàn)6、校準不符合要求的設備仍在使用（移液器、高速冷凍離心機）7、未引用校準出現(xiàn)的校準因子（、溫度計、恒溫金屬?。?、內(nèi)部校準存在問題：用于校準恒溫金屬浴的溫度計未校準；且最小刻度為1℃，不適用于金屬浴校準；內(nèi)部比對（溫度計）無記錄或記錄信息不全1、校準SOP中制定儀器校準參數(shù)、判斷標準2、實驗室檢測人員提出校準要求3、實驗室審核校準報告4、內(nèi)部比對記錄信息最少應包括：比對設備編號、用于比對設備的校準信息（校準日期、校準有效期、校準單位）、比對時間、標準設備實測數(shù)據(jù)、比對設備實測數(shù)據(jù)、判斷標準、結(jié)論、比對人、比對日期、科室負責人24存在問題整改措施1、儀器投入使用前未進行校準1、校準SO84存在問題整改措施1、未對不同試劑批號進行質(zhì)檢2、未對耗材進行質(zhì)檢定性試劑質(zhì)檢定量試劑質(zhì)檢抑制物質(zhì)檢（除非標明不含抑制物）使用上一次的擴增曲線判斷結(jié)果每次擴增應都做標準曲線1、更換儀器只做部分項目的驗證2、驗證參數(shù)不全、標本數(shù)量不足3、參比方法選擇有缺陷，無法比較4、標本類型更換未做驗證5、不是實驗室獨自完成，很難反應實際情況如未對試劑或方法進行重要修改，應對所采用的試劑或方法進行性能驗證，實驗室應獨自完成驗證試驗定量：精密度、準確度、檢測下限、線性范圍定性：精密度、符合率25存在問題整改措施1、未對不同試劑批號進行質(zhì)檢定性試劑質(zhì)檢85CLSI:相關(guān)文件項目名稱內(nèi)容123456789CLSIC24-A2CLSIC28-A2CLSIEP5-ACLSIEP6-ACLSIEP7-ACLSIEP9-A2CLSIEP10-A2CLSIEP13RCLSIGP10-A定量測定統(tǒng)計質(zhì)量控制：原理和定義如何確定臨床檢驗的參考區(qū)間臨床化學設備精密性能的評價定量分析方法現(xiàn)行的評價臨床化學中的干擾物檢測方法用患者標本進行方法比對及偏倚估計定量臨床檢驗方法的初步評價實驗室統(tǒng)計量-標準差使用ROC曲線評價臨床試驗的準確度：批準指南26CLSI:相關(guān)文件項目名稱內(nèi)容1CLSIC24-A2性能驗證前的準備應熟悉待驗證的檢測系統(tǒng)應熟悉驗證方案的步驟(PCR檢測項目成本高、陽性標本來源困難,精密度和正確度驗證建議采用EP15-A2文件)制定質(zhì)量保證措施確保足夠的樣本數(shù)量和覆蓋較寬檢測范圍確定比較方法86性能驗證前的準備應熟悉待驗證的檢測系統(tǒng)27精密度驗證（EP5-A2）重復性:指在相同條件(時間、校準、操作者、儀器)下獲得的精密度,也稱批內(nèi)精密度實驗室內(nèi)精密度:同一實驗室內(nèi)，使用相同的設備,由不同的操作者在不同時間內(nèi)獲得的精密度,也稱總精密度.(不包括大的設備維護、儀器校準和更換試劑批號等)87精密度驗證（EP5-A2）重復性:指在相同條件(時間、校準實驗要求試劑:同一批號實驗樣本:以前分析過的病人樣本其他已知值的物質(zhì)濃度要求:醫(yī)學決定水平廠家說明書精密度指標所用濃度內(nèi)容:重復性實驗室內(nèi)精密度88實驗要求試劑:同一批號29實驗步驟5天,每日一分析批,每日2個濃度水平,每一水平上同一樣本4次重復測定.每天做室內(nèi)質(zhì)控,如果失控,剔除數(shù)據(jù),重新進行測定按照廠家說明書規(guī)定進行校準計算結(jié)果判斷：與廠家申明比較89實驗步驟5天,每日一分析批,每日2個濃度水平,每一水平上同一正確度驗證（EP9-A2）比對方法:利用臨床病人樣本,比較兩個測量程序間的結(jié)果參考物質(zhì)90正確度驗證（EP9-A2）比對方法:利用臨床病人樣本,比較兩比對方法檢測20份患者樣本,其濃度水平覆蓋方法的可報告范圍在實驗室以常規(guī)操作方式檢測新鮮患者標本在3-4天時間內(nèi),每天由實驗和可比較方法測定5-7份樣本每天做室內(nèi)質(zhì)控,如果失控,剔除,重新測定檢查比較數(shù)據(jù)識別任何差異的結(jié)果出現(xiàn)單個樣本異常(兩個測量方法之間結(jié)果偏差很大)時:

用兩個測量方法對樣本進行重復測定,以區(qū)分:

特異性導致的誤差其他偶然或儀器的系統(tǒng)誤差棄去偏差異常大樣本,重新測定另一樣本91比對方法檢測20份患者樣本,其濃度水平覆蓋方法的可報告范圍3計算：偏移、相關(guān)系數(shù)結(jié)果判斷：與廠家（實驗室）申明比較92計算：偏移、相關(guān)系數(shù)33使用參考物質(zhì)的正確度方案參考物質(zhì)

有證參考物質(zhì)能力驗證計劃中具有指定值的參考物質(zhì)廠家具有指定值的物質(zhì)

EQA計劃中的物質(zhì)由幾家實驗室分析具有指定值來自第三方的物質(zhì)制備的已知濃度的標準物質(zhì)93使用參考物質(zhì)的正確度方案參考物質(zhì)34實驗步驟至少2個物質(zhì),濃度為可報告范圍中高和低的決定性濃度在3-5天內(nèi)每天測定一次,每次重復2次計算每個濃度測定結(jié)果的均值和標準差,以及置信區(qū)間幫助指定值的驗證94實驗步驟至少2個物質(zhì),濃度為可報告范圍中高和低的決定性濃度3結(jié)果判斷如果驗證區(qū)間包括定值數(shù)字,驗證通過驗證區(qū)間包括定值,但偏倚較大,可增加2-5個樣本進行檢測,用所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計以增加統(tǒng)計效能如果驗證區(qū)間未能包括定值數(shù)字,驗證不通過計算偏倚和允許總誤差是否符合臨床需要或者實驗室要求聯(lián)系廠家協(xié)助95結(jié)果判斷如果驗證區(qū)間包括定值數(shù)字,驗證通過36定量檢出限的驗證(EP-17A)概念能可靠檢出分析物的最低實際濃度,并在該濃度下的總誤差符合準確度要求總誤差目標來源:實驗室的需求、室間質(zhì)評結(jié)果、廠家的申明96定量檢出限的驗證(EP-17A)概念37實驗樣本低濃度參考物質(zhì)已知濃度的樣品適當稀釋成3-5個低濃度實驗樣品97實驗樣本低濃度參考物質(zhì)38實驗步驟至少25個重復測量每個樣品重復測量的結(jié)果與該樣品的參考值比較,以確定是否超出目標誤差,超過誤差目標的結(jié)果數(shù)量可用于評價此方法在該濃度是否合適98實驗步驟至少25個重復測量39

20-1000個檢測值符合超出LoB預期95%比例的下限檢測數(shù)觀察比例的下限(%)檢測數(shù)觀察比例的下限(%）20853087408850886088708980899090100901509120092250923009240093500931000949920-1000個檢測值符合超出LoB預期95%比例的下限分析測量范圍（EP6-A）分析測量范圍(線性范圍):指患者樣本未經(jīng)任何處理(稀釋、濃縮或其他預處理),由檢測系統(tǒng)直接測量得到的可靠結(jié)果范圍,在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的測量值與其實際濃度(真值)呈線性比例關(guān)系.臨床可報告范圍:指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍,患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其他預處理.線性:檢測樣本時,在一定范圍內(nèi)可以直接按比例關(guān)系得出分析物含量的能力.100分析測量范圍（EP6-A）分析測量范圍(線性范圍):指患者樣實驗樣品準備選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì),不含干擾物質(zhì);

或廠家推薦的產(chǎn)品數(shù)量驗證實驗:5-7個不同濃度的樣本,高值樣本應高于線性上限30%,低值樣本低于線性下限101實驗樣品準備選擇與臨床樣本同樣的基質(zhì),不含干擾物質(zhì);實驗方法實驗方法：上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度,按試劑說明書操作,將每一濃度樣本重復檢測2次,計算線性相關(guān)系數(shù)結(jié)果判斷：線性范圍應符合制造商規(guī)定的要求,且線性相關(guān)系數(shù)|r|≥0.97102實驗方法實驗方法：上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度定性檢測項目的性能驗證診斷明確的定性檢測性能評估:靈敏度、特異性診斷不明確的定性檢測性能評估:結(jié)果的一致性,Kappa值表示103定性檢測項目的性能驗證診斷明確的定性檢測性能評估:靈敏度、特診斷明確的定性檢測比較方法:目前正在使用的、”金標準”方法、某種定量方法或臨床診斷樣本要求:量足夠大,穩(wěn)定樣本數(shù)量:取決于評價者的目的結(jié)果不一樣標本的處理:用金標準或參考方法明確結(jié)果104診斷明確的定性檢測比較方法:目前正在使用的、”金標準”方法、檢測方法與明確診斷比較2*2列聯(lián)表檢測方法明確診斷陽性陰性總數(shù)陽性陰性AＣBＤA+ＢＣ＋Ｄ總數(shù)Ａ＋ＣＢ＋ＤＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ105靈敏度=100%[A/(A+C)]特異性=100%[B/(B+D)]陽性預測值=100%[A/(A+B)]陰性預測值=100%[A/(A+C)]檢驗效能=100%[(A+D)/N]檢測方法與明確診斷比較2*2列聯(lián)表檢測方法明確診斷陽性陰性總診斷不明確的定性檢測項目性能評估

檢測方法、可比較方法一致程度比較檢測方法可比較方法陽性陰性總計陽性陰性ＡＣＢＤＡ＋ＢＣ＋Ｄ總計Ａ＋ＣＢ＋Ｄ

n106一致程度百分比=100%(A+D)/nKappa值>0.75，一致性優(yōu)秀Kappa值：0.4-0.75，一致性較好Kappa值<0.4，一致性差診斷不明確的定性檢測項目性能評估

檢測方法、可比較個體化檢測系統(tǒng)性能驗證的特殊性驗證性能參數(shù)：精密度/重復性、正確度（突變型的檢測能力）、分析特異性（如正常野生型基因組與突變型之間的區(qū)分能力）、檢出限（每個反應能檢出的最小突變拷貝數(shù)）、選擇性（突變型與野生型不同比例設定）覆蓋標本的范圍（如不同的基因型）標本的類型（血液、尿液、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織）性能驗證存在難點：患病率低或罕見病其陽性標本少缺乏金標準107個體化檢測系統(tǒng)性能驗證的特殊性驗證性能參數(shù)：精密度/重復性、108標本管理存在問題整改措施HCVRNA