血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推薦方法測定

血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推薦方法測定實驗原理使用多克隆抗體抑制CK的CK-M同工酶活性后，按照德國臨床化學(xué)學(xué)會(DGKC)和國際臨床化學(xué)學(xué)會(IFCC)推薦的連續(xù)監(jiān)測法檢測余下的肌酸激酶活力。CK-MB由CK-M和CK-B亞單位組成?？笴K-M抗體完全抑制了CK-MM（酸激酶的主要活性部分）CK-MB中的CK-M亞單位的活性。再檢測CK的活力為余下的CK-B的活力，相當(dāng)于一半CK-MB活力。所以將結(jié)果乘以2CK-MB的活力。ADP+磷酸肌酸

CK肌酸+ATPATP+葡萄糖 ADP+葡萄糖-6-磷酸己糖激酶(HK)葡萄糖-6-磷酸+NADP+標(biāo)本：

6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+(G6P-DH)病人準備：無特殊。類型：血清，肝素或EDTA血漿。標(biāo)本存放：穩(wěn)定性：-20℃保存穩(wěn)定4（避光保存?；钚該p失：2～8保存24小時或18～221小時至少損失10%標(biāo)本運輸：常溫條件下保存運輸。標(biāo)本拒收標(biāo)準：細菌污染的標(biāo)本。實驗材料試劑利德曼CK測定試劑盒（試劑1 6×64ml試劑2 6×16ml）試劑組成試劑1（R1）+試劑2（R2：咪唑緩沖液 pH6.7 100mmol/L磷酸肌酸 30mmol/L葡萄糖 20mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC） 20mmol/L乙酸鎂 10mmol/LEDTA-Na2 2mmol/LADP 2mmol/LNADP 2mmol/LAMP 5mmol/L二腺苷-5'-磷酸 10μmol/L6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6P-DH） ≥1500U/L已糖激酶（HK） ≥2500U/L抑制人CK-MM的人抗體 ≥2000U/L試劑準備：試劑為即用式。試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑避光保存于2～8℃，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。注意事項：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。校準品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校準品對自動分析儀進行校準，具體參見生化檢驗校準品和質(zhì)控品.SOP文件。質(zhì)控品：具體參見生化檢驗校準品和質(zhì)控品.SOP文件。：貝克曼AU680生化分析儀操作步驟項目基本參數(shù)：參見AU680生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件儀器操作步驟：參見AU680生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件檢驗結(jié)果的判斷與分析質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控）做為未知標(biāo)本進行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。計算方法：使用ΔA/min均值乘以計算因子得到CK-MB活力。計算因子見下表：ΔA/min×因子=CK活力[U/L]計算因子（37℃：340nm 8254334nm 841412.參考值范圍10-24U/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應(yīng)建立自己的參考值。13.臨床意義12肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于腦中的同工酶（CK-B）組成。在血清中CK形式為CK-MM，，和巨酶等的二聚物。在檢測心肌損傷時CK-MB特異性很高。因此，CK-MB常用于心肌梗死的診斷和監(jiān)視。操作性能線性范圍＜1000U/L。批內(nèi)精密度xsCV批間精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20批內(nèi)精密度xsCV批間精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)樣品130.70.431.40樣品131.50.270.85樣品282.60.500.61樣品293.30.490.53樣品31941.000.52樣品31871.060.57方法學(xué)比較：本公司的試劑盒(y)與某商品化試劑盒(x)，同時對75個樣品進行CK-MB活力檢測，將檢測結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計結(jié)果如下：y=0.97x+3.78（U/L；r=0.998。靈敏度：本試劑的檢測限為2U/L病人結(jié)果可報告范圍：2-1000U/L。超出范圍結(jié)果處理：本法對CK-Mb活力的線性上限為1000U/L，當(dāng)測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液稀釋，重新測定。病危報警值的處理：無。方法局限性本法對CK-Mb活力的線性上限為1000U/L，當(dāng)測定值超過上限時，應(yīng)將樣品用9g/L氯化鈉溶液稀釋，重新測定。1704mol/L684mol/L，血紅蛋白2.00g/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L 時沒有觀察干擾。補救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進行維修。參考文獻Stein W. Creatine kinase (total activity), creatine kinaseisoenzymes and variants. In: Thomas Led. Clinical laboratorydiagnostics.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.71 MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry. 3rW.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.

ed.Philadelphia:WurzburgU,HennrichN,OrthHD,LangH.Quantitative ofcreatinekinaseisoenzymecatalyticconcentrationinserumusingimmunologicalmethods.JClinChemClinBiochem1977;15:131-7.Recommendations oftheGerman Society forClinical Standardizationofmethodsfortheestimationofenzymeactivitiesinbiologicalfluids:Sta