免疫組化技術(shù)簡(jiǎn)介課件

免疫組化技術(shù)簡(jiǎn)介1ppt課件免疫組化技術(shù)簡(jiǎn)介1ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制2ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制3ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04基本概念應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry,ICC)。免疫組化4ppt課件基本概念基本概念抗原（Antigen,Ag）一類能刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，即產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞等，并能與相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)或體外特異性結(jié)合的物質(zhì)?？贵w（Antibody,Ab）機(jī)體受抗原刺激后由B淋巴細(xì)胞，特別是漿細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種能與相應(yīng)抗原發(fā)生反應(yīng)的球蛋白，稱為免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）。5ppt課件基本概念抗原（Antigen,Ag）5ppt課件基本概念抗體的結(jié)構(gòu)V區(qū)氨基酸的種類和排列順序千變?nèi)f化，故可形成許多種具有不同結(jié)合抗原特異性的抗體。（抗原特異性，第一抗體）C區(qū)氨基酸的組成和排列在同一種屬動(dòng)物Ig同型L鏈和同一類H鏈中都比較恒定。制備第二抗體的重要基礎(chǔ)。一抗：鼠抗人二抗：羊抗鼠6ppt課件基本概念抗體的結(jié)構(gòu)V區(qū)氨基酸的種類和排列順序千變?nèi)f化，故可形基本概念單克隆抗體由同一克隆細(xì)胞產(chǎn)生，針對(duì)抗原分子上某一單個(gè)抗原決定簇的特異性抗體。多克隆抗體由不同細(xì)胞產(chǎn)生，其免疫化學(xué)特性不同，能夠識(shí)別抗原表面多種抗原決定簇的多種抗體的混合物?；蚬こ炭贵w在基因水平上對(duì)Ig分子進(jìn)行切割、拼接或修飾，甚至是在人工全合成后導(dǎo)入受體細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生的新型抗體。7ppt課件基本概念單克隆抗體7ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制8ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04基本原理抗原顯色抗體間接法直接法PAP法LSAB法9ppt課件基本原理抗原顯色抗體間接法直接法PAP法LSAB法9ppt課基本原理顯色系統(tǒng)酶免疫組化染色中的常用的酶及顯色底物辣根過(guò)氧化物酶/HRP：DAB、AEC堿性磷酸酶/AP：AP-Red、NBT/BCIP酶的選擇HRP染色結(jié)果比AP染色結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)含有內(nèi)源性HRP的組織切片：首選標(biāo)記酶為APAP和HRP結(jié)合可進(jìn)行雙重或3重免疫組化標(biāo)記，對(duì)比清晰10ppt課件基本原理顯色系統(tǒng)10ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制11ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04操作流程12ppt課件操作流程12ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制13ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)免疫原理的選擇一抗（屬種、單/多抗、濃縮/即用型）二抗（屬種、標(biāo)記方法）顯色方式14ppt課件技術(shù)要點(diǎn)免疫原理的選擇14ppt課件技術(shù)要點(diǎn)取材組織切片：冷凍切片、石蠟切片（最常用）；大?。?×1×0.5cm）；取病變組織與正常組織交界處；避免對(duì)組織標(biāo)本的損傷和擠壓。印片：肝、脾、淋巴結(jié)等器官或組織(經(jīng)新鮮標(biāo)本最大面積剖開(kāi)，充分暴露病灶，將載玻片輕輕壓與組織切面，細(xì)胞粘附于玻片上，然后固定）（缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻，細(xì)胞有重疊）各種體液、穿刺液：可直接涂片（血液、組織液等）或離心后涂片（細(xì)胞少腦脊液、腹水等）。培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮細(xì)胞離心后涂片；貼壁細(xì)胞可爬片。取材時(shí)間要早（24小時(shí)以內(nèi)），避免組織自溶，使抗原變性消失或嚴(yán)重彌散。組織切塊厚度不易超過(guò)0.5cm，以便固定液的及時(shí)滲透及脫水。15ppt課件技術(shù)要點(diǎn)取材取材時(shí)間要早（24小時(shí)以內(nèi)），避免組織自溶，使抗技術(shù)要點(diǎn)固定目的：①凝固蛋白，終止細(xì)胞內(nèi)酶的作用，防止細(xì)胞自溶；固定細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)；②保持組織細(xì)胞的抗原性；③防止細(xì)胞層脫落；④去除細(xì)胞內(nèi)的脂類（妨礙抗體結(jié)合）；⑤防腐。注意事項(xiàng)：①組織塊不宜過(guò)大；②固定液的量一般以組織塊大小的30倍為宜；③必須選擇對(duì)組織滲透力強(qiáng)，同時(shí)又不致使組織過(guò)度收縮或膨脹的試劑；④固定時(shí)間一般以24小時(shí)為宜。固定液的選擇：所有的標(biāo)本固定必須根據(jù)其性質(zhì)及所進(jìn)行的組織化學(xué)反應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌?。如甲醇、丙酮、甲醛、乙醇等。甲醛固定后，抗原容易被掩蓋，形成醛鍵或羧甲基，使蛋白交聯(lián)封閉部分抗原表位。16ppt課件技術(shù)要點(diǎn)固定甲醛固定后，抗原容易被掩蓋，形成醛鍵或羧甲基，使技術(shù)要點(diǎn)石蠟切片優(yōu)點(diǎn)：對(duì)組織結(jié)構(gòu)形態(tài)保存好，對(duì)組織的定位很準(zhǔn)確，是觀察組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的理想方法，可以用于回顧性研究。缺點(diǎn)：抗原常被封閉和破壞。對(duì)抗原的保存不如冰凍切片。冰凍切片優(yōu)點(diǎn)：能避免石蠟切片因固定，脫水，浸蠟等對(duì)抗原的損失，較好的保存組織抗原的免疫活性，適用于不穩(wěn)定的抗原。缺點(diǎn)：不易保存（-80℃）；細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞抗原結(jié)構(gòu)，造成抗原的彌散使定位不準(zhǔn)確。能做石蠟切片的就能做冰凍切片，能做冰凍切片的不一定能做石蠟切片！17ppt課件技術(shù)要點(diǎn)石蠟切片能做石蠟切片的就能做冰凍切片，能做冰凍切片的技術(shù)要點(diǎn)抗原修復(fù)免疫組化在制片的過(guò)程中由于廣泛的蛋白交聯(lián)而使其組織的某些抗原決定簇發(fā)生遮蔽、致使免疫細(xì)胞化學(xué)的信號(hào)減弱或消失等不良效應(yīng)。使遮蔽的組織抗原決定簇重新暴露的方法，即抗原修復(fù)。抗原修復(fù)常用方法：①酶修復(fù)法（胰蛋白酶、胃蛋白酶和無(wú)花果酶）；②熱修復(fù)（高壓修復(fù)、微波爐修復(fù)、煮沸法）18ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗原修復(fù)18ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗體的保存分裝密封保存，避免對(duì)抗體的污染并注明標(biāo)記（批號(hào)、名稱、效價(jià)、量）根據(jù)廠家提供的保存條件保存避免反復(fù)凍融而使抗體效價(jià)降低19ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗體的保存19ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制20ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04結(jié)果判讀必須設(shè)立對(duì)照陽(yáng)性組織對(duì)照陰性組織對(duì)照陰性試劑對(duì)照（空白對(duì)照；替代對(duì)照；吸收試驗(yàn)；抑制試驗(yàn)）自身對(duì)照沒(méi)有對(duì)照染色的免疫組化染色結(jié)果是不可信的！21ppt課件結(jié)果判讀必須設(shè)立對(duì)照沒(méi)有對(duì)照染色的免疫組化染色結(jié)果是不可信的結(jié)果判讀抗原表達(dá)必須在特定部位陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞學(xué)特征可分為①胞膜型；②胞核型；③胞質(zhì)(漿)型；④微絨毛型；⑤復(fù)合型（胞膜-胞質(zhì)兼有，胞核-胞質(zhì)兼有，或微絨毛-胞質(zhì)兼有）等五種陽(yáng)性細(xì)胞類型。這與抗原所在部位相關(guān)聯(lián)，但應(yīng)注意排除因組織固定不好引起的抗原彌散假象，尤其是復(fù)合型圖像。不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，一概不能視為陽(yáng)性。22ppt課件結(jié)果判讀抗原表達(dá)必須在特定部位不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，一結(jié)果判讀陰性結(jié)果不能視為抗原不表達(dá)由于檢測(cè)方法靈敏度有高低之分，有時(shí)可因染色方法靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)，判斷時(shí)應(yīng)注意。盡量避開(kāi)出血、壞死及切片刀痕和界面邊緣細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)，特別是酶免疫標(biāo)記因?yàn)檫@類陽(yáng)性著色多系內(nèi)源干擾，或系人為因素所致。對(duì)免疫組化標(biāo)記結(jié)果的意義不能絕對(duì)化應(yīng)結(jié)合臨床資料、X線等影像學(xué)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析。23ppt課件結(jié)果判讀陰性結(jié)果不能視為抗原不表達(dá)23ppt課件結(jié)果判讀非特異染色免疫組化染色過(guò)程中產(chǎn)生的非靶抗原的呈色結(jié)果，屬假陽(yáng)性，又稱背景著色，能嚴(yán)重干擾免疫組化染色結(jié)果的正確判斷，應(yīng)竭力避免或減輕。原因涉及免疫組化染色流程的各個(gè)環(huán)節(jié)，可來(lái)自：①內(nèi)源性干擾(自發(fā)熒光、內(nèi)源酶、內(nèi)源性生物素等)；②試劑污染(質(zhì)量差，交叉反應(yīng)，F(xiàn)c受體干擾等)；③組織處理不當(dāng)(組織固定不及時(shí)或固定不良所導(dǎo)致的抗原彌散移位、洗滌不充分所導(dǎo)致的游離試劑殘留等)。特異性染色非特異性染色分布在特定的部位,具結(jié)構(gòu)性無(wú)分布規(guī)律，常出現(xiàn)在切片邊緣、刀痕或皺折部位及壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)域由于細(xì)胞內(nèi)抗原含量不同，所以顯色不均一不限于單個(gè)細(xì)胞，而是累及一片細(xì)胞，均勻顯色陽(yáng)性與陰性細(xì)胞相互交雜，同一切片上顯色強(qiáng)度不一細(xì)胞和周圍的結(jié)締組織均無(wú)區(qū)別的著色24ppt課件結(jié)果判讀非特異染色特異性染色非特異性染色分布在特定的部位,結(jié)果判讀結(jié)果表示著色程度（抗原含量）弱陽(yáng)性（+）┅1分中等陽(yáng)性（++）┅2分強(qiáng)陽(yáng)性（+++）┅3分陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量弱陽(yáng)性（+，指陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%以下）┅1分中等陽(yáng)性（++,指陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%—49%)┅2分強(qiáng)陽(yáng)性（+++，指陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在50%以上)┅3分目前多采用積分綜合計(jì)量。計(jì)算公式：兩者相乘（或相加）。大多主張<3者為陰性，>4者為陽(yáng)性，>6者為強(qiáng)陽(yáng)性，至少隨機(jī)觀察5-10個(gè)HPF，取其均值。以免疫酶標(biāo)記（HRP-DAB/H2O2）為例：則表現(xiàn)為淡黃色細(xì)顆粒、棕黃色顆粒和褐黃色粗顆粒，后者耀眼易見(jiàn)。圖像攝影，原則上多取強(qiáng)陽(yáng)性區(qū)域。25ppt課件結(jié)果判讀結(jié)果表示著色程度（抗原含量）弱陽(yáng)性（+）┅1分中等陽(yáng)CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制26ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04失敗原因假陰性常見(jiàn)原因27ppt課件失敗原因假陰性常見(jiàn)原因27ppt課件失敗原因假陽(yáng)性常見(jiàn)原因28ppt課件失敗原因假陽(yáng)性常見(jiàn)原因28ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制29ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04質(zhì)量控制試劑的質(zhì)量控制抗體特異性、敏感性測(cè)試，抗體最佳稀釋度的選擇，稀釋劑，抗體孵育溫度、時(shí)間。儀器的質(zhì)量控制相關(guān)技術(shù)設(shè)備、儀器和器具定期校對(duì)、消毒。操作過(guò)程質(zhì)量控制操作：步驟是否正確規(guī)范；每日之間、操作人員之間的變異；試劑復(fù)溶、狀態(tài)是否良好標(biāo)本：陰性、陽(yáng)性或自身組織對(duì)照三種類型質(zhì)控品，可用于監(jiān)控標(biāo)本制備、操作過(guò)程、染色步驟、試劑質(zhì)量等問(wèn)題引起的誤差。30ppt課件質(zhì)量控制試劑的質(zhì)量控制30ppt課件謝謝大家31ppt課件謝謝31ppt課件免疫組化技術(shù)簡(jiǎn)介32ppt課件免疫組化技術(shù)簡(jiǎn)介1ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制33ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制34ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04基本概念應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry,IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry,ICC)。免疫組化35ppt課件基本概念基本概念抗原（Antigen,Ag）一類能刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)生免疫應(yīng)答，即產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞等，并能與相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)或體外特異性結(jié)合的物質(zhì)?？贵w（Antibody,Ab）機(jī)體受抗原刺激后由B淋巴細(xì)胞，特別是漿細(xì)胞分泌產(chǎn)生的一種能與相應(yīng)抗原發(fā)生反應(yīng)的球蛋白，稱為免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）。36ppt課件基本概念抗原（Antigen,Ag）5ppt課件基本概念抗體的結(jié)構(gòu)V區(qū)氨基酸的種類和排列順序千變?nèi)f化，故可形成許多種具有不同結(jié)合抗原特異性的抗體。（抗原特異性，第一抗體）C區(qū)氨基酸的組成和排列在同一種屬動(dòng)物Ig同型L鏈和同一類H鏈中都比較恒定。制備第二抗體的重要基礎(chǔ)。一抗：鼠抗人二抗：羊抗鼠37ppt課件基本概念抗體的結(jié)構(gòu)V區(qū)氨基酸的種類和排列順序千變?nèi)f化，故可形基本概念單克隆抗體由同一克隆細(xì)胞產(chǎn)生，針對(duì)抗原分子上某一單個(gè)抗原決定簇的特異性抗體。多克隆抗體由不同細(xì)胞產(chǎn)生，其免疫化學(xué)特性不同，能夠識(shí)別抗原表面多種抗原決定簇的多種抗體的混合物?；蚬こ炭贵w在基因水平上對(duì)Ig分子進(jìn)行切割、拼接或修飾，甚至是在人工全合成后導(dǎo)入受體細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生的新型抗體。38ppt課件基本概念單克隆抗體7ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制39ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04基本原理抗原顯色抗體間接法直接法PAP法LSAB法40ppt課件基本原理抗原顯色抗體間接法直接法PAP法LSAB法9ppt課基本原理顯色系統(tǒng)酶免疫組化染色中的常用的酶及顯色底物辣根過(guò)氧化物酶/HRP：DAB、AEC堿性磷酸酶/AP：AP-Red、NBT/BCIP酶的選擇HRP染色結(jié)果比AP染色結(jié)果保存時(shí)間長(zhǎng)含有內(nèi)源性HRP的組織切片：首選標(biāo)記酶為APAP和HRP結(jié)合可進(jìn)行雙重或3重免疫組化標(biāo)記，對(duì)比清晰41ppt課件基本原理顯色系統(tǒng)10ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制42ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04操作流程43ppt課件操作流程12ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制44ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)免疫原理的選擇一抗（屬種、單/多抗、濃縮/即用型）二抗（屬種、標(biāo)記方法）顯色方式45ppt課件技術(shù)要點(diǎn)免疫原理的選擇14ppt課件技術(shù)要點(diǎn)取材組織切片：冷凍切片、石蠟切片（最常用）；大小（1×1×0.5cm）；取病變組織與正常組織交界處；避免對(duì)組織標(biāo)本的損傷和擠壓。印片：肝、脾、淋巴結(jié)等器官或組織(經(jīng)新鮮標(biāo)本最大面積剖開(kāi)，充分暴露病灶，將載玻片輕輕壓與組織切面，細(xì)胞粘附于玻片上，然后固定）（缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻，細(xì)胞有重疊）各種體液、穿刺液：可直接涂片（血液、組織液等）或離心后涂片（細(xì)胞少腦脊液、腹水等）。培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮細(xì)胞離心后涂片；貼壁細(xì)胞可爬片。取材時(shí)間要早（24小時(shí)以內(nèi)），避免組織自溶，使抗原變性消失或嚴(yán)重彌散。組織切塊厚度不易超過(guò)0.5cm，以便固定液的及時(shí)滲透及脫水。46ppt課件技術(shù)要點(diǎn)取材取材時(shí)間要早（24小時(shí)以內(nèi)），避免組織自溶，使抗技術(shù)要點(diǎn)固定目的：①凝固蛋白，終止細(xì)胞內(nèi)酶的作用，防止細(xì)胞自溶；固定細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)；②保持組織細(xì)胞的抗原性；③防止細(xì)胞層脫落；④去除細(xì)胞內(nèi)的脂類（妨礙抗體結(jié)合）；⑤防腐。注意事項(xiàng)：①組織塊不宜過(guò)大；②固定液的量一般以組織塊大小的30倍為宜；③必須選擇對(duì)組織滲透力強(qiáng)，同時(shí)又不致使組織過(guò)度收縮或膨脹的試劑；④固定時(shí)間一般以24小時(shí)為宜。固定液的選擇：所有的標(biāo)本固定必須根據(jù)其性質(zhì)及所進(jìn)行的組織化學(xué)反應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌?。如甲醇、丙酮、甲醛、乙醇等。甲醛固定后，抗原容易被掩蓋，形成醛鍵或羧甲基，使蛋白交聯(lián)封閉部分抗原表位。47ppt課件技術(shù)要點(diǎn)固定甲醛固定后，抗原容易被掩蓋，形成醛鍵或羧甲基，使技術(shù)要點(diǎn)石蠟切片優(yōu)點(diǎn)：對(duì)組織結(jié)構(gòu)形態(tài)保存好，對(duì)組織的定位很準(zhǔn)確，是觀察組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的理想方法，可以用于回顧性研究。缺點(diǎn)：抗原常被封閉和破壞。對(duì)抗原的保存不如冰凍切片。冰凍切片優(yōu)點(diǎn)：能避免石蠟切片因固定，脫水，浸蠟等對(duì)抗原的損失，較好的保存組織抗原的免疫活性，適用于不穩(wěn)定的抗原。缺點(diǎn)：不易保存（-80℃）；細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞抗原結(jié)構(gòu)，造成抗原的彌散使定位不準(zhǔn)確。能做石蠟切片的就能做冰凍切片，能做冰凍切片的不一定能做石蠟切片！48ppt課件技術(shù)要點(diǎn)石蠟切片能做石蠟切片的就能做冰凍切片，能做冰凍切片的技術(shù)要點(diǎn)抗原修復(fù)免疫組化在制片的過(guò)程中由于廣泛的蛋白交聯(lián)而使其組織的某些抗原決定簇發(fā)生遮蔽、致使免疫細(xì)胞化學(xué)的信號(hào)減弱或消失等不良效應(yīng)。使遮蔽的組織抗原決定簇重新暴露的方法，即抗原修復(fù)。抗原修復(fù)常用方法：①酶修復(fù)法（胰蛋白酶、胃蛋白酶和無(wú)花果酶）；②熱修復(fù)（高壓修復(fù)、微波爐修復(fù)、煮沸法）49ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗原修復(fù)18ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗體的保存分裝密封保存，避免對(duì)抗體的污染并注明標(biāo)記（批號(hào)、名稱、效價(jià)、量）根據(jù)廠家提供的保存條件保存避免反復(fù)凍融而使抗體效價(jià)降低50ppt課件技術(shù)要點(diǎn)抗體的保存19ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04技術(shù)要點(diǎn)05結(jié)果判讀06失敗原因07質(zhì)量控制51ppt課件CONTENTS目錄01基本概念02基本原理03操作流程04結(jié)果判讀必須設(shè)立對(duì)照陽(yáng)性組織對(duì)照陰性組織對(duì)照陰性試劑對(duì)照（空白對(duì)照；替代對(duì)照；吸收試驗(yàn)；抑制試驗(yàn)）自身對(duì)照沒(méi)有對(duì)照染色的免疫組化染色結(jié)果是不可信的！52ppt課件結(jié)果判讀必須設(shè)立對(duì)照沒(méi)有對(duì)照染色的免疫組化染色結(jié)果是不可信的結(jié)果判讀抗原表達(dá)必須在特定部位陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞學(xué)特征可分為①胞膜型；②胞核型；③胞質(zhì)(漿)型；④微絨毛型；⑤復(fù)合型（胞膜-胞質(zhì)兼有，胞核-胞質(zhì)兼有，或微絨毛-胞質(zhì)兼有）等五種陽(yáng)性細(xì)胞類型。這與抗原所在部位相關(guān)聯(lián)，但應(yīng)注意排除因組織固定不好引起的抗原彌散假象，尤其是復(fù)合型圖像。不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，一概不能視為陽(yáng)性。53ppt課件結(jié)果判讀抗原表達(dá)必須在特定部位不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，一結(jié)果判讀陰性結(jié)果不能視為抗原不表達(dá)由于檢測(cè)方法靈敏度有高低之分，有時(shí)可因染色方法靈敏度不夠，而導(dǎo)致陰性反應(yīng)，判斷時(shí)應(yīng)注意。盡量避開(kāi)出血、壞死及切片刀痕和界面邊緣細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)，特別是酶免疫標(biāo)記因?yàn)檫@類陽(yáng)性著色多系內(nèi)源干擾，或系人為因素所致。對(duì)免疫組化標(biāo)記結(jié)果的意義不能絕對(duì)化應(yīng)結(jié)合臨床資料、X線等影像學(xué)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析。54ppt課件結(jié)果判讀陰性結(jié)果不能視為抗原不表達(dá)23ppt課件結(jié)果判讀非特異染色免疫組化染色過(guò)程中產(chǎn)生的非靶抗原的呈色結(jié)果，屬假陽(yáng)性，又稱背景著色，能嚴(yán)重干擾免疫組化染色結(jié)果的正確判斷，應(yīng)竭力避免或減輕。原因涉及免疫組化染色流程的各個(gè)環(huán)節(jié)，可來(lái)自：①內(nèi)源性干擾(自發(fā)熒光、內(nèi)源酶、內(nèi)源性生物素等)；②試劑污染(質(zhì)量差，交叉反應(yīng)，F(xiàn)c受體干擾等)；③組織處理不當(dāng)(組織固定不及時(shí)或固定不良所導(dǎo)致的抗原彌散移位、洗滌不充分所導(dǎo)致的游離試劑殘留等)。特異性染色非特異性染色分布在特定的部位,具結(jié)構(gòu)性無(wú)分布規(guī)律，常出現(xiàn)在切片邊緣、刀痕或皺折部位及壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)域由于細(xì)胞內(nèi)抗原含量不同，所以顯色不均一不限于單個(gè)細(xì)胞，而是累及一片細(xì)胞，均勻顯色陽(yáng)性與陰性細(xì)胞相互