瑞濟(jì)冷凍干燥生物羊膜特點(diǎn)與應(yīng)用

瑞濟(jì)

冷凍干燥生物羊膜

特點(diǎn)與應(yīng)用1940年,DeRotth將新鮮羊膜用于移植部分取得成功保存人羊膜治療眼表疾病首先見于Kim等1995的年的報(bào)道。羊膜-理想的眼科生物材料羊膜—理想的眼科生物材料JuanF.BatlleM.D.Amnioticmembraneshavebecomeanimportantsubstituteforconjunctivaltissuesinthemanagementofocularsurfacedisorders.Thehistologiccharacteristicsofthesemembranes,ourabilitytopreservethemwithminimalchallengetothehost’simmunesystem,anditseaseofpreparationandtransplantationhavebecomeatremendousassettotheclinicalophthalmologistandtotheanteriorsegmentsurgeon.Amnioticmembraneswererecentlyrediscoveredthroughtheeffortsandcollaborationofresearchersinthefieldofanteriorsegmentsurgeryfromdifferentpartsoftheworld.

自2000年以來羊膜已成功應(yīng)用于：瞼球粘連、結(jié)膜囊缺失、翼狀胬肉、角膜潰瘍、化學(xué)灼傷和熱燒傷、燙傷。逐步向青光眼青光眼等疾病的治療領(lǐng)域擴(kuò)展。國內(nèi)對(duì)羊膜的認(rèn)識(shí)與運(yùn)用存在的問題無標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品無權(quán)威性的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)法律保障--醫(yī)患糾紛羊膜保存時(shí)間短，運(yùn)輸不方便不能隨時(shí)滿足臨床要求潛在危險(xiǎn)：肝炎、愛滋、梅毒、衣原體等病原體羊膜的特性取材容易，使用方便，可在低溫下保存。不含有HLA-A、B或DR抗原，因此，移植后幾乎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。羊膜細(xì)胞能分泌多種抗體，多種溶菌酶和補(bǔ)體，具有抗病毒和殺菌作用與唇粘膜，鼻粘膜移植相比，移植后發(fā)生感染的風(fēng)險(xiǎn)較小。羊膜的特性羊膜含有抑制細(xì)胞因子表達(dá)和調(diào)節(jié)角膜細(xì)胞凋亡的成分，可以避免炎性細(xì)胞，細(xì)胞因子誘發(fā)的角膜基質(zhì)細(xì)胞和膠原纖維的過度增生以及新生血管的形成，抑制局部炎癥反應(yīng)，阻止新生血管和疤痕形成。羊膜中的基底膜含有IV、V型膠原和層粘連蛋白能分泌多種細(xì)胞因子，如堿性成纖維生長因子，肝細(xì)胞生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子等，在傷口愈合中起重要作用。羊膜具有較強(qiáng)的抗粘連性，對(duì)嚴(yán)重OSD所引起的瞼球粘連與結(jié)膜穹窿縮窄十分有利。羊膜的組織結(jié)構(gòu)制備羊膜時(shí)，將絨毛膜去掉。合格的羊膜材料只包括單層上皮細(xì)胞，基底膜，無血管和基質(zhì)成分（如成纖維細(xì)胞、膠原和其他非細(xì)胞成分）。羊膜光滑、無血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定彈性。正常羊膜厚約，是人體中最厚的基底膜。羊膜的組織結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞層：由單層無纖毛立方上皮細(xì)胞組成基底層：位于上皮細(xì)胞下的網(wǎng)狀組織致密層纖維母細(xì)胞層海綿層羊膜的組織結(jié)構(gòu)羊膜的作用機(jī)制羊膜移植的作用機(jī)制主要有5個(gè)方面延長上皮細(xì)胞的生命，維持其克隆形成刺激上皮細(xì)胞的分化在置于含有成纖維細(xì)胞的結(jié)膜時(shí)能刺激杯狀細(xì)胞的分化通過抗蛋白酶的活性，清除炎癥細(xì)胞能抑制轉(zhuǎn)化因子的信號(hào)傳遞和抑制正常成纖維細(xì)胞分化為肌成纖維細(xì)胞羊膜在眼表重建中的作用基底膜為干細(xì)胞提供“肥沃的土壤”。其各種旦白成分能促進(jìn)上皮分化，增生。增強(qiáng)旦白粘附性，在上皮創(chuàng)傷愈合中作用重大。羊膜含有的旦白酶抑制因子通過抑制旦白酶而發(fā)揮其抑炎作用。同時(shí)羊膜含有的抑制細(xì)胞因子表達(dá)和細(xì)胞調(diào)亡的成分，可避免炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子誘發(fā)的角膜基質(zhì)細(xì)胞和膠原纖維的過度增生，從而抑制局部炎癥，促進(jìn)表面愈合而不留瘢痕。5個(gè)方面的臨床效果加速上皮化維持正常上皮表型減輕炎癥反應(yīng)減輕血管化減少瘢痕形成等瑞濟(jì)生物羊膜按照嚴(yán)格的國家標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)……瑞濟(jì)生物羊膜低溫冷凍干燥技術(shù)鈷60輻照滅菌技術(shù)羊膜細(xì)胞處于“休眠狀態(tài)”延長其保存期

實(shí)現(xiàn)生物羊膜的產(chǎn)業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化，解決生物羊膜制備的安全性和常溫保存、運(yùn)輸?shù)碾y題滿足臨床需要保護(hù)液處理后預(yù)凍抽真空水分升華凍干羊膜對(duì)溫度的控制壓力的控制溫度的控制時(shí)間的控制冷凍干燥工藝過程羊膜冷凍干燥的概念盡可能的保存羊膜原有的生物學(xué)性能，使羊膜在冷凍的條件下進(jìn)行真空干燥。冷凍干燥羊膜的質(zhì)量要求保持羊膜原有的組織結(jié)構(gòu)、原有的基本化學(xué)組成、適用于臨床要求的組織韌性和生理pH值、含水量低適于常溫長期保存。冷凍干燥的控制１０萬級(jí)凈化車間生產(chǎn)環(huán)境羊膜來源的安全控制取健康剖宮產(chǎn)婦的胎盤組織排除乙肝、丙肝、梅毒及獲得性免疫缺陷病毒、巨細(xì)胞病毒、衣原體等對(duì)孕婦進(jìn)行跟蹤檢測，檢測結(jié)果記入每個(gè)羊膜的生產(chǎn)記錄檔案羊膜來源的安全控制對(duì)妊娠第三個(gè)月的婦女進(jìn)行檢測，了解其家族史情況，對(duì)符合要求的健康者跟蹤服務(wù)。取羊膜第一步（初檢）已跟蹤孕婦在產(chǎn)前再次檢測，各項(xiàng)檢查結(jié)果陰性者，在其知情的情況下，剖腹產(chǎn)后取羊膜取羊膜第二步（復(fù)檢）確認(rèn)被采集的產(chǎn)婦在第三個(gè)月及產(chǎn)前各檢測結(jié)果均是陰性后，再將羊膜進(jìn)行加工制備。取羊膜第三步（核實(shí)）被采集產(chǎn)婦的詳細(xì)資料，每片羊膜有安全的來源。取羊膜第四步（備案）質(zhì)量保證裁剪包裝6種型號(hào)規(guī)格，或按客戶要求特制單片、鋁塑袋密封包裝滅菌鈷-60輻照滅菌：可降低羊膜的免疫原性；徹底殺滅可能存在的所有致病原，無污染；消除病毒潛伏期的危害。質(zhì)檢檢測項(xiàng)目包括規(guī)格、外觀、水份、拉力、酸堿度、菌檢，合格品入庫質(zhì)量保證輻照滅菌技術(shù)

國家藥監(jiān)局對(duì)輻照滅菌中針對(duì)HIV、HBV、HCV、梅毒等病毒殺滅的有效性進(jìn)行了反復(fù)放射學(xué)與病毒學(xué)專家論證，確認(rèn)了鈷６０輻照生物羊膜可以達(dá)到高水平的病毒安全性。鈷60輻照滅菌權(quán)威論證專家病毒學(xué)專家－軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所消毒研究室主任、研究員中國消毒學(xué)雜志主編張文福醫(yī)學(xué)博士放射醫(yī)學(xué)和輻射化學(xué)專家－蘇州大學(xué)輻照研究所所長朱南康教授病毒學(xué)專家－中國科學(xué)院武漢病毒所所長胡志紅研究員病毒學(xué)專家－江西醫(yī)學(xué)院病毒學(xué)教研室主任鄭民實(shí)教授質(zhì)量保證瑞濟(jì)羊膜理化性能檢測：

外觀：清潔、透明、無雜質(zhì)、無破損水份：水份＜10%縫合拉力：應(yīng)不小于1.0g，5分鐘酸堿度測定：羊膜浸出液與同批空白對(duì)照液之間，PH值之差不超過1.5質(zhì)量保證抽樣檢測標(biāo)準(zhǔn)按國家標(biāo)準(zhǔn)GB2828-1987逐批檢查計(jì)數(shù)抽樣程序及抽樣表，對(duì)每批羊膜進(jìn)行逐批檢驗(yàn)，由質(zhì)檢部執(zhí)行。按國家標(biāo)準(zhǔn)GB2829-1987周期檢查計(jì)數(shù)抽樣程序及抽樣表，對(duì)羊膜進(jìn)行型式檢驗(yàn)（注冊(cè)檢驗(yàn)和周期檢驗(yàn)），由國家指定的檢驗(yàn)部門執(zhí)行。產(chǎn)品質(zhì)量檢測標(biāo)準(zhǔn)按本企業(yè)制定的注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)：YZB/國1059-2003進(jìn)行檢測，檢測內(nèi)容包括羊膜的物理性能、化學(xué)性能和生物學(xué)性能。質(zhì)量檢測保證國家食品藥品監(jiān)督管理局濟(jì)南醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心檢測

瑞濟(jì)羊膜生物安全性評(píng)價(jià)（試驗(yàn)觀察期為1～２周）無菌檢查：按GB/T14233.2無菌檢查法檢驗(yàn)細(xì)胞毒性試驗(yàn)：按照GB/T16886.5中規(guī)定的方法皮膚過敏試驗(yàn)：按照GB/T16886.10中第六章的方法遺傳性毒性試驗(yàn)：按GB/T16886.3進(jìn)行AMES試驗(yàn)植入后局部反應(yīng)：按照GB/T16886.6中第四章皮下組織植入試驗(yàn)方法進(jìn)行短期植入試驗(yàn)各項(xiàng)檢測結(jié)果均合格國家食品藥品監(jiān)督管理局濟(jì)南醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心檢驗(yàn)報(bào)告瑞濟(jì)冷凍干燥生物羊膜--與新鮮羊膜的比較新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜的各層組織結(jié)構(gòu)相同生物羊膜組織的透射電鏡檢測生物羊膜組織的掃描電鏡檢測新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜均保存了上皮細(xì)胞層

上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞生物羊膜組織化學(xué)的檢測（免疫組化試驗(yàn)）

膠原Ⅳ:ZyMed公司、鼠抗人單克隆抗體

冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜相比較，組織結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生明顯變化新鮮羊膜冷凍干燥羊膜膠原層膠原層上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞瑞濟(jì)冷凍干燥生物羊膜保持了新鮮羊膜原有組織結(jié)構(gòu)和原有的基本化學(xué)組成；具有適用于臨床要求的組織韌性和生理pH值；含水量低適于常溫長期保存；抗原性低而生物安全性高；無致病原，無污染，無毒副作用等。對(duì)于臨床應(yīng)用的意義解決了生物羊膜制備的安全性和常溫保存、運(yùn)輸?shù)碾y題，滿足臨床應(yīng)用和推廣方便的要求實(shí)現(xiàn)生物羊膜的產(chǎn)業(yè)化和標(biāo)準(zhǔn)化為眼科醫(yī)生在眼表重建和青光眼手術(shù)領(lǐng)域提供了有力武器。協(xié)助醫(yī)生提高手術(shù)成功率和手術(shù)質(zhì)量，造福患者。臨床試驗(yàn)經(jīng)藥監(jiān)局審查批準(zhǔn)的臨床試驗(yàn)方案A組用新鮮羊膜B組用瑞濟(jì)冷凍干燥輻照羊膜臨床試驗(yàn)

病種A組B組合計(jì)復(fù)發(fā)翼狀胬肉383674

眼表燒傷11617

青光眼156

瞼球粘連459Stevens-Johnson綜合征112

角膜潰瘍5813

合計(jì)6061121病種分布情況臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)結(jié)果組別顯效有效無效合計(jì)

A1440660B1939361合計(jì)33799121統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果：校正卡方檢驗(yàn)，Ｘ２＝188.012，Ｐ>0.05臨床試驗(yàn)結(jié)論“瑞濟(jì)生物羊膜”應(yīng)用于眼表創(chuàng)傷修復(fù)，療效顯著，使用方便。達(dá)到預(yù)期的研究目標(biāo)“瑞濟(jì)生物羊膜”——冷凍干燥羊膜的生物安全性、臨床有效性和使用的方便性，均達(dá)到國際領(lǐng)先水平。手術(shù)適應(yīng)癥各種原因造成的結(jié)膜和角膜缺損翼狀胬肉切除后的結(jié)膜創(chuàng)面眼表化學(xué)傷、熱灼傷瞼球粘連和眼表腫瘤切除造成的結(jié)膜缺損青光眼手術(shù)：濾過泡修補(bǔ)術(shù)、鞏膜瓣下植入術(shù)新鮮羊膜與冷凍干燥羊膜的比較對(duì)比項(xiàng)目新鮮剝制羊膜冷凍干燥羊膜質(zhì)量保障無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)制作、無保障按國家標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)、有保障致病原污染存在不存在保存方式低溫保存，儲(chǔ)存不方便常溫保存保存時(shí)間幾天一年使用方式臨時(shí)剝制，取材不便隨時(shí)可使用

第一個(gè)獲得國家級(jí)生產(chǎn)批文的羊膜制品經(jīng)過確定生產(chǎn)工藝制備的瑞濟(jì)生物羊膜的理化性能、安全性