長白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營養(yǎng)特性研究課件

延邊大學本科畢業(yè)論文長白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營養(yǎng)特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain延邊大學本科畢業(yè)論文長白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營養(yǎng)特性主要內(nèi)容材料與方法前言12結(jié)果與分析3結(jié)論4主要內(nèi)容材料與方法前言12結(jié)果與分析3結(jié)2

前言前言3繡球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名繡球蕈、對花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窩菌、白繡球花、繡球蘑。分類學上隸屬于擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、繡球菌科、繡球菌屬（Sparassis）。繡球菌[Sparassiacrispa（W4 繡球菌子實體肉質(zhì)潔白細嫩，有茴香氣味，鮮美異常，營養(yǎng)價值高，含有17種氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。 繡球菌子實體肉質(zhì)潔白細嫩，有茴香氣味，鮮美異常，營養(yǎng)價值高5藥用價值增加白血球，提高人體免疫力，對癌細胞具有直接殺傷作用繡球菌素具抗真菌活性治療高血壓、糖尿病、肝病等多種疾病藥用價值6

本試驗對采自長白山林區(qū)的野生繡球菌進行組織分離，并研究其菌絲體生長的營養(yǎng)條件，篩選出適宜長白山林區(qū)野生繡球菌菌絲生長的最佳營養(yǎng)條件，為開發(fā)、利用這一野生資源提供理論依據(jù)。本試驗對采自長白山林區(qū)的野生繡球菌進行組織分7

材料材料8本研究所用野生繡球菌標本由延邊大學農(nóng)學院食用真菌實驗室課題組成員于2010年7月采自長白山林區(qū)，由吉林農(nóng)業(yè)大學圖力古爾教授鑒定。將標本帶回室內(nèi)自然陰干，干燥后即可用于子實體組織分離菌種，純化培養(yǎng)，獲得試驗所用菌株。試驗材料本研究所用野生繡球菌標本由延邊大學農(nóng)學9供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄20g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然。供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄20g，10試驗方法試驗方法111.組織分離1.1材料及用具野生繡球菌型大、顏色正、無霉、無蟲害的子實體，無菌超凈工作臺，斜面培養(yǎng)基（10管），剪刀，鑷子，酒精燈1.2組織分離組織分離過程在超凈工作臺內(nèi)，整個過程要遵循無菌操作。1.3純化培養(yǎng)1.組織分離1.1材料及用具12

剪刀剪取部分繡球菌子實體75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子實體約1min無菌剪刀將四周邊緣剪掉選取遠離基部的組織長≈0.5㎝寬≈0.2㎝無菌鑷子夾取酒精燈外焰上方2-3次接種于斜面培養(yǎng)基中下部25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)12天左右新生長出的菌絲接種塊接種于平板培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)室純化培養(yǎng)所得菌絲接種于斜面培養(yǎng)基上25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)菌絲長滿試管后4℃冰箱中保存剪刀剪取部分75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的無菌剪132.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響碳源處理：分別設(shè)置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖包括葡萄糖各20g為碳源處理，以不加任何碳源為對照。重復次數(shù)：5次測定項目：菌絲長速，菌絲長勢，菌落色澤及菌落邊緣等特征。數(shù)據(jù)分析：采用Excel2003進行整理，用SPSS11.5軟件中Duncan檢驗進行差異顯著性分析。2.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響碳源處理：分別設(shè)置果14氮源處理：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為標準，分別設(shè)置酵母膏、麩皮、黃豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g為不同氮源處理，以不加任何氮源為對照。重復次數(shù)、測定項目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。3.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響氮源處理：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為標準，分別設(shè)置酵母膏、麩皮、黃豆粉、15無機鹽處理：分別設(shè)置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g為不同無機鹽處理，以不加任何無機鹽為對照。重復次數(shù)、測定項目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。4.不同無機鹽對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響無機鹽處理：分別設(shè)置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、Cu16結(jié)果與分析結(jié)果與分析17

圖2分離純化后的繡球菌菌株1.野生繡球菌組織分離圖2分離純化后的繡球菌菌株1.野生繡球菌組織分離182.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長勢壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個重復的平均值±SE。表1不同碳源對繡球菌菌絲體生長的影響Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa2.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀19圖3不同碳源對繡球菌菌絲體生長影響Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa圖3不同碳源對繡球菌菌絲體生長影響203.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響表2不同氮源對繡球菌菌絲體生長的影響Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長勢壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫英文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個重復的平均值±SE。3.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響表2不同氮源對繡球21圖4不同氮源對繡球菌菌絲體生長的影響Fig.4TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa圖4不同氮源對繡球菌菌絲體生長的影響22表3不同無機鹽對繡球菌菌絲體生長的影響Table3TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa4.不同無機鹽對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長勢壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫英文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個重復的平均值±SE。表3不同無機鹽對繡球菌菌絲體生長的影響4.不同無機鹽對繡球23圖5不同無機鹽對繡球菌菌絲體生長的影響Fig.5TheeffectsofdifferentInorganiconthegrowthofmyceliumofSparassiacrispa圖5不同無機鹽對繡球菌菌絲體生長的影響24結(jié)論結(jié)論251.采用組織分離純化法可以得到長白山野生繡球菌菌株。1.采用組織分離純化法可以得到長白山野生繡球菌菌株。26采用組織分離純化法可以得到長白山野生繡球菌菌株。

繡球菌菌絲體能利用多種碳源、氮源、無機鹽。最佳碳源為淀粉，其次是乳糖和葡萄糖；最佳氮源為酵母膏，其次是蛋白胨；最佳無機鹽為硫酸鈣，其次是硫酸鎂和硫酸鋅，硫酸銅抑制繡球菌菌絲體生長。采用組織分離純化法可以得到長白山野生繡球菌菌株。27ThankYou!請各位老師批評指正！ThankYou!請各位老師批評指正！延邊大學本科畢業(yè)論文長白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營養(yǎng)特性研究TheMyceliumTissueIsolationandTheStudyonNutritionalCharacteristicsofWideSparassiacrispaofChangbaiMountain延邊大學本科畢業(yè)論文長白山野生繡球菌菌絲體組織分離及營養(yǎng)特性主要內(nèi)容材料與方法前言12結(jié)果與分析3結(jié)論4主要內(nèi)容材料與方法前言12結(jié)果與分析3結(jié)30

前言前言31繡球菌[Sparassiacrispa（Wulf.）Fr.]又名繡球蕈、對花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窩菌、白繡球花、繡球蘑。分類學上隸屬于擔子菌亞門、層菌綱、非褶菌目、繡球菌科、繡球菌屬（Sparassis）。繡球菌[Sparassiacrispa（W32 繡球菌子實體肉質(zhì)潔白細嫩，有茴香氣味，鮮美異常，營養(yǎng)價值高，含有17種氨基酸，基本包含所有的必需氨基酸。 繡球菌子實體肉質(zhì)潔白細嫩，有茴香氣味，鮮美異常，營養(yǎng)價值高33藥用價值增加白血球，提高人體免疫力，對癌細胞具有直接殺傷作用繡球菌素具抗真菌活性治療高血壓、糖尿病、肝病等多種疾病藥用價值34

本試驗對采自長白山林區(qū)的野生繡球菌進行組織分離，并研究其菌絲體生長的營養(yǎng)條件，篩選出適宜長白山林區(qū)野生繡球菌菌絲生長的最佳營養(yǎng)條件，為開發(fā)、利用這一野生資源提供理論依據(jù)。本試驗對采自長白山林區(qū)的野生繡球菌進行組織分35

材料材料36本研究所用野生繡球菌標本由延邊大學農(nóng)學院食用真菌實驗室課題組成員于2010年7月采自長白山林區(qū)，由吉林農(nóng)業(yè)大學圖力古爾教授鑒定。將標本帶回室內(nèi)自然陰干，干燥后即可用于子實體組織分離菌種，純化培養(yǎng)，獲得試驗所用菌株。試驗材料本研究所用野生繡球菌標本由延邊大學農(nóng)學37供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄20g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨2g，MgSO40.5g，瓊脂20g，加水至1000ml，pH自然。供試培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄20g，38試驗方法試驗方法391.組織分離1.1材料及用具野生繡球菌型大、顏色正、無霉、無蟲害的子實體，無菌超凈工作臺，斜面培養(yǎng)基（10管），剪刀，鑷子，酒精燈1.2組織分離組織分離過程在超凈工作臺內(nèi)，整個過程要遵循無菌操作。1.3純化培養(yǎng)1.組織分離1.1材料及用具40

剪刀剪取部分繡球菌子實體75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的子實體約1min無菌剪刀將四周邊緣剪掉選取遠離基部的組織長≈0.5㎝寬≈0.2㎝無菌鑷子夾取酒精燈外焰上方2-3次接種于斜面培養(yǎng)基中下部25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)12天左右新生長出的菌絲接種塊接種于平板培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)室純化培養(yǎng)所得菌絲接種于斜面培養(yǎng)基上25℃恒溫培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)菌絲長滿試管后4℃冰箱中保存剪刀剪取部分75%酒精棉擦拭2-3遍酒精棉包住剪取的無菌剪412.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響碳源處理：分別設(shè)置果糖、淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、麥芽糖包括葡萄糖各20g為碳源處理，以不加任何碳源為對照。重復次數(shù)：5次測定項目：菌絲長速，菌絲長勢，菌落色澤及菌落邊緣等特征。數(shù)據(jù)分析：采用Excel2003進行整理，用SPSS11.5軟件中Duncan檢驗進行差異顯著性分析。2.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響碳源處理：分別設(shè)置果42氮源處理：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為標準，分別設(shè)置酵母膏、麩皮、黃豆粉、KNO3、(NH4)2SO4、NH4Cl包括蛋白胨各2g為不同氮源處理，以不加任何氮源為對照。重復次數(shù)、測定項目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。3.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響氮源處理：以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為標準，分別設(shè)置酵母膏、麩皮、黃豆粉、43無機鹽處理：分別設(shè)置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、CuSO4包括MgSO4各0.5g為不同無機鹽處理，以不加任何無機鹽為對照。重復次數(shù)、測定項目、數(shù)據(jù)分析同碳源處理。4.不同無機鹽對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響無機鹽處理：分別設(shè)置MnSO4、CaSO4、ZnSO4、Cu44結(jié)果與分析結(jié)果與分析45

圖2分離純化后的繡球菌菌株1.野生繡球菌組織分離圖2分離純化后的繡球菌菌株1.野生繡球菌組織分離462.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長勢壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個重復的平均值±SE。表1不同碳源對繡球菌菌絲體生長的影響Table1TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa2.不同碳源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響注：“+”表示菌絲稀47圖3不同碳源對繡球菌菌絲體生長影響Fig.3TheeffectsofdifferentcarbonsourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa圖3不同碳源對繡球菌菌絲體生長影響483.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響表2不同氮源對繡球菌菌絲體生長的影響Table2TheeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgrowthofSparassiacrispa注：“+”表示菌絲稀疏、纖弱，“++”表示菌絲密、長勢壯，“+++”表示菌絲濃密、粗壯。小寫英文字母表示P<0.05水平上的差異顯著性。數(shù)據(jù)為5個重復的平均值±SE。3.不同氮源對繡球菌菌絲體培養(yǎng)特性的影響表2不同氮源對繡球49圖4不同氮源對繡球菌菌絲體生長的影響Fig.4Theeffectsofdifferentnitrogensourcesonmyceliumgro