薄層色譜法注意事項(xiàng)課件

薄層色譜法檢驗(yàn)注意事項(xiàng)1定義薄層色譜法系指以適宜的固定相涂布于玻璃板、鋁箔片或聚酯薄膜上使成一均勻的薄層，將供試品與相應(yīng)的對照物點(diǎn)于薄層板的一端，以適宜的溶劑置展開容器內(nèi)展開，使供試品所含的相應(yīng)成分分離,采用適宜的顯色劑或顯色方法顯色，將供試品色譜與對照物色譜相比較，或采用薄層掃描儀掃描，以進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定的方法。2薄層板的制備將1份固定相和3份水(或加有黏合劑如0.2～0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液)在研缽中向同一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入準(zhǔn)備好的玻璃板上,用潔凈玻棒涂鋪成一個(gè)均勻的薄層,再稍加振動,使整板薄層均勻。0.2～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液:稱取2—5g羧甲基纖維素鈉,加1升水煮沸溶解,過濾,靜置，用時(shí)取上清液。110℃活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。3點(diǎn)樣盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。薄層色譜用于定量時(shí)，點(diǎn)樣是最主要的誤差來源。供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點(diǎn)樣的同時(shí)，樣品在原點(diǎn)就可是成環(huán)形展開，原點(diǎn)直徑的擴(kuò)散促進(jìn)了這種展開，Kaiser稱之為“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對隨后的先行展開造成很不利的影響。供試液的溶劑在原點(diǎn)的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時(shí)更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對色譜的影響也不可低估。因此點(diǎn)樣時(shí)的同步干燥或繼后干燥以除去原點(diǎn)殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強(qiáng)烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進(jìn)了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動相在展開時(shí)對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點(diǎn)拖尾的原因之一）。5展開浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中)，上行展距一般為8～15cm，高效板上行展距為5～8cm.若展距過長，各個(gè)物質(zhì)的分離更大，能夠提高分離效果。但是斑點(diǎn)的擴(kuò)散也更大，影響了斑點(diǎn)的集中。6展開劑的配置選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，

7展開系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快。8薄層掃描法——定義系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查或含量測定的方法。10