生物毒性測試儀說明書

生物毒性測試儀說明書生物毒性測試儀說明書生物毒性測試儀說明書V:1.0精細整理，僅供參考生物毒性測試儀說明書日期：20xx年X月生物毒性測試儀說明書DXY-3型智能化生物毒性(污染)測試儀使用說明書一、儀器特點DXY-3型智能化生物毒性(污染)測試儀是在DXY-2型生物毒性(污染)測試儀基礎(chǔ)上改進，并加人智能化功能的新型號機，與國際上同類產(chǎn)品相當，但是，價格低廉，發(fā)光菌能保證供應。該儀器是基于毒性物質(zhì)對特殊的發(fā)光細菌的發(fā)光度的抑制作用而設(shè)計的，它通過測定發(fā)光細菌發(fā)光度的變化，量度被測環(huán)境樣品中由重金屬和其它有機污染物所造成的急性生物毒性。與傳統(tǒng)的魚、蚤和其它水生生物作為生物檢測方法相比，發(fā)光細菌法簡便、快速、靈敏、適應性強、重復性好、精度高、費用低、用途廣，凡有毒化合物、廢水、廢棄物的生物毒性均可測定。因此，它是對受污染環(huán)境的生物毒性檢測進行初篩、監(jiān)測較為理想的工具，也是其他領(lǐng)域開拓新的實驗測試方法的新工具。該儀器可測量和顯示待測液的毒性含量，測量所得數(shù)據(jù)可存儲，可一次存儲10組數(shù)據(jù)，每組數(shù)據(jù)包含3個標準液測量值和3個待檢溶液的測量值，以便查看；同時，可以上傳到計算機，以便分析和長期保存。儀器顯示界面由液晶顯示屏提供，儀器的控制輸入由按鍵實現(xiàn)。該儀器2型機為中國環(huán)境監(jiān)測總站監(jiān)制產(chǎn)品。該儀器測定方法為國家標準，標準號：“GB/T15441-1995水質(zhì)急性毒性的測定發(fā)光細菌法”由中國標準出版社出標準文版。儀器標準號：Ｑ寧/KTS01-93。經(jīng)過近三十年的不斷開發(fā)，已經(jīng)在環(huán)境科學、微生物學、免疫學、細菌學、生物化學和臨床檢驗等領(lǐng)域得到廣泛應用。二、儀器用途測定純化合物(包括有機分子、無機金屬離子)的急性毒性。測定受污染水體(包括工業(yè)排放污水、礦山采礦和冶煉廢水、河水等水系)的急性毒性。測定受污染土壤、河流和沿海帶底泥的急性毒性。用于研究有毒元素以及化合物相互之間的相互作用－協(xié)同或拮抗效應。用于慢性反應的化學發(fā)光分析等。三、測試原理測試原理：總體急性生物毒性。明亮發(fā)光桿菌之所以發(fā)光，是由于菌的發(fā)光系統(tǒng)發(fā)生了如下反應：

基質(zhì)

↓

ATP

ATP

ATP還原型輔酶A→黃素(H2)→細胞色素→02

↓

載氫黃素單核苷酸

熒光酶(電子)↓

02

RCH0

RCO0H電子→FMNH2

→電子→FMNH→光＋FMN＋電子十H2O

↓

OOH

黑暗↓

電子十黃素單核苷酸十H2O2當細胞活性高，處于積極分裂狀態(tài)時，細胞ATP含量高，發(fā)光強；休眠細胞ATP含量明顯下降，發(fā)光弱；當細胞死亡，ATP立即消失，發(fā)光停止。處于活性期的發(fā)光菌，當加入毒性物質(zhì)(如重金屬離子Cu2＋/Cd2＋/Se4＋/Zn2＋/As3＋/Pb2＋，農(nóng)藥五氧吩嗪、福美雙，染料對氨基苯甲醚、對硝基鄰甲苯胺，酸、堿等)，菌體就會受抑甚至死亡，體內(nèi)ATP含量也會隨之降低甚至消失，發(fā)光度便下降甚至到零。由于毒物濃度與菌體發(fā)光度呈線性負相關(guān)地變化，因而可據(jù)發(fā)光度確定毒物急性生物毒性。若此毒物知其成份而不知其濃度，則可根據(jù)先前測得的發(fā)光度——毒物濃度關(guān)系曲線(標準曲線)，測定濃度。四、技術(shù)指標1、菌種名稱：明亮發(fā)光桿菌T3小種

急性生物毒性測定靈敏度比較化合物濃度(毫克/升)生物毒性測試儀EC50魚96小時LC50CU2＋

3.239

Cd2＋17.19

Zn2＋

0.37

Pb2＋82.23

Hg2＋

0.1260.01～0.9AS3＋

0.55

2、測試范圍：0~1999mV(發(fā)光量)3、測試精度：樣品3次重復，相對偏差不大于15%4、靈敏度：相當或優(yōu)于魚體96小時培養(yǎng)測定急性生物毒性試驗法，見表(列舉幾例)5、顯著性：樣品濃度與發(fā)光細菌相對發(fā)光度P<0.05工業(yè)廢水或0.01的水平(純化合物溶液)6、測試溫度：在室溫20～25℃范圍保持某一恒定值7、測試時間：10～20min(單個樣品)8、結(jié)果表示：樣品EC50值(稀釋百分濃度)或相對發(fā)光度(%)及相當?shù)穆然瘽舛戎?mg/L)9、供電電源：220V±l0%10、尺寸重量：300x240x130mm

5.5kg該儀器外形、尺寸、重量，若有變化，恕不另行告知。五、儀器操作(一)

儀器樣品室：儀器樣品室為單管結(jié)構(gòu)，可放入—只直徑為20毫米的測試樣品管(樣品溶液為5毫升)；也可以預先放入塑料套管，用直徑為12毫米的測試樣品管(樣品溶液為2毫升)。(二)樣品溶液的制備、發(fā)光細菌的復蘇以及測量順序等：見附錄。(三)儀器預熱：在開始測試前，先確認暗室處于關(guān)閉狀態(tài)（具體為暗室向右轉(zhuǎn)至底）再接通儀器電源(這時面板上應是電源指示燈亮與停止指示燈亮)，讓儀器預熱—刻鐘以上。請注意！在接通電源前，—定要蓋好樣品室的蓋子，避免光電倍增管曝光，而疲勞受損。(四)功能按鍵：儀器控制由按鍵實現(xiàn)：[上/左]、[下/右]、[取消/返回]、[測量]、[存儲]、[確定]。儀器開機后進入主界面，主界面有5個功能選項：[測量]、[校正]、[設(shè)置]、[查看]、[上傳]。通過[上/左]、[下/右]選擇要進入的功能選項，選中的功能反白顯示，按[確定]后進入相應的菜單。1、測量：進入[測量]后，設(shè)置有兩個選項：①、使用默認操作員編號進入測量（編號全為1）；②、使用手動輸入，設(shè)置操作員編號，有三組操作員，通過[上/左]、[下/右]按鍵設(shè)置，按[確定]進入測量界面。測量界面分三個部分：①、最左邊顯示項目號、設(shè)置好的操作員編號、時間和日期；②、上面顯示測量值，右上腳顯示溫度；③、中間顯示測量結(jié)果，每屏顯示兩組測量結(jié)果；下面顯示菜單，共四個菜單：[測量]、[上翻]、[下翻]、[返回]主界面。[測量]

菜單是用于記錄和修改已記錄的穩(wěn)定的測量值的。當菜單處于[測量]時，按[確定]鍵，會將測量值記錄下來，并在屏幕中間顯示出來；按[取消]鍵，會將最后記錄的一個數(shù)據(jù)清除，重新測量；按[上翻]、[下翻]查看已記錄的數(shù)據(jù)。一個項目包含10組數(shù)據(jù)，每屏只能顯示2組數(shù)據(jù)。測量完畢后如果需要保存數(shù)據(jù)的話，請按[儲存]鍵，屏幕會給出一個界面用于選擇是否保存當前項目所測數(shù)據(jù)，保存是請您記住系統(tǒng)自動遞增，生成的項目編號，以便你查閱數(shù)據(jù)。注意：測量時記錄的數(shù)據(jù)只是緩存，沒有存入ROM當中，如果測量完畢后的數(shù)據(jù)需要存儲的話，請務必按[存儲]鍵將數(shù)據(jù)保存。2、校正：進入[校正]后，有三個功能菜單：[零點校正]、[時間校正]、[返回]主界面。通過[上/左]、[下/右]、[確定]、[取消/返回]按鍵進行具體操作，反白顯示的為當前選中的操作。3、設(shè)置：進入[設(shè)置]后，有五個功能菜單：[背光保持時間]、[聲音設(shè)置]、[倍率]、[自動取樣時間]、[返回]主界面。[背光保持時間]包括：15S、30S、60S、常亮；[聲音設(shè)置]包括：開和關(guān)提示音；[倍率]包括：*1、*2、*3、*4、*5

以此放大發(fā)光菌的發(fā)光量。[自動取樣時間]包括：5S、10S、15S、手動；選擇[自動取樣時間]后，在測量時，到達設(shè)定的時間后，會自動記錄測量結(jié)果。4、查看：進入[查看]后，會提示輸入項目號(左上腳顯示的項目號)，輸入項目號后就會進入界面，可以查看當時測量后保存的數(shù)據(jù)，界面跟測量界面相同，顯示此項目測量的時間、日期、溫度、操作員編號、測量的數(shù)據(jù)，通過[上/左]、[下/右]按鍵上翻、下翻數(shù)據(jù)。按[返回]鍵退出查看，返回主界面。5、上傳：進入[上傳]后，會提示單一上傳或者選擇整片上傳，將ROM里面的數(shù)據(jù)全部上傳。(五)樣品測量：1、向上拔出樣品室的蓋子(注意！拔出前，面板上應是停止指示燈亮)，然后將盛有待測樣品溶液的瓶子放入樣品室，蓋好蓋子。2、抓住蓋子，依逆時針方向旋轉(zhuǎn)(這時面板上停止指示燈熄滅，測量指示燈亮)，約1-2秒，則可讀取樣品溶液的測定數(shù)據(jù)。3、抓住蓋子按順時針方向旋轉(zhuǎn)，回到原處(面板上測量指示燈熄滅，停止指示燈亮)，這時，才可以向上拔出蓋子，取出已測過的樣品。此后，可作如下處理：①、還有待測樣品，再取一瓶放入，蓋好蓋子，然后按上述步驟進行測量。②、因樣品需要進一步處理，不能馬上測量，可以蓋上蓋子等待。③、整批樣品已測試完畢，蓋好蓋子，將儀器電源切斷。(六)有色樣品液的測量：對有色被測液，若用常規(guī)方法測會有干擾，因此需用下述方法進行校正。具體步驟如下：1、從儀器樣品室取出黑色塑料管套。2、取一只2m1管(即12毫米測試樣品管)，加3%NaCI溶液2ml，將該管放進一只裝有適量3%NaCl溶液的5ml管(即20毫米的測試樣品管)內(nèi)，并使外管與內(nèi)管的3%NaCl溶液面平齊，此作CK管。3、另取一只2ml管，加3%NaCl溶液2ml，放入另一只裝有適量有色待測樣品液的5ml管內(nèi)，要使外管與內(nèi)管的3%NaCl溶液面平齊，此作CKc管。4、于CK和CKc二管的內(nèi)管中同時加復蘇發(fā)光菌液10μ(注意：必須是本批樣品測定所用同一瓶復蘇菌液)，立即記時到秒，等反應滿15分鐘，迅即放入儀器樣品室，測定二只帶有內(nèi)管的5ml管的發(fā)光度。分別記下發(fā)光度L1(CK管)和L2(CKc管)。5、計算因顏色引起的發(fā)光度校正值△L＝Ll-L2。6、測試帶色樣品管及其CK管(加3%NaCl溶液)的發(fā)光量。但是，所有CK管測得之發(fā)光度均須減去校正值△L后才能作為CK發(fā)光度。六、結(jié)果處理數(shù)據(jù)的處理：見附一中之(五)測試數(shù)據(jù)處理說明：當在一次系列樣品的測量過程中，“輸出幅度選擇”開關(guān)所處的位置有變動，則需換算成某—檔次的值，然后才進行數(shù)據(jù)處理?！癤l”檔與其它檔(“XN”檔)的關(guān)系如下：

XN

Xl

＝----或XN

＝

Xl·N

N式中：N--------為“輸出幅度選擇”開關(guān)所處的位置；

X1

，XN

--為“輸出幅度選擇”開關(guān)處于“Xl”，“XN”檔時，數(shù)字表上的讀數(shù)。七、分級標準根據(jù)國外有關(guān)資料及國內(nèi)的一些實驗數(shù)據(jù)，擬定如下水質(zhì)急性毒性的分級標準，供參考。水質(zhì)急性毒性的分級標準毒性等級相對抑光率%Hg（毫克/升）毒性級別I<

30<

0.07低毒II30-500.07-0.09中毒III50-700.09-0.12重毒IV70-1000.12-0.16高毒V100>

0.16劇毒注：相對抑光率%

＝100%

－相對發(fā)光度%八、注意事項(一)儀器要水平放置于工作臺上，并注意，千萬不要放置在溫度高、濕度大及電磁干擾大的地方。(二)當儀器不進行測試時，—定要蓋上樣品室的蓋子，防止灰塵進入及光電倍增管曝光；在測量時，要避免以強光照射光電倍增管，而產(chǎn)生疲勞現(xiàn)象。(三)在給各測試管加復蘇菌液后，蓋上瓶塞，用手顛倒5次；但是，在放回原位后，要拔去瓶塞！?。?四)請?zhí)貏e注意：嚴防測試的樣品溶液漏在樣品室內(nèi)。如發(fā)現(xiàn)樣品管外壁已附著樣品液時，一定要先擦干凈后，再放入樣品室，避免樣品室產(chǎn)生銹蝕，致旋轉(zhuǎn)不自如或轉(zhuǎn)不動。若樣品室內(nèi)已沾附著樣品液時，馬上用濾紙吸干，并用稀機油在沾附處擦洗—下。(五)發(fā)光細菌的活性及使用菌液量的準確性都將對測量產(chǎn)生很大的影響，因此務必正確的操作。(六)當發(fā)現(xiàn)測量結(jié)果異常時，要認真檢查分析，找出原因，并加以解決：1、操作的環(huán)境溫度、樣品溫度是否控制在200C；2、菌種的復蘇情況，是否均勻；3、用于測試的管子是否清洗干凈；4、用10μl微量注射器吸取復蘇菌液時是否有小氣泡；5、樣品與菌液的反應時間是否準確到秒；6、當天使用的菌種復蘇液只能在當天使用。(七)請注意：1、儀器處于“?！睜顟B(tài)，旋轉(zhuǎn)“調(diào)零”，數(shù)字表上能出現(xiàn)正負值