初中生物顯微鏡的使用

初中生物顯微鏡的使用初中生物顯微鏡的使用初中生物顯微鏡的使用V:1.0精細整理，僅供參考初中生物顯微鏡的使用日期：20xx年X月

光學顯微鏡的構(gòu)造和使用方法[實驗目的]1.熟悉光學顯微鏡各部分的結(jié)構(gòu)和用途，掌握顯微鏡維護的基本知識。2.初步掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的使用方法。[實驗用品]

1.材料：羊毛裝片、血涂片、字母裝片、兔脊神經(jīng)節(jié)切片。2.器材：顯微鏡、擦鏡紙、載玻片、香柏油、二甲苯。

[實驗內(nèi)容與方法]

一、顯微鏡的構(gòu)造

顯微鏡是一種復雜的光學儀器。它是醫(yī)學實驗常用工具之一，其作用是將觀察的標本放大，以便觀察和分析。一般光學顯微鏡包括機械裝置和光學系統(tǒng)兩大部分，如圖1-1所示。（一）機械裝置1.鏡座：位于最底部的構(gòu)造，為整個顯微鏡的基座，用以支持著整個鏡體，起穩(wěn)固作用。2.鏡柱：為垂直于鏡座上的短柱，用以支持鏡臂。3.鏡臂：為支持鏡筒和鏡臺的呈弓形結(jié)構(gòu)的部分，是取用顯微鏡時握拿的部分。鏡筒直立式光鏡在鏡臂與其下方的鏡柱之間有一傾斜關(guān)節(jié)，可使鏡筒向后傾斜一定角度以方便觀察，但使用時傾斜角度不應超過45°，否則顯微鏡由于重心偏移容易翻ss倒。4.調(diào)節(jié)器：也稱調(diào)焦螺旋，為調(diào)節(jié)焦距的裝置，位于鏡臂的上端（鏡筒直立式光鏡）或下端（鏡筒傾斜式光鏡），分粗調(diào)節(jié)器

(大螺旋）和細調(diào)節(jié)器（小螺旋）兩種。粗調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺作較快或較大幅度的升降，能迅速調(diào)節(jié)好焦距,適于低倍鏡觀

察時調(diào)焦。細調(diào)節(jié)器可使鏡筒或鏡臺緩慢或較小幅度地升降，使用于在低倍鏡下用粗調(diào)節(jié)器找到物體后，在高倍鏡和油鏡下進行焦距的精細調(diào)節(jié)，藉以對物體不同層次、深度的結(jié)構(gòu)做細致地觀察。5.鏡筒：位于鏡臂的前方，它是一個齒狀脊板與調(diào)節(jié)器相接的圓筒狀結(jié)構(gòu)，上端裝載目鏡，下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。根據(jù)鏡筒的數(shù)目,光鏡可分為單筒式和雙筒式。單筒光鏡又分為直立式和傾斜式兩種,鏡筒直立式光鏡的目鏡與物鏡的光軸在同一直線上,而鏡筒傾斜式光鏡的目鏡與物鏡的中心線互成45°角,在鏡筒中裝有使光線轉(zhuǎn)折45°的棱鏡；雙筒式光鏡的鏡筒均為傾斜式的。6.物鏡轉(zhuǎn)換器：又稱旋轉(zhuǎn)盤，位于鏡筒下端的一個可旋轉(zhuǎn)的凹形圓盤上，一般裝有2～4個放大倍數(shù)不同的接物鏡。旋轉(zhuǎn)它就可以轉(zhuǎn)換接物鏡。旋轉(zhuǎn)盤邊緣有一定卡，當旋至物鏡和鏡筒成直線時，就發(fā)出“咔”的響聲，這時方可觀察玻片標本。7.鏡臺：也稱載物臺,是位于鏡臂下面的平臺，用以承放玻片標本。載物臺中央有一圓形的通光孔，光線可以通過它由下向上反射。8.標本推進器：位于鏡臺的后方或側(cè)面邊緣，連一可動弧形彈簧夾。其上方或下方一側(cè)有兩個旋鈕，轉(zhuǎn)動旋鈕可調(diào)節(jié)推進器，使玻片標本前后或左右移動。標本推進器上有縱橫游標尺，用以測定標本在視野中的方位及其大小。游標尺一般由主標尺(a)和副標尺(b)組成。副標尺的分度為主標尺的9/10。使用時，首先看副標尺的0點位置。然后看主、副標尺的一致點。如圖i-2所示，副標尺的0點主標尺的26與27之間，副標尺的6與主標尺的32一致，即6與主標尺上的一個分度線正對，則此標尺所表示的數(shù)值為26.6mm。

圖1-2游標尺的用法

(二)光學系統(tǒng)1.反光鏡：是裝在鏡臺下面、鏡柱前方的一面可轉(zhuǎn)動的圓鏡，它有平凹兩面。平面鏡聚光力弱，適合光線較強時使用。凹面鏡聚光力強，適于光線較弱時使用。轉(zhuǎn)動反光鏡，可將光源反射到聚光鏡上，再經(jīng)鏡臺中央圓孔照明標本。2.聚光鏡：在鏡臺下方，是一組透鏡，用以聚集光線增強視野的亮度。鏡臺上方有一調(diào)節(jié)旋鈕，轉(zhuǎn)動它可升降聚光鏡。往上升時增強反射光，下降時減弱反射光。3.可變光欄：是在聚光鏡底部的一個圓環(huán)狀結(jié)構(gòu)。它裝有多片半月形的薄金屬片，疊合在中央成圓孔形。在圓環(huán)外緣有一突起的小柄，撥動它可使金屬片分開或合攏，用以控制光線的強弱，使物像變得更清晰。4.目鏡：裝在鏡筒上端，其上一般刻有放大倍數(shù)(如5×，10×)。目鏡內(nèi)常裝有一指示針，用以指示要觀察的某一部分。圖1-1顯微鏡的結(jié)構(gòu)1.目鏡

2.鏡筒

3.物鏡轉(zhuǎn)換器

4.物鏡

5.通光孔

6.聚光器

7.光圈8.反光鏡

9.粗調(diào)節(jié)器

10.細調(diào)節(jié)器

11.鏡臂

12.推進器

13.載物臺14.傾斜關(guān)節(jié)

15.鏡柱

16.鏡座

17.照明裝置

18.粗調(diào)限位環(huán)凸柄

標本推進器上有縱橫游標尺，用以測定標本在視野中的方位及其大小。游標尺一般由主標尺(a)和副標尺(b)組成。副標尺的分度為主標尺的9/10。使用時，首先看副標尺的0點位置。然后看主、副標尺的一致點。如圖i-2所示，副標尺的0點主標尺的26與27之間，副標尺的6與主標尺的32一致，即6與主標尺上的一個分度線正對，則此標尺所表示的數(shù)值為26.6mm。5.物鏡：裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上，一般分低倍鏡、高倍鏡和油鏡三種。低倍鏡鏡體較短，放大倍數(shù)?。桓弑剁R鏡體較長，放大倍數(shù)較大；油鏡鏡體最長，放大倍數(shù)最大（在鏡體上刻有數(shù)字，低倍鏡一般有4×、10×，高倍鏡一般有40×、45×，油鏡一般是90×、100×，×表示放大倍數(shù)）。

顯微鏡放大倍數(shù)的計算：目鏡放大倍數(shù)×物鏡放大倍數(shù)=顯微鏡對實物的放大倍數(shù)。二、顯微鏡的使用方法(一)低倍鏡的使用1.把顯微鏡放在桌面的左側(cè)，鏡臂對向胸前，坐下進行操作。用手轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使鏡筒上升，然后轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡對準鏡臺中央圓孔（當轉(zhuǎn)動到聽見“咔”聲響，或同時亦感到有阻力時立即停止轉(zhuǎn)動，說明物鏡已與鏡筒成一直線）。2.對光：撥動聚光鏡底部圓環(huán)的小柄，使光欄完全打開。旋轉(zhuǎn)聚光鏡升降螺旋，使聚光鏡上升到和鏡臺相平。用左眼（兩個眼睛都要睜開）在目鏡上觀察，同時用手調(diào)整反光鏡，對好光源。要求視野達到完全均勻明亮。3.放置玻片標本：取蛙血玻片標本放在鏡臺上，有蓋玻片的一面朝上。玻片兩端用移動器夾住，然后轉(zhuǎn)動螺旋，使玻片上要觀察的標本對準鏡中央圓孔。注意，鏡臺上的刻度可以標示玻片的坐標位置。4.調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使低倍鏡距玻片標本0.5mm左右。注意：必須從顯微鏡側(cè)面觀察物鏡與玻片的距離。切勿用眼在目鏡上觀察的同時轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，以防鏡頭碰撞玻片造成損壞。用左眼從目鏡上觀察，用手慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋下降鏡臺，當視野中出現(xiàn)物像時，再調(diào)節(jié)細調(diào)螺旋，直至視野中出現(xiàn)清晰的物像（許多橢圓形的紅細胞）為止。如果物像不在視野中央，可稍微移動玻片位置（注意：移動玻片的方向與觀察物像移動的方向恰好是相反的）。

反復練習上述各操作步驟，做到迅速熟練地找到標本，以及取光合適（即較熟練的應用反光鏡、光欄和聚光鏡）。(二)高倍鏡的使用1.一定要先在低倍鏡下找到要觀察的標本物像后，并把要放大的部分移至視野正中，同時調(diào)節(jié)到最清晰程度，才能進行高倍鏡的觀察。2.轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡轉(zhuǎn)到鏡臺中央圓孔處。轉(zhuǎn)換高倍鏡時速度要慢，要細心，并從側(cè)面進行觀察（防止高倍鏡碰撞玻片）。如果高倍鏡碰到玻片，說明低倍鏡的物距沒有調(diào)節(jié)好，應重新進行操作。3.調(diào)節(jié)物距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察。這時物像往往不清楚、或者要觀察的部分不在視野當中，可用細調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動（切勿用粗調(diào)螺旋）即能清楚看到物像。一般只需轉(zhuǎn)動半圈或一圈就能達到要求。在高倍鏡下，可見蛙血紅細胞呈橢圓形，外被細胞膜，膜內(nèi)為淺紅色細胞質(zhì)，中央有一圓形呈藍紫色的細胞核。(三)油鏡的使用1.首先在高倍鏡下找到所要觀察的標本后，把所要觀察的部分移至視野中央。2.轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，移開高倍鏡，在標本上所要觀察的位置加一滴鏡油（香柏油）。3.轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，轉(zhuǎn)換油鏡，使之對準鏡臺中央圓孔處，浸在油滴中。4.轉(zhuǎn)換好油鏡后，用左眼在目鏡上觀察。物像如不清楚，可用細調(diào)螺旋慢慢向上或向下轉(zhuǎn)動，即能清楚地看到物像。如仍看不清標本，需重新用低倍鏡、高倍鏡觀察，然后再轉(zhuǎn)換油鏡。5.觀察完標本后，用滴加上二甲苯的擦鏡紙擦拭干凈油鏡鏡頭，再用另一張清潔的擦鏡紙蓋在玻片標本上，滴上1～2滴二甲苯，輕拉擦鏡紙，將玻片上的鏡油擦去。注意，勿擦壞標本。三、使用顯微鏡注意事項1.持鏡時要一手緊握鏡臂，一手托住鏡座，絕不能一把提起顯微鏡便走，以防目鏡從鏡筒滑出或反光鏡脫落。2.輕拿輕放，不要把顯微鏡放在實驗臺邊緣，防止碰翻落地。3.顯微鏡光學系統(tǒng)部件要用清潔的擦鏡紙輕輕揩擦，切勿口吹、手抹或用粗布揩擦。4.使用時先用低倍鏡調(diào)整光線。觀察活體標本或染色較淺的標本時，要適當關(guān)小可變光欄便視野變暗，方能看得清楚。5.放置玻片標本時要對準鏡臺孔正中央，并且不能反放玻片，如標本玻片反放時高倍鏡下看不到物像，并容易壓壞玻片或物鏡。6.觀察時要雙目睜開，切勿閉上一只眼睛。左眼觀察視野，右眼用以繪圖。低倍鏡用粗調(diào)螺旋調(diào)節(jié)物距，高倍鏡要用細調(diào)螺旋，粗、細調(diào)節(jié)螺旋都不能單方向過度地旋轉(zhuǎn)。單向上升粗調(diào)螺旋會壓碎鏡片和損壞物鏡。7.不要隨便取出目鏡，以防塵土落人物鏡上。也不要任意拆卸任何零件，以防損壞。8.使用完畢后，轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋使鏡臺下降，取下玻片，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡離開聚光孔。再上升鏡臺使物鏡接近鏡臺（不要對著鏡臺孔）。然后以右手握鏡臂，左手托鏡座輕輕放人鏡箱中。9.每次使用顯微鏡之前，先按顯微鏡登記卡片逐項檢查顯微鏡各部分有無損壞。如發(fā)現(xiàn)損壞，應及時向教師報告。使用之后，認真填寫顯微鏡使用登記卡片。四、操作練習（一）低倍鏡、高倍鏡的使用練習1.觀察文字或字母裝片：取一片字母裝片，用低倍鏡觀察，反復練習對光、調(diào)光、標本放置和調(diào)節(jié)焦距等。如將玻片前后左右移動時，注意物像與玻片移動方向是否一致，玻片上的字母是正像還是反像，為什么

2.觀察羊毛片（或頭發(fā)）交叉裝片：取一張毛（發(fā)）交叉裝片，先用低倍鏡觀察，找到兩根毛（發(fā)）后，再將毛（發(fā)）交叉點移到視野中央，然后換高倍鏡觀察，再輕微轉(zhuǎn)動細調(diào)節(jié)器，觀察不同層次，判定哪條毛（發(fā)）在上方，哪條位于下方。

（二）油鏡的使用練習1.取一張血涂片或取血一小滴，滴于清潔的載玻片一端，另取一張邊緣平整的載玻片，按照圖1-3所示做成血涂片。先用低倍鏡再用高倍鏡進行觀察。

圖1-4蛙血涂片

圖1-5運動神經(jīng)細胞2.用油鏡觀察，并分辨紅細胞、白細胞和淋巴細胞，比較三種物鏡的放大倍數(shù)和分辨率。3.觀察兔脊神經(jīng)節(jié)切片（示固定染色的細胞）取兔脊神經(jīng)節(jié)切片標本先在調(diào)好光線的低倍鏡下觀察（固定染色的標本需調(diào)較亮光線），低倍鏡下找到要觀察的標本，為淡紫色的神經(jīng)節(jié)切面，在其外圍包有被膜，且向內(nèi)伸入，形成神經(jīng)節(jié)的結(jié)締組織支架，節(jié)內(nèi)有許多大小不等的神經(jīng)細胞，呈散在分布。然后轉(zhuǎn)換高倍鏡，選擇完整而清晰的圓形圖1-6感覺神經(jīng)細胞神經(jīng)細胞仔細觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。可見到在細胞中央有一圓形核，核內(nèi)有著色為深紫紅色的圓形核仁及染色質(zhì)顆粒，核與細胞膜之間是均勻淺紫色的細胞質(zhì)，在細胞的外面圍有若干個被囊細胞，它起保護神經(jīng)細胞的作用。在神經(jīng)細胞之間還可看到有軸索橫斷面和許多神經(jīng)纖維，多呈交錯排列。s圖1-3血涂片的制備方法4.觀察完畢，務必將油鏡按正確方法擦凈。五、其它幾種顯微鏡簡介

目前在生物學和醫(yī)學研究中，常用的顯微鏡，還有以下幾種：1.雙筒解剖顯微鏡：解剖較小標本或觀察玻片標本的全貌時，需使用解剖顯微鏡，以觀察自然狀態(tài)下較小的實體（正像）和較大的玻片標本，或解剖細小生物。2.暗視野顯微鏡：是一種具有暗視集中器或中央遮光板的顯微鏡。即在聚光鏡上加一特殊裝置，使光線從集光器透鏡的邊緣衍射或反射到標本上，經(jīng)標本反射投入物鏡內(nèi)，使整個視野變暗，故能在視野中見到被檢物體衍射之圖像。這種顯微鏡可觀察運動著的有機體。3.熒光顯微鏡：其特點是以紫外光為光源，利用紫外光照射，使標本內(nèi)的熒光物質(zhì)激發(fā)出不同顏色的熒光，以研究標本內(nèi)某些物質(zhì)的特征和位置。有些物質(zhì)本身能發(fā)出熒光，有些物質(zhì)需經(jīng)熒光染料染色后才能發(fā)出熒光。4.相差顯微鏡：活細胞在普通光鏡下，一般不能分辨其細微結(jié)構(gòu)。這是由于各細微結(jié)構(gòu)的折光性很近似或?qū)Ρ炔粔蝻@著的緣故。相差顯微鏡則是在聚光器下裝一個環(huán)狀光欄，其物鏡是安有相板的相差物鏡。環(huán)狀光欄的作用是造成空心的光線錐，使直射光和衍射光分離