1.2.1微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)一、微生物概述1.微生物的概念：_________________________的統(tǒng)稱。包括_______________________________等

2._____________，_______________________是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)。防止雜菌污染獲得純凈的微生物培養(yǎng)物3.實驗室培養(yǎng)微生物的條件：①要為人們需要的微生物提供合適的___________條件；②要確保__________________，并將需要的微生物分離出來。營養(yǎng)和環(huán)境其他微生物無法混入難以用肉眼觀察的微小生物細菌、真菌、病毒及一些原生生物二、培養(yǎng)基1.概念：人們按照微生物對

的不同需求，配制出供其_________的營養(yǎng)基質(zhì)。2.種類

培養(yǎng)基

↓加入_______

培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖液體凝固劑固體固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基菌落微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長形成肉眼可見的菌落3.成分(1)主要成分：水、

、氮源、

。(2)其他成分：還需要滿足微生物生長對

、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及

的要求。碳源無機鹽pH氧氣④培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供_____的條件。①培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加_______；②培養(yǎng)霉菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____；③培養(yǎng)細菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至_____________；維生素酸性中性或弱堿性無氧為什么培養(yǎng)基需要氮源？

是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的。培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g碳源、氮源和維生素NaCl5g無機鹽H2O定容到1000ml氫元素、氧元素1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)(2)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中主要提供碳源和主要提供氮源的物質(zhì)各是什么？

主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。思考：(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中提供碳源和氮源的物質(zhì)各是什么？

牛肉膏和蛋白胨都可以為微生物提供碳源和氮源。培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g碳源、氮源和維生素NaCl5g無機鹽H2O定容到1000ml氫元素、氧元素互動探究1.培養(yǎng)基(1)試根據(jù)微生物的同化作用類型將微生物進行分類。答案分為自養(yǎng)型微生物和異養(yǎng)型微生物。(2)試從碳源和氮源的角度分析不同類型的微生物所需的培養(yǎng)基成分的特點。項目自養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物碳源CO2、NaHCO3等無機物_____________氮源__________________________________________糖類等有機物NH3、硝酸鹽等無機物尿素、蛋白質(zhì)等有機物②鑒別培養(yǎng)基將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出來用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基(3)按照培養(yǎng)基的用途可以把培養(yǎng)基分成幾類？①選擇培養(yǎng)基※幾種選擇培養(yǎng)基①加入青霉素的培養(yǎng)基：分離酵母菌、霉菌等真菌②不加氮源的無氮培養(yǎng)基：分離固氮菌③不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基：分離自養(yǎng)型微生物※鑒別培養(yǎng)基如可用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈現(xiàn)深紫色，并帶有金屬光澤)1.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用的敘述，正確的是()A．同一種物質(zhì)可能既作為碳源又作為氮源，所有碳源都能提供能量B．接種前需對培養(yǎng)皿、接種環(huán)進行滅菌處理，對操作者的雙手等進行消毒處理C．培養(yǎng)不同的微生物，用同種成分的培養(yǎng)基即可D．微生物生長不可缺少的微量有機物有氨基酸、維生素和蛋白胨等B二、無菌技術(shù)1.概念：_____________的培養(yǎng)微生物的操作技術(shù)2.手段：主要包括____和____。（1）對實驗操作的____、操作者的________，進行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的____、________和______等進行滅菌。

無菌技術(shù)除用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？還能有效避免操作者被微生物感染。防止雜菌污染消毒滅菌空間衣著和手器皿接種用具培養(yǎng)基3.兩種無菌技術(shù)的比較比較項目消毒滅菌作用強度較為

的理化因素

的理化因素作用程度殺死物體表面或內(nèi)部的

微生物殺死物體內(nèi)外

的微生物芽孢和孢子一般不能殺滅能殺滅適用對象操作空間、活體生物材料、操作者衣著和雙手操作工具、玻璃器皿、培養(yǎng)基等溫和強烈部分所有4.常用的消毒方法主要內(nèi)容應(yīng)用范圍煮沸消毒法100℃煮沸5-6min家庭餐具等生活用品巴氏消毒法70-75℃下煮30min或

80℃下煮15min牛奶、啤酒、果酒等（不宜進行高溫滅菌的液體）化學(xué)藥劑消毒法用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源皮膚、傷口、手術(shù)器械等紫外線消毒紫外線照射30min接種室空氣高壓蒸氣滅菌（效果最好）：100kPa、121℃下維持15-30min，常用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌。濕熱滅菌：利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進行滅菌。5.常用的滅菌方法灼燒滅菌：常用于涂布器、接種環(huán)、接種針、試管口等的滅菌。干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。常用于玻璃器皿（如：吸管、培養(yǎng)皿等）和金屬器具。互動探究1.“無菌操作”與人們的生活休戚相關(guān)，無時無處不在。在日常生活、生產(chǎn)實踐、自身健康防護中，有哪些“無菌操作”的例子？

(1)被褥、鞋襪要常曬；肉制品儲存時用鹽腌等。(2)家畜閹割后，要在其傷口處涂抹一些酒精或白酒；初冬楊樹樹干涂刷生石灰水等。(3)打針時，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其傷口處涂抹一些碘酒。2.消毒和滅菌的原理是什么？消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎？(1)消毒和滅菌的原理都是使微生物的蛋白質(zhì)變性，借此殺死微生物。(2)滅菌可殺死處理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒僅能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。3.消毒和滅菌是否適用于所有的生物和物品？不是，無菌技術(shù)既要考慮效果，又要考慮操作對象的承受能力。例如，活體生物材料、操作者的雙手等只能消毒，而不能滅菌。在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回答下列問題：(1)在實驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具________(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是____________________________________________可以在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。思考：(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能______________。在照射前，適量噴灑______，可強化消毒效果。(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度，最可能的原因是____________________。破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液氯氣未將鍋內(nèi)冷空氣排盡三、微生物的純培養(yǎng)純培養(yǎng)物培養(yǎng)基特定種類微生物單一個體繁殖接種滅菌原理：微生物群分散或稀釋單個細胞單個菌落繁殖固體培養(yǎng)基稀釋涂布平板平板劃線子細胞群體葡萄糖瓊脂稀釋分散倒一個未接種接種環(huán)50酒干熱高壓蒸汽精燈火焰置恒溫培養(yǎng)箱4.酵母菌的純培養(yǎng)步驟（平板劃線法）倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。操作如下：①將

的培養(yǎng)皿放在

的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，使瓶口

。滅過菌火焰旁迅速通過火焰③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條

的縫隙，將培養(yǎng)基（10mL~20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固（大約需5~10min）后，將培養(yǎng)皿

。稍大于瓶口倒過來放置倒平板是制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的重要環(huán)節(jié)，如圖為倒平板的操作示意圖。(1)請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：_______________。(2)甲、乙、丙中的滅菌方法是_________。(3)丁中的操作需要等待_____________才能進行。丙→乙→甲→丁灼燒滅菌平板冷卻凝固1.倒平板時的注意事項(1)培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻至50℃左右時，才能倒平板的原因是什么？你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板時高于50℃則會燙手，低于50℃時若不及時操作，瓊脂會凝固。

可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了?；犹骄?2)分析下圖，回答①、②問題：①為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。②從防止雜菌污染的角度思考，平板冷凝后將平板倒置的原因是什么？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快揮發(fā)。(3)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？不能；原因：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。平板劃線法步驟接種環(huán)滅菌：將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒直至燒紅↓取菌種

│

↓a.在酒精燈

冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的_____b.將試管口通過

達到消滅試管口雜菌的目的c.將已

的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液d.將試管口

，并塞上棉塞火焰旁棉塞火焰冷卻通過火焰平板劃線↓培養(yǎng)：將平板

，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)a.左手將皿蓋打開一條縫隙，右手把沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃

條平行線，蓋上皿蓋。注意

。b.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域

開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與

相連三至五不要劃破培養(yǎng)基劃線的末端第一區(qū)倒置1234劃3個平板1個不劃線（重復(fù)實驗）（空白對照）小結(jié)：①接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次。②劃線首尾不能相接。③劃線后，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)12~24h。2022/11/71.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死接種環(huán)上原有微生物殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細胞殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者互動探究2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。平板劃