高中生物選修一生物技術實踐 知識點總結

高中生物選修一生物技術實踐知識點總結專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用課題一果酒和果醋的制作1、發(fā)酵：通過微生物技術的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵 無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖4、在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。 C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O5、在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。 C6H12O6→2C2H5OH＋2CO26、20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18℃-25℃7制約。8、醋酸菌是單細胞細菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂9、當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當缺少糖源時，醋酸菌將乙變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O10、控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當進行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實驗流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）3 3 2 413、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)應該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。疑難解答你認為應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會。你認為應該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進行酒精消毒；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。18～2535℃？溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20℃左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為30～35℃，因此要將溫度控制在30～35℃。1PAGEPAGE11專題二微生物的培養(yǎng)與應用課題一微生物的實驗室培養(yǎng)培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質，是進行微生物培養(yǎng)的物質基礎。物理性質液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基應用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。成分人工合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基不明的天然物質配制而成，常用于實際工業(yè)生產(chǎn)。劃分標準物理性質培養(yǎng)基種類液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基化學組成合成培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基特點不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂加凝固劑，如瓊脂含化學成分不明確的天然物質培養(yǎng)基成分明確（劃分標準物理性質培養(yǎng)基種類液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基化學組成合成培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基特點不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂加凝固劑，如瓊脂含化學成分不明確的天然物質培養(yǎng)基成分明確（知的化學物質配成）培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品用途工業(yè)生產(chǎn)微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)工業(yè)生產(chǎn)分類、鑒定培養(yǎng)、分離出特定微生物目的用途鑒別培養(yǎng)基鑒別不同種類的微生物水無機鹽碳源氮源生長因子等。碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質。如CO2NaHCO3單質碳不能作為碳源。氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質。如N2NH3NO3-無機氮源）基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮源）N2。培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對pH乳酸桿菌維生素霉菌時須將培養(yǎng)基的pH酸性細菌pH中性或微堿性厭氧型微生物無氧的條件無菌技術·獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。④實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子煮沸消毒法（對于一些不耐高溫的液體化學藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）紫外線消毒。比較項 理化因素的作用強度 消滅微生物的數(shù)量 芽孢和孢子能否被消消毒 較為溫和 部分生活狀態(tài)的微生物 不能滅菌 強烈 全部微生物 能滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌比較項 理化因素的作用強度 消滅微生物的數(shù)量 芽孢和孢子能否被消消毒 較為溫和 部分生活狀態(tài)的微生物 不能滅菌 強烈 全部微生物 能滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。比較項目 消毒 滅菌條件 使用較為溫和的理化方法 使用強烈的理化因素殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生 殺死物體內外所有的微生物，包括比較項目 消毒 滅菌條件 使用較為溫和的理化方法 使用強烈的理化因素殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生 殺死物體內外所有的微生物，包括結果物（不包括芽孢和孢子） 芽孢和孢子實驗操作的空間、操作者的衣服和手 微生物的培養(yǎng)器皿、接種用具和培適用養(yǎng)基等常用方法煮沸消毒法（如在10℃，煮沸6mi、巴氏消毒法（如在8℃，煮15mi氯氣、石炭酸等化學藥劑進行消毒灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌滅菌方法滅菌條件滅菌方法滅菌條件滅菌時間適用材料或用具灼燒滅菌酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅干熱滅菌干熱滅菌箱內，160～170℃1～2h高壓蒸汽滅菌 100kPa，121℃15～30min接種環(huán)、接種針或其他金屬工具玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等培養(yǎng)基等制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基方法步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。倒平板操作的步驟：①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙（10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。平板冷凝后，為什么要將平板倒置？既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌平板劃線法稀釋涂布平板法。逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見稀釋操作涂布平板操作兩步。目的從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。平板劃線操作的討論的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？提示：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。菌種的保存（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。4℃3～6②缺點：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。3mL1mL1mL－20℃的冷凍箱中保存。疑難解答生物的營養(yǎng)生殖所需的外源物質。人及動物的營養(yǎng)物質：水、無機鹽、糖類、脂質、蛋白質、維生素六類。植物的營養(yǎng)物質：礦質元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營養(yǎng)物質：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質五類。確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法1～2則需要重新制備。課題二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1．尿素：是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的篩選菌株實驗室中微生物的篩選應用的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件（pH等物生長。選擇性培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基。配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質以達到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計菌落數(shù)目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)。稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結果準確，3～530～300取平均值數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計結果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。30~3002.落蔓延，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物設置對照設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應的結果。實驗設計實驗設計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。pH≈7的土壤中取樣。鏟去表3～8cm的土壤層取樣。30~300測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104 105 106測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103 104微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌30~37℃1~2天，放線菌25~28℃5~725~28℃3~424小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時間狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值每=（C/V）*M其中，CV代表涂布平板時所用的稀釋液的體積m，M代表稀釋倍數(shù)專題三植物的組織培養(yǎng)技術課題一菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過程程。離體的植物組織或細胞，在培養(yǎng)了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。植物細胞工程具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞，都具有發(fā)育成完整個體的能力，即每個生物細胞都具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因為在特定的時間和空間條件下，通過基因的選擇性表達，構成不同組織和器官。培育作物新品種以及細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。細胞分化是一種持久性的變化，它有什么生理意義？（5）比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型 細胞來（5）比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型 細胞來根尖分生組織受精卵細胞形態(tài) 細胞結構正方形 無液泡愈傷組織 高度分化細胞 無定形 高度液泡化細胞排列緊密疏松細胞去向細胞組織再分化成新個體相同點 都通過有絲分裂進行細胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件材料：不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關系到試驗的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開選取生長旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導脫分化和再分化。MSNP、、、Ca、Mg、MnB、ZnCu、Mo、、Co，有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。激素：植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結果。使用順序先生長素，后細胞分裂素使用順序先生長素，后細胞分裂素后生長素實驗結果細胞既分裂也分化同時使用分化頻率提高生長素／細胞分裂素比值與結果促根分化，比值高時抑芽形成促芽分化，比值低時抑根形成比值適中促進愈傷組織生長條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。不同的植物對各種條件的要求往往不同。進行pH5.818~22℃，并且每日用日光燈照射12h.操作流程配制MS固體培養(yǎng)基（液?！な褂脮r根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸餾水稀釋?！づ渲婆囵B(yǎng)基：應加入的物質有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升?！ぴ诰栈ńM織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素。原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易?！缇翰扇〉臏缇椒ㄊ歉邏赫羝麥缇S培養(yǎng)基有哪些特點？大量元素和微量元素提供植物細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)。外植體的消毒外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70%的酒精中搖動2~36~7s體表面水分，放入質量分數(shù)為0.1%1~2min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：對外植體進行表面消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種7～8體接種與細菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。（12h）基。然后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，進行壯苗。最后進行露天栽培。栽培外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。專題四酶的研究與應用課題1果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用基礎知識活動：閱讀“果膠酶的作用果膠是植物細胞壁和胞間層的主要組成成分之一。在果汁加工中，果膠的存在易導致果汁出汁率低，果汁渾濁。果膠酶分解果膠的作用是：①瓦解植物的細胞壁及胞間層，使榨取果汁更容易，②把果膠分解為 可溶性的半乳糖醛酸 ，使渾濁的果汁變得澄清，因此可以解決汁加工中出現(xiàn)的問題。1〗在植物細胞工程中果膠酶的作用是與纖維素酶一起除去植物細胞的細胞壁?；顒樱洪喿x“酶的活性與影響酶活性的因素酶的活性是指：酶催化一定化學反應 的能力。酶的活性高低可用一定條件下的酶促反應速度來表示，即單位時間、單位體積內應物消耗量 或 產(chǎn)物生成量 來表示。影響酶活性的因素有：溫度 、 PH 、 激活劑 和 抑制劑 等活動：閱讀“果膠酶的用量，討論并回答下列問題：食品工業(yè)生產(chǎn)中最常用的果膠酶是通過 霉菌發(fā)酵 產(chǎn)生。確定果膠酶的最適溫度、最適PH實驗設計活動PH過程：實驗目的：定量測定溫度或pH〖思考2〗該實驗與必修I中探究“影響酶活性的條件”實驗有何不同？前者屬于是定量分析實驗，后者屬于定性分析實驗。澄清度。變量設計與控制：①你確定的溫度梯度（或pH梯度）為 10℃或5℃（或0.51.0） 。②實驗的自變量是（或p）（或滴加酸堿等）。③實驗的因變量是 酶的活性 ，檢測因變量的方法是測定 果汁的產(chǎn)出量或澄清度 ?！妓伎?〗果汁與果膠酶在混合之前，分裝在不同試管中用同一恒溫處理的目的是什么？保證果汁與果膠酶混合前后的溫度相同，避免因混合導致溫度變化而影響果膠酶活性。〖思考4〗該實驗中是否設置了對照？若設置，那么它是如何設置的？若沒有，則如何進行設置？已經(jīng)設置了對照。不同的溫度設置之間可以相互對照?！妓伎?〗怎樣排除PH和其他因素對實驗結果的干擾？目的是什么?控制PH和其他因素相同，保證只有溫度一個變量對果膠酶的活性產(chǎn)生影響?！妓伎?〗教材中A、B兩個同學的實驗設計有何不同？測定的因變量不同3．操作提示活動制備果泥：用 榨汁機 榨制果泥。在榨制橙子汁時應怎樣處理橙? 不必去橙皮在探究不同PH對果膠酶活性的影響時，可以用0.1%的NaOH溶液和鹽酸 調節(jié)pH。在果膠酶處理果泥時，為了是果膠酶能充分地催化反應，如何操? 用玻璃棒不時拌。的方法②注明坐標軸名的名稱、單位、坐標原點以及曲線名稱。③每個坐標軸上的取值單位要相等。④將實驗數(shù)據(jù)標在坐標系中，并用各種線型連接起來。（三）課堂總結、點評設計實驗方案制備水果泥配制果膠酶動手實驗水果泥與果膠酶分別水浴保溫記錄實驗數(shù)據(jù)將水果泥和果膠酶混合保溫過濾出果汁得出結論記錄果汁量改變不同的溫度后重復上面的實驗溫度℃ 10 15 20 25 30 35 404550果汁量/ml124654321一、實驗原理

專題五DNA和蛋白質技術課題六血紅蛋白的提取和分離蛋白質的物化理性質：形狀、大小、電荷性質和多少、溶解度、吸附性質、親和力等千差萬別，由此提取和分離各種蛋白質。凝膠色譜法（分配色譜法：大路程短流動快小多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。分離過程：混合物上柱→洗脫→大分子流動快、小分子流動慢→收集大分子→收集小分子*洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質分子的差速流動。緩沖溶液原理：由弱酸和相應的強堿弱酸鹽組成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等，調節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。抵制外界酸、堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。凝膠電泳法：等。pH下，使蛋白質基團帶上正電或負電；加入帶負電荷多的SDS二、實驗步驟樣品處理①紅細胞的洗滌洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，采集的血樣要及時采用低速短時間離心分離紅細胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時間離心，如此重復洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈。②血紅蛋白的釋放在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。注：加入蒸餾水后紅細胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細胞膜，有利于血紅蛋白的釋放和分離。粗分離①分離血紅蛋白溶液4甲苯層2脂溶性物質的沉淀層3血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。②透析取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質的量的濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液中12h分子量較小緩沖液。純化調節(jié)緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝↓ 膠面平齊，關閉出口。加入蛋白質樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動加到色譜柱的頂端。加樣后，∣ 打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內，等樣品完全滲入凝膠層后，↓ 關閉出口。20mmol/L的磷酸緩沖液到適當高度↓洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進行洗脫?！占盅b蛋白質：待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集4.純度鑒定 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）三、注意事項電泳技術電泳技術就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達到對樣品進行分離、鑒定或提純的目的。紅細胞的洗滌如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。如何檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功由于凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成無效的空隙，使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的不但節(jié)