地中海貧血的實驗室診斷進展

地中海貧血的實驗室診斷進展〔〕:

摘要：地中海貧血屬于人類非常常見的一種隱性特異性遺傳類疾病，在南方人群中較為多見，臨床暫無有效根治方法，挑選出合理的實驗室診斷方法對該病的預(yù)防具有重要意義，伴隨科學技術(shù)的更新與開展，該病實驗室檢查方法層出不窮，本文就該病實驗室診斷方法進展綜述，為該病的實驗室診斷提供一定參考根據(jù)。

關(guān)鍵詞：實驗室診斷；篩查；地中海貧血；基因診斷

本文引用格式：陳麗.地中海貧血的實驗室診斷進展[J].世界最新醫(yī)學信息文摘,2022,19(58):63-64.

ReviewofProgressonLaboratoryDiagnosisofThalassemia

CHENLi

(BaisePeople'sHospital,Baise,Guangxi,533000)

ABSTRACT：Thalassemiaisarecessivespecificgeneticdisease,whichisverymoninhumansandinpeopleofSouthernChina.Thereisnoeffectivecurativemethodinclinicalpractice.Thus,itissignificanttoscreenoutvalidlaboratorydiagnosismethodssoastopreventsuchdisease.Variouslaboratorydiagnosismethodshavekeptemergingwithconstantupdateanddevelopmentofscienceandtechnology.Thispaperreviewsthelaboratorydiagnosticmethodsofthedisease,providingreferenceforthelaboratorydiagnosisofthedisease.

KEYWORDS：Laboratorydiagnosis;Screening;Thalassemia;Geneticdiagnosis

0引言

地中海貧血作為人類非常常見的遺傳類疾病這一，多發(fā)于東南亞地區(qū)。地中海貧血可分成多種亞型，其中alpha;和beta;兩組亞型較多見，較輕病癥者僅為血液學出現(xiàn)細微變化，而病癥嚴重者可出現(xiàn)死胎以及早產(chǎn)后死亡【1】。臨床有關(guān)地中海貧血治療手段較為缺乏，在產(chǎn)前診斷中將受累胎兒淘汰是首選對策，因此，婚前和產(chǎn)前進展地中海貧血診斷非常重要【2】。目前篩查法和基因診斷法是地中海貧血的常見實驗室診斷方法，本文就這兩類診斷方法在疾病診斷中的價值進展討論，現(xiàn)綜述如下。

1篩查方法

伴隨醫(yī)療技術(shù)的迅速開展，有關(guān)地中海貧血的臨床治療工作已獲得較大進步，但對重癥患者的治愈仍有極高難度，篩查法屬于實驗室診斷該病的一種常用方法，對孕婦加強產(chǎn)前篩查與診斷能有效預(yù)防該病的發(fā)生【3】，常見篩查方法主要可分成常規(guī)血液檢查與血紅蛋白檢查兩類，檢查工程如下。

1.1血常規(guī)測定。對于存在地中海貧血的患者，常伴有低色素、小紅細胞者兩大特征，因此需對其血液中紅細胞計數(shù)、血紅蛋白含量以及紅細胞比容，并得出相應(yīng)平均紅細胞體積〔MCV〕和平均紅細胞血紅蛋白含量〔MCH〕，當MCVle;80f'l，MCHle;27pg，那么說明可能有地中海貧血存在【4】。孫秀山等研究提出【5】，血常規(guī)測定具有普及率高、操作簡單以及自動化程度較高等優(yōu)點，但無法和缺鐵性貧血相鑒別。

1.2紅細胞浸透脆性試驗。紅細胞浸透脆性試驗常被應(yīng)用于檢測浸透壓濃度不同的低滲鹽水溶液中紅細胞抵抗才能，該試驗詳細記錄下紅細胞自開始至全部溶血之后的界限，而這一界限取決于紅細胞外表積和體積的比值，地中海貧血患者紅細胞有代謝、生化以及形態(tài)異常，在低滲鹽溶液中極易出現(xiàn)膨脹和破裂，最終發(fā)生溶血，該試驗方法是篩查地中海貧血的一種最簡便方法【6】。

1.3血紅蛋白分析。血紅蛋白分析是地中海貧血患者一種可靠且快速的診斷方法，主要包括：①毛細管電泳法：選擇毛細管為別離血紅蛋白的管道，在電場的作用下發(fā)生定向挪動，利用挪動速度不同以實現(xiàn)別離，該方法分辨率和靈敏度較高、快速簡便、試劑量與樣品消耗較少等優(yōu)點，已被逐步應(yīng)用于臨床。②醋酸纖維素膜電泳：選擇醋酸纖維薄膜為支持物，定量分析電泳別離后血紅蛋白，但這種方法目前在臨床上應(yīng)用較少【7】。③Hb瓊脂糖電泳法：在堿性環(huán)境下，不同Hb分子會于電場作用下實現(xiàn)別離，經(jīng)過染色等操作后可定量分析Hb瓊脂糖，存在地中海貧血的患者其檢測絕對值和正常者相比擬有顯著升高。④高效液相色譜分析：主要用于定量分析HbF與HbA2，羅宏成等研究說明[8]，采用該技術(shù)進展抗堿血紅蛋白測定與血紅蛋白自動化分析時具有結(jié)果穩(wěn)定和快速便捷等優(yōu)點，尤其對beta;-珠蛋白生成障礙性貧血的診斷才能較高，在臨床實驗室中應(yīng)用較多。

1.4紅細胞形態(tài)學有關(guān)檢查。在制備完畢的新穎染色血涂片上開展瑞氏染色，利用鏡檢法觀察紅細胞體積及形態(tài)變化，假設(shè)患者的紅細胞存在大小不一或者大小和形態(tài)延長，那么說明可能存在地中海貧血。

1.5相關(guān)輔助檢查。測定血清中鐵含量，排出存在缺鐵性貧血的患者。利用X線對胎兒骨骼形態(tài)和骨髓腔變化進展檢測等。

2基因診斷方法

地中海貧血的出現(xiàn)和珠蛋白合成被阻斷之間有著親密關(guān)系，多數(shù)患者是因主動蛋白合成缺失引發(fā)疾病。伴隨醫(yī)學技術(shù)日漸進步，人類遺傳病的治療與診斷也得到了較好開展。地中海貧血的出現(xiàn)除和DNA構(gòu)造有關(guān)外，還與基因轉(zhuǎn)錄以及翻譯過程之間有著親密關(guān)系，因此，積極開展基因檢測能盡早診斷和預(yù)防該病[9]，開展基因診斷時，探測物屬于患者某個特定基因，并且探測的內(nèi)容物至少要包括DNA及mRNA，當前，基因診斷已被逐漸應(yīng)用到地中海貧血的臨床診斷中，本文總結(jié)了地中海貧血的基因診斷方法，內(nèi)容如下。

2.1聚合酶鏈反響〔PCR〕。李紅萍等研究提出[10]，通過血紅蛋白電泳法可初步診斷地中海貧血，但仍存在漏診等問題。

而PCR利用DNA聚合酶經(jīng)過體外作用于成對引物，使得兩者間特異DNA片段催化，進而合成基因，以實現(xiàn)體外擴增，該方法有檢測速度快、準確率高以及操作方便等優(yōu)點，在臨床適用性較高。

2.2PCR結(jié)合斑點雜交法。PCR結(jié)合斑點雜交法具有準確率高、方便經(jīng)濟以及消耗樣品少等優(yōu)點[11]。何建維等研究提出[12]，使用該方法診斷地中海貧血時，應(yīng)對待測基因進展逐一篩查，直到確診為某種突變，該方法消耗時間較長，且需具備以下幾個條件：①選擇突變基因為模板，利用PCR法依次擴展合成突變序列及正常序列的基因片段，同時放置突變基因于中心位置，做好探針標記；②合理選擇適宜引物；③充分掌握雜交所需條件，保證待測堿基和探針之間沒有發(fā)生配錯情況，以免出現(xiàn)雜交失敗。

2.3DNA雜交檢測法。選擇DNA為靶分子，后在DNA和DNA之間開展雜交，雜交以后利用電泳法別離所有待測基因片段，轉(zhuǎn)印并和某一固相支持物相結(jié)合，利用事先標記的DNA探針進展檢測，該方法是實驗室診斷地中海貧血的最初方法，但診斷效率不高[13]。

2.4RFLP連鎖分析。RFLP連鎖分析原理是基因限制性內(nèi)切酶有識別和切割核苷酸序列的功能，在核苷酸序列切割中能獲取DNA片段，堿基突變使得限制性內(nèi)切酶切位點出現(xiàn)喪失或增多，并改變DNA片段大小。于限制性內(nèi)切酶的水解作用下，突變基因的電泳帶數(shù)量和大小均會出現(xiàn)改變，對這些情況進展分析就能判斷基因是否發(fā)生突變，但該方法具有操作繁瑣的缺點，且不能檢測出突變基因的類型[14]。

2.5基因芯片雜交法。伴隨有關(guān)地中海貧血研究的不斷深化，多種檢測方法開始被應(yīng)用于基因突變類型的檢測中，基因芯片雜交這一技術(shù)有著方便高效、準確自動、快速簡單以及痕量分析等優(yōu)點，是基因診斷地中海貧血的一種重要新型方法，該方法將核苷酸擴增作為根底，選擇引物延伸法或熒光標記法對突變基因進展檢測，與傳統(tǒng)方法相比擬，其特異性、靈敏性以及檢測準確率更高[15]。黃海龍等研究提出[16]，基因芯片雜交法中基因芯片的通量較高，能將不同患者的待測基因集中于同一張芯片上，后開展篩查，在人口中大面積普查疾病中具有更高的適用性，但因基因芯片本錢較高，非常昂貴，因此很難普及于臨床檢驗。

2.6寡核苷酸探針〔ASO〕檢測法。ASO檢測法在所有地中海貧血的實驗室診斷方法中最具有代表性，ASO探針可以快速且直接尋找出患者的缺失基因序列，同時準確判斷出疾病類型，有著較高的特異性和敏感度，操作較為簡便，但是該方法僅是針對某一種或者某一類基因突變進展檢測，需重復(fù)開展屢次試驗，才能作出相應(yīng)確切評估，目前我國已經(jīng)將這種方法應(yīng)用至地中海貧血臨床診斷中，且獲得了較好成效，該方法可以對常見的18種突變探針作出準確診斷，不僅有著較高的診斷準確性，還能對大規(guī)模樣本進展篩查及基因定型，是產(chǎn)前進展地中海貧血篩查的新型手段[17]。

2.7等位基因特異性擴增技術(shù)〔ARMS〕。ARMS具有一定特異性，主要是指針對某一種突變基因類型地中海貧血而開展的針對性檢測，根據(jù)擴增后的電泳別離結(jié)果作出是否存在相應(yīng)點突變的判斷，該方法在小片段DNA電泳分析中適用性較高，可應(yīng)用與痕量檢測，有著可靠準確、結(jié)果明晰等多種優(yōu)點[18]。

3結(jié)論

基因診斷法與篩查法在地中海貧血的實驗室診斷中各有自身優(yōu)優(yōu)勢，將二者有機結(jié)合可為該病的實驗室診斷提供重要參考根據(jù)。實驗室診斷的總標準是本錢低、效率高、和方便簡單，同時需保證疾病診斷準確性，防止出現(xiàn)漏診和誤診現(xiàn)象。伴隨醫(yī)學技術(shù)日漸進步，我們相信地中海貧血有關(guān)實驗室診斷技術(shù)將會更加完善和成熟。

參考文獻

【1】陳小蘭,劉海平,余豐，等.佛山市新生兒地中海貧血篩查及基因型分析[J].中國生育安康雜志,2022,29(1):74-77,81.

【2】李莉艷,鐘梅.地中海貧血的產(chǎn)前診斷[J].中國醫(yī)師雜志,2022,17(10):1448-1450,1454.

【3】陳熙,肖克林,羅茗月,等.地中海貧血實驗室篩查指標評價[J].分子診斷與治療雜志,2022,8(4):242-245,288.

【4】陸勤波,賴燕全.500例地中海貧血孕婦篩查結(jié)果及血常規(guī)和血紅蛋白A2差異分析[J].中國婦幼保健,2022,33(12):2756-2758.

【5】孫秀山,顏潔,管澤琴，等.血常規(guī)檢測對缺鐵性貧血和地中海貧血鑒別診斷中的應(yīng)用[J].四川醫(yī)學,2022,34(3):440-441.

【6】謝建渝,虞柯靜,羅文梅，等.423例孕婦地中海貧血篩查及基因檢測結(jié)果分析和臨床意義[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2022,6(10):1325-1327,1330

【7】賀海林,鐘澤艷,陳劍虹，等.廣東省惠州地區(qū)363例地中海貧血產(chǎn)前基因診斷及隨訪情況分析[J].中國方案生育學雜志,2022,26(7):615-617,621.

[8]羅宏成,王春芳,向陽，等.廣西百色市胎兒羊水地中海貧血基因檢測分析[J].暨南大學學報,2022,13(6):520-524.

[9]李良瓊,熊見,王長本，等.渝東北區(qū)地中海貧血常見基因類型的調(diào)查研究[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2022,9(6):753-754,757.

[10]李紅萍,李培培,張軒,等.MCV與MCH結(jié)合血紅蛋白電泳篩查常見地中海貧血[J].檢驗醫(yī)學,2022,9(7):703-706.

[11]黃超群,曾云,楊海濤,等.941對育齡高危夫婦地中海貧血基因結(jié)果分析[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志,2022,34(2):299-301.

[12]何建維,黃恒柳,張燕,等.重慶地區(qū)地中海貧血基因突變類型分析[J].