達(dá)氟沙星danofloxainelisa試劑盒使用方法

達(dá)氟沙星(Danofloxain)elisa試劑盒使用方法使用目的：本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉)，血清和尿樣中達(dá)氟沙星(Danofloxain)殘留的定量檢測。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有達(dá)氟沙星(Danofloxain)偶聯(lián)抗原，加入達(dá)氟沙星(Danofloxain)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離達(dá)氟沙星(Danofloxain)與微孔條上預(yù)，包被的達(dá)氟沙星(Danofloxain)偶聯(lián)抗原互相競爭抗達(dá)氟沙星( Danofloxain)抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中達(dá)氟沙星( Danofloxain)含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中達(dá)氟沙星(Danofloxain)的含量。試劑盒組成：3.1預(yù)包被的達(dá)氟沙星(Danofloxain)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊(12孔x8條)。達(dá)氟沙星(Danofloxain)標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶(1ml/瓶)，含量分別是：0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗達(dá)氟沙星(Danofloxain)抗體酶結(jié)合物：1瓶(6ml)。3.4顯色液A：1瓶(6ml)。3.5顯色液B：1瓶(6ml)。3.6終止液：1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液：1瓶(10x,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液：1瓶(20x,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。需要而未提供的材料：4.1、設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2、試劑去離子水或蒸餾水。甲醇。貯存：5.1試劑盒貯存于2?8C，切勿冷凍未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存注意事項(xiàng)：使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2C）,建議至少回溫2小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)品中含有達(dá)氟沙星（Danofloxain），使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。工作液準(zhǔn)備：達(dá)氟沙星（Danofloxain）標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用7.3顯色劑：已備用，避免光線直照反應(yīng)終止液：已備用樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1取10g粉碎的樣品，加20ml70%甲醇溶液強(qiáng)力振蕩3分鐘用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取25口I處理后的樣品，加入25口I樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為 2）酶免分析步驟9.1、實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（ 25±2C）,時(shí)間約2小時(shí)?；販刂潦覝兀?5±2C）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于 2?8C干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2?8C保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用精確的微量移液器9.1.5操作一旦開始，請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣加樣時(shí)請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2、分析步驟921預(yù)先進(jìn)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測922取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回 2?8C保存923樣品稀釋液（10X）、濃縮洗滌液（20X）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）9.2.4在B0孔中加入50口10.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50口1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50口1樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50口1的達(dá)氟沙星（Danofloxain）抗體酶結(jié)合物輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.3、37C溫浴30min（溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入 50口l顯色液A,再加50口l顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.2、37C溫浴10min9.4.3每孔中加入50口l終止液，混勻在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算：10.1、 定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（ B）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0口g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。10.1.2達(dá)氟沙星（Danofloxain）濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為達(dá)氟沙星（Danofloxain）濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中達(dá)氟沙星（ Danofloxain）濃度C（ppb）。10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2、 半定量測定目測半定量測定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。儀器半定量測定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。特異性：物質(zhì)交叉反應(yīng)達(dá)氟沙星(Danofloxain)100%試劑盒參數(shù)：本試劑盒檢測下限為