藥品非臨床試驗(yàn)安全性規(guī)范-中研院生物實(shí)驗(yàn)安全防護(hù)

藥品非臨床試驗(yàn)安全性規(guī)範(fàn)

(GuidelinefortheNonclinical

Pharmacology/ToxicologyStudiesforMedicinal

ProductsApplications)行政院衛(wèi)生暑編

中華民國(guó)八十七年六月初版

中華民國(guó)八十七年九月再版

中華民國(guó)八十九年六月三版目錄TOC\o"1-5"\h\z目錄 1序言 2三版序言 3第一章新藥品許可上市之流程 6第二章生物製劑之非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn) 16第三章生物製劑之品質(zhì)管制 25第四章藥理試驗(yàn)規(guī)範(fàn)(GUIDELINESFORGENERALPHARMACOLOGYSTUDIES) 32\o"CurrentDocument"第1節(jié)藥效學(xué)試驗(yàn)(PharmacodynamicStudies,PD) 34\o"CurrentDocument"第2節(jié)藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)(PharmacokineticStudies,PK) 41第五章毒性試驗(yàn)規(guī)範(fàn) 46\o"CurrentDocument"第1節(jié)單ー劑量毒性試驗(yàn)(SingleDoseToxicityStudy) 47\o"CurrentDocument"第2節(jié)重覆劑量毒性試驗(yàn)(RepeatedDoseToxicityStudy) 50\o"CurrentDocument"第3節(jié)基因毒性試驗(yàn)(GenotoxicityStudy) 57\o"CurrentDocument"第4節(jié)生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)(ReproductiveandDevelopmentalToxicityStudies) 68\o"CurrentDocument"第5節(jié)致癌性試驗(yàn)(CarcinogenicityStudy) 78\o"CurrentDocument"第6節(jié)皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)(SkinSensitizationStudy) 88\o"CurrentDocument"第7節(jié)皮膚感光過(guò)敏’性之式驗(yàn)(SkinPhotosensitizationStudy) 93\o"CurrentDocument"第8節(jié)皮膚刺激性^式驗(yàn)(SkinIrritationStudy) 98\o"CurrentDocument"第9節(jié)眼睛刺激性試驗(yàn)(EyeIrritationStudy) 101第六章附錄 104第3節(jié)縮寫(xiě)名詞對(duì)照表 111第5節(jié)無(wú)特定病原實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之標(biāo)準(zhǔn) 114第6節(jié)非臨床試驗(yàn)動(dòng)物安全性試驗(yàn)附表 116試驗(yàn)用新藥新藥申請(qǐng)意見(jiàn)備註序言世界各醫(yī)藥先進(jìn)國(guó)家，為確保上市藥品之安全性與有效性，均明文規(guī)定應(yīng)有足夠之藥理試驗(yàn)、安全性試驗(yàn)及人體臨床試驗(yàn)為依據(jù)，證明該藥品安全性及有效性後始得上市。近年來(lái)我國(guó)已躋身開(kāi)發(fā)國(guó)家之林，日漸重視智慧財(cái)產(chǎn)權(quán)及專(zhuān)利法，新藥研究發(fā)展工作勢(shì)在必行，目前衛(wèi)生署己先後完成優(yōu)良藥品製造標(biāo)準(zhǔn)（GMP）、藥品優(yōu)良臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)（GCP）、及藥品研發(fā)動(dòng)物試驗(yàn)優(yōu)良實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)範(fàn)（GLP）之相關(guān)規(guī)範(fàn)。利用動(dòng)物進(jìn)行藥理、毒理試驗(yàn)是決定藥品進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)階段的依據(jù)，因此訂定完整之動(dòng)物藥理、毒理試驗(yàn)相關(guān)規(guī)範(fàn)，實(shí)有其必要性。非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)內(nèi)容涵蓋藥理試驗(yàn)與毒性試驗(yàn)。藥理試驗(yàn)方面有藥效試驗(yàn)、藥動(dòng)試驗(yàn)。毒性試驗(yàn)包含單ー劑量毒性試驗(yàn)、重覆劑量毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)、致突變性試驗(yàn)、致癌性試驗(yàn)、皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)、皮膚感光過(guò)敏性試驗(yàn)、皮膚刺激性試驗(yàn)、及眼睛刺激性試驗(yàn)等。生物技術(shù)醫(yī)藥品品質(zhì)管制包括細(xì)胞庫(kù)及製程的污染測(cè)試、細(xì)胞株的鑑定及偶發(fā)的病毒和反錄病毒之檢測(cè)等。非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)的訂定主要參照國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（InternationalConferenceonHarmonization,ICH）指導(dǎo)準(zhǔn)則，經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD），以及美、歐、日等國(guó)之非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)。以期建立我國(guó)一般化學(xué)醫(yī)藥品及生物製劑之藥理、毒理之安全性試驗(yàn)規(guī)範(fàn)，使我國(guó)之藥品研發(fā)能符合現(xiàn)代化標(biāo)準(zhǔn)的參考規(guī)範(fàn)，以提昇國(guó)內(nèi)非臨床試驗(yàn)水準(zhǔn)。本規(guī)範(fàn)編訂工作共召開(kāi)編修討論及書(shū)面審查會(huì)議，藉邀請(qǐng)各相關(guān)衛(wèi)生主管機(jī)構(gòu)、學(xué)術(shù)單位及研究機(jī)構(gòu)、製藥廠商共同研商，進(jìn)行符合我國(guó)醫(yī)藥品及生物製劑之藥理、毒理、安全性規(guī)範(fàn)編訂，以期我國(guó)之非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)，能落實(shí)應(yīng)用。三版序言本署衛(wèi)署藥字第87040788號(hào)公告『藥品非臨床試驗(yàn)安全性規(guī)範(fàn)』於中華民國(guó)八十七年六月二十四日公告後，於同年六月發(fā)行單行本，迅即再版（同年九月）。今將修正部份予以公告並將修正部份以黑粗字體表示，同時(shí)也印製單行本，以供業(yè)界與專(zhuān)家學(xué)者參考。藥品非臨床試驗(yàn)安全性規(guī)範(fàn)GuidelinefortheNoclinical

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ProductsApplication第一章新藥品許可上市之流程新藥品(指依據(jù)藥事法第七條之:新成份、新療效複方或新使用途徑之藥品)上市許可之過(guò)程可分為三部份:(1)進(jìn)行臨床及非臨床試驗(yàn)的安全、有效性測(cè)試;(2)整理該藥品之實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，提出申請(qǐng)進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)(InvestigationalNewDrug?IND)和新藥許可上市(NewDrugApplication，NDA)；(3)衛(wèi)生署審核IND與NDA之申請(qǐng)。雖然所有的新藥都經(jīng)由上述的上市申請(qǐng)程序，但是每個(gè)藥品通過(guò)上市申請(qǐng)的過(guò)程及試驗(yàn)的內(nèi)容，包括臨床試驗(yàn)與非臨床試驗(yàn)之試驗(yàn)形態(tài)與數(shù)量都不甚相同，須視每個(gè)新藥品的性質(zhì)、劑型、用途、及給藥方式等情況而作調(diào)整。一般新藥品必須經(jīng)過(guò)一系列的非臨床試驗(yàn)，測(cè)定其安全性及有效性，再進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)。然而長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)非常費(fèi)時(shí)，為使新藥品能早日嘉惠病患，及減少不必要的使用動(dòng)物，非臨床與臨床試驗(yàn)的時(shí)程可相互並行(參見(jiàn)圖一之流程圖)，以短期毒性試驗(yàn)之結(jié)果，援護(hù)初期的人體臨床試驗(yàn)2。本新藥品上市許可之流程(圖ー)適用於一般化學(xué)醫(yī)藥品開(kāi)發(fā)，對(duì)於生物技術(shù)醫(yī)藥品的安全性評(píng)估之流程(圖二)，則須依試驗(yàn)物質(zhì)特性而定。對(duì)於用作治療對(duì)生命有立即威脅疾病的藥物，則須依其裨益與風(fēng)險(xiǎn)的考量進(jìn)行個(gè)案評(píng)估。ー、非臨床試驗(yàn)I所有新藥品進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)之前，必須提供其安全性評(píng)估資料，包括:(I)非臨床動(dòng)物試驗(yàn)數(shù)據(jù)，可以推衍至此藥品實(shí)際產(chǎn)生的作用;(2)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)或在其他國(guó)家的藥品使用情況證明。非臨床試驗(yàn)包括藥理與毒性試驗(yàn)。.藥理試驗(yàn)a,藥效學(xué)試驗(yàn)(PharmacodynamicStudy，PD)藥效學(xué)試驗(yàn)是評(píng)估藥物在主要器官(心血管、中樞神經(jīng)及呼吸系統(tǒng)）的藥理作用、作用機(jī)轉(zhuǎn)、劑量和反應(yīng)關(guān)係等之研究，試驗(yàn)結(jié)果為此藥開(kāi)發(fā)之依據(jù)。此項(xiàng)試驗(yàn)須在人體臨床試驗(yàn)前完成。b,藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)（PharmacokineticStudy?PK）此項(xiàng)試驗(yàn)係進(jìn)行藥物之吸收、分佈、代謝、排泄方面的研究。藥物在進(jìn)入人體試驗(yàn)前須先進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)，所得的藥動(dòng)數(shù)據(jù)，可作為第一期臨床試驗(yàn)（人體藥理試驗(yàn)）時(shí)，藥物在人體吸收、分佈、代謝、排泄過(guò)程的指引，以及作為臨床試驗(yàn)與動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果之比較。.毒性試驗(yàn)a,單一劑量毒性試驗(yàn)單ー劑量毒性試驗(yàn)須先對(duì)至少兩種的哺乳類(lèi)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，始可進(jìn)行人體臨床試驗(yàn)。哺乳類(lèi)動(dòng)物包含嚼齒類(lèi)及非嚼齒類(lèi)動(dòng)物2，嚼齒類(lèi)動(dòng)物一般最常使用大鼠和小鼠，近親、雜交或混合品系均可，但試驗(yàn)動(dòng)物須來(lái)自健康及特性鑑定完全之種源;非嚼齒類(lèi)動(dòng)物一般最常使用狗，Beagles或其他純種品系狗均可。b.重覆劑量毒性試驗(yàn)重覆劑量毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)週期須依該藥物將進(jìn)入臨床試驗(yàn)的那一個(gè)階段及給藥期間而定（表ー、二）。一般動(dòng)物毒性試驗(yàn)須進(jìn)行兩種或以上的哺乳類(lèi)動(dòng)物，而試驗(yàn)週期不得短於人體臨床試驗(yàn)的週期。表ー、人體臨床試驗(yàn)第一、二期與重覆劑量毒性試驗(yàn)試驗(yàn)週期對(duì)照表臨床試驗(yàn)試驗(yàn)週期a重覆劑量毒性試驗(yàn)試驗(yàn)週期32週31個(gè)月33個(gè)月36個(gè)月〉6個(gè)月2週1個(gè)月3個(gè)月6個(gè)月6個(gè)月a某些狀況下，人體臨床試驗(yàn)的試驗(yàn)週期會(huì)依試驗(yàn)需要延長(zhǎng)，比重覆劑量毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)週期長(zhǎng)。表二、人體臨床試驗(yàn)第三期與重覆劑量毒性試驗(yàn)試驗(yàn)週期對(duì)照表臨床試驗(yàn)試驗(yàn)週期a重覆劑量毒性試驗(yàn)試驗(yàn)期32週31個(gè)月〉1個(gè)月1個(gè)月3個(gè)月6個(gè)月a某些狀況下，人體臨床試驗(yàn)的試驗(yàn)週期會(huì)依試驗(yàn)需要延長(zhǎng)，比重覆劑量毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)週期長(zhǎng)。C.局部容許劑量試驗(yàn)局部容許劑量試驗(yàn)是以使用未來(lái)人體臨床使用的相同給藥途徑及部位進(jìn)行給藥，觀察給藥部位的反應(yīng)，評(píng)估其局部容許劑量，此試驗(yàn)須在人體臨床試驗(yàn)前完成。d,基因毒性試驗(yàn)在進(jìn)行人體臨床試驗(yàn)前，一般須以體外致突變性測(cè)試方法評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)基因之突變與染色體之傷害情形，若試驗(yàn)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，則須進(jìn)行其他致突變性測(cè)試。標(biāo)準(zhǔn)的綜合基因毒性試驗(yàn)則須在臨床試驗(yàn)第二階段開(kāi)始前完成。e.致癌性試驗(yàn)一般完整的致癌性試驗(yàn)不需要在人體臨床試驗(yàn)前進(jìn)行，除非有其他因素考量。凡對(duì)於（1）未來(lái)須持續(xù)給藥6個(gè)月以上之藥品，（2）過(guò)去之?dāng)?shù)據(jù)顯示此類(lèi)別之藥品可能引起致癌性者，（3）藥品之作用機(jī)轉(zhuǎn)推測(cè)可能有致癌性者，（4）重覆劑量毒性之試驗(yàn)結(jié)果顯示有腫瘤生成現(xiàn)象之藥品，（5）藥品之成分或其代謝產(chǎn)物長(zhǎng)期停留在組織中，產(chǎn)生局部的組織作用或病理生理反應(yīng)，或（6）基因毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示有致突變性存在之藥品等，均應(yīng)在藥物上市前完成致癌性測(cè)試。但是若試驗(yàn)物質(zhì)只針對(duì)有限的特定疾病或病患進(jìn)行治療，且該試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)病患的治療十分有效時(shí)，可視需要而在藥物獲準(zhǔn)上市後進(jìn)行。f.生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)應(yīng)視給藥對(duì)象的需要而進(jìn)行。若臨床試驗(yàn)之受試者為男性和不具生育カ之女性，而重覆劑量毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示該試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)生殖器官不造成任何傷害，則生殖與發(fā)育毒性第一期試驗(yàn)只須在臨床試驗(yàn)第三階段開(kāi)始前完成。具生育カ之女性可參與尚未進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn)之試驗(yàn)物質(zhì)的臨床試驗(yàn)，但必須嚴(yán)謹(jǐn)、小心監(jiān)控試驗(yàn)過(guò)程，包括進(jìn)行檢孕檢查、使用高效率之避孕方法及在確認(rèn)的生理期後，方可進(jìn)入臨床試驗(yàn)，並須檢附受試者同意書(shū)，同意書(shū)須告知受試者該試驗(yàn)物質(zhì)可能潛在的危險(xiǎn)性。若第三階段臨床試驗(yàn)包含使用高效率之避孕方法之具生育カ女性，則生殖與發(fā)育毒性第一、二期試驗(yàn)須在臨床試驗(yàn)開(kāi)始前完成，除非有其他因素考量，生殖與發(fā)育毒性第三期試驗(yàn)可在藥物取得上市許可前完成。若具生育カ之女性不使用高效率之避孕方法或懷孕情況不明者，則生殖與發(fā)育毒性第二、三期試驗(yàn)及基因毒性試驗(yàn)須在臨床試驗(yàn)開(kāi)始前完成。若懷孕之女性參與臨床試驗(yàn)，該試驗(yàn)物質(zhì)須先完成生殖與發(fā)育及基因毒性試驗(yàn)，方可進(jìn)行臨床試驗(yàn)。g.其他毒性試驗(yàn)若以上幾種毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示該試驗(yàn)物質(zhì)具有特定的毒性，則須進(jìn)行其他特定的毒性試驗(yàn)。二'試驗(yàn)中新藥之申請(qǐng)3若非臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示新藥品的安全性已足以進(jìn)行初步的臨床試驗(yàn)時(shí)，則廠商可向衛(wèi)生署提出試驗(yàn)中新藥申請(qǐng)，經(jīng)衛(wèi)生署許可後方可進(jìn)行人體臨床試驗(yàn)。提出試驗(yàn)中新藥申請(qǐng)時(shí)，須至少具備以下兩項(xiàng)資料:（1）所有非臨床試驗(yàn)之藥理作用、藥物動(dòng)力學(xué)、毒性、或安全性資料，及藥品之物理、化學(xué)性質(zhì)、符合GMP規(guī)定之製造與品管步驟;（2）臨床試驗(yàn)計(jì)劃書(shū):可證明藥品的人體臨床安全性與效用（治療、預(yù)防或診斷）之詳細(xì)臨床試驗(yàn)計(jì)劃，同時(shí)檢附其他與臨床試驗(yàn)有關(guān)的資料，如試驗(yàn)主持人及主要協(xié)同人員之學(xué)、經(jīng)歷及其所受訓(xùn)練之背景等資料，及受試者同意書(shū);（3）人體試驗(yàn)委員會(huì)同意函。三、試驗(yàn)用藥品使用許可之審核（藥事法第五條）衛(wèi)生署對(duì)試驗(yàn)用藥品之申請(qǐng)，依個(gè)案進(jìn)行審查，決定藥品的安全性是否符合進(jìn)行人體試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)檢查臨床試驗(yàn)計(jì)劃書(shū)，以確保受試者之安全。經(jīng)衛(wèi)生署審核通過(guò)後，申請(qǐng)者即可開(kāi)始進(jìn)行臨床試驗(yàn)。若審查過(guò)程中出現(xiàn)以下所述的情況，則不能進(jìn)行臨床試驗(yàn):.試驗(yàn)用藥品之使用許可的申請(qǐng)資料中，並無(wú)足夠的資訊評(píng)估藥品臨床試驗(yàn)的安全性。.臨床試驗(yàn)計(jì)畫(huà)書(shū)中所列的試驗(yàn)主持人，其經(jīng)驗(yàn)及所受的訓(xùn)練不足以執(zhí)行臨床試驗(yàn)之觀察。.試驗(yàn)主持人所依循之相關(guān)藥品的安全性與效用之資料有誤導(dǎo)、錯(cuò)誤、或內(nèi)容不齊全之情形。四、臨床試驗(yàn)4臨床試驗(yàn)是藥品發(fā)展的過(guò)程中最重要也是最困難的步驟，若藥品能夠通過(guò)臨床試驗(yàn)，衛(wèi)生署將根據(jù)這些臨床試驗(yàn)結(jié)果決定是否核準(zhǔn)該藥品的上市。衛(wèi)生署對(duì)進(jìn)行臨床試驗(yàn)的藥品有較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，其規(guī)定為:(1)藥品進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)主持人須為試驗(yàn)用藥品使用許可申請(qǐng)書(shū)中所指定的人員;(2)而臨床試驗(yàn)步驟則須依臨床試驗(yàn)計(jì)劃書(shū)中的方法進(jìn)行;(3)進(jìn)行試驗(yàn)的單位須符合藥品優(yōu)良臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)(GCP)的標(biāo)準(zhǔn)5,以保護(hù)病人的權(quán)益與保持臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的完整。臨床試驗(yàn)一般分為三個(gè)階段進(jìn)行:第一階段:對(duì)20?80名健康自願(yuàn)者給藥，以了解藥品在人體之吸收、分佈、代謝、排泄情形及安全性，確定人體忍受之劑量範(fàn)圍，及可能引起的不良反應(yīng)。第二階段:選擇至少100?200位自願(yuàn)病患進(jìn)行，以了解該藥品可能之療效，並了解藥品在患者體內(nèi)之吸收、分佈、代謝、排泄之情況，確定治療劑量及其治療範(fàn)圍。第三階段:本階段在多重醫(yī)療中心或機(jī)構(gòu)選擇足夠特定的患者，進(jìn)一步確認(rèn)藥品之療效，並藉由多數(shù)患者之治療，確定適應(yīng)癥，並偵測(cè)藥品禁忌、不良反應(yīng)之發(fā)生情形，取得注意事項(xiàng)、藥品交互作用等之資料。第四階段(新藥監(jiān)視期):針對(duì)核準(zhǔn)上市之新藥品，為更了解其使用情形，於上市後列入售後監(jiān)視，以了解藥品之不良反應(yīng)發(fā)生情形、發(fā)掘罕見(jiàn)之不良反應(yīng)，或了解是否有其他新適應(yīng)癥。五、新藥上市許可之申請(qǐng)3由於衛(wèi)生署是根據(jù)新藥品上市申請(qǐng)所檢送的試驗(yàn)數(shù)據(jù)決定藥品是否安全、有效而能上市，因此此步驟是藥品上市許可最重要的步驟。試驗(yàn)單位或廠商須依其試驗(yàn)數(shù)據(jù)提出藥品許可上市的申請(qǐng)。新藥品上市申請(qǐng)文件包含所有動(dòng)物與臨床試驗(yàn)的結(jié)果，詳細(xì)的藥品成分及其分析資料，藥品在製造、處理、包裝過(guò)程中的方法、設(shè)備、及條件，以及其他的相關(guān)資訊，如持續(xù)進(jìn)行中的新臨床數(shù)據(jù)，以及最終定案的產(chǎn)品標(biāo)示。六、新藥上市許可的審核3新藥上市的審核是對(duì)藥品進(jìn)行更仔細(xì)的分析與審查。若在審查過(guò)程不利於藥品安全性與藥效的結(jié)果時(shí)，衛(wèi)生署將由藥物審議委員會(huì)專(zhuān)家委員對(duì)廠商提出建議。衛(wèi)生署對(duì)申請(qǐng)案做出決定後，須行文試驗(yàn)單位及廠商告知申請(qǐng)案是否通過(guò)，若申請(qǐng)案未獲通過(guò)，會(huì)說(shuō)明衛(wèi)生署的決定，廠商如何改進(jìn)可以有申覆的機(jī)會(huì)，但以一次為限。若申請(qǐng)案通過(guò)，則該藥品即可上市販?zhǔn)?若申請(qǐng)案須進(jìn)行某些修正方可通過(guò)，則廠商須將修正過(guò)後的申請(qǐng)案交由衛(wèi)生署再審核，以獲得正式的上市許可。參考文獻(xiàn)InternationalConferenceonHarmonisationTopicM3Document."GuidelinefortheTimingofNon-ClinicalSafetyStudiesfortheConductofHumanClinicalTrialsforPharmaceuticals”.(Step3)SiglinJ.C.andRutledgeG.M.(1995).LaboratoryAnimalManagement.In:CRCHandbookofToxicology,ppi-50,DerelankoM.J.andHollingerM.A.ed.,CRCPress,BocaRaton.MathieuM.(1990).NewDrugDevelopment:ARegulatoryOverview.ParexelInt.Co.Cambridge,USA.行政院衛(wèi)生署(1994)。藥品臨床試驗(yàn)申請(qǐng)須知。行政院衛(wèi)生署(1997)。藥品優(yōu)良臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)。圖ー、新化學(xué)藥品上市流程圖若試驗(yàn)結(jié)果符合要求進(jìn)行第三期人體臨床試驗(yàn)!若試驗(yàn)結(jié)果符合要求-E申請(qǐng)新藥上市(NDA)

(NewDrugApplication)致癌性試驗(yàn)重覆劑量毒性試驗(yàn)(三六個(gè)月)生殖與發(fā)育第三期試驗(yàn)?|檢附所有相關(guān)資料向衛(wèi)生署申請(qǐng)新藥許可1r進(jìn)行第四期人體臨床試驗(yàn)（監(jiān)視中的新藥上市後不良反應(yīng)追蹤調(diào)査）圖二、生物製劑上市流程圖士若試驗(yàn)結(jié)果符合要求申請(qǐng)新藥上市(NDA)(NewDrugApplication)上若試驗(yàn)結(jié)果符合要求*重覆劑量毒性試驗(yàn)(三及\或六個(gè)月)致癌性試驗(yàn)進(jìn)行第三期人體臨床試驗(yàn)生殖與發(fā)育第三期試驗(yàn)檢附所有相關(guān)資料向衛(wèi)生署申請(qǐng)新藥許可上市進(jìn)行第四期人體臨床試驗(yàn)（監(jiān)視中的新藥,

上市後不良反應(yīng)追蹤調(diào)査）樂(lè)啜密嚏瑯麻源川函新成份的生合成及純化生物製劑應(yīng)依規(guī)定執(zhí)行種源批次系統(tǒng)及病毒安全性等進(jìn)行動(dòng)物藥理、藥動(dòng)及毒理測(cè)試製程確效與安定性試驗(yàn)一非臨床試驗(yàn)其他必要之毒性試驗(yàn)短期（急性、亞急性）毒性試驗(yàn)第一階段臨床試驗(yàn)*▼一新藥審核臨床試驗(yàn)新藥監(jiān)視期第二階段臨床試驗(yàn)aAイ平均:15個(gè)月?A監(jiān)視藥物不良作用蒐集產(chǎn)品缺陷報(bào)告?建議事先與衛(wèi)生主管機(jī)關(guān)討論?|_第三階段臨床試驗(yàn)孤兒藥及臨尿特殊用藥申請(qǐng)長(zhǎng)期毒性試險(xiǎn)（重覆痢量毒性試驗(yàn):三至六個(gè)月）生殖及發(fā)育毒性試驗(yàn)（第一、二，三期）產(chǎn)品抽樣調(diào)查及再評(píng)估

上市後續(xù)性追蹤調(diào)查處

方藥試長(zhǎng)及廣告監(jiān)視免疫毒性試驗(yàn)、基因毒性試驗(yàn)、致癌性毒性試驗(yàn)、長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)ー平均:18個(gè)月??試驗(yàn)用新藥（IND）申請(qǐng)平均:5年新藥（NDA）申請(qǐng)?jiān)S可證核準(zhǔn)第二章 生物製劑之非臨床試驗(yàn)規(guī)範(fàn)生物技術(shù)醫(yī)藥品的來(lái)源非常廣泛，且產(chǎn)品種類(lèi)眾多，涵蓋由基因工程、細(xì)胞工程及蛋白質(zhì)工程方法製造而得之藥品或檢驗(yàn)試劑，基於生物製劑的多樣性，而生物活性亦隨結(jié)構(gòu)的變化而改變，因此傳統(tǒng)的毒性測(cè)試方法不一定適用於此類(lèi)產(chǎn)品，均採(cǎi)用較彈性的方式，依試驗(yàn)物質(zhì)特性而進(jìn)行評(píng)估?；渡镅u劑的產(chǎn)品類(lèi)型眾多，依據(jù)國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)之指導(dǎo)原則，本規(guī)範(fàn)?僅適用於基本的生物技術(shù)醫(yī)藥品，包括以細(xì)菌、酵母菌、昆蟲(chóng)、植物及哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞等製造的生物製劑，此類(lèi)產(chǎn)品一般應(yīng)用於醫(yī)學(xué)診斷、治療或預(yù)防，其有效成份包括經(jīng)基因工程或細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)製造所得的蛋白質(zhì)、勝肽、及其衍生物等，如細(xì)胞激素(cytokines)'血纖維分解原酶活化劑(plasminogenactivator)、基因重組的血漿蛋白及凝血因子(recombinantbloodplasmafactors)、生長(zhǎng)激素(growthfactor)'荷爾蒙(hormones)與單株抗體(monoclonalantibodies)等。本規(guī)範(fàn)中部分內(nèi)容亦適用於基因重組蛋白疫苗(recombinantDNAproteinvaccines)、合成勝肽(chemicallysynthesizedpeptides)'由血漿中抽取的成份(bloodplasmaextractedfactors)、人體組織分離之內(nèi)生性蛋白(endogenousproteinsextractedfromhumantissue)、及寡オ玄甘酉受藥物(oligonucleotidedrugs)°對(duì)於細(xì)菌和病毒疫苗、基因疫苗、細(xì)胞和基因療法、抗生素、過(guò)敏性萃取物(allergenicextracts)'肝燐脂、血球細(xì)胞成物(cellularbloodcomponent)、維生素、及微生物等產(chǎn)品，將依科技的發(fā)展及國(guó)際上管理的趨勢(shì)，依個(gè)案方式另行審核。ー、生物製劑的品質(zhì)生物製劑在生產(chǎn)及製造過(guò)程中可能因宿主細(xì)胞株(細(xì)菌、酵母菌、昆蟲(chóng)、植物及哺乳類(lèi)細(xì)胞)的來(lái)源被污染而造成危害，受污染之宿主細(xì)胞所製造之產(chǎn)品會(huì)引起過(guò)敏性反應(yīng)或其他免疫病理效應(yīng)。若生物製劑是利用昆蟲(chóng)、植物或哺乳類(lèi)細(xì)胞、或基因轉(zhuǎn)殖動(dòng)物製造的，更應(yīng)確定是否受病毒感染。因此生物製劑在製程過(guò)程中必須能除去或不活化這些病毒及其他不純物，以確保其安全性，並詳細(xì)鑑定產(chǎn)品中的成份，方可進(jìn)入非臨床試驗(yàn)。一般非臨床試驗(yàn)與臨床試驗(yàn)使用之產(chǎn)品須做比較，若產(chǎn)品的製造過(guò)程有所改變時(shí)，為確定產(chǎn)品在不同的製造過(guò)程中產(chǎn)品品質(zhì)的一致性，可藉由產(chǎn)品的生化特性（如性質(zhì)、純度、穩(wěn)定性、力價(jià)）或藥動(dòng)試驗(yàn)來(lái)鑑定，同時(shí)評(píng)估此改變可能造成的影響。二'非臨床試驗(yàn)一般非臨床試驗(yàn)的目的為:（1）決定人體臨床試驗(yàn)的安全起始給與劑量及劑量增加之方式;（2）測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)在標(biāo)的器官中引起的毒性與其可逆性;（3）決定臨床試驗(yàn)的觀察檢測(cè)參數(shù)。基於生物製劑的多樣性，而生物活性亦隨結(jié)構(gòu)的變化而改變，因此當(dāng)傳統(tǒng)的毒性測(cè)試方法不適用於此類(lèi)產(chǎn)品時(shí)，則可考慮採(cǎi)用較彈性的方式，依試驗(yàn)物質(zhì)特性而進(jìn)行評(píng)估。所有毒性試驗(yàn)均需依循GLP規(guī)範(fàn)進(jìn)行，然而當(dāng)生物技術(shù)藥品的測(cè)試系統(tǒng)，無(wú)法依循現(xiàn)行GLP規(guī)範(fàn)時(shí)，則須說(shuō)明是那些試驗(yàn)，及其廠內(nèi)（In-House）之GLP規(guī)範(fàn)，作為產(chǎn)品安全性評(píng)估時(shí)之依據(jù)。.生物活性/藥效學(xué)試驗(yàn)生物製劑的活性可利用活體及體外測(cè)試方法獲得。體外試驗(yàn)包括利用細(xì)胞株或初代細(xì)胞培養(yǎng)，檢驗(yàn)試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的反應(yīng)與細(xì)胞增殖現(xiàn)象。由於某些生技藥品對(duì)動(dòng)物品種有很高的專(zhuān)一性，因此須選擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物品種進(jìn)行毒性試驗(yàn)，而使用哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)有助預(yù)估生體之活性，例如測(cè)定受體的親和力、藥理作用，同時(shí)輔助選擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物品種進(jìn)行活體藥理及毒性試驗(yàn)。藉由活體試驗(yàn)評(píng)估產(chǎn)品的藥理作用、作用機(jī)制，以利於評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)在臨床試驗(yàn)中的作用。結(jié)合活體與體外試驗(yàn)結(jié)果，有助於預(yù)測(cè)試驗(yàn)物質(zhì)在人體內(nèi)可能產(chǎn)生的作用。對(duì)於單株抗體產(chǎn)品，抗體的免疫性質(zhì)包括其抗原特性、補(bǔ)體結(jié)合、任何非預(yù)期的作用、及對(duì)非標(biāo)的器官的細(xì)胞毒性等都須詳細(xì)敘述。.動(dòng)物品種的選擇由於生物製劑不同於一般藥品，其藥效活性具有品種或組織的特異性，因此標(biāo)準(zhǔn)毒性試驗(yàn)使用的動(dòng)物品種（如鼠與狗）在此並不一定適用，雖然一般藥品的安全性評(píng)估須使用至少二種哺乳類(lèi)動(dòng)物，某些情況下，可以考慮只進(jìn)行一種動(dòng)物試驗(yàn)，但須提出說(shuō)明。一般進(jìn)行毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)動(dòng)物，其產(chǎn)生的藥理須與人體相關(guān)，然而若體外非臨床試驗(yàn)無(wú)法確定其相關(guān)的動(dòng)物品種時(shí)，仍須進(jìn)行一種動(dòng)物的毒性試驗(yàn)（如14天以內(nèi)的重覆劑量毒性試驗(yàn)），以評(píng)估此產(chǎn)品對(duì)主要器官功能（如心血管、呼吸系統(tǒng)）可能產(chǎn)生的毒性。近年來(lái)已發(fā)展出與人體疾病型態(tài)相類(lèi)似的動(dòng)物，這些動(dòng)物具有自發(fā)性疾病或帶著重組DNA分子（基因轉(zhuǎn)殖動(dòng)物），提供良好的動(dòng)物模式可進(jìn)一步測(cè)定生技藥品的藥理反應(yīng)、藥動(dòng)性質(zhì)及藥量，同時(shí)有助於測(cè)定此類(lèi)產(chǎn)品的安全性。若能經(jīng)由科學(xué)證明，具有特定疾病之動(dòng)物亦可取代ー般動(dòng)物進(jìn)行毒性試驗(yàn)［說(shuō)明1］。.動(dòng)物數(shù)量動(dòng)物的數(shù)目與性別須視實(shí)驗(yàn)的需要做彈性的調(diào)整。每劑量組的試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)足夠觀察出產(chǎn)品的毒性，若試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量太少，則只能觀察出產(chǎn)生毒性的機(jī)率，而無(wú)法觀察出其毒性的嚴(yán)重程度。若因試驗(yàn)動(dòng)物（靈長(zhǎng)類(lèi)）的數(shù)量有限時(shí)，則以提高觀察的頻率與期間來(lái)彌補(bǔ)此種限制。一般試驗(yàn)須雄、雌兩性並用。4,給藥途徑非臨床試驗(yàn)中使用的給藥途徑、給藥頻率及時(shí)間應(yīng)盡量與臨床所用的相同，但須考量產(chǎn)品的藥動(dòng)性質(zhì)、生體可用率，及對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物較安全與人道的劑量。若試驗(yàn)物質(zhì)的主成份溶解度較低、或試驗(yàn)動(dòng)物具較佳的藥物移除能力，可藉增加對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的給藥頻率，使試驗(yàn)動(dòng)物的給藥劑量與臨床使用劑量間相近。若由於生體可用率、動(dòng)物品種（生理性質(zhì)、大?。┑认拗贫荒芤耘R床藥物給予途徑給藥，則可採(cǎi)用替代的給藥方式。.劑量選擇劑量須包含會(huì)產(chǎn)生毒性、能達(dá)到劑量反應(yīng)，及不造成任何不良反應(yīng)（NoObservedAdverseEffectLevel?NOAEL）的劑量。若試驗(yàn)物質(zhì)的毒性較低或不具毒性，無(wú)法確定最高劑量之極限，則須提出劑量選擇的依據(jù)，並應(yīng)包含數(shù)倍於人體使用劑量的劑量。最高劑量之選擇應(yīng)依據(jù)藥效與生理作用、試驗(yàn)物質(zhì)的取得及臨床使用情形。若動(dòng)物細(xì)胞對(duì)試驗(yàn)物質(zhì)的親和性或效能比人體細(xì)胞低，則應(yīng)進(jìn)行更高劑量的試驗(yàn)。每種生物製劑的安全劑量範(fàn)圍及臨床應(yīng)用均不盡相同，利用數(shù)倍於人體使用劑量的劑量有助於決定適當(dāng)?shù)陌踩珓┝抗?fàn)圍及臨床應(yīng)用。試驗(yàn)動(dòng)物給予試驗(yàn)物質(zhì)時(shí)，須考慮每種動(dòng)物之每次最高耐受劑量，若超過(guò)動(dòng)物本身負(fù)荷時(shí)，應(yīng)分次適當(dāng)給予，以逹試驗(yàn)之目的。.免疫活性大多數(shù)生物製劑在動(dòng)物活體中都具有免疫性，因此應(yīng)在重覆劑量毒性試驗(yàn)中測(cè)量抗體與該生物製劑結(jié)合的量，同時(shí)鑑定抗體反應(yīng)的特性（中和性或非中和性），以了解其與藥動(dòng)、藥效或毒性變化的關(guān)係。在數(shù)據(jù)分析時(shí)，須評(píng)估抗體生成對(duì)藥動(dòng)或藥效參數(shù)、不良反應(yīng)的發(fā)生與程度的影響，及抗體是否產(chǎn)生新的毒性。不能只憑偵測(cè)到抗體而作為終止非臨床試驗(yàn)或修改試驗(yàn)的時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)，除非免疫反應(yīng)能夠中和該生物製劑對(duì)動(dòng)物活體的藥效或毒性作用。一般動(dòng)物對(duì)不同基因工程蛋白的免疫反應(yīng)不同（人體亦然），須評(píng)估因免疫補(bǔ)體等成份的形成或沈澱而導(dǎo)致的病理改變，並配合以上各項(xiàng)因素評(píng)估其安全性試驗(yàn)的數(shù)據(jù)。動(dòng)物活體與人體對(duì)生物製劑產(chǎn)生抗體的反應(yīng)並不相同，所以即使動(dòng)物活體中產(chǎn)生明顯的抗體，人體卻不一定會(huì)有相同的反應(yīng)。如以天竺鼠進(jìn)行蛋白質(zhì)產(chǎn)品的過(guò)敏性試驗(yàn)通常會(huì)呈陽(yáng)性反應(yīng)，但此現(xiàn)象極少可能發(fā)生於人體。因此，評(píng)估免疫活性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，須考量此試驗(yàn)是否適合用來(lái)預(yù)測(cè)人體的反應(yīng)。三'毒性試驗(yàn)非臨床試驗(yàn)的目的為在進(jìn)行人體臨床試驗(yàn)前及臨床應(yīng)用時(shí)決定試驗(yàn)物質(zhì)的藥效與毒性效應(yīng)，若生物製劑的結(jié)構(gòu)及藥理作用，特別是藥動(dòng)形態(tài)與市售品相似，則可減少毒性測(cè)試的項(xiàng)目。.安全藥理試驗(yàn)藉著適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模式，觀察生物製劑在活體中產(chǎn)生任何非預(yù)期的藥理作用，並在毒性試驗(yàn)或臨床試驗(yàn)時(shí)觀察此藥理作用。安全藥理試驗(yàn)可提供毒性的功能指標(biāo)，這些功能指標(biāo)可由獨(dú)立的試驗(yàn)加以觀察?或在進(jìn)行毒性試驗(yàn)時(shí)加以觀察。安全藥理試驗(yàn)的目的為鑑定主要生理系統(tǒng)的功能作用，可藉著離體器官或其他體外的測(cè)試系統(tǒng)，觀察生物製劑的藥理性質(zhì)評(píng)估其對(duì)特定器官的功能的影響。.毒性與藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)（吸收、分佈、代謝、排泄，ADME））2一般最常用的毒性與藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)為單ー劑量藥動(dòng)與組織分佈試驗(yàn)，但生物製劑很難依一般的毒性與藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)規(guī)範(fàn)進(jìn)行，因此試驗(yàn)並不能評(píng)估生物製劑在活體中之組織分佈、累積及排除情況。動(dòng)物品種間ADME的差異對(duì)預(yù)測(cè)臨床現(xiàn)象的能力，及評(píng)估劑量與作用間之關(guān)係有很大的影響。藥動(dòng)形態(tài)因免疫之清除機(jī)制作用的改變，將會(huì)影響ADME形態(tài)與毒性數(shù)據(jù)的分析。ADME試驗(yàn)所使用的試驗(yàn)物質(zhì)應(yīng)足以代表使用於臨床的藥物，而給藥途徑亦須使用與臨床使用的相近。a.分析方法視試驗(yàn)需要並依科學(xué)方法決定使用的分析方法，一般而言，一種評(píng)估分析方法已足夠。若分析中有使用放射性標(biāo)記的試驗(yàn)物質(zhì)，則須確定該放射性物質(zhì)的活性與生物性質(zhì)與原試驗(yàn)物質(zhì)相同。動(dòng)物試驗(yàn)與人體臨床試驗(yàn)最好使用相同的分析方法，同時(shí)評(píng)估血漿與蛋白質(zhì)或抗體對(duì)分析方法的影響。b.動(dòng)物品種的選擇使用與藥理及毒理試驗(yàn)結(jié)果能相互比較，同時(shí)與人類(lèi)相關(guān)的動(dòng)物品種。c,吸收觀察試驗(yàn)物質(zhì)的吸收與生體可用率的特性，以及其與玲菓途徑的關(guān)係。吸收試驗(yàn)可與毒性試驗(yàn)ー併進(jìn)行，吸收形態(tài)會(huì)受試驗(yàn)物質(zhì)的配方或劑量的影響。在進(jìn)行臨床試驗(yàn)前，應(yīng)先取得相關(guān)的動(dòng)物吸收資訊，以決定安全劑量及給藥方式。d.分佈組織分佈與清除機(jī)制之試驗(yàn)有助了解試驗(yàn)物質(zhì)的藥理與毒性性質(zhì)。由於放射性胺基酸追蹤劑會(huì)因蛋白質(zhì)生成，而進(jìn)入不相關(guān)的蛋白質(zhì)或勝肽中，因此使用具放射活性的胺基酸追蹤劑須小心控制。e.代謝生物製劑的代謝途徑較傳統(tǒng)藥品簡(jiǎn)單，因此動(dòng)物品種間的代謝差異並無(wú)很大的影響。代謝形態(tài)的鑑定方法有很多，例如免疫化學(xué)偵測(cè)、色層分析、SDS-凝膠電泳分析等。f.排泄生物製劑的排泄?fàn)可娴讲煌钠鞴傧到y(tǒng)與作用機(jī)制，因此試驗(yàn)須觀察各個(gè)器官的排泄速率。單ー劑量毒性試驗(yàn)至少使用一種的動(dòng)物進(jìn)行，觀察劑量與全身或局部毒性的關(guān)係，輔助選擇重覆劑量毒性試驗(yàn)的劑量。同時(shí)可由藥理試驗(yàn)或單一劑量毒性試驗(yàn)觀察試驗(yàn)物質(zhì)之劑量與作用的關(guān)係。.重覆劑量毒性試驗(yàn)試驗(yàn)應(yīng)使用與臨床的給藥途徑及給藥頻率相同的方式。若試驗(yàn)需要，試驗(yàn)方法應(yīng)包含觀察試驗(yàn)物質(zhì)的毒性動(dòng)力學(xué)2。一般重覆劑量毒性試驗(yàn)須測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)在復(fù)原期會(huì)否引起藥效或毒性增強(qiáng)作用，及遲發(fā)性的毒性作用。重覆劑量毒性試驗(yàn)的給藥週期須依藥品臨床使用的給藥週期及應(yīng)用而定，一般生物製劑的給藥期間為1-3個(gè)月，若產(chǎn)品為短期使用（七天以下），或針對(duì)急性重大疾病，則兩週之試驗(yàn)數(shù)據(jù)已足以提供藥品進(jìn)行臨床及上市所須之資料。若產(chǎn)品是治療慢性疾病，則給藥期間為6個(gè)月。.免疫毒性免疫毒性試驗(yàn)包含免疫活性與過(guò)敏性評(píng)估。許多生物製劑會(huì)引發(fā)或抑制免疫系統(tǒng)。注射部位產(chǎn)生的感染反應(yīng)可視為引發(fā)反應(yīng)，同時(shí)，若動(dòng)物產(chǎn)生自體免疫的現(xiàn)象，表示標(biāo)的器官的表面抗原之表現(xiàn)有所改變，免疫毒性試驗(yàn)可用以釐清這些現(xiàn)象。.生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)是依據(jù)生物製劑的性質(zhì)、臨床應(yīng)用及給藥對(duì)象來(lái)決定是否需要進(jìn)行。若需要評(píng)估生殖與發(fā)育毒性，試驗(yàn)內(nèi)容與給藥頻率須依試驗(yàn)動(dòng)物品種特異性及抗原性修改［說(shuō)明2］。一般基因毒性測(cè)試方法並不一定適用於生物製劑，因無(wú)法分析動(dòng)物經(jīng)投入大量的勝肽/蛋白質(zhì)物質(zhì)而得的數(shù)據(jù)結(jié)果，同時(shí)生物製劑一般不會(huì)與DNA或其他染色體物質(zhì)直接結(jié)合作用〔說(shuō)明3]〇但若有其他因素考量，如蛋白質(zhì)產(chǎn)品含有有機(jī)連接物或外來(lái)DNA等成份，則須進(jìn)行基因毒性試驗(yàn)。.致癌性試驗(yàn)生物製劑須視臨床給藥的時(shí)間與給藥對(duì)象決定是否須進(jìn)行致癌性評(píng)估，當(dāng)嘴齒類(lèi)動(dòng)物不是該產(chǎn)品評(píng)估毒性或免疫性的特定品種'一般傳統(tǒng)致癌性測(cè)試方法並不適用，則以其他試驗(yàn)方法評(píng)估其致癌性。生物製劑可能會(huì)引發(fā)細(xì)胞變型增殖或造成單株細(xì)胞大量增殖而產(chǎn)生腫瘤者可能情況下，應(yīng)進(jìn)行致癌性試驗(yàn)，以評(píng)估該生物製劑是否刺激惡性細(xì)胞的形成、增殖或誘發(fā)惡性細(xì)胞在正常人體產(chǎn)生的生長(zhǎng)能力。若由體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)生物製劑有誘發(fā)腫瘤之可能，則須對(duì)相關(guān)動(dòng)物進(jìn)行活體試驗(yàn)。若生物製劑在嚼齒類(lèi)動(dòng)物活體中有生物活性且無(wú)免疫性，可考慮使用一種動(dòng)物進(jìn)行致癌性的評(píng)估。進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)須小心選擇給藥劑量，可依據(jù)生物製劑的藥動(dòng)學(xué)與藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果、受體的特性、及人體使用臨床劑量選擇最適當(dāng)?shù)膭┝俊?局部容許劑量試驗(yàn)一般欲上市生物製劑的配方須進(jìn)行局部容許劑量測(cè)試，但若特殊情況，也可測(cè)試其代表性的配方。同時(shí)，生物製劑的局部反應(yīng)可藉由單ー劑量或重覆劑量毒性試驗(yàn)所得之資訊進(jìn)行評(píng)估。説明.利用具有疾病的動(dòng)物模式進(jìn)行試驗(yàn)有助於決定毒性終點(diǎn)、選擇臨床劑量、並決定適當(dāng)?shù)奶幏?，但此種試驗(yàn)一般無(wú)相關(guān)試驗(yàn)數(shù)據(jù)可作為評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果的參考，因此進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)須同時(shí)收集對(duì)照與基線數(shù)據(jù)，以作為試驗(yàn)的比較。.若有充足的類(lèi)似化合物之生殖與發(fā)育毒性資訊，而唯一相關(guān)的動(dòng)物為靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，且反應(yīng)機(jī)制試驗(yàn)顯示新藥物會(huì)產(chǎn)生相似的作用，則可免除生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)。.生物製劑會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)累積產(chǎn)生自發(fā)性突變細(xì)胞，可視為致癌物質(zhì)，而標(biāo)準(zhǔn)的一般基因毒性試驗(yàn)不適用於此類(lèi)產(chǎn)品，則應(yīng)以其他體外與活體試驗(yàn)方法進(jìn)行評(píng)估。參考文獻(xiàn)InternationalConferenceonHarmonizationTopicS6Document“PrechmcalTestingofBiotechnology-DerivedProducビ.(Step3)InternationalConferenceonHarmonization(1995).GuidelineontheAssessmentofSystemicExposureinToxicityStudies60(40):11264-11268第三章 生物製劑之品質(zhì)管制生物技術(shù)醫(yī)藥品的來(lái)源非常廣泛，且產(chǎn)品種類(lèi)眾多，涵蓋由基因工程、細(xì)胞工程及蛋白質(zhì)工程方法製造而得之藥品或檢驗(yàn)試劑，基於生物製劑在生產(chǎn)及製造過(guò)程中可能因宿主細(xì)胞株的來(lái)源被污染，使所製造之產(chǎn)品會(huì)引起過(guò)敏性反應(yīng)或其他免疫病理效應(yīng)，而造成毒害。若生物製劑是利用昆蟲(chóng)、植物或哺乳類(lèi)細(xì)胞、或基因轉(zhuǎn)殖動(dòng)物製造的，更應(yīng)確定是否受病毒感染。因此生物製劑在製程過(guò)程中必須能除去或消滅這些病毒及其他不純物，以確保其安全性，並詳細(xì)鑑定產(chǎn)品中的成份，方可進(jìn)入非臨床試驗(yàn)(參見(jiàn)圖ー)I。生物製劑之製造過(guò)程因產(chǎn)品性質(zhì)不同而改變，須依產(chǎn)品之特性進(jìn)行品質(zhì)管理及測(cè)試。生物製劑的絕對(duì)純度會(huì)因醺化作用(glycosylation)、脫醯胺作用(deamidation)或其他異質(zhì)性而難以測(cè)定，而這些變化會(huì)影響生物製劑之生物活性、穩(wěn)定性、免疫毒性及安全性。一般生物製劑的性質(zhì)可利用相關(guān)的物化、生化及免疫化學(xué)分析方法鑑定［說(shuō)明1］?；蚬こ萄u劑及疫苗等以細(xì)胞成份生產(chǎn)的製劑，其製造管制須符合種源批次系統(tǒng)(SeedLotSystem)(表ー)，種源批次系統(tǒng)的組成包括(1)種源細(xì)胞庫(kù)(MasterCellBank,MCB)?(2)工作細(xì)胞庫(kù)(ManufactureWorkingCellBank?MWCB)'(3)最終產(chǎn)品細(xì)胞(MaximumEnd-of-ProductionCells，MEPC)2?一'細(xì)胞株的鑑定2,3基因工程蛋白質(zhì)的製造須基於定義良好的種源細(xì)胞庫(kù)(MCB)與エ作細(xì)胞庫(kù)(MWCB)［說(shuō)明2］。細(xì)胞株須經(jīng)過(guò)無(wú)菌及黴漿菌(mycoplasma)之測(cè)試，細(xì)胞株之歷史及細(xì)胞庫(kù)的製造須詳細(xì)敘述，包括細(xì)胞培養(yǎng)方法與使用之試劑、體外細(xì)胞的代數(shù)與儲(chǔ)存條件，同時(shí)各細(xì)胞庫(kù)須標(biāo)明其基因型(genotype)與表現(xiàn)型(phenotype)，包括重組蛋白質(zhì)的表現(xiàn)或重組基因載體構(gòu)造的表現(xiàn)，並對(duì)MCB中的表現(xiàn)基因載體構(gòu)造進(jìn)行鑑定，若無(wú)法對(duì)MCB進(jìn)行測(cè)試，則應(yīng)對(duì)每個(gè)MWCB進(jìn)行測(cè)試。種源細(xì)胞庫(kù)(MCB)表現(xiàn)結(jié)構(gòu)之分析方法:.使用Restrictionendonuleasemapping或其他適當(dāng)?shù)募夹g(shù)分析表現(xiàn)基因載體構(gòu)造的複製數(shù)目，插入或刪除、及連結(jié)位置個(gè)數(shù)。對(duì)於extrachromosoma!表現(xiàn)系統(tǒng)，則測(cè)定原有表現(xiàn)基因構(gòu)造之宿主細(xì)胞所佔(zhàn)之百分比。.確定表現(xiàn)基因載體構(gòu)造之重組蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)序列(proteincodingsequence)°對(duì)於extrachromosoma!表現(xiàn)系統(tǒng)，則分離表現(xiàn)基因載體構(gòu)造並確定產(chǎn)品的核酸序列。對(duì)於具有表現(xiàn)基因載體構(gòu)造之複製染色體細(xì)胞，可由複製染色體的再複殖與定序確定其核酸序列。.生物製劑的核酸序列可以其他的技術(shù)加以確認(rèn)，如sequencingofpooledc-DNAclones或polymerasechainreaction技術(shù)°二'細(xì)胞庫(kù)及製程的污染測(cè)試4一般由細(xì)胞株製造之生物製劑常會(huì)有受到病毒污染的危險(xiǎn)，這樣的污染會(huì)在臨床上造成嚴(yán)重的後果，且污染可源自於來(lái)源細(xì)胞株或生產(chǎn)過(guò)程。因此在製造過(guò)程中須進(jìn)行病毒偵測(cè)試驗(yàn)，以確保所使用的細(xì)胞成份安全無(wú)虞，無(wú)有害的病源體污染。.病毒來(lái)源生物製劑的病毒污染可能源自於細(xì)胞株的來(lái)源，或在製造過(guò)程中引入病毒。a.內(nèi)源性的病毒污染細(xì)胞可能受潛伏或殘存的病毒感染，或由代代細(xì)胞垂直轉(zhuǎn)移的內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒感染，而這些病毒會(huì)以原性質(zhì)呈現(xiàn)或呈現(xiàn)感染性病毒。MCB受病毒感染的途徑有:(1)由受感染之動(dòng)物的細(xì)胞株感染，(2)使用含病毒細(xì)胞建立細(xì)胞株，(3)使用受污染的生物試劑，及(4)細(xì)胞處理過(guò)程中被污染。b.外源性的病毒污染外源性病毒可經(jīng)由許多途徑介入最終產(chǎn)品:（1）使用受污染的生物試劑，（2）使用含病毒細(xì)胞所引發(fā)表現(xiàn)之蛋白質(zhì)，（3）使用受污染的試劑，如單株抗體親和層析凝膠，及（4）在配方過(guò)程中使用受污染的輔劑。.病毒檢驗(yàn)（表二）a.種源細(xì)胞庫(kù)（MCB）須對(duì)種源細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行廣泛的內(nèi)源性（endogenous）與非內(nèi)源性（nonendogenous）的病毒檢驗(yàn)，由於人類(lèi)或其他靈猿類(lèi)動(dòng)物之病毒污染會(huì)引起特別的傷害，因此須對(duì)異源融合細(xì)胞株進(jìn)行測(cè)試，以偵測(cè)該病毒。非內(nèi)源性病毒測(cè)試須包括體外與活體接種測(cè)試及其他特定之測(cè)試，包括特定品種測(cè)試，如利用籐鼠產(chǎn)生抗體（mouseantibodyproduction，MAP）測(cè)試。若適用，根據(jù)細(xì)胞株過(guò)去之歷史偵測(cè)可能的病毒污染。b.工作細(xì)胞庫(kù)（MWCB）每一個(gè)生產(chǎn)用之MWCB或MEPC進(jìn)行外源性病毒測(cè)試。若MCB及MEPC之細(xì)胞已進(jìn)行非內(nèi)源性病毒測(cè)試，則不須對(duì)MWCB進(jìn)行類(lèi)似的測(cè)試，但也可對(duì)MWCB進(jìn)行完整的病毒測(cè)試。c.最終產(chǎn)品細(xì)胞（MEPC）最終產(chǎn)品細(xì)胞須進(jìn)行內(nèi)源性及外源性病毒測(cè)試一次以上，以確保製造過(guò)程未受病毒污染。若測(cè)得外源性病毒，則須詳細(xì)檢查製造過(guò)程，以查出污染的來(lái)源。三'病毒鑑定4偵測(cè)內(nèi)源性及外源性病毒之分析方法非常多一這些分析方法為目前所建議的方法，但並不完全侷限於此，須隨著科技之進(jìn)步，及生物製劑之性質(zhì)使用適當(dāng)?shù)姆治龇椒?。分析方法須包含?duì)照組以確定其方法之靈敏度與專(zhuān)一性。若由細(xì)胞種類(lèi)可預(yù)測(cè)某種特定的病毒之出現(xiàn)機(jī)率很大，則須針對(duì)該病毒進(jìn)行偵測(cè)，如免疫缺陷及肝炎病毒。若用於生產(chǎn)之細(xì)胞株來(lái)源為人類(lèi)或靈猿類(lèi)動(dòng)物，則須進(jìn)行人體病毒之測(cè)試，如聚合醃連鎖反應(yīng)(polymerasechainreaction?PCR)方法可偵測(cè)人體病毒及其他病毒的序列。.反轉(zhuǎn)錄病毒測(cè)試對(duì)於MCB或MEPC之細(xì)胞須進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄病毒測(cè)試，包括以敏感性細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行的感染性測(cè)試及電子顯微鏡試驗(yàn)(electronmicroscopy5EM)，若試驗(yàn)結(jié)果並無(wú)測(cè)得感染性及在EM中並無(wú)觀察到反轉(zhuǎn)錄病毒或類(lèi)似粒子，則需以反轉(zhuǎn)錄醃(reversetranscriptase，RT)或其他適當(dāng)?shù)姆椒▊蓽y(cè)不具感染性之反轉(zhuǎn)錄病毒。.體外試驗(yàn)體外試驗(yàn)之方法為將試驗(yàn)物質(zhì)接種在各種靈敏且可廣泛偵測(cè)人類(lèi)或相關(guān)動(dòng)物病毒的細(xì)胞培養(yǎng)中，測(cè)試細(xì)胞的選擇須依待測(cè)細(xì)胞庫(kù)的種類(lèi)而定，但須包括對(duì)人體病毒敏感的人類(lèi)或靈長(zhǎng)類(lèi)細(xì)胞株。測(cè)試方法及樣品須依病毒的種類(lèi)而定，並偵測(cè)細(xì)胞病變及血球吸附病毒。.活體試驗(yàn)活體試驗(yàn)是將試驗(yàn)物質(zhì)接種於動(dòng)物體內(nèi)(包括幼鼠、成鼠及受胎卵)，觀察無(wú)法在細(xì)胞培養(yǎng)中生長(zhǎng)之病毒。依待測(cè)細(xì)胞株的性質(zhì)與來(lái)源決定是否須對(duì)其他動(dòng)物品種進(jìn)行測(cè)試。試驗(yàn)期間須觀察試驗(yàn)動(dòng)物之健康情況及異常現(xiàn)象，以了解發(fā)病的原因。.抗體產(chǎn)生試驗(yàn)嚼齒類(lèi)細(xì)胞株之品種特定病毒可藉由將試驗(yàn)物質(zhì)接種至無(wú)病毒動(dòng)物中，經(jīng)過(guò)一段期間後，檢驗(yàn)血清抗體濃度或酵素活性而測(cè)得，例如籃鼠抗體產(chǎn)生測(cè)試法（MAP）、大鼠抗體產(chǎn)生測(cè)試法（RAP）、倉(cāng)鼠抗體產(chǎn)生測(cè)試（HAP）。說(shuō)明一般生化分析方法包括:SDSPAGE(reducedandnon-reduced)'HPLCreversephaseヽsizeexclusionヽionexchangeヽaminoacidanalysisヽproteinsequencingヽpeptidemappingヽisoelectricfocusingヽcirculardichroismヽmassspectrometryヽcarbohydrateanalysisヽbiologicalactivityヽhostcellproteinsヽnucleicacidヽLALヽbioburdendeterminationヽsterility等°(a)種源細(xì)胞庫(kù)(MCB)是將相同成分的細(xì)胞於特定的條件下儲(chǔ)存，一般MCB為經(jīng)挑選之含有表現(xiàn)基因載體的細(xì)胞株。(b)工作細(xì)胞庫(kù)(MWCB)是由MCB所衍生的細(xì)胞庫(kù)。參考文獻(xiàn)InternationalConferenceonHarmonizationTopicS6Document“PrechmcalTestingofBiotechnology-DerivedProduct”.(Step3)FDA/CBER(1994).DraftPointstoConsiderintheManufactureandTestingofMonoclonalAntibodyProductsforHumanUse.InternationalConferenceonHarmonization(1996).FinalGuidelineonQualityofBiotechnologicalProducts:AnalysisoftheExpressionConstructinCellsUsedforProductionof7-DNADerivedProteinProducts.FederalRegister61(37):7006-7008.InternationalConferenceonHarmonization(1996).GuidelineAvailability:Biotechnological/Biological PharmaceuticalProducts;ViralSafetyEvaluation.FederalRegister61(92):21882-21891.

表一、種源批次系統(tǒng)的品質(zhì)管制MCBMWCBMEPC無(wú)菌測(cè)試+十+黴漿菌測(cè)試+++病毒測(cè)試+十十動(dòng)物品種專(zhuān)一性?+一+反錄病毒測(cè)試**+一+確定性測(cè)試+十十若適用，測(cè)試嚼齒類(lèi)、靈長(zhǎng)類(lèi)或人類(lèi)反錄病毒以外的病毒。除動(dòng)物融合瘤外，其餘細(xì)胞物質(zhì)均需進(jìn)行反錄病毒測(cè)試。表二 細(xì)胞種源批次之病毒測(cè)試MCBMWCBMEPC反轉(zhuǎn)錄病毒及內(nèi)源性病毒檢測(cè)感染性測(cè)試+電子顯微鏡試驗(yàn)a+aa反轉(zhuǎn)錄鵰卜+bb其他特定病毒測(cè)試c若適用c—若適用c非內(nèi)源性病毒檢測(cè)體外測(cè)試方法+d+活體測(cè)試方法十d+抗體產(chǎn)生測(cè)試e+e其他特定病毒測(cè)試「+f,可同時(shí)測(cè)定其他作用物。b若反錄病毒感染測(cè)試為正反應(yīng)，則不需進(jìn)行?！?、適用於細(xì)胞株已知受該作用物感染。dMWCB的首次細(xì)胞，使用由MCB所衍生之可使用的極限代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試，由MWCB首次細(xì)胞所衍生之MWCB細(xì)胞，則只須對(duì)MWCB或其極限代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行體外及活體測(cè)試。0如MAP,RAP,HAP-一般適用於嚼齒類(lèi)細(xì)胞株?！笢y(cè)試由人類(lèi)及靈長(zhǎng)類(lèi)來(lái)源之細(xì)胞株，若適用，可測(cè)試其他細(xì)胞株。圖ー、生物製劑之品管過(guò)程第四章 藥理試驗(yàn)規(guī)範(fàn)（GuidelinesforGeneralPharmacologyStudies)第1節(jié) 藥效學(xué)試驗(yàn)(PharmacodynamicStudies,PD)第2節(jié) 藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)(PharmacokineticsStudies,PK)第四章第1節(jié)藥效學(xué)試驗(yàn)（PharmacodynamicStudies,PD）試驗(yàn)物質(zhì)的藥效作用可分為應(yīng)用於治療標(biāo)的疾病之主藥效作用及非標(biāo)的疾病之一般藥效作用。一般藥效學(xué)試驗(yàn)（Pharmacodynamicstudy）的目的為確定試驗(yàn)物質(zhì)其主藥效以外的其他藥效作用（一般藥效作用），試驗(yàn)應(yīng)能鑑定一般藥效作用，同時(shí)測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)的藥效，而試驗(yàn)結(jié)果有助於預(yù)測(cè)試驗(yàn)物質(zhì)可能產(chǎn)生的不良反應(yīng)，並提供處理該不良反應(yīng)的相關(guān)資訊。此外，可藉由一般藥效學(xué)試驗(yàn)偵測(cè)在毒性試驗(yàn)無(wú)法偵測(cè)到的功能變化，並觀察任何不良反應(yīng)。因此，若在藥效學(xué)試驗(yàn)中觀察到明顯的一般藥效作用時(shí)，則要對(duì)這些作用的反應(yīng)機(jī)制加以探討。若在人體臨床試驗(yàn)觀察到嚴(yán)重之不良反應(yīng)，應(yīng)藉一般藥效學(xué)試驗(yàn)了解此不良反應(yīng)的反應(yīng)機(jī)制。每個(gè)試驗(yàn)物質(zhì)的藥效作用都不相同，因此並無(wú)統(tǒng)一的測(cè)試步驟適用於一般藥效學(xué)試驗(yàn)。本規(guī)範(fàn)?僅提供一般藥效學(xué)試驗(yàn)的基本概念與測(cè)試方法，以應(yīng)用於新藥之研發(fā)。一般藥效學(xué)試驗(yàn)的測(cè)試步驟可分為二部份，（1）基本測(cè)試方法:所有新藥品須進(jìn)行的藥效測(cè)試方法，試驗(yàn)內(nèi)容須能足以評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)可能產(chǎn)生的藥效作用，及（2）進(jìn)階測(cè)試方法:根據(jù)基本測(cè)試方法之試驗(yàn)結(jié)果而決定須進(jìn)行的測(cè)試方法。隨著科技的發(fā)展，應(yīng)選擇最新穎的方法與技術(shù)進(jìn)行一般藥效學(xué)試驗(yàn)，同時(shí)參閱說(shuō)明中一般目前常使用的試驗(yàn)方法。ー、動(dòng)物.動(dòng)物品種選擇適於進(jìn)行試驗(yàn)的動(dòng)物，如大鼠、小鼠、天竺鼠、兔子、貓、狗等動(dòng)物，此外動(dòng)物的品種、性別、年齡等也須列入考量。.測(cè)試系統(tǒng)測(cè)試系統(tǒng)可分成下列四種:a.活體動(dòng)物b.離體的器官與組織c.血液與其組成份d.細(xì)胞與其組成份.注意使用的試驗(yàn)動(dòng)物或測(cè)試系統(tǒng)的靈敏度、再現(xiàn)性及一般接受程度。.使用的試驗(yàn)動(dòng)物與測(cè)試系統(tǒng)要能預(yù)測(cè)人體臨床試驗(yàn)結(jié)果，將可提供有效資訊。二'給藥1,給藥途徑與未來(lái)人體臨床使用的給藥途徑相同，若試驗(yàn)需要（依測(cè)試系統(tǒng)之適用性）可以其他給藥途徑取代。若試驗(yàn)物質(zhì)的吸收性很低，須改用其他給藥途徑，以能確定試驗(yàn)物質(zhì)完全吸收，如以靜脈注射給藥方式進(jìn)行測(cè)試。.給藥頻率若以活體動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，一般試驗(yàn)物質(zhì)是以單一劑量給藥，但若重覆劑量給藥會(huì)產(chǎn)生某些反應(yīng)時(shí)，則選擇適當(dāng)?shù)慕o藥頻率進(jìn)行試驗(yàn)。.劑量選擇選擇劑量之基本考量要素:a.試驗(yàn)組之試驗(yàn)物質(zhì)給予劑量範(fàn)圍須能觀察到劑量與藥效作用之間的關(guān)係。b.試驗(yàn)組之試驗(yàn)物質(zhì)給予劑量範(fàn)圍應(yīng)足以涵蓋產(chǎn)生主藥效作用之劑量範(fàn)圍。若試驗(yàn)物質(zhì)的臨床使用的給藥途徑不是靜脈注射，使用之劑量須能使試驗(yàn)物質(zhì)的血中濃度高於產(chǎn)生主藥效作用的濃度。.對(duì)照組一般試驗(yàn)須包含陰性(溶劑)對(duì)照組及/或陽(yáng)性(參考藥物或衍生藥物)對(duì)照組。三'測(cè)試方法.基本測(cè)試方法評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)可能產(chǎn)生的一般藥效作用。a.一般活性與行為上的作用肉眼觀察動(dòng)物之一般活性，評(píng)估肉眼可觀察到的變化，以了解試驗(yàn)物質(zhì)的藥效作用［說(shuō)明1］。b.中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用(1)檢查試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)自發(fā)性活動(dòng)力(spontaneouslocomotoractivity)的影響［說(shuō)明2］。(2)評(píng)估一般麻醉作用［說(shuō)明3］除了評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)清醒的動(dòng)物之麻醉作用外，亦須評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)麻醉的動(dòng)物產(chǎn)生的協(xié)力(synergistic)或拮抗(antagonistic)作用。(3)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)痙攣的影響［說(shuō)明4］除了評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)活體動(dòng)物的痙攣活性，亦須測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)誘發(fā)痙攣的動(dòng)物產(chǎn)生協(xié)力或拮抗作用。(4)評(píng)估鎮(zhèn)痛作用(說(shuō)明5］(5)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)體溫的影響c.自律神經(jīng)系統(tǒng)及平滑肌的作用評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)迴腸的作用，包括試驗(yàn)物質(zhì)本身產(chǎn)生的作用及與平滑肌興奮劑之交互作用［說(shuō)明6］。d.呼吸系統(tǒng)與心血管系統(tǒng)的影響評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)呼吸、血壓、血液流動(dòng)、心率及心電圖的影響。一般使用麻醉中之動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，若試驗(yàn)需要也可使用清醒的動(dòng)物。e.消化系統(tǒng)的影響評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)胃腸道蠕動(dòng)的影響。觀察腸道蠕動(dòng)之時(shí)間;若適用同時(shí)檢查使胃排空的時(shí)間［說(shuō)明7］?！晁c電解質(zhì)代謝的作用測(cè)定尿液的體積及尿液中鋼離子、鉀離子、氯離子等的濃度。g.其他重要的藥效作用評(píng)估主藥效及上述作用以外的特別藥效作用，而此藥效作用在與試驗(yàn)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或藥效相近的藥品得知可能產(chǎn)生的作用。.進(jìn)階測(cè)試方法根據(jù)基本測(cè)試方法之試驗(yàn)結(jié)果而決定須進(jìn)行的測(cè)試方法，以期深入了解其藥效作用。a.中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)腦電波(electroencephalogram)的影響，可利用電腦輔助數(shù)據(jù)分(2) 評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)脊椎反應(yīng)的影響。(3)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)條件下迴避反應(yīng)(conditionedavoidanceresponse)的影響。(4)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力與自發(fā)性活動(dòng)力的影響［說(shuō)明8］。b,軀體神經(jīng)系統(tǒng)的影響(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)神經(jīng)與肌肉的界面合體之影響［說(shuō)明9］。(2)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)肌肉鬆弛之影響［說(shuō)明10］°(3)評(píng)估局部麻醉的作用［說(shuō)明11］。c.自主神經(jīng)系統(tǒng)及平滑肌的作用(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)瞳孔大小及瞬膜收縮之影響。(2)利用離體的組織或器官，如血管、支氣管、輸精管、子宮等進(jìn)行試驗(yàn)。d.呼吸系統(tǒng)與心血管系統(tǒng)的影響(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)因?qū)ψ月缮窠?jīng)性、誘發(fā)迷走神經(jīng)性及頸動(dòng)脈閉塞藥品等引起的血壓或心率變化的影響。(2)同時(shí)進(jìn)行心臟檢驗(yàn)。(3)利用離體的組織或器官，如心臟、心房、乳頭肌、血管等，評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)該組織或器官的影響。e.消化系統(tǒng)的影響(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)胃液、唾液、膽汁、胰液分泌的影響。(2)利用體外試驗(yàn)，評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)胃腸道的蠕動(dòng)力之影響。(3)利用活體試驗(yàn)，評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)胃腸道的蠕動(dòng)力之影響。(4)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)胃與十二指腸的黏膜之影響。f.其他作用(1)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)血液凝固系統(tǒng)的影響［說(shuō)明!2］〇(2)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)血小板凝集的影響［說(shuō)明13］?(3)評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)腎功能的影響［說(shuō)明14］。(4)評(píng)估溶血的可能性。說(shuō)明.可使用多方觀察的方法。.可使用評(píng)估自發(fā)性活動(dòng)力的設(shè)備,如旋轉(zhuǎn)籠(wheelingcage)'開(kāi)放式廣場(chǎng)(openfield)方法。.一般麻醉可使用安眠劑，如巴比妥鹽酸(barbiturate)衍生物?若在此試驗(yàn)?zāi)Ｊ接^察到試驗(yàn)物質(zhì)具有協(xié)力或拮抗作用，則要確定該作用是否作用於中樞神經(jīng)系統(tǒng)。.可以電擊或pentylenetetrazol引發(fā)痙攣，也可視試驗(yàn)需要以strychnine'picrotoxinヽnicotine等引發(fā)痙攣。.使用引發(fā)壓力的方法，或使用writhingtest'Randall-Selittoヽhotplate'tail-flick等方法。.使用適當(dāng)?shù)慕M織作用藥品，如histamineヽacetylcholineヽbariumchloride'serotonin等。.大鼠與小鼠的胃腸道蠕動(dòng)時(shí)間，可以碳粉填充方法或其他生理測(cè)試儀器來(lái)評(píng)估。.使用適當(dāng)?shù)姆椒?，如rotarod測(cè)試法。.適當(dāng)?shù)难u備如坐骨神經(jīng)ー腓腸肌與橫隔膜神經(jīng)ー橫隔膜肌等離體組織模式。.適當(dāng)?shù)姆椒òㄊ湛s測(cè)試與heatdrop方法。.適當(dāng)?shù)姆椒òń悄し瓷渑c皮膚反射的評(píng)估。.測(cè)量包括血液凝固時(shí)間、加鈣後凝固時(shí)間(recalcificationcoagulation)ヽ及前凝血原酶凝血素(prothrombin)時(shí)間。.測(cè)量包括ADP'膠原及花生油酸對(duì)血小板凝集的謗發(fā)。14,測(cè)量包括腎小球過(guò)濾速率(glomerularfiltrationrate，GFR)與腎臟血流量(renalplasmaflow，RPF)°參考文獻(xiàn)1.JMHW(1995).JapaneseGuidelinesforNonclinicalStudiesofDrugsManual.第四章第2節(jié)藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)(PharmacokineticStudies,PK)本規(guī)範(fàn)’以「藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)」(PharmacokineticStudies)名詞代表試驗(yàn)物質(zhì)之「吸收、分佈、代謝及排泄試驗(yàn)」，藥勤學(xué)試驗(yàn)之目的是測(cè)定及了解試驗(yàn)物質(zhì)在動(dòng)物活體內(nèi)的吸收、分佈、代謝及排泄的過(guò)程，其不僅可用於預(yù)估該試驗(yàn)物質(zhì)之藥效、作用的過(guò)程與機(jī)轉(zhuǎn)，同時(shí)也可經(jīng)由試驗(yàn)物質(zhì)在體內(nèi)分佈、滯留期、濃度等數(shù)據(jù)而預(yù)估發(fā)生不良反應(yīng)的可能性，作為選擇安全及有效的人體使用量之依據(jù)。基於科學(xué)不斷進(jìn)步，本規(guī)範(fàn)期望以現(xiàn)階段的科學(xué)水準(zhǔn)，並針對(duì)試驗(yàn)物質(zhì)的性質(zhì)為準(zhǔn)則，選擇適合於該試驗(yàn)物質(zhì)特性的測(cè)試方法，如化學(xué)性質(zhì)、藥效、毒性、臨床反應(yīng)及給藥途徑，進(jìn)行藥勤學(xué)試驗(yàn)。一、測(cè)試方法1.試驗(yàn)物質(zhì)須對(duì)測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)、以同位素作標(biāo)記(isotope-labeled)之測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)［說(shuō)明1］，及預(yù)期使用之劑型(若試驗(yàn)需要)進(jìn)行試驗(yàn)評(píng)估。2,動(dòng)物品種以適合進(jìn)行毒理試驗(yàn)、藥理試驗(yàn)、及藥動(dòng)數(shù)據(jù)可沿用於臨床試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為考量，選擇適當(dāng)?shù)膭?dòng)物品種と。.給藥途徑與未來(lái)臨床使用的給藥途徑相同，若試驗(yàn)需要可以其他給藥途徑取代［說(shuō)明2］。.劑量範(fàn)圍參考毒理學(xué)試驗(yàn)、藥理學(xué)試驗(yàn)、及臨床試驗(yàn)使用之藥量，選擇適當(dāng)?shù)膭┝抗?fàn)圍ユ。.給藥週期原則上，單一及重覆給藥試驗(yàn)均需進(jìn)行。若進(jìn)行重覆劑量給藥，則給藥週期與間隔須足以評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)在動(dòng)物活體內(nèi)的穩(wěn)定度、累積程度及對(duì)藥物代謝酵素的影響。.分析方法清楚定義分析的方法及其靈敏度、準(zhǔn)確度、專(zhuān)一性等性質(zhì)。二、觀測(cè)的參數(shù)在評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)的藥動(dòng)性質(zhì)時(shí)，須觀察之參數(shù)如排除半衰期(或任何其他相關(guān)的常數(shù)，如排除速率常數(shù)、平均停留時(shí)間等)、清除率、分佈的體積及生體可用率等，藉著觀察以上參數(shù)，可確定試驗(yàn)物質(zhì)是否具有線性藥動(dòng)關(guān)係。若試驗(yàn)需要，須檢驗(yàn)該試驗(yàn)物質(zhì)之代謝產(chǎn)物的藥動(dòng)性質(zhì)。.吸收(Absorption)此試驗(yàn)的目的是了解試驗(yàn)物質(zhì)的吸收範(fàn)圍及速率，可以藉由血液濃度與時(shí)間之曲線圖(bloodconcentrationvstimecurve)，或血液濃度與排泄累積量之曲線圖(bloodconcentrationvscumulativeexcretion)測(cè)定［說(shuō)明3、4］。若試驗(yàn)需要，則須檢測(cè)影響試驗(yàn)物質(zhì)吸收的因素［說(shuō)明5］。.分佈(Distribution)此試驗(yàn)的目的是檢驗(yàn)試驗(yàn)物質(zhì)在不同器官與組織中的分佈情形，以及試驗(yàn)物質(zhì)之累積程度隨時(shí)間而產(chǎn)生的變化［說(shuō)明6］。須檢驗(yàn)之項(xiàng)目包括:a.試驗(yàn)物質(zhì)在組織與器官的濃度コ［說(shuō)明7］。b.藉由動(dòng)物全身的自體射線攝影術(shù)(autoradiography)觀察分佈之情形。c.試驗(yàn)物質(zhì)移轉(zhuǎn)到胎盤(pán)和胎兒的情形。d.與血漿蛋白質(zhì)結(jié)合(plasmaproteinbinding)及分佈於血液中的量。.代謝(Metabolism)代謝試驗(yàn)的目的是鑑定試驗(yàn)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物，並進(jìn)行定量，同時(shí)測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)的代謝途徑、程度、與速率，了解試驗(yàn)物質(zhì)在試驗(yàn)動(dòng)物與人體的代謝過(guò)程之異同處。代謝試驗(yàn)一般自生物檢體(如血液、尿液、膽汁與糞便)中分離出試驗(yàn)物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物，進(jìn)行定量［說(shuō)明8］。若試驗(yàn)需要，則須檢測(cè)影響試驗(yàn)物質(zhì)代謝的因素〔說(shuō)明9I0.排泄(Excretion)排泄試驗(yàn)的目的是在確定試驗(yàn)物質(zhì)及其主要代謝產(chǎn)物的排泄途徑、程度、與速率［說(shuō)明10］。若試驗(yàn)需要，則須檢測(cè)影響試驗(yàn)物質(zhì)排泄的因素［說(shuō)明11］。排泄途徑之檢測(cè)包括:a,尿液、糞便、呼氣［說(shuō)明12］0b.膽汁［說(shuō)明13］。c.乳液。.其他的評(píng)估及考慮項(xiàng)目觀察試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)藥物代謝酵素系統(tǒng)的影響，若試驗(yàn)需要，則須觀察及評(píng)估藥物交互作用與初度作用(行rst-passeffect)［說(shuō)明14］。若試驗(yàn)物質(zhì)為消旋混合物，則須檢驗(yàn)每個(gè)光學(xué)異構(gòu)物之藥動(dòng)性質(zhì)。說(shuō)明.使用同位素標(biāo)記的化合物，須註明:供應(yīng)者、合成方法、純度、使用的同位素、標(biāo)記的位置、特定放射活性、穩(wěn)定性等相關(guān)資料。.若以靜脈注射或其他途徑給藥，可不須考慮試驗(yàn)物質(zhì)吸收的過(guò)程，只須提供基本藥動(dòng)數(shù)據(jù)，了解試驗(yàn)物質(zhì)的藥動(dòng)性質(zhì)。.血中濃度之?dāng)?shù)據(jù)包括自血清、血漿或全血所測(cè)得。試驗(yàn)物質(zhì)的吸收程度及速率可藉由測(cè)定試驗(yàn)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物在血中最高濃度(Cmax)、到達(dá)該濃度所須的時(shí)間(Tmax)及血中濃度對(duì)時(shí)間所作曲線下的面積(theareaunderthebloodconcentrationcurve，AUC)等參數(shù)而得。若以給藥途徑與靜脈注射或其他標(biāo)準(zhǔn)給藥途徑方式給藥的參數(shù)結(jié)果進(jìn)行比較，可更精確地預(yù)估試驗(yàn)物質(zhì)吸收的範(fàn)圍與速率。.排泄之?dāng)?shù)據(jù)包括測(cè)量試驗(yàn)物質(zhì)在糞便、尿液、膽汁、呼氣中的排泄量，這些總排泄量可作為試驗(yàn)物質(zhì)吸收程度的指標(biāo)。.下列因素會(huì)影響試驗(yàn)物質(zhì)吸收:a.試驗(yàn)物質(zhì)在腸胃道中之溶解度。b,在製備過(guò)程中試驗(yàn)物質(zhì)被釋出的情形。c,吸收部位。d.試驗(yàn)物質(zhì)在腸胃道內(nèi)之代謝程度及穩(wěn)定度，若試驗(yàn)物質(zhì)是經(jīng)由胃腸道

以外部位給藥，則觀察試驗(yàn)物質(zhì)在給藥部位的代謝程度與穩(wěn)定性。e.腸胃道內(nèi)之食物及酸鹼值。.進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，要有足夠的觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)，以反應(yīng)試驗(yàn)物質(zhì)的藥動(dòng)性質(zhì)。.此試驗(yàn)在單ー劑量試驗(yàn)後進(jìn)行，若發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)物質(zhì)在器官與組織之濃度很高或呈現(xiàn)蓄積的現(xiàn)象，此時(shí)須進(jìn)行重覆劑量組織分佈試驗(yàn)，並須測(cè)定分佈在器官與組織中之化學(xué)成份，以了解試驗(yàn)物質(zhì)的毒性與藥效，並評(píng)估試驗(yàn)物質(zhì)的累積程度與血中濃度之關(guān)係。.除了活體試驗(yàn)，以試驗(yàn)物質(zhì)之代謝器官的部分細(xì)胞、細(xì)胞懸浮物及組織均質(zhì)物(tissuehomogenate)而得之樣品進(jìn)行體外試驗(yàn)，亦有助於了解試驗(yàn)物質(zhì)的代謝情形。.代謝過(guò)程會(huì)因動(dòng)物品種、年齡、性別、疾病癥狀等因素而改變，亦可能因重覆給予試驗(yàn)物質(zhì)或同時(shí)給予多種試驗(yàn)物質(zhì)造成的酵素被誘發(fā)或抑制而改變。代謝過(guò)程會(huì)因不同劑量與給藥速率而呈非線性現(xiàn)象，而試驗(yàn)物質(zhì)的非線性代謝現(xiàn)象與給藥途徑會(huì)影響到試驗(yàn)物質(zhì)與其代謝產(chǎn)物的比例，及代謝型態(tài)。.試驗(yàn)物質(zhì)的排泄累積量與給藥劑量之比值，可作為累積程度與藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)可信度的參考指標(biāo)。.下列因素會(huì)影響試驗(yàn)物質(zhì)之排泄:如(1)腎功能;(2)尿液酸鹼值;(3)尿流速率。.放射性物質(zhì)經(jīng)單一劑量給藥後，須測(cè)量至排泄物的放射性總量達(dá)給藥量的95%，或至給藥後第七天止，選用所需時(shí)間較短的一種測(cè)試方法進(jìn)行。.若試驗(yàn)物質(zhì)主要排泄至膽汁中，須觀察試驗(yàn)物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物是否參與腸肝(entro-hepatic)循環(huán)。.若試驗(yàn)物質(zhì)會(huì)影響藥物之代謝酵素，或試驗(yàn)物質(zhì)具高蛋白結(jié)合率，則有可能產(chǎn)生藥物交互作用。而若試驗(yàn)物質(zhì)以口服或其他途徑給予，在通過(guò)肝臟迅速被代謝並排泄至膽汁中，則表示此物質(zhì)有明顯first-passeffect作用。參考文獻(xiàn)JMHW(1995).JapaneseGuidelinesforNonclinicalStudiesofDrugsManual.InternationalConferenceonHarmonization(1995).GuidelineontheAssessmentofSystemicExposureinToxicityStudies60(40):11264-11268.InternationalConferenceonHarmonization(1995).GuidelineonRepeatedDoseTissueDistributionStudies60(40):11274-11275.第五章毒性試驗(yàn)規(guī)範(fàn)

(GuidelinesforToxicityStudies)第1節(jié)單ー劑量毒性試驗(yàn)(SingleDoseToxicityStudy)第2節(jié)重覆劑量毒性試驗(yàn)(RepeatedDoseToxicityStudy)第3節(jié)基因毒性試驗(yàn)(GenotoxicityStudy)第4節(jié)生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)(ReproductiveandDevelopmentToxicityStudy)第5節(jié)致癌性試驗(yàn)(CarcinogenicityStudy)第6節(jié)皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)(SkinSensitizationStudy)第7節(jié)皮膚感光過(guò)敏性試驗(yàn)(SkinPhotosensitizationStudy)第8節(jié)皮膚刺激性試驗(yàn)(SkinIrritationStudy)第9節(jié)眼睛刺激性試驗(yàn)(EyeIrritationStudy)第五章第1節(jié)單ー劑量毒性試驗(yàn)（SingleDoseToxicityStudy）單ー劑量毒性試驗(yàn)?的目的為測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)經(jīng)單ー劑量給藥後（包含24小時(shí)內(nèi)完成的多次給藥），對(duì)哺乳類(lèi)動(dòng)物之急性毒性影響，包括檢測(cè)其在活體中毒理特性之量與質(zhì)的任何改變，此試驗(yàn)結(jié)果有助於重覆劑量毒性試驗(yàn)時(shí)劑量範(fàn)圍之選擇，同時(shí)可顯示該試驗(yàn)物質(zhì)的標(biāo)的器官與遲發(fā)之毒性。同時(shí)單ー劑量毒性試驗(yàn)可協(xié)助選擇臨床試驗(yàn)第一階段的起始劑量，並了解服藥過(guò)量可能引發(fā)之急性毒性?！?動(dòng)物品種使用至少兩種的哺乳類(lèi)動(dòng)物，一種為嚙齒類(lèi)（最常用的為大鼠、態(tài)鼠），另一種為非嘴齒類(lèi)動(dòng)物［說(shuō)明1］，兔子除外。其中至少一種的動(dòng)物須包含雄、雌兩性。二'動(dòng)物數(shù)量嚼齒類(lèi)動(dòng)物每個(gè)劑量組使用10隻（5雄、5雌）或以上動(dòng)物;非嚼齒類(lèi)每個(gè)劑量組使用6隻（3雄、3雌）或以上動(dòng)物。三、給菓途徑進(jìn)行兩種或以上的給藥途徑;（1）與未來(lái)人體臨床使用之給藥途徑相同，（2）會(huì)引起全身性作用的給藥途徑，若試驗(yàn)物質(zhì)許可，使用靜脈注射途徑給藥。若靜脈注射是未來(lái)人體臨床使用之給藥途徑，則不須進(jìn)行其他給藥途徑［說(shuō)明2］。四、劑量範(fàn)圍劑量範(fàn)圍須包含不會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng)及足以顯示毒性癥狀（造成死亡）之劑量。此外，還要包括溶劑對(duì)照組、及/或空白對(duì)照組。若試驗(yàn)物質(zhì)毒性很低，則以試驗(yàn)物質(zhì)許可之最高限界劑量進(jìn)行〔說(shuō)明3I0五、觀察.一般試驗(yàn)觀察期為14天，每天至少觀察動(dòng)物二次，以確定死亡情形。.每天至少觀察試驗(yàn)動(dòng)物的癥狀一次，記錄試驗(yàn)動(dòng)物顯示的毒性癥狀，包括死亡率、臨床毒性癥狀（嚴(yán)重程度）、發(fā)生時(shí)間、持續(xù)的時(shí)間及中毒後的復(fù)原性，並瞭解毒性癥狀與劑量及時(shí)間的關(guān)係。.在觀察期間死亡的動(dòng)物（嚼齒類(lèi)或非嚼齒類(lèi)動(dòng)物）及試驗(yàn)終結(jié)存活的嚼齒類(lèi)動(dòng)物均須進(jìn)行屍體解剖和肉眼病理檢查。.若試驗(yàn)需要，所有肉眼可觀察到有病變的器官與組織均須進(jìn)行組織病理檢驗(yàn)。說(shuō)明.若具有初步單ー劑量毒性試驗(yàn)或短期重覆劑量毒性試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果，且其劑量範(fàn)圍及臨床觀察已被確定，則可刪除非嚼齒類(lèi)動(dòng)物的單ー劑量毒性試驗(yàn)。.嚼齒類(lèi)動(dòng)物，口服給藥若採(cǎi)強(qiáng)迫餵食的方式，給藥前動(dòng)物須經(jīng)過(guò)特定時(shí)段的禁食，而給藥之體積應(yīng)在10ml/kg動(dòng)物體重以下，若給藥體積過(guò)高，可採(cǎi)多次給藥方式，但須在6小時(shí)內(nèi)完成。.若試驗(yàn)許可，依不同劑量所產(chǎn)生的死亡率或毒性癥狀估算致死劑量。

參考文獻(xiàn)1.FederalRegisterPharmaceuticals.(1996).SingleDoseAcuteToxicityTestingfor

參考文獻(xiàn)1.FederalRegisterPharmaceuticals.第五章第2節(jié)重覆劑量毒性試驗(yàn)(RepeatedDoseToxicityStudy)重覆劑量毒性試驗(yàn)之目的是測(cè)試試驗(yàn)物質(zhì)經(jīng)重覆給藥後對(duì)哺乳類(lèi)動(dòng)物可能產(chǎn)生之毒性影響，了解毒性變化之產(chǎn)生，同時(shí)測(cè)定無(wú)毒性顯示之劑量。給藥時(shí)間的長(zhǎng)短，依照試驗(yàn)物質(zhì)在未來(lái)臨床使用之頻率，選擇毒性試驗(yàn)的給藥期間1，一週給藥7天[說(shuō)明1]°藥物於臨床上使用之期間毒性試驗(yàn)給藥期間單ー劑量亞急性2?4週二週以下的重覆劑量給藥亞急性1個(gè)月一個(gè)月以下的重覆劑量給藥亞慢性3個(gè)月[說(shuō)明2]一個(gè)月以上的長(zhǎng)期重覆劑量給藥慢性6個(gè)月[說(shuō)明2]產(chǎn)生特殊毒性性質(zhì)的試驗(yàn)物質(zhì)[說(shuō)明3]慢性6個(gè)月[說(shuō)明2ヽ4]一'動(dòng)物品種使用至少兩種的哺乳類(lèi)動(dòng)物，一種為嚼齒類(lèi)，另一種為非嚼齒類(lèi)動(dòng)物(兔子除外)，最常使用的動(dòng)物為鼠和狗。二、性別雄、雌兩性動(dòng)物的數(shù)量須相同。三'動(dòng)物數(shù)量2.亞急性毒性試驗(yàn):嚼齒類(lèi)動(dòng)物每個(gè)劑量組使用雄、雌各!0隻或以上動(dòng)物;非嚼齒類(lèi)每個(gè)劑量組使用雄、雌各4隻或以上動(dòng)物。若須進(jìn)行試驗(yàn)中期解剖或復(fù)原測(cè)試，動(dòng)物數(shù)量須視解剖的次數(shù)適量增加，而每次試驗(yàn)中期解剖，每組雄、雌各10隻或以上。.亞慢性毒性試驗(yàn):嘴齒類(lèi)動(dòng)物每個(gè)劑量組使用雄、雌各20隻或以上動(dòng)物;非嚼齒類(lèi)每個(gè)劑量組使用雄、雌各4隻或以上動(dòng)物。若須進(jìn)行試驗(yàn)中期解剖或復(fù)原測(cè)試，動(dòng)物數(shù)量須視解剖的次數(shù)適量增加I而每次試驗(yàn)中期解剖，每組雄、雌各10隻或以上。3,慢性毒性試驗(yàn):嘴齒類(lèi)動(dòng)物每個(gè)劑量組使用雄、雌各20隻或以上動(dòng)物;非嚼齒類(lèi)每個(gè)劑量組使用雄、雌各4隻或以上動(dòng)物。若須進(jìn)行試驗(yàn)中期解剖或復(fù)原測(cè)試，動(dòng)物數(shù)量須視解剖的次數(shù)適量增加，而每次試驗(yàn)中期解剖，每組雄、雌各10隻或以上。四、給藥途徑與未來(lái)人體臨床使用的給藥途徑相同〔說(shuō)明5I0五、劑量範(fàn)圍為了使毒性試驗(yàn)?zāi)軌蝻@示試驗(yàn)物質(zhì)的毒性影響，並了解劑量與毒性間的關(guān)係。試驗(yàn)中至少要有三個(gè)劑量組:（1）高劑量為該劑量足以使試驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生毒性癥狀，但不造成死亡;（2）低劑量為不會(huì)引起毒性的劑量:（3）中間劑量為足以引起最低毒性作用（如血中酵素值改變或體重成長(zhǎng)速度下降）。此外，還要包括載體對(duì)照組、空白對(duì)照組，若試驗(yàn)需要可加入?yún)⒖紝?duì)照組。六、觀察與檢驗(yàn)2.觀察a.每天至少觀察動(dòng)物二次，以確定死亡情形。b.每天至少觀察試驗(yàn)動(dòng)物的癥狀一次，記錄試驗(yàn)動(dòng)物顯示的毒性及藥效作用，包括作用之開(kāi)始及過(guò)程。若發(fā)現(xiàn)腫瘤生長(zhǎng)，則記錄每個(gè)肉眼可觀察到或觸摸到的腫瘤發(fā)現(xiàn)時(shí)間、部位、大小、外觀及成長(zhǎng)過(guò)程。在亞急、亞慢性毒性試驗(yàn)，須同時(shí)觀察動(dòng)物行為的改變、自主官能管制失調(diào)、及其他神經(jīng)系統(tǒng)毒性徵象。.體重與食物消耗量定期測(cè)量動(dòng)物的體重及食物消耗量。若試驗(yàn)需要，須同時(shí)測(cè)量動(dòng)物的飲水消耗量。a,體重:試驗(yàn)開(kāi)始給藥前，測(cè)量動(dòng)物體重;給藥期間每週至少測(cè)量ー次。b,食物消耗量:試驗(yàn)開(kāi)始給藥前，測(cè)量食物消耗量;給藥期間每週至少測(cè)量一次。嚼齒類(lèi)動(dòng)物食物消耗量之測(cè)量可以每隻或每組為單位［說(shuō)明6］。.病理檢驗(yàn)a.血液檢驗(yàn)（Hematology）試驗(yàn)動(dòng)物須在開(kāi)始給藥前、給菓期間（若試驗(yàn)需要）及解剖前各採(cǎi)樣一