兩種Ｘ染色質(zhì)檢查方法的比較

兩種Ｘ染色質(zhì)查抄要領(lǐng)的比力【論文關(guān)鍵詞】要領(lǐng)；檢測(cè)；性染色質(zhì)；比力【論文摘要】目的：探究革新檢測(cè)X染色質(zhì)的要領(lǐng)。要領(lǐng)：以在校門生的口腔黏膜細(xì)胞為質(zhì)料，別離用石炭酸復(fù)紅染液直接涂片法和吉姆薩染液扣染法表現(xiàn)X染色質(zhì)。結(jié)果：石炭酸復(fù)紅染液染色直接涂片法操縱簡(jiǎn)樸，用時(shí)短，陽(yáng)性檢測(cè)率低；吉姆薩染液扣染法操縱稍龐大，用時(shí)稍長(zhǎng)，陽(yáng)性檢出率高，但由于講堂時(shí)間限定，中職門生的講堂講授中不易推廣。討論：應(yīng)用革新的人類性染色質(zhì)檢測(cè)要領(lǐng)，可以正確檢出性染色質(zhì)。中等職校?醫(yī)門生物學(xué)?實(shí)行講授中不停相沿石炭酸復(fù)紅直接涂片法〔以下簡(jiǎn)稱直接涂片法〕，陽(yáng)性率不太抱負(fù)，故比年鑒戒改進(jìn)后的吉姆薩染液扣染法〔以下簡(jiǎn)稱扣染法〕，陽(yáng)性率顯著進(jìn)步，現(xiàn)將兩種要領(lǐng)比力如下。1實(shí)行質(zhì)料及要領(lǐng)1．1質(zhì)料：選擇本校一年級(jí)漢族女生〔16~20歲〕20例，取其頰部口腔黏膜細(xì)胞為標(biāo)本。1．1．1染色液配制：石炭酸復(fù)紅染液的配制，A液：堿性復(fù)紅(basifuhsin)0．3g，95%酒精10l，B液：石炭酸5．0g、蒸餾水95l；將堿性復(fù)紅在研缽中研磨后，漸漸參加95%酒精，繼承研磨使其溶解，配成A液。石炭酸溶解于水中，配成B液，混淆A液及B液即成。通常可將此混淆液稀釋5~10倍利用，稀釋液易變質(zhì)失效，一次不宜多配[1]。1．1．2吉姆薩染液的配制：將吉姆薩粉末1g先溶于少量甘油，在研缽內(nèi)研磨30in以上，至看不見顆粒為止，再將全部(66l)剩余甘油倒入，于56℃溫箱內(nèi)保溫2h。然后再參加甲醇(66l)，攪勻后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可恒久保存，一樣平常剛配制的母液染色結(jié)果欠佳，保存時(shí)間越長(zhǎng)越好。臨用時(shí)用pH6.8的磷酸鹽緩沖液稀釋10倍。結(jié)實(shí)液(甲醇:冰醋酸=3:1)，用時(shí)現(xiàn)配[2]。1．1．3實(shí)行所需其他東西：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、燒杯、量筒、吸管、牙簽、染色缸、擦鏡紙、吸水紙、離心機(jī)以及鹽酸試劑等。1．2要領(lǐng)1．2．1石炭酸復(fù)紅染色直接涂片法：用牙簽在女性口腔黏膜頰部刮取上皮細(xì)胞，勻稱涂布于(只能向一個(gè)標(biāo)的目的涂抹，只管制止細(xì)胞被粉碎)載玻片中心部位。應(yīng)當(dāng)把細(xì)胞核邊界清楚的深層上皮細(xì)胞用作這些涂片。稍干后，放入3:1的甲醛、冰醋酸結(jié)實(shí)液中結(jié)實(shí)30in。結(jié)實(shí)的標(biāo)本經(jīng)水沖洗后，在石炭酸復(fù)紅染液中染5~10in，再在95％乙醇中分色約半分鐘，末了用中性樹膠封片、鏡檢。1．2．2吉姆薩扣染法：受查抄者用凈水漱口后，用牙簽輕輕刮取兩側(cè)頰部?jī)?nèi)側(cè)的黏膜，棄去第一次刮取到的黏膜細(xì)胞，在同一部位一連刮取數(shù)次，將刮取的細(xì)胞涮入裝有生理鹽水3l的刻度離心管中，以1000r/in離心10in，棄上清液，參加1l/L鹽酸3l，用吸管將細(xì)胞團(tuán)輕輕打散，制成懸液，37℃解離20in，以1000r/in離心10in，棄上清液。參加新配制的卡諾結(jié)實(shí)液〔甲醇:冰醋酸，V:V=3:1〕3l，用吸管將細(xì)胞團(tuán)輕輕打散，制成懸液，室溫下結(jié)實(shí)10in，再次打散細(xì)胞團(tuán)后，繼承結(jié)實(shí)20in，離心前將細(xì)胞打散，以1000r/in離心10in，棄上清液，按照細(xì)胞幾多加0.1~0.2l新配制的卡諾結(jié)實(shí)液，將細(xì)胞打散，制成懸液，用吸管取細(xì)胞懸液，滴于冰水浸過(guò)的載玻片上，天然晾干后染色、鏡檢。1．3計(jì)數(shù)尺度及要領(lǐng)：X染色質(zhì)位于核膜內(nèi)緣，是核內(nèi)惟一濃染的、外表清楚的小體，呈小山丘形、扁平形或三角形、圓形等。形態(tài)相似但不依附于核膜內(nèi)緣的不計(jì)數(shù)，凡核膜缺損、染色過(guò)深或細(xì)胞上有雜質(zhì)附著，細(xì)胞核重疊等均不做計(jì)數(shù)；低倍鏡下尋到細(xì)胞會(huì)合而又勻稱疏散的細(xì)胞群，油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)可計(jì)數(shù)細(xì)胞〔可做為計(jì)數(shù)細(xì)胞的是細(xì)胞核較大，外表清楚完備，無(wú)缺損、皺褶，染色清楚。核質(zhì)呈細(xì)網(wǎng)狀或勻稱的細(xì)顆粒狀，無(wú)深染大顆粒及細(xì)菌污染〕，盤算此中X染色質(zhì)的陽(yáng)性率。2結(jié)果2．1直接涂片法結(jié)果：制片時(shí)間短，約40in，大多數(shù)個(gè)別細(xì)胞被濃染，且配景殘留染液雜質(zhì)較多，污染視野，淘汰了可計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量。個(gè)別細(xì)胞X染色質(zhì)陽(yáng)性率為12%~17％。在講授歷程中由門生操縱時(shí)，因主不雅緣故原由致陽(yáng)性檢出率更低。2．2扣染法結(jié)果：染色時(shí)間較長(zhǎng)，95分鐘擺布，鏡下可見細(xì)胞外表拉清楚，胞核胞漿比擬顯著，核質(zhì)勻稱，細(xì)胞配景質(zhì)料雜質(zhì)少，X染色質(zhì)形態(tài)清楚，每個(gè)個(gè)別X染色質(zhì)陽(yáng)性率在17%~20％。3討論X染色質(zhì)查抄可用于斷定細(xì)胞中X染色體數(shù)量，以此斷定性別及性染色體非常的遺傳性疾玻與核型闡發(fā)比擬具有快速、操縱輕便，所需儀器簡(jiǎn)樸等長(zhǎng)處，是比核型闡發(fā)優(yōu)先思量的要領(lǐng)：直接涂片法染色時(shí)間短，制片時(shí)間短染色歷程不易掌控，細(xì)胞不是染色過(guò)深，就是細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)比擬不顯著，大概是由于染液濃度過(guò)高或是染色時(shí)間不適所造成；且配景殘留較多雜質(zhì)，直接涂片致使細(xì)胞不易完全分開，有重疊細(xì)胞團(tuán)，由于結(jié)實(shí)液揮發(fā)還致細(xì)胞被粉碎較多，導(dǎo)致鏡檢和統(tǒng)計(jì)困難。門生在實(shí)行課上操縱時(shí)，制片歷程更不敷細(xì)致等主不雅緣故原由致以上環(huán)境更嚴(yán)峻，陽(yáng)性檢出率更低，據(jù)統(tǒng)計(jì)為10%~13％?？廴痉ㄔ鲩L(zhǎng)了細(xì)胞解離歷程，促進(jìn)細(xì)胞松軟，可以或許使細(xì)胞充實(shí)疏松，不重疊；在高倍鏡下不雅察，核質(zhì)勻稱，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核區(qū)明白顯，易于統(tǒng)計(jì)；結(jié)實(shí)歷程在離心管中舉行，淘汰了結(jié)實(shí)液揮發(fā)而導(dǎo)致的細(xì)胞粉碎，細(xì)胞保持完備，