清燥潤(rùn)肺合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

清燥潤(rùn)肺合劑質(zhì)量尺度研究周娟娟,潘金火,盧歡,朱寧?kù)o,潘文【摘要】目的創(chuàng)立清燥潤(rùn)肺合劑的質(zhì)量尺度。要領(lǐng)接納薄層色譜法對(duì)制劑中桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉舉行定性區(qū)分；接納高效液相色譜法對(duì)制劑中甘草酸含量舉行測(cè)定。結(jié)果薄層色譜中陰性無(wú)滋擾,專(zhuān)屬性強(qiáng)；甘草酸在0.2031～1.6921μg范疇內(nèi)線(xiàn)性干系精良,r＝0.9998,均勻接納率為98.24%,rsd＝2.62%。結(jié)論本試驗(yàn)創(chuàng)立的要領(lǐng)輕便、快捷,重復(fù)性好,可用于清燥潤(rùn)肺合劑的質(zhì)量操縱?！娟P(guān)鍵詞】清燥潤(rùn)肺合劑；質(zhì)量尺度；甘草酸；高效液相色譜法；薄層色譜法keyrds：qingzarunfeiixture；qualitystandard；glyyrrhiziaid；hpl；tl清燥潤(rùn)肺合劑由桑葉、石膏、甘草、黑芝麻、北沙參、麥冬、枇杷葉等9味藥材構(gòu)成。具有清燥潤(rùn)肺之效,用于燥氣傷肺、干咳無(wú)痰、氣逆而喘、咽干鼻燥、心煩口渴等病癥。筆者按照處方構(gòu)成藥物的理化性子[1]及重復(fù)試驗(yàn),對(duì)桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉舉行了區(qū)分,同時(shí),接納高效液相色譜法測(cè)定了制劑中甘草酸的含量,創(chuàng)立了可靠、不變、簡(jiǎn)樸的質(zhì)量操縱要領(lǐng)。1儀器與試藥agilent1100高效液相色譜儀,agilent1100紫外檢測(cè)器,hphestatins事情站。清燥潤(rùn)肺合劑10批樣品由揚(yáng)州市三藥制藥消費(fèi)并提供(批號(hào)為061101、061102、061103、061104、061105、061106、061107、061126、061128、061130)；甘草藥材購(gòu)自揚(yáng)州市藥材公司(由揚(yáng)州市三藥制藥提供,批號(hào)為060912、060920、060928),經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)王春根傳授斷定為豆科植物甘草的枯燥根及根莖；甘草酸銨比較品購(gòu)自中國(guó)藥品生物成品檢定所(批號(hào)110731-202211)。硅膠g由青島海洋化工場(chǎng)消費(fèi)；全部試劑由上海久億化學(xué)試劑消費(fèi),均為闡發(fā)純或色譜純。2定性區(qū)分2.1桑葉取桑葉比較藥材2g,加石油醚(60～90℃)20l,超聲處置懲罰20in,棄去石油醚液,藥渣揮干,加無(wú)水乙醇30l,超聲處置懲罰20in,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0l使溶解,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品20l,蒸干,殘?jiān)?0%乙醇50l,超聲處置懲罰20in,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)铀?0l使溶解,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?l使溶解,作為供試品溶液。取除桑葉以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品20l,用與供試品溶液制備雷同的要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各5μl,別離點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠g薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上層溶液為睜開(kāi)劑,置于睜開(kāi)劑預(yù)飽和20in的睜開(kāi)缸內(nèi),睜開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中,在與比較藥材色譜對(duì)應(yīng)的位置上,表現(xiàn)雷同顏色的熒光斑點(diǎn),而陰性比較液無(wú)此斑點(diǎn)。2.2甘草[2]取甘草比較藥材1g,加乙醚30l,超聲處置懲罰20in,濾過(guò),藥渣揮干,加甲醇30l,超聲處置懲罰20in,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)铀?0l使溶解,濾過(guò),用水飽和的正丁醇萃取2次,每次20l,歸并正丁醇液,用水洗滌2次,每次20l,取正丁醇液,蒸干,殘?jiān)蛹状?l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加乙醚30l,超聲處置懲罰20in,靜置分層,置分液漏斗中,分出水層,用水飽和的正丁醇提取2次,每次20l,歸并正丁醇液,用水洗滌2次,每次20l,取正丁醇液,蒸干,殘?jiān)蛹状?l使溶解,作為供試品溶液。取除甘草以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各5μl,別離點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為睜開(kāi)劑,睜開(kāi),取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應(yīng)位置上,顯雷同顏色的斑點(diǎn),陰性比較液無(wú)滋擾。2.3北沙參取北沙參比較藥材5g,加乙醚30l,加熱回流1h,濾過(guò),濾液揮干,殘?jiān)右掖?l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,蒸干,殘?jiān)右掖?0l使溶解,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)右掖?l使溶解,作為供試品溶液。取除北沙參以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各10μl,別離點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為睜開(kāi)劑,睜開(kāi),取出,晾干,置氨缸內(nèi)熏40in,紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中,在與比較藥材色譜對(duì)應(yīng)的位置上,表現(xiàn)雷同顏色的熒光斑點(diǎn),陰性比較液無(wú)滋擾。2.4麥冬取麥冬比較藥材2g,加水20l,加鹽酸2l,煮沸2in,放冷,濾過(guò),濾液用三氯甲烷10l萃取,取三氯甲烷液,蒸干,殘?jiān)尤燃淄?.5l溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加鹽酸1l,煮沸2in,放冷,濾過(guò),濾液用三氯甲烷10l萃取1次,取三氯甲烷液,蒸干,殘?jiān)尤燃淄?.5l使溶解,作為供試品溶液。取除麥冬以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述溶液各約5μl,別離點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上,以三氯甲烷-甲醇(20∶1)為睜開(kāi)劑,睜開(kāi),取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應(yīng)位置上,顯雷同顏色的斑點(diǎn),陰性比較液無(wú)滋擾。2.5枇杷葉取枇杷葉比較藥材5g,加水200l煎煮2h,濾過(guò),濾液用5%的氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至10,用乙酸乙酯40l萃取,濃縮,殘?jiān)?l甲醇溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加水20l稀釋,搖勻,濾過(guò),用5%的氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至10,用乙酸乙酯40l萃取,濃縮,殘?jiān)?l甲醇溶解,作為供試品溶液[3]。取除枇杷葉以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述溶液各約10μl,別離點(diǎn)于同一硅膠g薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(8∶4∶1)為睜開(kāi)劑,睜開(kāi),取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應(yīng)位置上,顯雷同顏色的斑點(diǎn),陰性比較液無(wú)滋擾。3含量測(cè)定3.1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補(bǔ)劑；以甲醇-水-冰醋酸(63∶36.6∶0.4)為活動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250n；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按甘草酸峰盤(pán)算應(yīng)不低于3000。3.2比較品溶液的制備細(xì)密稱(chēng)取甘草酸銨比較品,加甲醇制成0.2073g/l的溶液。細(xì)密量取5l,置10l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得0.10365g/l的比較品溶液。3.3供試品溶液的制備取10個(gè)批號(hào)的樣品,每批取2份,別離細(xì)密量取20l,加水飽和的正丁醇20l,超聲30in,置分液漏斗中取正丁醇液。下層加水飽和的正丁醇20l萃取,歸并正丁醇液,蒸干,殘?jiān)眉状级哭D(zhuǎn)移至10l量瓶中,定容,搖勻,即得。3.4空缺試驗(yàn)取除甘草以外的別的8味藥材,按處方比例制得陰性樣品,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制得陰性比較液。細(xì)密汲取10μl,一連進(jìn)樣3次。結(jié)果表白,空缺比較液未檢出與甘草酸銨比較液對(duì)應(yīng)的色譜峰,視為空缺無(wú)滋擾。色譜圖見(jiàn)圖1。3.5線(xiàn)性干系觀(guān)察別離汲取濃度為0.10365g/l的甘草酸銨比較品溶液(折合甘草酸為0.10153g/l)2、4、6、8、10l,用甲醇定容至10l,各進(jìn)樣10μl。以甘草酸銨均勻峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)舉行線(xiàn)性回歸,得回歸方程：y＝721.62x－16,r＝0.9998,指標(biāo)身分甘草酸的線(xiàn)性范疇為0.2031～1.6921μg。3.6細(xì)密度試驗(yàn)細(xì)密汲取同一比較品溶液10μl,一連進(jìn)樣5次,結(jié)果測(cè)得甘草酸銨峰面積值的rsd＝0.71%。3.7不變性試驗(yàn)細(xì)密汲取批號(hào)為061105的樣品溶液10μl,每隔斷2h進(jìn)樣1次,一連觀(guān)察10h,峰面積的rsd＝0.74%,表白指標(biāo)身分在10h內(nèi)比力不變。3.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(061105)的樣品5份,按“樣品測(cè)定〞項(xiàng)下要領(lǐng)測(cè)得樣品中甘草酸銨的含量,rsd＝2.11%,表白重復(fù)性精良。3.9加樣接納率試驗(yàn)取含量同一批號(hào)(061105)的樣品6份,細(xì)密量取10l,別離細(xì)密參加濃度為0.10365g/l的甘草酸銨比較液4l,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制得供試液。照“樣品測(cè)定〞項(xiàng)下要領(lǐng)測(cè)定,盤(pán)算樣品中甘草酸銨含量及加樣接納率,結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣接納率試驗(yàn)結(jié)果〔略〕3.10樣品測(cè)定取10個(gè)批號(hào)的樣品適量,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制成供試品溶液。按上述色譜條件,別離進(jìn)樣10μl,各進(jìn)2針,用尺度曲線(xiàn)法盤(pán)算含量。10個(gè)批號(hào)樣品甘草酸含量測(cè)定結(jié)果依次為0.0318、0.0383、0.0393、0.0371、0.0389、0.0386、0.0385、0.0389、0.0391、0.0391g/l。4討論在定性區(qū)分的拔取上,由于苦杏仁中的重要身分是苦杏仁苷,且其他身分的含量很少,而枇杷葉中也同樣含有苦杏仁苷,故未對(duì)苦杏仁舉行試驗(yàn)；而阿膠、黑芝麻的區(qū)分,顛末試驗(yàn),陰性均有滋擾；故暫未創(chuàng)立此3味藥的區(qū)分要領(lǐng)。試驗(yàn)表白,上述桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉的區(qū)分專(zhuān)屬性強(qiáng),重復(fù)性好,操縱輕便。本試驗(yàn)曾以甲醇為活動(dòng)相a,水相為活動(dòng)相b,此中水相由水-冰醋酸(100∶1)構(gòu)成,a∶b＝66∶34,試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn),甘草酸銨峰