血液學(xué)血細(xì)胞化學(xué)染色課件

第三章

細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

1精選ppt第三章

細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)1精選ppt

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟；鐵染色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色的正常血細(xì)胞染色反應(yīng)和臨床意義。2.熟悉：細(xì)胞化學(xué)染色的概念和臨床應(yīng)用。3.了解：細(xì)胞化學(xué)染色的原理和影響因素。2精選ppt學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟；鐵染色第一節(jié)概述

一、概念細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分(酶類/脂類/糖類/鐵/蛋白質(zhì)/核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。3精選ppt第一節(jié)概述

一、概念3精選ppt要求：血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。4精選ppt要求：血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反二、必要性從形態(tài)學(xué)觀察，存在較多的主觀性；有些原始細(xì)胞形態(tài)較相似，難以鑒別；結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色，提高疾病的診斷率。5精選ppt二、必要性從形態(tài)學(xué)觀察，存在較多的主觀性；5精選ppt三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型2.輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷3.觀察疾病的療效和預(yù)后4.疾病發(fā)病機制的探討6精選ppt三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型6精選ppt白血病的診斷：MICM分型

M：morphologyI：immunology

C：cytogeniticsM：molecularbiology形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步的診斷免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種類細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)分子生物學(xué)分型：提高到分子水平7精選ppt白血病的診斷：MICM分型

M：morpho四、基本步驟1.固定（1）物理法：干燥、火焰（2）化學(xué)法：A、蒸氣固定：甲醛B、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。8精選ppt四、基本步驟1.固定8精選ppt2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色（2）聯(lián)苯胺法：POX（3）普魯士藍(lán)反應(yīng)：Fe（4）希夫反應(yīng)：PAS（5）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：SBB9精選ppt2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色9精選pp3.復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅PAS-------甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。10精選ppt3.復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅1五、研究對象

外周血和骨髓新鮮涂片單個細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì)：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等

11精選ppt11精選ppt

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

鐵染色過氧化物酶染色蘇丹黑B染色酯酶染色過碘酸-希夫反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色

12精選ppt

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

一、鐵染色

（ferricstain）13精選ppt一、鐵染色

（fer亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍(lán)色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)反應(yīng)骨髓小粒中的含F(xiàn)e血黃素（細(xì)胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細(xì)胞內(nèi)的Fe（細(xì)胞內(nèi)鐵）原理14精選ppt亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)

二、結(jié)果判斷

1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素)鐵顆粒、鐵小珠、鐵團(tuán)塊15精選ppt二、結(jié)果判斷1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀察)（－）：無顆粒（＋）：有少量鐵顆粒或偶見鐵小珠（＋＋）：有較多的鐵顆粒或鐵小珠（＋＋＋）：有很多的鐵顆粒、鐵小珠和少數(shù)鐵小塊（＋＋＋＋）：有極多鐵顆粒、小珠和很多鐵小塊，密集成堆。16精選ppt細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀察)16精選ppt2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小)

細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率

觀察100個中晚幼紅細(xì)胞，計算出鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比。17精選ppt2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆?！窘Y(jié)果判斷】

幼紅細(xì)胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍(lán)綠色。

18精選ppt18精選ppt細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細(xì)胞)

Ⅰ型：1～2個小鐵顆粒；

Ⅱ型：3～5個小鐵顆粒；

Ⅲ型：6～10個小鐵顆?；?～4個大顆粒；

Ⅳ型：

10個以上小鐵顆?；?個以上大顆粒。19精選ppt細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細(xì)胞)Ⅰ型：1～2個小鐵顆粒；1

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsideroblast)

幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒>6個，圍繞核周2/3以上者。鐵粒幼紅細(xì)胞(sideroblast)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。鐵粒紅細(xì)胞(siderocyte)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的成熟紅細(xì)胞。20精選ppt環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsiderobl綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞21精選ppt綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞21精選1.細(xì)胞外鐵：

（+）~（++）2.細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率大約12~44%，I~II型（I型為主），無Ⅲ型、Ⅳ型、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞。三、參考范圍22精選ppt1.細(xì)胞外鐵：（+）~（++）四、臨床意義

鐵染色是評估鐵缺乏最實用的方法，是反映儲存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)，是臨床應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞化學(xué)染色之一。23精選ppt四、臨床意義23精選ppt

1.缺鐵性貧血：外鐵（－），內(nèi)鐵<10%；治療有效后，內(nèi)外鐵。

2.鐵粒幼細(xì)胞性貧血：外鐵；內(nèi)鐵陽性率，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，可見粗顆粒的Ⅲ、Ⅳ型鐵粒幼紅細(xì)胞。24精選ppt1.缺鐵性貧血：24精選ppt

3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞>15%。

4.非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、白血病等，內(nèi)外鐵正?；蛟龆唷?/p>

5.感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：外鐵增多。25精選ppt3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒25精五、應(yīng)用評價鐵染色是臨床常用的一種細(xì)胞化學(xué)染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反映機體儲存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)。

外鐵：反映骨髓中鐵的儲存量；

內(nèi)鐵：反映骨髓中可利用的鐵量。

26精選ppt五、應(yīng)用評價鐵染色是臨床常用的一種細(xì)胞化二、過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

27精選ppt二、過氧化物酶染色

（peroxidase,一、原理

粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體顆粒中含有過氧化物酶(POX)，它可分解H2O2釋放出新生態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的活性部位。

二甲基聯(lián)苯胺法（DAB）原理28精選ppt一、原理粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體POX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質(zhì)中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)色顆粒（漿內(nèi)酶部位）粒、單核細(xì)胞胞漿【原理】29精選pptPOX新生態(tài)氧過氧化氫四甲基聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵二、ICSH推薦的三種方法

二氨基聯(lián)苯胺法（DBA）二鹽酸聯(lián)苯胺法過氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法

30精選ppt二、ICSH推薦的三種方法30精選ppt三、結(jié)果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應(yīng)。（二氨基聯(lián)苯胺法）31精選ppt三、結(jié)果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為二氨基聯(lián)苯胺法32精選ppt二氨基聯(lián)苯胺法32精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法33精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法33精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法34精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法34精選ppt【結(jié)果判斷】

-、±、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強陽性顆粒粗大，密布于整個胞漿35精選ppt【結(jié)果判斷】35精選pptPOX結(jié)果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（e）（++++）全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。36精選pptPOX結(jié)果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。36精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.粒細(xì)胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細(xì)胞中。

分化差的原粒細(xì)胞陰性;

分化好的原粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞各階段均呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞的成熟逐漸增強。

中性分葉核粒細(xì)胞：強陽性嗜酸粒細(xì)胞：陽性最強嗜堿粒細(xì)胞：（－）37精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】37精選ppt

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)紅細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞系統(tǒng)陰性漿細(xì)胞組織細(xì)胞

38精選ppt38精選ppt39精選ppt39精選ppt40精選ppt40精選ppt41精選ppt41精選ppt42精選ppt42精選ppt四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選（1）急淋和急性髓細(xì)胞系的鑒別：急淋：（－），陽性率<3%；急單：弱陽性；急粒：陽性（+～+++）。

43精選ppt四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選43精選ppt

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）或弱（+），陽性顆粒少而細(xì)小。

3.其它系統(tǒng)細(xì)胞：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞（－）。

44精選ppt2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：44精選ppt【臨床評價】

急性髓細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病

鑒別45精選ppt【臨床評價】鑒別45精選ppt

1.急性髓細(xì)胞白血病

（1）急性粒細(xì)胞白血病

陽性反應(yīng)

（2）急性單核細(xì)胞白血病

弱陽性反應(yīng)46精選ppt1.急性髓細(xì)胞白血病46精選ppt

2.急性淋巴細(xì)胞白血病

陰性反應(yīng)或陽性率<3%(殘留原粒細(xì)胞)47精選ppt2.急性淋巴細(xì)胞白血病47精選pptALL48精選pptALL48精選pptALL49精選pptALL49精選ppt原粒陰性50精選ppt原粒陰性50精選ppt原粒弱陽性51精選ppt原粒弱陽性51精選ppt原粒陽性52精選ppt原粒陽性52精選ppt早幼粒強陽性53精選ppt早幼粒53精選ppt

一、原理

蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)(中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇)，而使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色(粒細(xì)胞：豐富；單核細(xì)胞：少量)。三、蘇丹黑B染色（SudanblackB，SBB）54精選ppt一、原理蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)與POX染色基本一致臨床意義與POX染色相似55精選ppt正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)與POX染色基本一致55精選ppt二、SBB與POX區(qū)別：

1.POX特異性高于SBB，而敏感性低于SBB；2.POX染色要求涂片新鮮，保持酶活性，SBB染色可用陳舊涂片。56精選ppt二、SBB與POX區(qū)別：1.POX特異性高于SB57精選ppt57精選ppt58精選ppt58精選ppt

1.特異性酯酶（specificesterase）

主要存在于粒細(xì)胞，又稱“粒細(xì)胞酯酶”

－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。

一、分類四、酯酶染色59精選ppt1.特異性酯酶（spec

2.非特異性酯酶(nonspecificesterase)單核、組織細(xì)胞中含量較多，粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中含量少，且氟化鈉抑制單核細(xì)胞中的非特異性酯酶，而不抑制粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞。60精選ppt2.非特異性酯酶(nonspecificesterase

醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE

α-醋酸奈酚酯酶：α-NAE

α-丁酸奈酚酯酶：α-NBE酸性α-醋酸奈酚酯酶：ANAE

(α-NBE敏感性不如NAS-DAE但特異性較之強)

61精選ppt醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE61精選ppt（

一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

NaphtholAS-Dchloroacetateesterase62精選ppt（一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚

1.原理氯乙酸AS-D萘酚AS-D萘酚

不溶性的有色(紅)沉淀。NAS-DCE幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞，其特異性高，因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶”NAS-DCE

重氮鹽(堅牢藍(lán)紫醬)63精選ppt1.原理氯乙酸AS-D萘酚氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色64精選ppt氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色64精選ppt

2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

①粒系(酶活性不隨細(xì)胞成熟而增強)原粒（－）或（+）早幼粒~成熟中性粒細(xì)胞（+）嗜酸性粒細(xì)胞（－）或弱（+）嗜堿性粒細(xì)胞（+）65精選ppt2.正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)①粒

②單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）③肥大細(xì)胞：（+）

④淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、

巨核細(xì)胞、血小板：（－）66精選ppt②單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）66精選ppt

3.臨床意義

主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型：

①急性粒細(xì)胞白血病：（+）

②急性早幼粒細(xì)胞白血?。簭姡?）

③急性單核細(xì)胞白血病：（－）

④急粒-單：粒細(xì)胞（+）單核細(xì)胞（－）

⑤急性巨核細(xì)胞性白血?。海ǎ?/p>

⑥急性淋巴細(xì)胞白血病：（－）67精選ppt3.臨床意義主要用于輔助鑒別急性白血病

原理

：

非特異性脂酶在相應(yīng)的pH環(huán)境中，

將基質(zhì)液中相應(yīng)底物水解，產(chǎn)生含萘酚

的物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，

形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)

內(nèi)酶所在的部位。（二）非特異性脂酶染色68精選ppt原理根據(jù)pH值的不同分為：酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶染色(ANAE)中性：α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)

醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DAE)堿性：α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)69精選ppt根據(jù)pH值的不同分為：69精選ppt

名稱pH底物生成物重氮鹽(產(chǎn)物顏色)α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)中α-醋酸萘酚α-萘酚堅牢藍(lán)B棕黑,灰黑醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)中醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚堅牢藍(lán)BB藍(lán)α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)堿α-丁酸萘酚α-萘酚堅牢紫醬GBC紅酸性α-醋酸萘酚酯酶(ANAE)酸α-醋酸萘酚α-萘酚六偶氮付品紅紅70精選ppt

名稱pH底物生成物重氮鹽α-醋酸萘酚酯酶中α-醋酸萘酚α-

1.α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）71精選ppt1.α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholα-醋酸萘酚酯酶（細(xì)胞內(nèi)）α-醋酸萘酚（基質(zhì)液中）α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍(lán)B）胞漿不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】72精選pptα-醋酸萘酚酯酶α-醋酸萘酚α-萘酚重氮鹽胞漿不溶性灰黑色【結(jié)果判斷】

胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。73精選ppt【結(jié)果判斷】73精選pptα-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)74精選pptα-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)74精選pptα-醋酸萘酚酯酶染色a:單核b:BPCc:巨核d:LC(+)e:幼紅(-)75精選pptα-醋酸萘酚酯酶染色a:單核b:BPCc:巨核

氟化鈉抑制試驗

在基質(zhì)液中加入適量NaF,其余染色方法同上。兩種方法染色后用油鏡計數(shù)100或200個被檢細(xì)胞，分別計算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。76精選ppt76精選ppt

氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100%77精選ppt氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制前陽性率或78精選ppt78精選ppt

A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強陽性

B圖：急性單核細(xì)胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）

A

B79精選pptA圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色B圖：急性單核細(xì)胞【臨床評價】急單急粒急性早幼粒急粒單急淋α-NAE+++或-或++陽性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型80精選ppt【臨床評價】急單急粒急性早幼粒急

2.臨床意義

輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型

急單：單核細(xì)胞陽性，能被NaF抑制。

急粒：粒細(xì)胞弱陽性，不被NaF抑制。81精選ppt2.臨床意義輔助鑒別急性白血病

M3：強陽性，不能被NaF抑制。

M4：部分陽性細(xì)胞能被NaF抑制，

部分陽性細(xì)胞不能被NaF抑制。

ALL：原幼淋陰性或陽性，不能被NaF抑制。82精選pptM3：強陽性，不能被NaF抑制。82精選pp【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.單核細(xì)胞系統(tǒng)

原始單核細(xì)胞分化差陰性分化好陽性

幼稚及成熟單核細(xì)胞陽性被氟化鈉抑制83精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.單核細(xì)胞系統(tǒng)被氟化鈉抑制83精

2.粒細(xì)胞系統(tǒng)

原粒細(xì)胞陰性或弱陽性以下階段為弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)

多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性

不被氟化鈉抑制84精選ppt2.粒細(xì)胞系統(tǒng)不被氟化鈉抑制84精選ppt2.α-丁酸奈酚酯酶染色α-NBE

原理：

血細(xì)胞中α-NBE在堿性條件下，基質(zhì)液中的α-丁酸奈酚水解，產(chǎn)生α-奈酚，后者與堅牢醬紫GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。85精選ppt2.α-丁酸奈酚酯酶染色α-NBE原理：α-NBE染色反應(yīng)1.粒系：各期（-）2.單核系：分化差的原單（-）；分化好的原單（+）幼單~成熟單核（+），可被NaF抑制3.淋巴系：TC、非T非B（+）BC（+）

4.其他細(xì)胞：巨核、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞（-）或弱（+）

組織細(xì)胞(+),不被NaF抑制86精選pptα-NBE染色反應(yīng)86精選ppt3.酸性α-醋酸奈酚酯酶染色ANAE

原理：

血細(xì)胞中的酸性α-醋酸奈酚酯酶（ANAE）在pH弱酸性（pH5.8）的條件下，可水解基質(zhì)液中的α-醋酸奈酚，產(chǎn)生α-奈酚，進(jìn)而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。87精選ppt3.酸性α-醋酸奈酚酯酶染色ANAE原理：酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）---M588精選ppt酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）---M588精選pANAE染色反應(yīng)1.單核系：強（+）可被NaF抑制2.淋巴系：TC（+）BC（-）3.其他細(xì)胞：粒系（-）或弱（+）不被NaF抑制

紅系、巨核系（-）

89精選pptANAE染色反應(yīng)1.單核系：強（+）可被NaF抑制89精選p

4.酯酶雙染色

在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色特異性酯酶+非特異性酯酶對診斷急性粒-單細(xì)胞白血病有獨特價值

α-NAE與NAS-DCE紅色(單)

α-NBE與NAS-DCE蘭色(粒)

90精選ppt4.酯酶雙染色在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染色顯示，原始粒細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色CE陽性反應(yīng)；而原始單核細(xì)胞胞漿呈棕色的NAE陽性反應(yīng)。91精選ppt骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）的雙酯酶染

NAS-DCE：

M1弱(+)/M2(+)/M3強(+)，M5/ALL(－)；

α-NBE：

M5(+)NaF抑制，M1/M2/M3/ALL(－)；

α-NAE/NAS-DAE：

M5強(+)NaF抑制

M3強(+)/M1M2a/ALL(+)NaF不抑制。

92精選pptNAS-DCE：92精選ppt五、過碘酸-希夫反應(yīng)

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）93精選ppt五、過碘酸-希夫反應(yīng)

(糖原染色)

（periodic雙醛基過碘酸希夫試劑中的無色品紅

紫紅色化合物(附于含多糖類的胞漿內(nèi))乙二醇基(多糖類物質(zhì)含有)氧化【原理】94精選ppt雙醛基過碘酸希夫試劑中紫紅色化合物乙二醇基氧化【原理

過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基的多糖類物質(zhì)(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖等)氧化，形成雙醛基。醛基與Schiff’s液中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于含多糖類的細(xì)胞內(nèi)。

一、原理95精選ppt過碘酸是氧化劑，使含有乙二醇基的多糖【結(jié)果判斷】陽性胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀。陰性胞漿內(nèi)無色或無顆粒,核淡綠。

96精選ppt【結(jié)果判斷】陽性胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆96精選pp97精選ppt97精選ppt98精選ppt98精選ppt

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強）

原始粒C（－）或（+）早幼粒C~成熟中性粒C（+）：

細(xì)顆粒均勻紅色嗜酸粒C：顆粒不著色，胞質(zhì)呈紅色。嗜堿粒C：顆粒陽性，胞質(zhì)不著色。

二、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)99精選ppt1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強）

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差（－）其他（+），

粗顆粒狀。3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：多數(shù)（－）少數(shù)（+），粗顆?；驂K狀。

4.紅細(xì)胞系統(tǒng)：（－），病理情況可（+）。

5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)：（+），顆粒狀或塊狀。

6.其它細(xì)胞：漿細(xì)胞（－），巨噬細(xì)胞（+）100精選ppt2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差（－）其他（+）a粒細(xì)胞、b巨核細(xì)胞、c單核細(xì)胞、d幼紅細(xì)胞101精選ppta粒細(xì)胞、b巨核細(xì)胞、c單核細(xì)胞、d幼紅細(xì)胞101精三、結(jié)果判斷

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：

紅色、彌散狀。各種細(xì)胞陽性反應(yīng)強弱不同

2.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。102精選ppt三、結(jié)果判斷1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：各種細(xì)胞陽性反應(yīng)強弱1、+2、++3、+++4、++++5、－103精選ppt1、+2、++3、+++4、

3.紅細(xì)胞系統(tǒng)：

均勻紅色或塊狀

4.單核細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀

5.巨核細(xì)胞和血小板：

顆粒狀、塊狀。104精選ppt3.紅細(xì)胞系統(tǒng)：4.單核細(xì)胞系統(tǒng)：5.1.巨核細(xì)胞和血小板陽性105精選ppt1.巨核細(xì)胞和血小板陽性105精選ppt

1.幫助鑒別巨幼細(xì)胞性貧血和骨

髓增生異常綜合征、紅白血病:

前者（－），后兩者（+）。四、臨床意義106精選ppt1.幫助鑒別巨幼細(xì)胞性貧血和骨四、臨床意義10107精選ppt107精選ppt急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性108精選ppt急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色108精選ppt109急淋PAS陽性細(xì)胞109精選ppt109急淋PAS陽性細(xì)胞109精選ppt110PAS陽性的幼紅細(xì)胞110精選ppt110PAS陽性的幼紅細(xì)胞110精選ppt

2.幫助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型：

急淋：（+）呈粗顆粒狀或塊狀。

急粒：（+）細(xì)顆粒狀或均勻紅色。

急單：（+）細(xì)顆粒狀，均勻分布，有時胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大。

111精選ppt2.幫助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型：111

3.其他細(xì)胞：

骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞細(xì)胞呈強陽性

霍奇金淋巴瘤RS細(xì)胞多呈陰性或弱陽性

戈謝細(xì)胞呈強陽性尼曼-皮克細(xì)胞多呈陰性或弱陽性112精選ppt3.其他細(xì)胞：112精選pptCLLALL113精選pptCLLALL113精選ppt

六、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）114精選ppt六、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（neutr磷酸萘酚鈉（基質(zhì)中）中性粒細(xì)胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍(lán)鹽RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞漿中）水解【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法115精選ppt磷酸萘酚鈉中性粒細(xì)胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚重氮鹽＋紫黑【結(jié)果判斷】

胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+~++++）116精選ppt【結(jié)果判斷】116精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】中性成熟粒細(xì)胞陽性反應(yīng)NAP主要存在于成熟的中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中。嚴(yán)重的化膿性感染時，晚幼階段粒細(xì)胞也可見有陽性反應(yīng)。2.其他細(xì)胞基本呈陰性反應(yīng)

117精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】中性成熟粒細(xì)胞陽性反應(yīng)117精選p118精選ppt118精選ppt

NAP染色反應(yīng)強度標(biāo)準(zhǔn)：

（－）：胞質(zhì)中無顆粒；（＋）：胞質(zhì)含少量顆粒，約占1/4；（＋＋）：胞質(zhì)含中等量顆粒，約占1/2；（＋＋＋）

：胞質(zhì)含較多顆粒，約占3/4；

（＋＋＋＋）：胞質(zhì)充滿顆粒，無空隙。119精選pptNAP染色反應(yīng)強度標(biāo)準(zhǔn)：119精選p

2.NAP積分值計數(shù)100個成熟中性粒細(xì)胞（桿狀和分葉）,分別記錄其分級情況：

120精選ppt120精選ppt(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

陽性率全部陽性反應(yīng)細(xì)胞之和

積分值各種陽性程度細(xì)胞的分值之和121精選ppt(-)0分121精選ppt

NAP染色結(jié)果報告包括陽性率和積分值。陽性率：指計數(shù)100個中性成熟粒細(xì)胞，其陽性細(xì)胞的數(shù)量即為陽性率；積分值：指計數(shù)100個中性成熟粒細(xì)胞，不同陽性程度細(xì)胞數(shù)量乘以其陽性程度之和即為積分值，其計算公式為：積分值=(＋)數(shù)量×1+(＋＋)數(shù)量×2+(＋＋＋)數(shù)量×3+(＋＋＋＋)數(shù)量×4。

2.NAP染色結(jié)果報告：122精選pptNAP染色結(jié)果報告包括陽性率和積分值。2.N例：4分占20%

4×20=80分3分占40%

3×40=120分2分占18%

2×18=36分1分占10%

1×10=10分0分占12%

0×12=0分陽性率88%積分=246分123精選ppt例：4分占20%4×20=80分123精選pp124精選ppt124精選ppt0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。

Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%～75%。125精選ppt0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅱ級++Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅳ級++++胞漿充滿深黑色致密的團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。

126精選pptⅢ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大127精選ppt127精選ppt

3.參考范圍：

中性粒細(xì)胞NAP陽性率：＜40%

NAP積分為：30~130分128精選ppt3.參考范圍：128精選ppt【臨床評價】（1）細(xì)菌性感染與病毒性感染

（尤其是化膿性感染）

明顯增加無明顯變化129精選ppt129精選ppt

四、臨床意義

1.生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。

2.病理性變化：

(1)NAP：細(xì)菌性感染、慢粒(加、急)、急

淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、

骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小

板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。130精選ppt四、臨床意義1.生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠

3.疾病的鑒別：

(1)類白與慢粒:前者

后者

(2)慢粒慢性期與慢性中性粒細(xì)胞白血?。?/p>

前者

后者

(3)細(xì)菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：前者

后兩者正?；?/p>

(2)NAP：慢粒(慢)、PNH、MDS、惡組等。131精選ppt3.疾病的鑒別：(1

(6)惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥：前者后者常

(7)急性白血病類型：

急性髓細(xì)胞急淋

(4)慢粒病情觀察：

(5)再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：

前者

后者132精選ppt(6)惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥：CML類白133精選pptCML類白133精選ppt(2）類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病明顯增加明顯下降且常為零分，緩解時又上升到正常134精選ppt(2）類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病134精選ppt五、應(yīng)用評價NAP染色有多種檢測方法，國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦Kaplow萘酚AS-BI磷酸鈉法和Tomonaga萘酚AS-MX磷酸鈉法。鈣-鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應(yīng)時間長，臨床上逐步被偶氮偶聯(lián)法取代，陽性產(chǎn)物色澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚AS-BI磷酸鈉法最為廣泛使用，利于評定NAP活性強度的分級。常用重氮鹽有堅牢藍(lán)RR、堅牢藍(lán)BB、堅牢紫醬等，不同偶聯(lián)有不同的靈敏度。

135精選ppt五、應(yīng)用評價NAP染色有七、酸性磷酸酶染色(acidphosphatase，ACP)一、原理1.Gomori硫化鉛法136精選ppt七、酸性磷酸酶染色一、原理1.Gomori硫化鉛法136精棕黑色pH5.0137精選ppt棕黑色pH5.0137精選ppt

2.偶氮偶聯(lián)法(常用)六偶氮付品紅——棕紅色沉淀磷酸萘酚AS-BI

萘酚AS-BI棕紅色沉淀

ACPPh5.0重氮鹽138精選ppt2.偶氮偶聯(lián)法(常用)ACPPh5.0重氮鹽138139精選ppt139精選ppt

3.抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標(biāo)本涂片+兩份基質(zhì)液(加L-酒石酸，不加L-酒石酸)ACP染色耐L-酒石酸兩份（+）不耐L-酒石酸不加L-酒石酸（+）加L-酒石酸（－）140精選ppt3.抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相

二、正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)。141精選ppt二、正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、

三、臨床評價

1.診斷多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞白血?。海?），不被L-酒石酸抑制。慢淋和惡性淋巴瘤細(xì)胞:

（+），被L-酒石酸抑制。142精選ppt三、臨床評價1.診斷多毛細(xì)胞白血病142精選p多毛細(xì)胞白血病慢性淋巴細(xì)胞白血病143精選ppt多毛細(xì)胞白血病143精選ppt抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞白血病144精選ppt抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞白血病144精選多毛細(xì)胞白血病抗L-酒石酸ACP陽性145精選ppt多毛細(xì)胞白血病抗L-酒石酸ACP陽性145精選ppt

2.鑒別戈謝(Gaucher)細(xì)胞和尼曼-匹

克(Niemann-Picks)細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

3.鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

146精選ppt2.鑒別戈謝(Gaucher)細(xì)胞和尼曼-匹14Gaucher’scell147精選pptGaucher’scell147精選ppt八.細(xì)胞化學(xué)染色綜合分析148精選ppt八.細(xì)胞化學(xué)染色綜合分析148精選ppt四種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果項目M3M1/M2M5ALLPOX強陽性陽性/陰性弱陽性/陰性陰性

NAS-DCE強陽性陽性/陰性多陰性陰性α-NAE強陽性陰性/弱陽性陽至強陽性陰性/陽性α-NAE+NaF

不抑制不抑制抑制不抑制α-NBE陰性陰性陽性陰性

α-NBE+NaF抑制149精選ppt四種常見急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果項目

急非淋脂酶染色NAP：類白與慢粒、感染類型、再障與

PNH、慢粒分期；ACP：毛白、T細(xì)胞/B細(xì)胞、脂代謝障礙；PAS：巨幼貧與MDS-RA、紅白血?。昏F染色：缺鐵貧、鐵粒幼貧、MDS-RAS。急淋POX急性白血病150精選ppt急淋POX急性白血病150精選ppt

151PAS:陽性，顆粒狀NAP:積分增高PAS:大小不定塊狀陽性NAP:積分增高L1、L2、L3形態(tài)區(qū)分M7，可做免疫分型ANAE+NaF抑制M5：陽性～強陽性，抑制率＞50％M4:陽性，抑制率＞50％（形態(tài)、做酯酶雙染）NAP:積分減低

涂片可見較多幼稚細(xì)胞POX染色陰性（陽性率<3%)陽性，強陽性

陰性或弱陽性（部分陰性，部分陽性）PAS+NAPM2、M3最強M1、M5最弱（CE陽性，形態(tài)區(qū)分）

NAP:積分減低CE151精選ppt151PAS:陽性，顆粒狀PAS:大小不定塊狀陽性L11.常用的化學(xué)反應(yīng)種類不包括下列哪種A.偶氮偶聯(lián)法B.聯(lián)苯胺法C.普魯士藍(lán)反應(yīng)D.中和反應(yīng)E.希夫反應(yīng)2.臨床上輔助判斷急性白血病類型首選最重要的細(xì)胞化學(xué)染色是A.特異性酯酶B.非特異性酯酶C.過氧化物酶D.中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶E.酸性磷酸酶3.特異性及非特異性酯酶的染色方法是A.偶氮偶聯(lián)法B.聯(lián)苯胺法C.普魯士藍(lán)反應(yīng)D.中和反應(yīng)E.希夫反應(yīng)152精選ppt1.常用的化學(xué)反應(yīng)種類不包括下列哪種152精選ppt4.鑒別小原粒白血病與急淋，下列首選試驗是A.酯酶染色B.糖原染色C.過氧化物酶染色D.堿性磷酸酶染色E.酸性磷酸酶染色5.非特異性酯酶染色陽性，且陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制見于A.急性粒細(xì)胞白血病B.急性淋巴細(xì)胞白血病C.急性單核細(xì)胞白血病D.急性早幼粒細(xì)胞白血病E.慢性粒細(xì)胞白血病6輔助判斷急性白血病類型的細(xì)胞化學(xué)染色不包括A.過氧化物酶染色B.酯酶染色C.中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色D.鐵染色E.糖原染色153精選ppt4.鑒別小原粒白血病與急淋，下列首選試驗是153精選ppt1．掌握常用細(xì)胞化學(xué)染色方法的結(jié)果判斷和臨床意義。2．熟悉常用細(xì)胞化學(xué)染色方法的原理。本章目的要求154精選ppt1．掌握常用細(xì)胞化學(xué)染色方法的結(jié)果判斷和臨床意義。本章目的思考題：1.鐵染色的臨床意義2.POX染色的原理及臨床意義

3.PAS染色對不同類型急性白血病的鑒別4.NAP積分增加和減少的臨床意義5.酯酶染色的臨床應(yīng)用155精選ppt思考題：1.鐵染色的臨床意義155精選ppt

完156精選ppt156精選ppt感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請及時聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，第三章

細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

158精選ppt第三章

細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)1精選ppt

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟；鐵染色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色的正常血細(xì)胞染色反應(yīng)和臨床意義。2.熟悉：細(xì)胞化學(xué)染色的概念和臨床應(yīng)用。3.了解：細(xì)胞化學(xué)染色的原理和影響因素。159精選ppt學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟；鐵染色第一節(jié)概述

一、概念細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成的一門科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運用化學(xué)反應(yīng)的原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分(酶類/脂類/糖類/鐵/蛋白質(zhì)/核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。160精選ppt第一節(jié)概述

一、概念3精選ppt要求：血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物，具有一定的穩(wěn)定性。血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。161精選ppt要求：血細(xì)胞化學(xué)染色的基本要求是在原位顯示細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)，反二、必要性從形態(tài)學(xué)觀察，存在較多的主觀性；有些原始細(xì)胞形態(tài)較相似，難以鑒別；結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色，提高疾病的診斷率。162精選ppt二、必要性從形態(tài)學(xué)觀察，存在較多的主觀性；5精選ppt三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型2.輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷3.觀察疾病的療效和預(yù)后4.疾病發(fā)病機制的探討163精選ppt三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型6精選ppt白血病的診斷：MICM分型

M：morphologyI：immunology

C：cytogeniticsM：molecularbiology形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步的診斷免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種類細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)分子生物學(xué)分型：提高到分子水平164精選ppt白血病的診斷：MICM分型

M：morpho四、基本步驟1.固定（1）物理法：干燥、火焰（2）化學(xué)法：A、蒸氣固定：甲醛B、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。165精選ppt四、基本步驟1.固定8精選ppt2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色（2）聯(lián)苯胺法：POX（3）普魯士藍(lán)反應(yīng)：Fe（4）希夫反應(yīng)：PAS（5）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：SBB166精選ppt2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色9精選pp3.復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅PAS-------甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。167精選ppt3.復(fù)染：使各種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅1五、研究對象

外周血和骨髓新鮮涂片單個細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì)：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等

168精選ppt11精選ppt

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

鐵染色過氧化物酶染色蘇丹黑B染色酯酶染色過碘酸-希夫反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色

169精選ppt

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

一、鐵染色

（ferricstain）170精選ppt一、鐵染色

（fer亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍(lán)色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)反應(yīng)骨髓小粒中的含F(xiàn)e血黃素（細(xì)胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細(xì)胞內(nèi)的Fe（細(xì)胞內(nèi)鐵）原理171精選ppt亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)

二、結(jié)果判斷

1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素)鐵顆粒、鐵小珠、鐵團(tuán)塊172精選ppt二、結(jié)果判斷1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀察)（－）：無顆粒（＋）：有少量鐵顆?；蚺家婅F小珠（＋＋）：有較多的鐵顆?；蜩F小珠（＋＋＋）：有很多的鐵顆粒、鐵小珠和少數(shù)鐵小塊（＋＋＋＋）：有極多鐵顆粒、小珠和很多鐵小塊，密集成堆。173精選ppt細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀察)16精選ppt2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆粒數(shù)量的多少及大小)

細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清。粗大顆粒：很容易看清的顆粒。（2）陽性率

觀察100個中晚幼紅細(xì)胞，計算出鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比。174精選ppt2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀察)（1）分級(按鐵顆?！窘Y(jié)果判斷】

幼紅細(xì)胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍(lán)綠色。

175精選ppt18精選ppt細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細(xì)胞)

Ⅰ型：1～2個小鐵顆粒；

Ⅱ型：3～5個小鐵顆粒；

Ⅲ型：6～10個小鐵顆?；?～4個大顆粒；

Ⅳ型：

10個以上小鐵顆?；?個以上大顆粒。176精選ppt細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀察幼紅細(xì)胞)Ⅰ型：1～2個小鐵顆粒；1

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsideroblast)

幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒>6個，圍繞核周2/3以上者。鐵粒幼紅細(xì)胞(sideroblast)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。鐵粒紅細(xì)胞(siderocyte)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的成熟紅細(xì)胞。177精選ppt環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsiderobl綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞178精選ppt綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞21精選1.細(xì)胞外鐵：

（+）~（++）2.細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率大約12~44%，I~II型（I型為主），無Ⅲ型、Ⅳ型、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞。三、參考范圍179精選ppt1.細(xì)胞外鐵：（+）~（++）四、臨床意義

鐵染色是評估鐵缺乏最實用的方法，是反映儲存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)，是臨床應(yīng)用最廣泛的細(xì)胞化學(xué)染色之一。180精選ppt四、臨床意義23精選ppt

1.缺鐵性貧血：外鐵（－），內(nèi)鐵<10%；治療有效后，內(nèi)外鐵。

2.鐵粒幼細(xì)胞性貧血：外鐵；內(nèi)鐵陽性率，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，可見粗顆粒的Ⅲ、Ⅳ型鐵粒幼紅細(xì)胞。181精選ppt1.缺鐵性貧血：24精選ppt

3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞>15%。

4.非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、白血病等，內(nèi)外鐵正?；蛟龆?。

5.感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：外鐵增多。182精選ppt3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒25精五、應(yīng)用評價鐵染色是臨床常用的一種細(xì)胞化學(xué)染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，但是反映機體儲存鐵的金標(biāo)準(zhǔn)。

外鐵：反映骨髓中鐵的儲存量；

內(nèi)鐵：反映骨髓中可利用的鐵量。

183精選ppt五、應(yīng)用評價鐵染色是臨床常用的一種細(xì)胞化二、過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

184精選ppt二、過氧化物酶染色

（peroxidase,一、原理

粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體顆粒中含有過氧化物酶(POX)，它可分解H2O2釋放出新生態(tài)的氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的活性部位。

二甲基聯(lián)苯胺法（DAB）原理185精選ppt一、原理粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞的溶酶體POX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質(zhì)中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)色顆粒（漿內(nèi)酶部位）粒、單核細(xì)胞胞漿【原理】186精選pptPOX新生態(tài)氧過氧化氫四甲基聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵二、ICSH推薦的三種方法

二氨基聯(lián)苯胺法（DBA）二鹽酸聯(lián)苯胺法過氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法

187精選ppt二、ICSH推薦的三種方法30精選ppt三、結(jié)果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為陽性反應(yīng)。（二氨基聯(lián)苯胺法）188精選ppt三、結(jié)果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)金黃色顆粒為二氨基聯(lián)苯胺法189精選ppt二氨基聯(lián)苯胺法32精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法190精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法33精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法191精選ppt二鹽酸聯(lián)苯胺法34精選ppt【結(jié)果判斷】

-、±、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強陽性顆粒粗大，密布于整個胞漿192精選ppt【結(jié)果判斷】35精選pptPOX結(jié)果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（e）（++++）全部胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。193精選pptPOX結(jié)果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。36精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.粒細(xì)胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細(xì)胞中。

分化差的原粒細(xì)胞陰性;

分化好的原粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞各階段均呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞的成熟逐漸增強。

中性分葉核粒細(xì)胞：強陽性嗜酸粒細(xì)胞：陽性最強嗜堿粒細(xì)胞：（－）194精選ppt【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】37精選ppt

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)紅細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞系統(tǒng)陰性漿細(xì)胞組織細(xì)胞

195精選ppt38精選ppt196精選ppt39精選ppt197精選ppt40精選ppt198精選ppt41精選ppt199精選ppt42精選ppt四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選（1）急淋和急性髓細(xì)胞系的鑒別：急淋：（－），陽性率<3%；急單：弱陽性；急粒：陽性（+～+++）。

200精選ppt四、臨床意義鑒別急性白血病的類型首選43精選ppt

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）或弱（+），陽性顆粒少而細(xì)小。

3.其它系統(tǒng)細(xì)胞：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞（－）。

201精選ppt2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：44精選ppt【臨床評價】

急性髓細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病

鑒別202精選ppt【臨床評價】鑒別45精選ppt

1.急性髓細(xì)胞白血病

（1）急性粒細(xì)胞白血病

陽性反應(yīng)

（2）急性單核細(xì)胞白血病

弱陽性反應(yīng)203精選ppt1.急性髓細(xì)胞白血病46精選ppt

2.急性淋巴細(xì)胞白血病

陰性反應(yīng)或陽性率<3%(殘留原粒細(xì)胞)204精選ppt2.急性淋巴細(xì)胞白血病47精選pptALL205精選pptALL48精選pptALL206精選pptALL49精選ppt原粒陰性207精選ppt原粒陰性50精選ppt原粒弱陽性208精選ppt原粒弱陽性51精選ppt原粒陽性209精選ppt原粒陽性52精選ppt早幼粒強陽性210精選ppt早幼粒53精選ppt

一、原理

蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)(中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇)，而使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色(粒細(xì)胞：豐富；單核細(xì)胞：少量)。三、蘇丹黑B染色（SudanblackB，SBB）211精選ppt一、原理蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)與POX染色基本一致臨床意義與POX染色相似212精選ppt正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)與POX染色基本一致55精選ppt二、SBB與POX區(qū)別：

1.POX特異性高于SBB，而敏感性低于SBB；2.POX染色要求涂片新鮮，保持酶活性，SBB染色可用陳舊涂片。213精選ppt二、SBB與POX區(qū)別：1.POX特異性高于SB214精選ppt57精選ppt215精選ppt58精選ppt

1.特異性酯酶（specificesterase）

主要存在于粒細(xì)胞，又稱“粒細(xì)胞酯酶”

－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。

一、分類四、酯酶染色216精選ppt1.特異性酯酶（spec

2.非特異性酯酶(nonspecificesterase)單核、組織細(xì)胞中含量較多，粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中含量少，且氟化鈉抑制單核細(xì)胞中的非特異性酯酶，而不抑制粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞。217精選ppt2.非特異性酯酶(nonspecificesterase

醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE

α-醋酸奈酚酯酶：α-NAE

α-丁酸奈酚酯酶：α-NBE酸性α-醋酸奈酚酯酶：ANAE

(α-NBE敏感性不如NAS-DAE但特異性較之強)

218精選ppt醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE61精選ppt（

一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

NaphtholAS-Dchloroacetateesterase219精選ppt（一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚

1.原理氯乙酸AS-D萘酚