急性有機(jī)磷中毒動物機(jī)能指標(biāo)的動態(tài)觀察與測定課件

急性有機(jī)磷中毒動物機(jī)能指標(biāo)的動態(tài)觀察與測定

指導(dǎo)老師：林明棟余劍平組員：陳春宇陳達(dá)標(biāo)黃利軍李慶志

一課題背景知識回顧近年來，急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）患者逐年增多，對AOPP的防治成了國內(nèi)外研究的一個熱點(diǎn)課題。有機(jī)磷酸酯類進(jìn)入機(jī)體后，與血漿膽堿酯酶（AChE）生成難以水解的磷酰化膽堿酯酶，使AChE失去水解ACh的能力，導(dǎo)致不同程度的中毒表現(xiàn)。一課題背景知識回顧有機(jī)磷中毒時對AChE的抑制作用已闡明，但中毒過程中逐步出現(xiàn)的M樣，MN樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的輕、中、重度中毒表現(xiàn)。通常只是以測定的AChE值為判定AOPP的中毒程度及指導(dǎo)搶救用藥的常規(guī)方法。目前臨床上的傳統(tǒng)搶救方法是抗膽堿藥阿托品和膽堿酯酶復(fù)能劑氯磷定配伍。二探索性研究成果階段性匯報（一）實(shí)驗方案①材料及方法（一）試劑0.1%硫酸阿托品、5%敵百蟲、1%肝素、2.5%解磷定、75%酒精、膽堿酯酶試劑盒（南京建成生物研究所）、血糖試紙①材料及方法（二）儀器血糖儀（SureStep）、恒溫水浴、分光光度計、離心機(jī)、微量移液管（50-200μL、200-1000μL）、試管架、一次性小試管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、燒杯（150ml）、玻璃棒、保溫瓶、試劑瓶、測瞳尺（可用游標(biāo)卡尺代替）、刀片、棉球①材料及方法（三）實(shí)驗動物及分組實(shí)驗動物：家兔，體重2~2.5kg動物分組：分阿托品急救組和解磷定急救組，每組4個動物c. 按照2.0ml/kg的標(biāo)準(zhǔn)從耳緣靜脈處注射5%敵百蟲，觀察記錄表所示各項指標(biāo)，中毒癥狀明顯時按照b步驟中的方法取血測定血糖和備血測定膽堿酯酶；d. 出現(xiàn)重度中毒現(xiàn)象時，立即給家兔注射0.1%硫酸阿托品1ml/kg、當(dāng)癥狀出現(xiàn)明顯緩解時取血測定血糖、備血測定膽堿酯酶活性；e. 換用另外一只家兔，按照同樣的方法步驟（d步驟注射2.5%解磷定）進(jìn)行預(yù)實(shí)驗。f. 測定膽堿酯酶活性（步驟參考試劑盒使用說明書）；（二）實(shí)驗結(jié)果阿托品解救瞳孔迅速變大；唾液和淚腺分泌較前明顯減少，排便減少，呈稀糊狀；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其呼吸急促，可聞及明顯濕羅音。肌顫較前減緩，但沒有消失，四肢仍然完全癱軟無力，不能站立；精神狀況逐漸恢復(fù)，意識清醒。解磷定解救呼吸較前平緩，未聞及濕羅音；唾液和淚腺分泌減少，排便減少；以上指標(biāo)逐漸恢復(fù)到正常水平。其瞳孔大小基本不變，但發(fā)散現(xiàn)象消失；精神狀況有所改善，但總體情況比第一組的差。注射足量解磷定后，肌顫馬上消失，部分家兔后期再次出現(xiàn)輕微肌顫。其行動能力有所恢復(fù)CHE活力變化SPSS結(jié)果血糖變化SPSS結(jié)果M樣癥狀M受體存在于大多數(shù)副交感神經(jīng)節(jié)后纖維和少數(shù)交感神經(jīng)節(jié)后纖維所支配的效應(yīng)器細(xì)胞膜上。當(dāng)M受體被乙酰膽堿激活時，將產(chǎn)生一系列副交感神經(jīng)興奮的效應(yīng)，表現(xiàn)為平滑肌痙攣和腺體分泌增加，故引起唾液和淚腺分泌增多，排便頻繁且逐漸呈稀糊狀以及瞳孔縮小等體征改變。分布于支氣管和肺的M受體興奮時，一方面使呼吸道的分泌物大量增多部分積聚于肺泡；另一方面使肺小血管通透性增加，加重肺泡液量，二者相加造成肺部濕鑼音、肺通氣和換氣障礙。N樣癥狀隨著中毒程度加深，乙酰膽堿將激活機(jī)體中的N受體，產(chǎn)生N樣癥狀。N受體有N1和N2兩種亞型，前者存在于自主神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元，后者存在于骨骼肌運(yùn)動終板。骨骼肌運(yùn)動終板N1受體被激動時表現(xiàn)為肌束顫動，常先從眼瞼、顏面等處小肌肉開始，逐漸波及全身，最后又轉(zhuǎn)為肌無力，并可導(dǎo)致肌肉麻痹，嚴(yán)重時可因呼吸肌麻痹而死。交感神經(jīng)節(jié)受乙酰膽堿刺激時，其節(jié)后交感神經(jīng)纖維末梢釋放兒茶酚胺使血管收縮，引起血壓增高、心跳加快和心律失常。CHE活力部分中毒：靜脈注射，有機(jī)磷與血液中的酶結(jié)合迅速，所以很快便到達(dá)重度中毒水平（30%）阿托品解救：CHE活性降低到10%左右，猜想是M受體被阻斷，乙酰膽堿的蓄積量進(jìn)一步升高，機(jī)體應(yīng)激性地從血液中轉(zhuǎn)運(yùn)一定量的CHE到神經(jīng)接頭處，以分解突然增多的乙酰膽堿，故測得血液中CHE活性下降。而后，血液中CHE含量降低將促進(jìn)其在機(jī)體內(nèi)的合成，從而使得酶活性恢復(fù)到注射阿托品前的水平。解磷定解救：恢復(fù)膽堿酯酶活力，直接上升。血糖部分中毒升高機(jī)理：有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)人體內(nèi)，作為強(qiáng)烈的應(yīng)激原刺激機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，繼而表現(xiàn)出一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)引起的機(jī)體各種機(jī)能代謝方面的變化。N樣作用時，交感神經(jīng)興奮，通過β受體刺激胰島α細(xì)胞，使胰高血糖素分泌增加。而交感神經(jīng)興奮還可使兒茶酚胺釋放增多，從而通過α受體抑制胰島素分泌，結(jié)果表現(xiàn)為血中胰島素減少和胰高血糖素增加，造成急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒患者血糖濃度升高。機(jī)體應(yīng)激時，通過下丘腦--垂體--腎上腺皮質(zhì)軸的興奮而使糖皮質(zhì)激素分泌增加，糖皮質(zhì)激素促進(jìn)蛋白質(zhì)分解，使氨基酸轉(zhuǎn)移至肝，糖異生過程加強(qiáng)，從而使血糖升高。結(jié)論血糖作為動態(tài)檢測指標(biāo)是可行的。（三）實(shí)驗小結(jié)1.實(shí)驗前應(yīng)做足充分準(zhǔn)備，包括試劑的準(zhǔn)備和儀器的調(diào)節(jié)；2.由于給藥方式的不妥，使得血糖與經(jīng)典的膽堿酯酶的活性在中毒階段無法體現(xiàn)出