走近數(shù)字PCR學習培訓課件

走近數(shù)字PCR何為PCR技術(shù)？聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction），簡稱PCR。是一種分子生物學技術(shù)，是一個模擬生物體內(nèi)DNA的復制過程，在體外特異的復制一段已知序列的DNA片段。不足之處：產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果開蓋污染、雜帶不能定量檢測實時熒光定量PCR（RealTimeQ-PCR），簡稱RT-qPCR或RT-PCRPCR技術(shù)的發(fā)展歷程—實時熒光PCR絕對定量或相對定量基本原理：一種實時監(jiān)控核酸擴增的技術(shù)，在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR反應進程，并通過相關(guān)數(shù)據(jù)分析方法對目的基因進行定量分析的技術(shù)。該技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，與普通PCR相比，優(yōu)勢：①實時、定量檢測②敏感性、特異性高③自動化程度高④有效解決PCR開蓋污染問題在進行RT-PCR實驗后，我們發(fā)現(xiàn)其檢測靈敏度不夠，且無法輕松進行絕對定量分析，在解決生命科學中的某些問題時，似乎困難重重。思考數(shù)字PCR絕對定量PCR技術(shù)的發(fā)展歷程—數(shù)字PCR技術(shù)什么是DigitalPCR？它是核酸絕對定量技術(shù)之一，相較于RT-PCR，數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的絕對定量。1992年，提出了數(shù)字PCR的構(gòu)想；1997年，建立了單分子定量技術(shù)；1999年,發(fā)展了微升級的PCR定量（微孔板）技術(shù)；

2003年，基于微流體芯片的PCR反應技術(shù)；2008年，基于嵌入式芯片的PCR反應技術(shù)。發(fā)展歷程（視頻、動畫呈現(xiàn)）分析原理微反應室數(shù)字PCR：如不銹鋼芯片刻蝕微反應室（直徑300μm；體積33nl/反應單元）大規(guī)模集成微流控芯片數(shù)字PCR：如芯片密度達440000/cm2，體積10pl/反應單元

液滴數(shù)字PCR：源于乳液PCR技術(shù)，將模板與連接引物的磁性微球以極低濃度包裹于油水兩相形成的納升至皮升級液滴中進行擴增，該液滴反應體系，更易進行小體積、高通量及低成本的核酸檢測。*根據(jù)樣品稀釋分配方式不同分類數(shù)字化結(jié)果—無需標準曲線實現(xiàn)絕對定量從普通PCR誕生到數(shù)字PCR的成熟與發(fā)展，經(jīng)歷了漫長的30年，三代PCR技術(shù)的發(fā)展，是科學家們智慧的結(jié)晶，也是他們對知識、技術(shù)創(chuàng)新、對科研執(zhí)著的最好體現(xiàn)！科學家們的探索精神給我們帶來的啟示是：

1.永遠不要滿足現(xiàn)狀，停滯不前，要用發(fā)展的眼光看問題！2.對未來新領(lǐng)域，同學們要有敢于創(chuàng)新、不畏艱難、獻身科學的精神！數(shù)字PCR在疾病診斷中的應用1.腫瘤診斷

癌基因突變和表達異常檢測，可定量檢測體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)的DNA分子及外周血中的腫瘤細胞2.感染性疾病診斷

SARS-CoV-2早期診斷、藥效觀察、病情判斷及預后觀察3.產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是指在出生前利用分子遺傳學和醫(yī)學影像方法，對胚胎或胎兒的發(fā)育狀態(tài)、是否患有疾病等方面進行檢測診斷。進行孕婦血漿中胎兒染色體異常分析數(shù)字PCR技術(shù)可以快速精準檢測2019新冠病毒的絕對拷貝數(shù)；比如：通過自動化全封閉微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，并通過一步法反轉(zhuǎn)錄-數(shù)字PCR-探針方法，可快速、準確及安全診斷新冠病毒攜帶者，對新冠病毒RNA進行定性和絕對定量檢測，盡可能降低假陰性，讓更多患者能及時確診、隔離及治療；檢測方法適用于樣本中新冠病毒核酸檢測和RT-PCR檢測判為陰性的新冠病毒疑似樣本的復檢。案例舉例：數(shù)字PCR技術(shù)快速精準檢測2019新冠病毒（SARS-CoV-2）的絕對拷貝數(shù)

2019年12月以來新冠病毒肆虐，給醫(yī)學檢驗技術(shù)行業(yè)帶來新機遇和挑戰(zhàn)。作為醫(yī)學檢驗專業(yè)的學生，同學們身上應當肩負著責任感、使命感以及榮譽感。

未來，同學們需要繼續(xù)進行專業(yè)學習、知識探索及科學研究，通過過硬的科學知識和熟練操作技能武裝自己，應對未來更多的挑戰(zhàn)，隨時做好準備，為國家和人類發(fā)展做貢獻！檢驗專業(yè)榮譽感和責任感PCR技術(shù)飛速發(fā)展，PCR衍生技術(shù)層出不窮，PCR及其衍生技術(shù)目前已成為生物學和醫(yī)學研究乃至臨床疾病診斷不可或缺的工具。普通PCR技術(shù)熒光定量PCR技術(shù)數(shù)字PCR技術(shù)多重PCR技術(shù)巢式PCR技術(shù)反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)隨機引物PCR技術(shù)橋式PCR技術(shù)長片段PCR技術(shù)PCR衍生技術(shù)隨著dP