藥敏試驗與實驗室認可

抗菌藥物敏感性試驗的

規(guī)范與實驗室認可上海市臨床檢驗中心臨床微生物室葛平

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為了保證藥敏試驗結果準確，必須在藥敏試驗整個過程中采取種種措施以保證試驗結果正確，這就需要對藥敏試驗進行質量控制。（美國）臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)對各屬細菌藥敏試驗中應選擇使用的抗生素、操作、判斷及報告方式均做了具體規(guī)定，其中質量控制是我們在整個藥敏試驗過程中必須重視的一環(huán)。

同樣，CNAS的實驗室認可也對臨床檢驗的藥敏試驗規(guī)范提出要求。2標準：《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第三版）》臨床實驗室標準化協(xié)會的CLSI-M07-A10（稀釋法）臨床實驗室標準化協(xié)會的CLSI-M02-A12（擴散法）臨床實驗室標準化協(xié)會的CLSI-M100-S24（執(zhí)行標準）其它：CLSI-M11-A8（厭氧菌）CLSI-M27-A3（酵母菌MIC）CLSI-M38-A2（絲狀真菌MIC）規(guī)范：CNAS-CL02醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則（2012）CNAS-CL42醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在臨床微生物學檢驗領域的應用說明（2012）3CLSI-M100-S24相關標準45略……一.人員要求

接受過相關的教育。具有臨床微生物檢驗相關理論和基本操作技能。掌握（追蹤）最新的CLSI標準，按文件規(guī)定對結果作出正確的判斷和解釋。熟悉臨床微生物檢驗質控理論和方法。67CL025.1.8繼續(xù)教育和專業(yè)發(fā)展應對從事管理和技術工作的人員提供繼續(xù)教育計劃。員工應參加繼續(xù)教育。應定期評估繼續(xù)教育計劃的有效性。員工應參加常規(guī)專業(yè)發(fā)展或其他的專業(yè)相關活動。需要關注：員工培訓的有效性評估。15189評審不符合項1：培訓次數(shù)與培訓計劃不符。8CL425.1.6應每年對各級工作人員制定培訓計劃并進行微生物專業(yè)技術及知識培訓、質量保證/質量管理培訓、客戶服務培訓、安全培訓、繼續(xù)教育培訓。需要關注：人員比對是檢驗程序的質量保證中室內質控的一重要環(huán)節(jié)。不符合項2：室內質控計劃未見人員比對的內容。二.儀器設備的質控培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱冰箱自動或被自動細菌鑒定/藥敏儀

每天觀察溫度和CO2含量；

定期對細菌鑒定/藥敏儀器的校準和維護。95.3.2設備校準、維護及性能等應符合如下要求：（a）自動化鑒定儀、血培養(yǎng)儀的校準應滿足制造商建議；（b）每6個月進行檢定或校準的設備至少應包括濁度儀；（c）每12個月進行檢定或校準的設備至少應包括：生物安全柜（高效過濾器、氣流、負壓等參數(shù)）、CO2濃度檢測儀、細胞離心機、壓力滅菌器、游標卡尺、培養(yǎng)箱、溫度計、移液器、微量滴定管或自動分配器；需要關注：儀器設備的校準如濁度儀半年校準、游標卡尺的校準等。1015189評審不符合項3：藥敏試驗未配備和使用游標卡尺量抑菌環(huán)。11三.材料要求1.培養(yǎng)基：①MH培養(yǎng)基外觀必須表面平整、光滑，透明度好，無雜質，厚薄均勻，厚度不小于4mm。PH應在7.2-7.4之間。②無菌試驗陰性。12③培養(yǎng)基性能測試：通常用糞腸球菌ATCC29212作為質控菌進行測試。如果復方新諾明紙片形成的抑菌圈邊緣清楚≥20mm，說明培養(yǎng)基的質量好；如果無抑菌圈或圈內有再生菌，直徑<20mm表明培養(yǎng)基質量欠佳，MH所含的胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶超過要求。氨基糖苷類或四環(huán)素對銅綠假單胞菌的抑菌圈變小，說明鈣、鎂離子含量高；抑菌圈變大甚至于大的不可接受時，說明含量過低。鋅離子含量的變化也能影響細菌對頭胞碳烯的敏感性。

貯存在2-8℃的冰箱中的MH培養(yǎng)基，應在配制后七天用完。

132.藥敏培養(yǎng)基種類MH瓊脂：用于需氧菌藥敏試驗（紙片法和瓊脂稀釋法）MH肉湯：用于需氧菌藥敏試驗（肉湯稀釋法）HTM培養(yǎng)基：用于流感嗜血桿菌的藥敏試驗含5％脫纖維羊血的MH培養(yǎng)基：用于肺炎鏈球菌及其它鏈球菌的藥敏試驗（紙片法）添加馬血的陽離子調整過的MH肉湯：用于鏈球菌的藥敏試驗（稀釋法）GC瓊脂（添加促生長劑）：用于淋病奈瑟菌的藥敏試驗143.藥敏紙片/板條

紙片每一批藥敏紙片都要用質控菌株進行測試，質量符合要求時才可使用。為了保證藥敏紙片質量穩(wěn)定，應保存在－14℃以下的冰箱。使用前1-2小時取出，放室溫平衡后再打開使用。防止熱空氣接觸冷紙片時產生冷凝水，對試驗結果造成影響。一周使用量的藥敏紙片可以放在8℃以下的冰箱。貯存的紙片或某些性能不穩(wěn)定的藥敏紙片如亞胺培南、頭胞克洛、克拉維酸復合劑。15藥敏板條的質控按照生產廠商的要求，定期對同一批號的藥敏板條進行質控。更換批號時應作質控。164.比濁管

0.5麥氏單位其1cm光徑625nm的吸光度為0.08～0.10。配制的硫酸鋇標準管每月更換。膠乳顆粒懸液穩(wěn)定性更好。使用濁度儀需注意定期校準和維護1718自配的硫酸鋇標準管保存期測試5.標準菌株的質控種類與應用范圍菌株的保存19需氧菌藥敏試驗的標準菌株大腸埃希菌ATCC25922

用于腸桿菌科細菌、霍亂弧菌藥敏試驗的質控金黃色葡萄球菌ATCC25923

用于葡萄球菌屬或腸球菌屬細菌藥敏試驗的質控（紙片法）金黃色葡萄球菌ATCC29213

用于葡萄球菌屬細菌藥敏試驗的質控（稀釋法）糞腸球菌ATCC29212

用于腸球菌屬細菌藥敏試驗的質控（稀釋法）銅綠假單胞菌ATCC27853

用于銅綠假單胞菌和不動桿菌屬細菌藥敏試驗的質控大腸埃希菌ATCC35218

用于β－內酰胺酶抑制劑復合藥藥敏試驗的質控

20苛養(yǎng)菌藥敏試驗質控菌株流感嗜血桿菌ATCC49247/49766

用于流感嗜血桿菌屬細菌藥敏試驗的質控淋病奈瑟菌ATCC49226

用于淋病奈瑟菌藥敏試驗的質控肺炎鏈球菌ATCC49619

用于肺炎鏈球菌及其它鏈球菌的藥敏試驗的質控21質控菌株可用三種方法保存

冷凍干燥冷凍（<-20℃）

菌種保藏管、含10～15％甘油的肉湯、羊血、脫脂乳冷藏半固體、斜面、平板22質控菌株的使用質控菌株對藥物敏感性測試應按CLSI規(guī)定的標準方法進行。使用與臨床分離株相同的抗微生物藥物。日常使用的質控菌應放冰箱冷藏，每周移種。每月必須用冷凍菌株或凍干菌株作更換。不使用變異的菌株。23

6.儀器

有藥敏試驗和結果分析的自動化細菌鑒定儀以及細菌比濁儀。這些儀器應定期進行維護和校準。需注意新購儀器的初始的藥敏試驗的質量控制。24四.藥敏質控方法及頻率

紙片擴散法儀器法（微量MIC法）25藥敏試驗質控頻率新開展藥敏試驗要做每種藥物/細菌組合的20/30個數(shù)據（或替代方法）。每種藥物/細菌組合的20/30個數(shù)據中，允許1/3個數(shù)據超出規(guī)定范圍。滿足上述要求可將質控頻率改為每周一次。每周質控時，如果有一個數(shù)據超標，要找出原因并重復此質控試驗,如無明確原因則連續(xù)做5日質控。5日數(shù)據在控表明找到原因。找不到原因時，應恢復每日質控。在恢復每周質控之前，應再有20/30日連續(xù)質控數(shù)據。2627CL425.6檢驗程序的質量保證5.6.1實驗室制定的內部質量控制程序應包括整個實驗操作過程，如實驗分析前、中、后（報告）。質量控制應滿足如下要求：（c）實驗室采用的抗菌藥物敏感性試驗方法應以標準菌株連續(xù)檢測20－30天，每一組藥物/細菌超出參考范圍（抑菌圈直徑或MIC）的頻率應小于1/20或2/30……需要關注：何時應用初始化？初始化的方法和其規(guī)則。不符合項4：微生物未能提供新增“VITEK2COMPACT微生物鑒定及藥敏儀”（設備編號200445220068/020）的藥物敏感性試驗的初始室內質控記錄。28替代20/30天藥敏質控的方法（5天15個數(shù)據）29CL425.6檢驗程序的質量保證5.6.1實驗室制定的內部質量控制程序應包括整個實驗操作過程，如實驗分析前、中、后（報告）。質量控制應滿足如下要求：（c）……采用自動或半自動儀器檢測MIC時，應按照制造商的要求進行質控。應保存抗菌藥物敏感性試驗資料，并至少每年向臨床醫(yī)師報告。不符合項5：未按廠商的規(guī)定頻率做藥敏試驗的室內質控。30CLSIM100-S24紙片擴散法——質控頻率參考指南31CLSIM100-S24MIC試驗——質控頻率參考指南紙片擴散法質量控制遇到問題解決指南132紙片擴散法質量控制遇到問題解決指南233紙片擴散法質量控制遇到問題解決指南334藥敏試驗的培養(yǎng)條件需注意：35腸桿菌科：35±2℃16～18小時銅綠假單胞菌：35±2℃16～18小時洋蔥伯克霍爾德菌：35±2℃20～24小時不動桿菌屬：35±2℃20～24小時嗜麥芽窄食單胞菌：35±2℃20～24小時葡萄球菌屬：35±2℃16～18小時苯唑西林、甲氧西林、奈夫西林、萬古霉素24小時，

高于35℃不能測MRS。腸球菌屬：35±2℃16～18小時，萬古霉素24小時。流感嗜血桿菌：35±2℃16～18小時，5％CO2。淋病柰瑟菌：36±1℃（不超過37℃），20～24小時，5％CO2。腦膜炎柰瑟菌：36±1℃，20～24小時，5％CO2。