薄層板跑版注意事項(xiàng)

點(diǎn)樣用微量進(jìn)樣器進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣前，先用鉛筆在層析上距尾端2cm處輕輕畫一橫線，而后用毛細(xì)管吸取樣液在橫線上輕輕點(diǎn)樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，睜開的色譜圖分別度好，顏色分明。假如要從頭點(diǎn)樣，必定要等前一次點(diǎn)樣剩余的溶劑揮發(fā)后再點(diǎn)樣（用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干再點(diǎn)），免得點(diǎn)樣斑點(diǎn)過(guò)大。一般斑點(diǎn)直徑大于2mm，不宜超出5mm。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干。底線距基線1～2．5cm，點(diǎn)間距離為lcm左右，樣點(diǎn)與玻璃邊沿距離起碼lcm，為防備邊沿效應(yīng)，睜開將點(diǎn)了樣的薄層板放在盛在有睜開劑的睜開槽中，因?yàn)槊?xì)管作用，睜開溶劑在薄層板上遲緩前進(jìn)，行進(jìn)至必定距離后，拿出薄層板，樣品組分固挪動(dòng)速度不一樣而相互分別。①睜開室應(yīng)預(yù)飽和。為達(dá)到飽和成效，可在室中加入足夠量的睜開劑，密封室頂?shù)纳w。②睜開劑一般為兩種以上互溶的有機(jī)溶劑，而且臨用時(shí)新配為宜。激烈振搖使混淆液充分混勻，擱置，假如分層，取用體積大的一層作為睜開劑。絕對(duì)不該當(dāng)把各構(gòu)成溶液倒入睜開缸，振搖睜開缸來(lái)配制睜開劑?；煜黄骄蜎]有分液的睜開劑，會(huì)造成層析的完整失敗。各構(gòu)成溶劑的比率正確度對(duì)不一樣的剖析任務(wù)有不一樣的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精準(zhǔn)度，比方：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，③薄層板點(diǎn)樣后，應(yīng)待溶劑揮發(fā)完，再放人睜開室中睜開。④睜開應(yīng)密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放入睜開室時(shí)，睜開劑不可以沒過(guò)樣點(diǎn)。一般狀況下，睜開劑浸入薄層下端的高度不宜超出0.5cm。⑤睜開劑每次睜開后，都需要改換，不可以重復(fù)使用。（睜開缸中得睜開劑棄去，密封在容量瓶中得睜開劑可在當(dāng)日使用）⑥睜開后的薄層板用適合的方法，使溶劑揮發(fā)完整，而后進(jìn)行檢視。⑦Rf值一般控制在～，當(dāng)Rf值很大或很小時(shí)，應(yīng)適合改變流動(dòng)相的比率。斑點(diǎn)的檢出睜開后的薄層板經(jīng)過(guò)干燥后，常用紫外光燈照耀或用顯色劑顯色檢出斑點(diǎn)。對(duì)于無(wú)色組分，在用顯色劑時(shí)，顯色劑噴灑要平均，量要適量。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出成效就越好。睜開分別后，化合物在薄層板上的地點(diǎn)用比移值(Rf值)來(lái)表示?；衔锇唿c(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離與溶劑前沿至原點(diǎn)的距離的比值就是該化合物的Rf值。注意事項(xiàng)：一．預(yù)飽和分為2部分：1、睜開缸的預(yù)飽和：在睜開以前，使睜開劑蒸汽在睜開缸內(nèi)飽和，使睜開缸汽液狀態(tài)達(dá)到必定的穩(wěn)固狀態(tài)，此時(shí)還沒有放薄層板。2、薄層板的預(yù)飽和：在睜開缸飽和后，放入已經(jīng)點(diǎn)樣完成的薄層板，進(jìn)行飽和，使薄層板整體差異性減小。詳細(xì)做法是：在雙槽層析玻璃缸內(nèi),將此中一個(gè)槽內(nèi)倒入配好的睜開劑,另一個(gè)槽內(nèi)放入薄層板,蓋好上邊的玻璃蓋,這時(shí)候就是在預(yù)飽和。對(duì)于飽和時(shí)間：依據(jù)睜開劑而定。1、睜開劑組分極性差異不大的且揮發(fā)性好的，時(shí)間能夠短一些，一般15－20分鐘即可；2、極性差異大的，且揮發(fā)性差異大的，時(shí)間要長(zhǎng)一些，一般要

30－60分鐘；3、極性差異大的，且揮發(fā)性差異不大的，時(shí)間要長(zhǎng)一些，一般要

20－30分鐘；4、極性差異不大，且揮發(fā)性差不大的，時(shí)間能夠短一些，一般要

10－15分鐘；5、水飽和有機(jī)試劑或有機(jī)試劑飽和水的，時(shí)間一般都比較長(zhǎng)，30－60分鐘。6、此外，大家翻開封閉睜開缸的速度要快，放板取板的速度也要快，不然預(yù)飽和的成效全被你后期的操作給扼殺了??！二．睜開室應(yīng)放在水平、穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，不可以有陽(yáng)光直射，也不可以在通風(fēng)處擱置，走開熱源，防止溫度顛簸對(duì)分別不利；光敏物質(zhì)的分別應(yīng)將睜開室置于暗處進(jìn)行。三．點(diǎn)樣時(shí)間不該超出三分鐘。硅膠的硅醇基以氫鍵形式優(yōu)先吸附水，物理吸附使硅膠的活度降低，影響了弱極性物質(zhì)的吸附，化合物的Rf值相應(yīng)地增大。硅膠薄層的吸水速度很快，當(dāng)用早先經(jīng)過(guò)活化的薄層板，在點(diǎn)樣過(guò)程中干燥的薄層會(huì)立刻吸附空氣中的水蒸氣，在數(shù)分鐘內(nèi)達(dá)到均衡，吸附水蒸氣的量決定于點(diǎn)樣速度即裸露在空氣中的時(shí)間和空氣的相對(duì)濕度。Dallas指出厚、20cm×20cm的硅膠薄層板在50%相對(duì)濕度中擱置約3min就失掉活性的一半，而擱置15min時(shí)吸附的水分已達(dá)到最大值。在用同樣條件分別同一組化合物獲得的結(jié)果不可以重現(xiàn)時(shí)，一定考慮到相對(duì)濕度對(duì)睜開的影響，特別是我國(guó)南北地區(qū)濕度相差很大；即便在同一實(shí)驗(yàn)室冬夏天節(jié)不一樣濕度也有顯然差異，假如不注意濕度的影響就得不到預(yù)期的結(jié)果。睜開時(shí)的最正確相對(duì)濕度范圍決定于溶質(zhì)和溶劑的極性，隨溶質(zhì)和溶劑極性的增添相對(duì)濕度的范圍也相應(yīng)地增大，在用苯作睜開劑時(shí)，適合的相對(duì)濕度范圍很窄，所以濕度對(duì)分別的影響十分顯然；當(dāng)用乙醚為睜開劑時(shí)，相對(duì)濕度在20%-50%,時(shí)均可獲得重現(xiàn)的結(jié)果；如用氯仿-異丙醇-25%氨水（45:45:10）為睜開劑時(shí)，則相對(duì)濕度在20%-80%范圍內(nèi)可獲得較好的重現(xiàn)性。這類差異來(lái)自睜開室中睜開劑蒸氣有代替吸附在薄層上水分子的趨向，代替量決定于睜開劑蒸氣的極性和量；苯為非極性溶劑，其代替作用小，因?yàn)楸脚c水極性相差很大，即便吸附水量有細(xì)小的變化也能惹起Rf值的改變，甚至在薄層上形成“兩個(gè)前沿”而使色譜畸形。而在用極性溶劑如乙醇、甲醇或氨水為睜開劑時(shí)，則吸附的水分子被大批代替，本來(lái)吸附的水分降落，這時(shí)均衡主要決定于高濃度的溶劑蒸氣。睜開劑極性越大，薄層上吸附水蒸氣的影響越小，所以能在一較寬