薄層板跑版注意事項

點樣用微量進樣器進行點樣。點樣前，先用鉛筆在層析上距尾端2cm處輕輕畫一橫線，而后用毛細管吸取樣液在橫線上輕輕點樣，點的斑點較小，睜開的色譜圖分別度好，顏色分明。假如要從頭點樣，必定要等前一次點樣剩余的溶劑揮發(fā)后再點樣（用電吹風的熱風吹干再點），免得點樣斑點過大。一般斑點直徑大于2mm，不宜超出5mm。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干。底線距基線1～2．5cm，點間距離為lcm左右，樣點與玻璃邊沿距離起碼lcm，為防備邊沿效應(yīng)，睜開將點了樣的薄層板放在盛在有睜開劑的睜開槽中，因為毛細管作用，睜開溶劑在薄層板上遲緩前進，行進至必定距離后，拿出薄層板，樣品組分固挪動速度不一樣而相互分別。①睜開室應(yīng)預(yù)飽和。為達到飽和成效，可在室中加入足夠量的睜開劑，密封室頂?shù)纳w。②睜開劑一般為兩種以上互溶的有機溶劑，而且臨用時新配為宜。激烈振搖使混淆液充分混勻，擱置，假如分層，取用體積大的一層作為睜開劑。絕對不該當把各構(gòu)成溶液倒入睜開缸，振搖睜開缸來配制睜開劑?；煜黄骄蜎]有分液的睜開劑，會造成層析的完整失敗。各構(gòu)成溶劑的比率正確度對不一樣的剖析任務(wù)有不一樣的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精準度，比方：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標移液管，③薄層板點樣后，應(yīng)待溶劑揮發(fā)完，再放人睜開室中睜開。④睜開應(yīng)密閉，展距一般為8～15cm。薄層板放入睜開室時，睜開劑不可以沒過樣點。一般狀況下，睜開劑浸入薄層下端的高度不宜超出0.5cm。⑤睜開劑每次睜開后，都需要改換，不可以重復使用。（睜開缸中得睜開劑棄去，密封在容量瓶中得睜開劑可在當日使用）⑥睜開后的薄層板用適合的方法，使溶劑揮發(fā)完整，而后進行檢視。⑦Rf值一般控制在～，當Rf值很大或很小時，應(yīng)適合改變流動相的比率。斑點的檢出睜開后的薄層板經(jīng)過干燥后，常用紫外光燈照耀或用顯色劑顯色檢出斑點。對于無色組分，在用顯色劑時，顯色劑噴灑要平均，量要適量。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出成效就越好。睜開分別后，化合物在薄層板上的地點用比移值(Rf值)來表示。化合物斑點中心至原點的距離與溶劑前沿至原點的距離的比值就是該化合物的Rf值。注意事項：一．預(yù)飽和分為2部分：1、睜開缸的預(yù)飽和：在睜開以前，使睜開劑蒸汽在睜開缸內(nèi)飽和，使睜開缸汽液狀態(tài)達到必定的穩(wěn)固狀態(tài)，此時還沒有放薄層板。2、薄層板的預(yù)飽和：在睜開缸飽和后，放入已經(jīng)點樣完成的薄層板，進行飽和，使薄層板整體差異性減小。詳細做法是：在雙槽層析玻璃缸內(nèi),將此中一個槽內(nèi)倒入配好的睜開劑,另一個槽內(nèi)放入薄層板,蓋好上邊的玻璃蓋,這時候就是在預(yù)飽和。對于飽和時間：依據(jù)睜開劑而定。1、睜開劑組分極性差異不大的且揮發(fā)性好的，時間能夠短一些，一般15－20分鐘即可；2、極性差異大的，且揮發(fā)性差異大的，時間要長一些，一般要

30－60分鐘；3、極性差異大的，且揮發(fā)性差異不大的，時間要長一些，一般要

20－30分鐘；4、極性差異不大，且揮發(fā)性差不大的，時間能夠短一些，一般要

10－15分鐘；5、水飽和有機試劑或有機試劑飽和水的，時間一般都比較長，30－60分鐘。6、此外，大家翻開封閉睜開缸的速度要快，放板取板的速度也要快，不然預(yù)飽和的成效全被你后期的操作給扼殺了！！二．睜開室應(yīng)放在水平、穩(wěn)固的實驗臺上，不可以有陽光直射，也不可以在通風處擱置，走開熱源，防止溫度顛簸對分別不利；光敏物質(zhì)的分別應(yīng)將睜開室置于暗處進行。三．點樣時間不該超出三分鐘。硅膠的硅醇基以氫鍵形式優(yōu)先吸附水，物理吸附使硅膠的活度降低，影響了弱極性物質(zhì)的吸附，化合物的Rf值相應(yīng)地增大。硅膠薄層的吸水速度很快，當用早先經(jīng)過活化的薄層板，在點樣過程中干燥的薄層會立刻吸附空氣中的水蒸氣，在數(shù)分鐘內(nèi)達到均衡，吸附水蒸氣的量決定于點樣速度即裸露在空氣中的時間和空氣的相對濕度。Dallas指出厚、20cm×20cm的硅膠薄層板在50%相對濕度中擱置約3min就失掉活性的一半，而擱置15min時吸附的水分已達到最大值。在用同樣條件分別同一組化合物獲得的結(jié)果不可以重現(xiàn)時，一定考慮到相對濕度對睜開的影響，特別是我國南北地區(qū)濕度相差很大；即便在同一實驗室冬夏天節(jié)不一樣濕度也有顯然差異，假如不注意濕度的影響就得不到預(yù)期的結(jié)果。睜開時的最正確相對濕度范圍決定于溶質(zhì)和溶劑的極性，隨溶質(zhì)和溶劑極性的增添相對濕度的范圍也相應(yīng)地增大，在用苯作睜開劑時，適合的相對濕度范圍很窄，所以濕度對分別的影響十分顯然；當用乙醚為睜開劑時，相對濕度在20%-50%,時均可獲得重現(xiàn)的結(jié)果；如用氯仿-異丙醇-25%氨水（45:45:10）為睜開劑時，則相對濕度在20%-80%范圍內(nèi)可獲得較好的重現(xiàn)性。這類差異來自睜開室中睜開劑蒸氣有代替吸附在薄層上水分子的趨向，代替量決定于睜開劑蒸氣的極性和量；苯為非極性溶劑，其代替作用小，因為苯與水極性相差很大，即便吸附水量有細小的變化也能惹起Rf值的改變，甚至在薄層上形成“兩個前沿”而使色譜畸形。而在用極性溶劑如乙醇、甲醇或氨水為睜開劑時，則吸附的水分子被大批代替，本來吸附的水分降落，這時均衡主要決定于高濃度的溶劑蒸氣。睜開劑極性越大，薄層上吸附水蒸氣的影響越小，所以能在一較寬