基因擴增檢測實驗結(jié)果分析

基因擴增檢測實驗及結(jié)果剖析基因擴增檢測實驗及結(jié)果剖析基因擴增檢測實驗及結(jié)果剖析基因擴增檢測實驗及結(jié)果剖析1、目的：保證擴增及結(jié)果剖析的標準化、規(guī)范化。2．適用范圍：適用于本室使用的一般離心計。3．負責人：操作人：、標準程序：4.1基因擴增檢測標準程序：擴增反應(yīng)前須先在樣本輸入模板上依據(jù)開初排好的標當?shù)刂愤M行設(shè)置。每次實驗除待檢標本，還需包含：陰性比較、陽性比較（室內(nèi)質(zhì)控品高低值各一份），一組陽性標準品（4個梯度108、106、105、104）。打開電腦電源開關(guān)，進入WindowsNT界面。接著打開PCR儀電源開關(guān)，預(yù)熱5分鐘。雙擊電腦桌面的ABIPrism5700SDSSoftware圖標進入程序設(shè)置界面。單擊“文件”菜單中的“新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。在測定、容器和模板中做相應(yīng)的選擇，點擊OK。應(yīng)用檢測管理程序，并將其增添到樣品板文檔中。檢測反應(yīng)管，依據(jù)當次實驗所需條件編寫時間和溫度。運轉(zhuǎn)樣品板文檔。4.2結(jié)果剖析標準程序：應(yīng)按以下步驟進行：所有曲線——陰性比較——陽性比較——陽性室內(nèi)質(zhì)控品——陽性標準品——逐一剖析（標出陽性標本和可疑標本）——調(diào)整參數(shù)，獲取較好的標準曲線，顯示定量結(jié)果——登記，發(fā)報告。整體曲線的察看：將所有曲線選中進行整體察看1）察看可否存在污染狀況（包含標本污染和試劑污染），特別應(yīng)注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的狀況。2）察看可否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓顛簸等機器原由形成的異常曲線。陰性比較的剖析陰性比較：試劑中加入與待檢標本進行相同辦理的已知陰性標本。作用：用以監(jiān)測實驗室和前辦理過程中可否存在污染。陽性比較的剖析陽性比較：試劑中加入與待檢標本進行相同辦理的已知陽性標本。作用：用以監(jiān)測實驗可否正常檢出陽性標本，防范假陰性的出現(xiàn)。室內(nèi)質(zhì)控品的剖析室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標本進行相同辦理的已知濃度室內(nèi)質(zhì)控品。作用：用以監(jiān)控平常實驗的精巧度。陽性標準品的剖析1）各梯度曲線的散布可否平均，若各梯度曲線均未分開，則表示陽模稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。2）察看各曲線的Ct值可否在平常的正常地址。狀況1：若出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而各曲線Ct值均后移，則判斷可否為試劑擴增效率降落（如試劑過期或保存條件不合格）。狀況2：出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解狀況。3）每日必做104標準品，用作以下三方面監(jiān)控：一可否存在操作偏差，如加樣量過少等原由致使104標準品未能檢出；二可否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標準品降解的情況；三是若高拷貝標準品出現(xiàn)Ct值后移，且能除掉狀況1、2，則判斷可否為試劑矯捷度降落。單個曲線的判斷：逐一剖析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標本是指曲線在25個Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺趨向不顯然或上漲幅度比較低的標本。可疑標本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報陽性，不然結(jié)果報陰性。）曲線察看內(nèi)容：在基線選擇2～8時察看熒光強度（可否有三期特點）。并分別在DeltaRnvs.Cycle、Ctvs.WellNumber和Rnvs.Cycle這三種擴增圖形式下剖析數(shù)據(jù)。得出定量結(jié)果：調(diào)治基線和閾值以獲取一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時應(yīng)除掉某些陰性標本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。發(fā)放報告：實時登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報告。4.3實驗結(jié)果無效的判斷標準：出現(xiàn)下述四種狀況中的任何一種或多種，當次實驗結(jié)果不可以發(fā)，查找原由，重做實驗。陰性比較出現(xiàn)擴增。陽性比較無擴增。大量甚至所有的標本都擴增了。室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果出現(xiàn)失控狀況，實驗失控的具體標準詳見室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序。4.4實驗結(jié)果有效的判斷標準：達到以下要求后，當次實驗有效，可以發(fā)放結(jié)果。陰性比較沒有擴增，陽性比較擴增。陽性標準品梯度曲線圓滑平均，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果處于在控狀態(tài)，詳盡標準詳見本文涉及以下表格室間質(zhì)評記錄表PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表室內(nèi)質(zhì)控圖內(nèi)容總結(jié)

（1）基因擴增檢測實驗及結(jié)果剖析

1、目的：保證擴增及結(jié)果剖析的標準化、規(guī)范化

（2）2．適用范圍：適用于本室使用的一般離心計

（3）4.1.4