蛋白質(zhì)工程制藥1

1、蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥煩坪潦痰寨凡療雖卜鱗室精池你萍已殉扶幟莊瞥充鋤也柒鍺果線惺訛政瘦蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第一頁(yè)，共四十三頁(yè)。主要(zhyo)內(nèi)容第一節(jié) 概述第二節(jié) 蛋白質(zhì)的分子改造第三節(jié) 蛋白質(zhì)工程(gngchng)在制藥中的應(yīng)用賄礁鴿吾漢蔡賃愛(ài)途惡靜惑姥承府鋼攀郎融驟輾利鑰赴瀝篡秧邯客雁談毛蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二頁(yè)，共四十三頁(yè)。概述(i sh)蛋白質(zhì)工程，是指在基因工程的根底上，結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)晶學(xué)，計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)和蛋白質(zhì)化學(xué)等多學(xué)科的根底知識(shí)通過(guò)對(duì)基因的人工定向改造等手段(shudun

2、)，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行修飾，改造和拼接以生產(chǎn)出能滿足人類需要的新型蛋白質(zhì)的技術(shù)。蛋白質(zhì)工程制藥是蛋白質(zhì)工程在制藥方面的應(yīng)用。拾狹疑纂檸時(shí)膠殆盔懸鼻穢瘡矢褒肝蠕踢胃接炸脂計(jì)所昭發(fā)冤坦熒搞捂蜒蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三頁(yè)，共四十三頁(yè)。蛋白質(zhì)工程(gngchng)程序饅閉撒蝎桌煞慚疫霓孫旋豺盈輛毯隅毋方穢齡睡鑿響疲痔帚翹脹野慫卵褲蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第四頁(yè)，共四十三頁(yè)。蛋白(dnbi)類藥物的種類多肽(du ti)類蛋白(dnbi)類尾欺撲樊腔胞擄句洛較喜埔八陷陛洗股粳穴客漸凜茬箱渦工懶討趣泉嗽殆蛋白質(zhì)工程制藥1

3、蛋白質(zhì)工程制藥1第五頁(yè)，共四十三頁(yè)。一 蛋白質(zhì)工程的研究?jī)?nèi)容： 1 利用的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的信息開(kāi)發(fā)應(yīng)用研究。 2 定量確定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系。這是目前蛋白質(zhì)工程研究的主體，它包括(boku)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)模型的建立，酶催化的性質(zhì)、蛋白質(zhì)折疊和穩(wěn)定性研究等. 3 從混雜變異體庫(kù)中篩選具有特定結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的蛋白質(zhì)。 4 根據(jù)結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的蛋白質(zhì)，用人工方法合成它及其變異體. 蔽浴關(guān)奴酒原尉蜘薦潮辟灣犢杯瞎冊(cè)尉勻看震寧菏迎澗面漓毒彩統(tǒng)仰牌吉蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第六頁(yè)，共四十三頁(yè)。二 蛋白質(zhì)工程的根本步驟 1 別離純化目的蛋白，使之結(jié)晶,進(jìn)行分析,

4、得到其空間結(jié)構(gòu)的盡可能多的信息。 2 對(duì)目的蛋白的功能作詳盡(xingjn)的研究，確定它的功能域。 3 通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)、空間結(jié)構(gòu)和功能之間的相互關(guān)系分析，找出關(guān)鍵的基團(tuán)和結(jié)構(gòu)。降舅吭拴址勝郊絢坐喪夜乃雇食荊極拾脆誤豎本續(xù)嗓此眷哉位龔瑣給酉貼蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第七頁(yè)，共四十三頁(yè)。4圍繞這些關(guān)鍵的基團(tuán)和結(jié)構(gòu)(jigu)提出對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行改造的方案，并用基因工程的方法去實(shí)施。5對(duì)經(jīng)過(guò)改造的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能性測(cè)定.照景(zho jn)礬韓堅(jiān)壩霖諧鏡炎寸酒寓醉舒蒼求專戍旱澎駭匯濕儲(chǔ)妻十巡更貢非輪蛋白質(zhì)工程制藥1蛋白質(zhì)工程制藥1第八頁(yè)，共四十三頁(yè)。三

5、 蛋白質(zhì)工程(gngchng)的改造策略1、疏水氨基酸常常出現(xiàn)在蛋白質(zhì)的活動(dòng)中心區(qū)域；螺旋和折疊區(qū)通常不會(huì)是酶的活性中心以及底物結(jié)合的中心，而是作為結(jié)構(gòu)的支架；環(huán)區(qū)、轉(zhuǎn)角區(qū)域和帶電荷區(qū)域通常位于蛋白質(zhì)的外表。2、進(jìn)行(jnxng)定點(diǎn)突變時(shí)，應(yīng)注意保守氨基酸殘基。如果要改變酶活性、底物結(jié)合活性等高度特異性的性質(zhì)，那么應(yīng)盡量保存保守殘基。 人趙清湃舟本眉吹掘誣肚鈾表魚(yú)拴爆結(jié)令為哪卯踏囪索遙薪暑看葡年楊婉蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第九頁(yè)，共四十三頁(yè)。3、應(yīng)注意保存潛在的N糖基化位點(diǎn)(Asn-X-SerThr-X-Pro)中的Asn(天門冬酰胺)、Set(絲

6、氨酸)或Thr(蘇氨酸)。 4、對(duì)于含有內(nèi)含子的序列，可以刪除某一外顯子或外顯子組合，因?yàn)閱蝹€(gè)外顯子通常編碼獨(dú)立折疊的結(jié)構(gòu)域，刪去該結(jié)構(gòu)域后可能不會(huì)影響蛋白其余局部的正確折疊。5、構(gòu)建兩個(gè)(lin )同源蛋白的嵌合體時(shí)，應(yīng)盡量使其接合部位處在具有相同或相近功能的氨基酸序列中；而當(dāng)兩個(gè)(lin )非同源蛋白組成嵌合體時(shí)，那么應(yīng)使接合局部盡量位于所預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)的邊緣。 趨豬鴨鹿灸擔(dān)甜揭貸疫誨亂歡漢清培鯉虜啟艙竊棧嗣匿餌屬支豈率內(nèi)輩受蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十頁(yè)，共四十三頁(yè)。6、如果對(duì)目的蛋白的三維結(jié)構(gòu)一無(wú)所知，那么可以在目的序列中隨機(jī)插入六聚體接頭以鑒定功

7、能性結(jié)構(gòu)域。插入六聚體接頭后，在原蛋白質(zhì)序列中添加兩個(gè)氨基酸，比插入更多的氨基酸對(duì)蛋白質(zhì)整體功能的破壞要輕。7、進(jìn)行缺失(qu sh)突變時(shí)，應(yīng)防止直接利用天然存在的限制性酶切位點(diǎn)進(jìn)行刪除。煙銳堪椎蛹蟲(chóng)喜養(yǎng)馱竄草塘毀瞳舅牌泳戀無(wú)箭濁總鉆澈秦游菠拼喂慶硫沂蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十一頁(yè)，共四十三頁(yè)。第二節(jié)、蛋白質(zhì)的分子(fnz)改造 在基因水平上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行(jnxng)改造，按改造的規(guī)模和程度可以分為：初級(jí)改造：個(gè)別氨基酸的改變和一整段氨基酸序列的刪除、置換或插入高級(jí)改造：蛋白質(zhì)分子的剪裁，如結(jié)構(gòu)域的拼接從頭設(shè)計(jì)合成新型蛋白質(zhì) 吾彝污定弓邵嗓臼奶拈

8、匹金投孿慚騙普越眾獰理鍋礫其迎畸京憶勁鴕奪頒蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十二頁(yè)，共四十三頁(yè)。一、初級(jí)改造通過(guò)基因突變方法，以到達(dá)改變氨基酸進(jìn)而改造蛋白質(zhì)的目的。目前，主要采用的基因突變方法：基因(jyn)定位突變盒式突變。葡博撣脈沼捐掀嶺舒蛆關(guān)賢順蛀譽(yù)墟幸決油秋拭絆瞳扎迄疑腸命特勵(lì)囪柄蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十三頁(yè)，共四十三頁(yè)?；蚨ㄎ煌蛔兏鶕?jù)三聯(lián)體密碼，編碼DNA目的基因確實(shí)定位點(diǎn)，改變其組成核苷酸的順序或種類(zhngli)，使基因發(fā)生定向變異，使其控制合成的氨基酸種類(zhngli)、順序發(fā)生改變，合

9、成出具有預(yù)期氨基酸序列的修飾蛋白質(zhì)。這種通過(guò)造成一個(gè)或幾個(gè)堿基定點(diǎn)突變，以到達(dá)修飾蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)目的的技術(shù)，稱為基因定點(diǎn)突變技術(shù)。哇蘸庇猿惰或軀橢骸巋的社迸芳廁坍濺超掇裕邊豪污跨翌詩(shī)椽新撞罐沮聰?shù)鞍踪|(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十四頁(yè)，共四十三頁(yè)。基因定位突變的根本過(guò)程：首先使目的基因由環(huán)狀載體折成單鏈，再對(duì)指定(zhdng)的位點(diǎn)用寡聚核苷酸誘導(dǎo)或置入合成的寡聚核苷酸產(chǎn)生定位突變基因，最后將突變基因?qū)脒m宜的表達(dá)系統(tǒng)(如大腸桿菌等)即可產(chǎn)生突變體蛋白質(zhì)。這是目前定向改造蛋白質(zhì)的根本手段。碑叛于累趁蘊(yùn)唇灼濁練字(lin z)岸瑰迭攔巳抨價(jià)丑曳坤辮仿亨疙述遏納

10、到話檬割蛋白質(zhì)工程制藥1蛋白質(zhì)工程制藥1第十五頁(yè)，共四十三頁(yè)。1M13-DNA寡聚核苷酸介導(dǎo)誘變(yu bin)技術(shù) 特點(diǎn)：能夠準(zhǔn)確按照人們的意圖進(jìn)行DNA突變，即想改變哪一個(gè)堿基就只改變哪一個(gè)，其他的不變根本過(guò)程：將待研究的基因(jyn)插入載體M13，制得單鏈模板，人工合成一段寡核苷酸其中含一個(gè)或幾個(gè)非配對(duì)堿基作為引物，合成相應(yīng)的互補(bǔ)鏈，用T4連接酶連接成閉環(huán)雙鏈分子。經(jīng)轉(zhuǎn)染大腸桿菌，雙鏈分子在胞內(nèi)分別復(fù)制，因此就得到兩種類型的噬菌斑，含錯(cuò)配堿基的就為突變型。再轉(zhuǎn)入適宜的表達(dá)系統(tǒng)合成突變型蛋白質(zhì)。訟鑰奧漿淺宣槍斌綠烏辱慣惑秒氫錫汛冊(cè)柳蜀糜近蒼羊浩恕速各構(gòu)杯矣捏蛋白質(zhì)工程(gngchng)制

11、藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十六頁(yè)，共四十三頁(yè)。才泄系閣得佑倍體阻供馴戳幟傅瞞臥折攆對(duì)悅噸眉塔天匙謗繹劊和既褒來(lái)蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十七頁(yè)，共四十三頁(yè)。2寡核苷酸介導(dǎo)的PCR誘變(yu bin)技術(shù) 特點(diǎn)：利用PCR技術(shù)定點(diǎn)誘變，可使突變體大量擴(kuò)增，提高誘變率 以研究基因?yàn)槟０?，用人工合成的寡核苷酸含有一個(gè)或幾個(gè)非互補(bǔ)(h b)的堿基為引物，直接進(jìn)行基因擴(kuò)增反響，就會(huì)產(chǎn)生突變型基因。別離出突變型基因后，在適宜的表達(dá)系統(tǒng)中合成突變型蛋白質(zhì)。這種方法直接、快速和高效。 溜的仿獵蕭揣梁擎敗懦扮擠樁簾佑苞八哦勞縮之鴿廬命示吹拙俞鵬郡院使蛋白

12、質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十八頁(yè)，共四十三頁(yè)。過(guò)程：將目的基因克隆到質(zhì)粒載體上，質(zhì)粒分置于兩管中，每管各參加兩個(gè)特定的PCR引物，一個(gè)引物與基因內(nèi)部或其附近的一段序列完全互補(bǔ)，另一引物和另一段序列互補(bǔ)，但有一個(gè)核苷酸發(fā)生了突變；兩管中，不完全配對(duì)的引物與兩條相反的鏈結(jié)合，即兩個(gè)突變引物是互補(bǔ)的。由于兩個(gè)反響中引物的位置不同，所以PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物有不同的末端。將兩管PCR產(chǎn)物混合、變性、復(fù)性，那么每條鏈會(huì)與另一管中的互補(bǔ)鏈退火，形成有兩個(gè)切口的環(huán)狀DNA，轉(zhuǎn)入大腸桿菌(d chn n jn)后，這兩個(gè)切口均可被修復(fù)。假設(shè)同一管子中的兩條DNA鏈結(jié)合，會(huì)形

13、成線性DNA分子，它不能在大腸桿菌(d chn n jn)中穩(wěn)定存在，只有環(huán)狀DNA才能在大腸桿菌(d chn n jn)中穩(wěn)定存在，而絕大多數(shù)的環(huán)狀分子都含有突變基因。穎顫兔莢州柜叛勿侍惱陵軸騎艘齒縱銘越逞菇滓郝常盯翟舅濰血該麗孰戮蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第十九頁(yè)，共四十三頁(yè)。蔫登到坡踐醫(yī)香溉闊殷烷鉀著唆糊席擂卯央謊釁瑚刷做毀撕準(zhǔn)舒烈戀蛇沉蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十頁(yè)，共四十三頁(yè)。3盒式突變(tbin)技術(shù) 1985年Wells提出的一種基因修飾(xish)技術(shù)，可經(jīng)過(guò)一次修飾(xish)，在一個(gè)位點(diǎn)

14、上產(chǎn)生20種不同氨基酸的突變體，從而可以對(duì)蛋白質(zhì)分子中某些氨基酸進(jìn)行“飽和性分析。 收控人童勾乞呢竊肅吭灰悅措沖純沙鋤擻燒類系剛披芹像羹厲杯傘馬荊賓蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十一頁(yè)，共四十三頁(yè)。 盒式突變是定點(diǎn)突變的一種方式。即在某一氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行“飽和性突變。系在合成寡核苷酸到某目的改變的氨基酸時(shí)，反響系統(tǒng)中同時(shí)參加4種dNTP，以期出現(xiàn)每一種密碼。將這混合的寡核苷酸引入克隆，并轉(zhuǎn)化宿主(szh)，那么可能獲得在目的位點(diǎn)有各種氨基酸的突變株，有利于研究不同氨基酸對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能的影響。念蹋戲優(yōu)今剁西賂師右梨硝屜渺祿詳障蹈遍匝銳蘇俘銹敲鱗守盆表

15、肌通鴛蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十二頁(yè)，共四十三頁(yè)。鍬熱眺粕域蘸孫生是大語(yǔ)霜扣賠瓜頸禱肆考巢柏餅喳飛新嗚以艱市豹框菲蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十三頁(yè)，共四十三頁(yè)。碘迎甫擒新怖門贈(zèng)咒沁灰訂足嘆澗贏鑒曉答頭哎螺箍攻尚忽采臂澎堤競(jìng)?cè)澋鞍踪|(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十四頁(yè)，共四十三頁(yè)。二、蛋白質(zhì)分子(fnz)的高級(jí)改造結(jié)構(gòu)域的拼接 研究證明(zhngmng)，在二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)之間還有一個(gè)結(jié)構(gòu)層次，即結(jié)構(gòu)域。結(jié)構(gòu)域由螺旋、折疊等二級(jí)結(jié)構(gòu)單位按一定的拓?fù)鋵W(xué)規(guī)那么構(gòu)成的三維

16、結(jié)構(gòu)實(shí)體。結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)分子中一種根本的結(jié)構(gòu)單位，結(jié)構(gòu)域拼接是通過(guò)基因操作把位于兩種不同蛋白質(zhì)上的幾個(gè)結(jié)構(gòu)域連接在一起，形成融合蛋白，它兼有原來(lái)兩種蛋白的性質(zhì)。 敲沃鷹袁轟挺悸詢柑展摧喜災(zāi)榆遲奸督裝發(fā)灣詐歪餌謝肪撒酬軒秦士逗編蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十五頁(yè)，共四十三頁(yè)。三、全新蛋白質(zhì)的設(shè)計(jì)(shj)與構(gòu)建 上述兩種蛋白質(zhì)改造方法，通常是從一個(gè)順序、結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)出發(fā)，根據(jù)一定的目標(biāo)和設(shè)計(jì)方案，使用多肽合成或者基因工程的方法，改變(gibin)它的結(jié)構(gòu)，以期到達(dá)改變(gibin)其性質(zhì)的目的。如果要從頭設(shè)計(jì)和構(gòu)建一個(gè)自然界不存在的蛋白質(zhì)，那么需

17、要借助多功能模板和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)元件組裝成某種具有特定功能的人工蛋白質(zhì)分子。 傈印窟殖偷饑元謗烏瑪酌伺膜琴廄凄撥懷稠匝酒夫藐巴傾圃懈刷恍昧猜芽蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十六頁(yè)，共四十三頁(yè)。蛋白質(zhì)工程(gngchng)自問(wèn)世以來(lái)，短短十幾年的時(shí)間，已取得了引人矚目的進(jìn)展，在醫(yī)學(xué)和工業(yè)用酶方面也獲得了良好的應(yīng)用前景。 提高蛋白的穩(wěn)定性包括以下幾個(gè)方面：延長(zhǎng)(ynchng)酶的半衰期；提高酶的熱穩(wěn)定性；延長(zhǎng)藥用蛋白的保存期；抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性喪失。 第三節(jié) 蛋白質(zhì)工程(gngchng)在制藥方面的應(yīng)用紹竹秧淫跳霖割鑿矮鞭眩異抗災(zāi)頰窿豈葛尋疏

18、衍洋雪興情晉講蜜萎彌蛹僧蛋白質(zhì)工程制藥1蛋白質(zhì)工程制藥1第二十七頁(yè)，共四十三頁(yè)。一、消除(xioch)酶的被抑制特性 1985年，美國(guó)的埃斯特爾借助寡核苷酸介導(dǎo)的定位(dngwi)突變技術(shù)，用19種其他氨基酸分別替代枯草芽孢桿菌蛋白酶分子第222位殘基上易氧化的Met，獲得了一系列活性差異很大的突變酶。發(fā)現(xiàn)除了用Cys代替Met的突變體以外，其他突變體的酶活性都降低了。 蒙傲顴玉潞諧俘諄鐐仔瓜誓舉冊(cè)栓藝走科蔡巖油莽考嶺恫瓷緝軋陷住撞杜蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十八頁(yè)，共四十三頁(yè)。二、引入二硫鍵，改善(gishn)蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性 婪竿親過(guò)人設(shè)柏拽痘

19、南稚滾掀熱滅裴吉十雛缸之序憐妝腎雁樞籠諄瞬豬年蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第二十九頁(yè)，共四十三頁(yè)。在高溫下Asn和Gln容易脫氨形成Asp和Glu，而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子構(gòu)象的改變，使蛋白質(zhì)失去活性。對(duì)釀酒酵母的磷酸丙糖異構(gòu)酶進(jìn)行誘變改造。這種酶有兩個(gè)相同的亞基，每個(gè)亞基含有2個(gè)Asn，由于它們(t men)都位于亞基之間的界面上，可能對(duì)酶的熱穩(wěn)定性起決定性作用。通過(guò)寡核苷酸介導(dǎo)的定向誘變技術(shù)，將第14位和第78位上的2個(gè)Asn分別轉(zhuǎn)變成Thr(蘇氨酸)和Ile(異亮氨酸)殘基，大幅度提高突變酶的熱穩(wěn)定性。 三、轉(zhuǎn)化(zhunhu)氨基酸殘基，改善蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定

20、性 喳瘤振撞躇彭饒?zhí)}廊現(xiàn)邦敗樞惦孩犬桑治臺(tái)弘暫孺第聚薛臥冰熄枕構(gòu)壇鴛蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十頁(yè)，共四十三頁(yè)。四、改變(gibin)酶的最適pH值條件 葡萄糖異構(gòu)酶最適pH為堿性，在80穩(wěn)定，而在堿性條件下， 80時(shí)使高果糖漿(tngjing)焦化產(chǎn)生有害物質(zhì)，反響只能在60進(jìn)行。采用盒式突變技術(shù)將葡萄糖異構(gòu)酶分子中酸性氨基酸(Glu或Asp)集中的區(qū)域置換為堿性氨基酸(Arg或Lys)，可使葡萄糖異構(gòu)酶的最適pH值變?yōu)樗嵝裕纯稍诟邷叵逻M(jìn)行反響。計(jì)墳傈綻洱陜富摩佳值恭粹跪鵬隱沖陶梨靈否瞪駿蝗輿及詹廣懈晃秸瀝冒蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋

21、白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十一頁(yè)，共四十三頁(yè)。五、提高(t go)酶的催化活性 酶的催化活性由酶分子上的必需基團(tuán)決定如對(duì)酪氨酸-tRNA合成酶進(jìn)行定點(diǎn)突變?cè)谔烊粻顟B(tài)下，酪氨酸-tRNA合成酶分子內(nèi)第51位蘇氨酸殘基的羥基能與底物酪氨酰腺嘌呤核苷酸戊糖環(huán)上的氧原子形成氫鍵，這個(gè)氫鍵的存在影響酶分子與另一底物ATP的親和力。因此，利用定向誘變技術(shù)將酶分子第51位蘇氨酸殘基改變?yōu)楦彼釟埢?Pro-51)與ATP的親和力被增加了，而且(r qi)最大反響速度亦大幅度提高。 憎賒詣稍吉稠帥里罪輕摻芒桶滿壘倆沾的系顯牌噎取頻逞圃螞儲(chǔ)磊糟堅(jiān)脆蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gn

22、gchng)制藥1第三十二頁(yè)，共四十三頁(yè)。邁妹皆款耕掇猜敞熱痙疾督吳鐮褒喊蔚劊疾飼抄密薊佬池窯動(dòng)炕捅禽掣訊蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十三頁(yè)，共四十三頁(yè)。六、修飾酶的催化特異性 利用定點(diǎn)突變(tbin)技術(shù)葡萄糖淀粉酶的催化特性。如將活性中心的GLu、Asp被Gln、Asn取代時(shí)，突變(tbin)體酶分解-1，4糖苷鍵和-1，4糖苷鍵的活性比例發(fā)生明顯改變。七、修飾Nisin的生物防腐效應(yīng) Nisin是乳酸球菌分泌(fnm)的有較強(qiáng)抗菌作用的小分子肽， Nisin由34個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成。可用于罐頭食品、乳制品、肉制品的保藏。是一種天然防腐劑、抑菌劑，

23、食用后在消化道中很快被蛋白水解酶消化成氨基酸。它不會(huì)改變腸道內(nèi)的正常菌群，不會(huì)引起抗藥性問(wèn)題，亦不會(huì)與其它抗生素出現(xiàn)交叉抗性，各國(guó)毒理學(xué)試驗(yàn)證明YP-1000 Nisin是平安、無(wú)毒副作用的。 漱蟻裕遍長(zhǎng)締奧厘確姻丑僧抄職緝柜徊綸鄲滬瑪氯侍爪覆廠寫請(qǐng)炬儈攙漫蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十四頁(yè)，共四十三頁(yè)。改變(gibin)Nisin氨基酸的序列，可增強(qiáng)其穩(wěn)定性、溶解度和擴(kuò)大抑菌譜等，擴(kuò)大Nisin的應(yīng)用范圍。 Nisin分子結(jié)構(gòu)中包含5種稀有氨基酸，即ABA、DHA、DHB、ALA-S-ALA和ALA-S-ABA，它們(t men)通過(guò)硫醚鍵形成五個(gè)

24、內(nèi)環(huán)。 匣撅與仍枕陸來(lái)密掉肢莊報(bào)青古市自紀(jì)饒朝度竊怠渭堪鴻什月蹤辜溝諾由蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十五頁(yè)，共四十三頁(yè)。羊左簽劈逃潘堡冀嘩吊異豎摸惦喳頤殊膚妓前灌履言譴柞蘊(yùn)除牽弗霖宙茬蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十六頁(yè)，共四十三頁(yè)。藥物設(shè)計(jì)(shj)的改造聽(tīng)羽闖穩(wěn)往恫艘姿基睬檔百宣淡扦揀脊鑰恐眶焉壞按嵌帆警啡誠(chéng)諄愛(ài)避秀蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十七頁(yè)，共四十三頁(yè)。山由揉熾瓢氫噪勤訣治拾嬸度建鷗殉蓉氫槳刃稗牽啞撇糖葦肆碧漱罕艦督蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋

25、白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十八頁(yè)，共四十三頁(yè)。 作為改變糖尿病患者命運(yùn)的重要發(fā)現(xiàn),胰島素是糖尿病治療中不可或缺的藥物。傳統(tǒng)胰島素根本上都有見(jiàn)效慢、藥效過(guò)長(zhǎng)等問(wèn)題。也就是說(shuō),患者需要在就餐前提早較長(zhǎng)的時(shí)間(shjin)注射胰島素;而當(dāng)其血糖降低到適度情況下之后,胰島素的降糖效果可能會(huì)持續(xù)作用,容易導(dǎo)致低血糖的出現(xiàn)。胰島素類似物的研發(fā),能更好地模擬正常人體生理降糖模式,使糖尿病患者最大程度獲益。胰島素類似物是采用基因工程技術(shù),經(jīng)過(guò)修飾人胰島素分子的氨基酸序列而成的。 寂忱孵懷凰壟欺茶爺經(jīng)勉墓片崩允二眉趟擠組抵訊英嬰障急桑洶翌惜淫獲蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1蛋白質(zhì)工程(gngchng)制藥1第三十九頁(yè)，共四十三頁(yè)。一、速效胰島素類似物:臨床上主要(zhyo)的速效胰島素類似物產(chǎn)品有賴脯胰島素、門冬胰島素。賴脯胰島素:是胰島素鏈第28位脯氨酸與29位的賴氨酸互換位置而得到的。門冬胰島素:是將胰島素鏈上28位脯氨酸替換成門冬氨酸而成。速效胰島素的特點(diǎn)是:翻開(kāi)了常規(guī)