2022年醫(yī)學(xué)專題-SDS尿蛋白及本周氏電泳的意義

1、SDS尿蛋白電泳(din yn)王連升法國(f u)Sebia公司上海代表處 第一頁，共三十九頁。腎病(shn bn)的現(xiàn)狀腎臟疾病：慢性隱匿，發(fā)病率急劇上升，早期就診率20-30%，部分患者首診即終末期腎功能衰竭慢性腎功能衰竭（CRF）是各種慢性腎臟病（CKD）的最終結(jié)果CRF并發(fā)癥嚴(yán)重,死亡率高嚴(yán)重危害人類健康的全球性的公共衛(wèi)生問題第二頁，共三十九頁。腎單位的生理(shngl)結(jié)構(gòu)和各類生理(shngl)蛋白2百萬個腎單位每天過濾180升的血漿同時產(chǎn)生大約1.5升的尿液。腎小管的廢棄物排放 最后形成的尿液含有 1/3的白蛋白 和 2/3 球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋

2、白腎小球過濾白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白第三頁，共三十九頁。尿里的蛋白(dnbi)在生理學(xué)角度講，正常的人的尿蛋白量小于150 mg/24 h (大約在 100 mg/L)主要的蛋白是白蛋白 (少于 30 mg/L)病理上的腎功能疾?。寒?dāng)尿蛋白量大于150 mg/24 h 而此時，尿蛋白的成分也是不定的。第四頁，共三十九頁。尿蛋白含量(hnling)增加的原因間歇性的 生理因素 ：食高蛋白飲食(ynsh)后，精神激動、劇烈運(yùn)動、長時間受 寒，站立過久, 病理性的： 腎前性（溢出性） 腎性 腎后性 腎小球損傷 腎小管損傷 混合性 選擇性 非選擇性第五頁，共三十九頁。 67kDa

3、67 kDa溢出(y ch)性蛋白尿血漿中相對分子質(zhì)量(zhling)較小或陽性電荷蛋白異常增多經(jīng)腎小球?yàn)V過，超過腎小管重吸收能力形成蛋白尿。腎小球?yàn)V過、腎小管重吸收均正常。第六頁，共三十九頁。7常見蛋白(dnbi)種類及疾病 游離輕鏈 見于多發(fā)性骨髓瘤 2微球蛋白 見于淋巴組織增生綜合征 溶菌酶 見于部分急性粒細(xì)胞白血病 血紅蛋白 溶血性疾病,血型不合輸血 1酸性糖蛋白 見于支氣管肺癌 肌紅蛋白 擠壓傷,心肌梗死腎前性(溢出(y ch)蛋白尿第七頁，共三十九頁。腎后性蛋白尿 來源于腎小管代謝產(chǎn)生的、組織破壞分解的、炎癥或藥物(yow)刺激泌尿系統(tǒng)分泌的蛋白質(zhì)，進(jìn)入尿液而形成的蛋白尿。第八頁，

4、共三十九頁。腎性蛋白尿腎小球性蛋白尿 腎小球?yàn)V過膜因炎癥、免疫、代謝等因素?fù)p傷后濾過膜孔徑增大、斷裂(dun li)和（或）靜電屏障作用減弱。 根據(jù)濾過膜損傷程度及尿蛋白的組分，尿蛋白分為2類： （1）選擇性蛋白尿（selective proteinuria）：相對分子質(zhì)量中等的清蛋白為主 （2）非選擇性蛋白尿（non-selective proteinuria）：以相對分子質(zhì)量較大和中等的蛋白質(zhì)同時存在為主。反映腎小球毛細(xì)管壁有嚴(yán)重斷裂和損傷。腎小管性蛋白尿 腎小管在受到感染、中毒損傷或繼發(fā)于腎小球疾病時，因重吸收能力降低或抑制，而出現(xiàn)的以相對分子質(zhì)量較小的蛋白為主的蛋白尿。第九頁，共三十九

5、頁。腎小球過濾(gul)大分子量蛋白(dnbi)（主要為67kDa）無法透過腎小球進(jìn)入腎小管其他決定各種蛋白被過濾的因素 : 分析形狀, 帶電量, 血漿濃度.還有一些血液動力學(xué)因素可影響蛋白的過濾.第十頁，共三十九頁。腎小球損傷(snshng)原因糖尿病感染性損傷 (細(xì)菌感染, 乙肝患者, 水痘(shu du), 梅毒, 單核白血球增多癥 ,) 其他系統(tǒng)性疾病 (自動免疫系統(tǒng), 癌癥,)中毒現(xiàn)象 (重金屬, 藥物中毒,)此時, 我們可以在尿蛋白中發(fā)現(xiàn)白蛋白和其他大分子量蛋白 (大于 67kDa)。第十一頁，共三十九頁。腎小管的再次吸收(xshu)功能在腎小球中被過濾掉的小分子蛋白， 分子量小于

6、67kDa, 將會在腎小管內(nèi)被重新吸收 (內(nèi)吞作用(zuyng).99% 的在腎小球內(nèi)被過濾的蛋白, 都將會被重新吸收利用. 例如, 18g/24-h 白蛋白將會被過濾掉; 30mg/24-h 白蛋白在人的尿液中被發(fā)現(xiàn). 第十二頁，共三十九頁。腎小管損傷(snshng)腎小管損傷將會改變其對小蛋白分子的重新吸收能力 (小于67kDa的蛋白)產(chǎn)生原因遺傳原因 (Fanconi syndrome)代謝性疾病 (糖尿病, 草酸中毒) 免疫(miny)球蛋白單克隆擴(kuò)增(myeloma, Waldenstrm)藥物作用(氨基甙類抗生素 )中毒 (金屬中毒,氨基甙類)白蛋白 ( 67 kDa 67 kDa

7、 67 kDa第十三頁，共三十九頁?；旌闲該p傷(snshng)混合性蛋白尿 腎臟病變同時或相繼累及腎小球和腎小管時而(sh r)產(chǎn)生的蛋白尿。各組分所占比例因病變損害部位不同而不一致。 67kDa 150 - 200 mg/L ):蛋白(dnbi)尿陽性變藍(lán)，本周氏蛋白(dnbi)時會產(chǎn)生假陰性定量檢測方法 - 比濁法（不建議使用）- 建議采用比色法（焦性沒食子酚紅，考馬斯藍(lán)）第十七頁，共三十九頁。尿中總蛋白的定量分析無法(wf)檢測到低濃度的本周氏蛋白第十八頁，共三十九頁。特異蛋白(dnbi)測定免疫法定(fdng)量測定腎小球性標(biāo)志蛋白:Albumin, IgG, Transferrin腎

8、小管性標(biāo)志蛋白:b 2 microglobulin, RBP, a1 microglobulin如果需要更多的特異蛋白信息，需要更多的測試第十九頁，共三十九頁。尿蛋白電泳提供更全面(qunmin)的蛋白信息第二十頁，共三十九頁。在 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 凝膠上 主要的尿蛋白 電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類蛋白(分子量 67 kDa)白蛋白(分子量 : 67 kDa)a1-微球蛋白 (MW : 33 kDa)游離輕鏈 (MW 25 kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白 (MW : 80 kDa)Cystatin (MW : 11 kDda)b2-微球蛋白 (MW :12 kDa)溶菌酶

9、(MW : 15 kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW : 21 kDa)游離輕鏈的二聚體(MW 50 kDa)Ig G (MW : 160 kDa)Ig A (MW : 165 kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白 (MW :900 kDa)注 : (Cystatin C),血清(xuqng)半胱氨酸蛋白酶抑制劑C第二十一頁，共三十九頁。5 PROTEINURIE14.3 KDa26.6 KDa150 KDa67 KDa第二十二頁，共三十九頁。腎小球性蛋白尿血清(xuqng)Glomerular proteins ( 67kDa)腎小球性蛋白(dnbi)第二十三頁，共三十九頁。腎小管性蛋白尿Se

10、rSerTubular proteins腎小管性蛋白(dnbi) ( 67kDa)第二十四頁，共三十九頁。臨床(ln chun)病例2 : Light chain myeloma輕鏈性骨髓瘤4 : Macroscopic Hematuria肉眼(ruyn)血尿MW第二十五頁，共三十九頁。5: Overload Proteinuriawith polymerised BJ 本周氏蛋白(dnbi)多聚體 第二十六頁，共三十九頁。非濃縮(nn su)尿蛋白電泳的優(yōu)點(diǎn)1.可以直觀地反映出病人是腎小球受損還是腎小管受損，或者是小球小管均受損傷的混合型尿蛋白。2.操作簡便、尿液無須濃縮，只需2個半小時即可

11、出報告。3.對不愿意進(jìn)行腎穿檢查的病人,可作為替代實(shí)驗(yàn)。4.方法敏感，最小檢出限度為15mg/L。5.能得到尿蛋白剖像的電泳譜，便于比較和保存。6.兒童尤以腎小球病變?yōu)橹?直接檢測24h尿蛋白。7.對臨床不典型的患者及微量尿蛋白的患者的診斷及各種腎病在治療過程中的動態(tài)分析具有很高的臨床價值。第二十七頁，共三十九頁。本周氏Bence-Jones蛋白(dnbi)檢測第二十八頁，共三十九頁。本周氏蛋白(dnbi)（Bence-Jones Proteins,BJP)Henry Bence Jones 于1844年在一個骨髓瘤患者尿中發(fā)現(xiàn)的一種具有特殊凝溶性質(zhì)的蛋白該種蛋白4060發(fā)生(fshng)沉淀

12、，加熱煮沸時溶解，冷卻后又沉淀。后被證明是單克隆的免疫球蛋白輕鏈二聚體。大多數(shù)骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白5060室溫90100第二十九頁，共三十九頁。本周氏蛋白(dnbi)漿細(xì)胞增生癥影響(yngxing)血液中出現(xiàn)(chxin)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病第三十頁，共三十九頁。本周氏蛋白陽性(yngxng)患者多表現(xiàn)為腎臟損害極易誤診(w zhn)為慢性腎炎輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中正常的輕鏈過剩 慢性肝病、紅斑狼瘡等多克隆增殖性疾病伴隨輕鏈單一輕鏈第三十一頁，共三十九頁。 本周氏蛋白(dnbi)免疫固定電泳方法 儀

13、器(yq)： Sebia 瓊脂糖凝膠電泳儀試劑：本周氏蛋白電泳試劑 方法： 點(diǎn)樣，電泳，加抗體反應(yīng)， 條帶檢測ELP 泳道(yn do): 固定液GAM 泳道： 抗IgG .A.M重鏈抗血清K 泳道： 抗 輕鏈抗血清L 泳道： 抗 輕鏈抗血清Kfree 泳道： 抗游離 輕鏈抗血清L free 泳道： 抗 游離輕鏈抗血清重鏈參考泳道復(fù)合輕鏈游離輕鏈第三十二頁，共三十九頁。免疫(miny)球蛋白免疫球蛋白是機(jī)體(jt)的正常生理成分多克隆分類重鏈：IgG、IgA、IgM 、 IgD、IgE輕鏈：、10種類型抗復(fù)合輕鏈抗血清結(jié)合位置抗游離輕鏈抗血清結(jié)合位置，不能與完整抗體的輕鏈結(jié)合第三十三頁，共三十

14、九頁。本周氏蛋白(dnbi)檢測結(jié)果解析游離(yul)kappa復(fù)合kappa游離(yul)lambda第三十四頁，共三十九頁。Lambda Bence Jones protein(G, A or M) kappa kappa Bence Jones2 different levels of polymerization第三十五頁，共三十九頁。Bence Jones suspectedNo Bence Jones suspectedBence Jones suspectedBences Jones suspectedBenceJones?Bence Jones lambda (polymerized)No Bence Jones Bence Jones lambdaBences Jones kappa (polymerized)第三十六頁，共三十九頁。本周氏蛋白電泳檢測(jin c)對象腎病不明原因水腫尿蛋白陽性血清蛋白電泳提示“M蛋白”尿SDS蛋白電泳提示“輕鏈”存在骨髓瘤患者其他淋巴系統(tǒng)(xtng)惡性增殖性疾病淋巴細(xì)胞白血病漿細(xì)胞型白血病第三十七頁，共三十九頁。謝 謝第三十