生化分離技術(shù)試題及答案

1、-. z.*理工成教院期終考試生化別離技術(shù)試卷A試卷教學(xué)站年級班級*填空題每空1分，共21分。生化別離是從生物材料、微生物的發(fā)酵液或動植物細(xì)胞的培養(yǎng)液中別離并純化有關(guān)生化產(chǎn)品的過程，一般采用如下工藝流程：發(fā)酵液 細(xì)胞別離 細(xì)胞破碎 細(xì)胞碎片別離 成品加工。提取的產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)，選用細(xì)胞破碎法；在細(xì)胞膜附近則可用細(xì)胞破碎法；提取的產(chǎn)物與細(xì)胞壁或膜相結(jié)合時，可選用機(jī)械法和化學(xué)法相結(jié)合的細(xì)胞破碎法。3、發(fā)酵液的預(yù)處理目的主要包括改變和。4、典型的工業(yè)過濾設(shè)備有和。5、反萃取是將目標(biāo)產(chǎn)物從轉(zhuǎn)入 的過程。6、超臨界流體萃取的溶劑可分為非極性和極性溶劑兩種，常用的極性溶劑有和、非極性有。7、按膜的孔徑的大小

2、分類，可將膜分為、和等。凍干操作過程包括：、和。判斷題每題1分，共15分鹽析是指向蛋白質(zhì)溶液中參加*些濃的中性鹽后，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出，以到達(dá)別離、提純生物大分子的目的。 2、常用的鹽析劑有葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺、明膠等。 3、萃取是利用化合物在兩種互不相容的溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物 從一種溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過反復(fù)屢次的萃取，將絕大局部化合物提取出來的方法。 4、雙水相萃取的體系的兩相是不含有水分的。 )5、膜別離操作中，所有溶質(zhì)均被透過液傳送到膜外表上，不能完全透過膜的溶質(zhì)受到膜的截留作用，在膜外表附近濃度升高，這種現(xiàn)象叫做濃差極化。 6、凝膠色譜是利用不

3、同生物分子的電離能力不同而到達(dá)物質(zhì)別離目的的。 7、離子交換色譜是利用不同分子的大小不同而到達(dá)物質(zhì)別離目的的。 8、親和色譜是利用生物分子之間的親和力的不同而到達(dá)物質(zhì)別離目的的。 9、要增加目的物的溶解度，往往要在目的物的等電點附近進(jìn)展提取。 10、蛋白質(zhì)類的生物大分子在鹽析過程中，最好在高溫下進(jìn)展，因為溫度高會增加其溶解度。 蛋白質(zhì)為兩性電解質(zhì)，改變pH可以改變其電荷性質(zhì)，pH大于pI，蛋白質(zhì)帶正電荷。12、丙酮沉析作用小于丙酮。 13、真空冷凍枯燥的操作條件是高溫低壓，所以適合于枯燥熱敏性物質(zhì)。 14、生產(chǎn)氨基酸類藥物主要的生產(chǎn)方法有蛋白質(zhì)水解法、微生物發(fā)酵法、酶工程法和化學(xué)合成法。 15

4、、DNA、RNA是核苷酸類物質(zhì)，胱氨酸和谷氨酸屬于蛋白質(zhì)類物質(zhì)。 三、選擇題18為單項選擇，每題2分，913為多項選擇，每題3分，共31分。1、發(fā)酵液的預(yù)處理方法不包括 A、加熱 B、絮凝 C、離心 D、調(diào)節(jié)pH2、以下細(xì)胞破碎的方法中，屬于非機(jī)械破碎法的是 A、化學(xué)法 B、高壓勻漿法 C、超聲波破碎法 D、高速球磨法3、在萃取操作中，以下哪項不是選擇溶劑的原則 A、較高的選擇性 B、較高的沸點 C、較強(qiáng)的溶解能力 D、易于回收4、使蛋白質(zhì)鹽析，可參加試劑 A、鹽酸 B、硫酸 C、硝酸汞 D、硫酸銨5、在一個完整的萃取過程中，常常在萃取和反萃取的過程中增加洗滌操作，目的是 。A、除去與目標(biāo)產(chǎn)物

5、同時萃取到有機(jī)相的雜質(zhì) C、增大目標(biāo)產(chǎn)物在水相中的分配系數(shù)B、增大目標(biāo)產(chǎn)物在有機(jī)相中的溶解度 D、增大選擇性系數(shù)。6、萃取中利用相似相溶的原理進(jìn)展萃取的過程稱為 A、反萃取 B、物理萃取 C、化學(xué)萃取 D、有機(jī)溶劑萃取7、鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理是 A、降低蛋白質(zhì)的介電常數(shù) C、與蛋白質(zhì)結(jié)合形成不溶性蛋白 B、中和電荷，破壞水膜 D、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液pH至等電點8、膜別離是利用具有一定的 性的過濾介質(zhì)進(jìn)展物質(zhì)的別離過程。A、選擇透過性 B、吸附 C、溶解 D、擴(kuò)散9、利用鹽析法進(jìn)展初步純化后都需要進(jìn)展脫鹽處理，常用的脫鹽方法有 A、透析 B、超濾 C、凝膠過濾 D、離子交換10、常用于生物大分子沉

6、淀的有機(jī)溶劑有 A、乙醇 B、丙酮 C、異丙酮 D、甲醇11、晶體質(zhì)量主要是指 A、純度 B、粒度 C、晶體形狀 D、晶體大小12、在結(jié)晶操作中，工業(yè)上常用的起晶方法有 A、重結(jié)晶 B、自然起晶法 C、刺激起晶法 D、晶種起晶法13、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，可分為 紙色譜 B、薄層色譜 C、柱色譜 D、吸附色譜四、簡答題每題5分，共20分。在生化別離與純化的過程中，要綜合運(yùn)用多種現(xiàn)代別離與純化的技術(shù)，才能保證產(chǎn)品的有效性、穩(wěn)定性、均一性和純潔度。生化別離操作存在哪五個方面的特點？結(jié)晶的前提是什么？過飽和溶液的形成方法有哪些？萃取時根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物以及與其共存雜質(zhì)的性質(zhì)選擇適宜的有機(jī)溶劑，可使目標(biāo)

7、產(chǎn)物有較大的分配系數(shù)和較高的選擇性，萃取溶劑選擇的原則主要有哪些？4、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)流動相的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)別離原理的不同，色譜主要分為哪幾類？五、綜合應(yīng)用題共13分，臨床上治療尿毒癥采用的膜別離方法是什么？簡述該種別離方法的原理。4分下面是關(guān)于胸腺肽提取別離的操作流程圖，答復(fù)以下問題。共9分 胸腺肽由兩種肽組成，其分子量分別為9600和7000，含15種氨基酸，其中人體必需氨基酸的含量比擬高。胸腺肽對熱穩(wěn)定，能耐80高溫不變性；對蛋白酶敏感，易降解失活。絞碎胸腺小牛胸腺胸腺勻漿 原料處理制勻漿、提取絞碎胸腺小牛胸腺胸腺勻漿 絞碎 10000r

8、/min 1min,-2048h注射用胸腺肽注射用胸腺肽 分裝、凍干 超濾、提純?yōu)V液精致液 3%甘露醇 超濾膜 局部熱變性、離心、過濾濾液精致液 分子量10000 80 5min,5000r/min 40min1為什么以小牛胸腺作為原材料？3分2采用局部熱變形、離心、過濾操作的目的是什么？3分3為什么選用截留分子量小于10000的超濾膜？3分*理工成教院期終考試生化別離技術(shù)試卷A答案一、填空題每空1分，共21分。1、預(yù)處理、初步純化、高度純化 2、機(jī)械、非機(jī)械3、發(fā)酵液過濾特性、雜質(zhì)的去除4、板框壓濾機(jī)、轉(zhuǎn)筒真空過濾機(jī)5、有機(jī)相、水相6、甲醇、乙醇、二氧化碳注：甲醇、乙醇的位置可互換7、超濾、

9、微濾、納濾、反滲透8、預(yù)凍、升華枯燥、解析枯燥二、判斷題每題1分，共15分1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、三、選擇題18為單項選擇，每題2分，913為多項選擇，每題3分，共31分。1、 C 2、A 3、 B 4、 D 5、A 6、 D 7、 B 8、A9、AC 10、ABCD 11、ACD 12、BCD 13、ABC四、簡答題每題5分，共20分。1、特點：目的產(chǎn)物在初始物料發(fā)酵液中的含量低；培養(yǎng)液是多組分的混合物，除少量產(chǎn)物外，還有大量的細(xì)胞及碎片、其他代謝物幾百上千種、培養(yǎng)基成分、無機(jī)鹽等，給過程設(shè)計造成困難；生化產(chǎn)物的穩(wěn)定性低，易變質(zhì)、易失活、易變性

10、，對溫度、pH值、重金屬離子、有機(jī)溶劑、剪切力、外表*力等非常敏感；發(fā)酵和培養(yǎng)很多是分批操作，生物變異性大，各批發(fā)酵液不盡一樣，要求所用加工設(shè)備有一定操作彈性；對最終產(chǎn)品的質(zhì)量要求高。2、結(jié)晶的前提是過飽和溶液的形成。過飽和溶液的形成方法有：蒸發(fā)法；溫度誘導(dǎo)法；鹽析結(jié)晶法；透析結(jié)晶法；有機(jī)溶劑結(jié)晶法；等電點法；化學(xué)反響結(jié)晶法。價廉易得；與水相不互溶；與水相有較大的密度差，并且黏度小，外表*力適中，相分散和相別離較容易；容易回收和再利用；毒性低、腐蝕性小、閃點低、使用平安；不與目標(biāo)產(chǎn)物發(fā)生反響。4、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為紙色譜、柱色譜、薄層色譜。根據(jù)流動相的形式分類，色譜可分為液相

11、色譜、氣象色譜。根據(jù)別離原理的不同，色譜主要分為吸附色譜、分配色譜、凝膠過濾色譜、離子交換色譜、親和色譜等五、綜合應(yīng)用題1、臨床上治療尿毒癥采用的膜別離方法透析。其原理是：透析時，小于截留分子量MWCO的分子在透析膜兩邊溶液濃度差產(chǎn)生的擴(kuò)散壓作用下滲過透析膜，高分子溶液中的小分子溶質(zhì)如無機(jī)鹽透向水側(cè)，水則向高分子一側(cè)透過。2、1胚胎后期及初生時胸腺重量相對最大，隨年齡增長，胸腺逐漸退化，所以選用小牛的胸腺作為原料。2胸腺肽對熱穩(wěn)定，在80高溫不變性，但其他的雜蛋白會受熱變性，生成沉淀析出，而胸腺肽在清液中，所以需要離心過濾，將胸腺肽與雜蛋白別離開。3胸腺肽由兩種肽組成，其分子量分別為9600和

12、7000，截留分子量小于10000的超濾膜剛好可以讓胸腺肽透過，而分子量大于10000的雜蛋白被截留下來。*理工成教院期終考試生化別離技術(shù)試卷B試卷教學(xué)站年級班級*一、填空題每空1分，共21分。1、發(fā)酵產(chǎn)物的初步純化方法有很多，常用的有法、吸附法、法、法、法、溶劑萃取法、雙水相萃取和超臨界流體萃取等。2、降低發(fā)酵液粘度的主要方法是和。3、極性化合物易溶于的溶劑中，而非極性化合物易溶于的溶劑中，這一規(guī)律稱為。4、在超速離心中，離心方法可分為、和。5、固相析出技術(shù)是通過參加*種試劑或改變?nèi)芤旱臈l件，使生化物質(zhì)以固體形式從溶液中沉淀析出，假設(shè)析出的是無定型物，則稱為，假設(shè)析出的是晶體，則稱為。6、凍

13、干操作過程中，預(yù)凍的處理方法主要主要有和。7、親和色譜的洗脫方法可分為洗脫和洗脫。8、凝膠粒度的大小對別離效果有直接影響。一般說來，細(xì)粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分辨率，多用于別離等。粗粒凝膠柱流速快，洗脫峰寬，分辨率 ，多用于別離等。二、判斷題每題1分，共15分1、萃取是利用化合物在兩種互不相容的溶劑中溶解度或分配系數(shù)的不同，使化合物從一種溶劑內(nèi)轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，經(jīng)過反復(fù)屢次的萃取，將絕大局部化合物提取出來的方法。( )2、在沉淀的過程中，溶液的pH值、溫度、離子濃度等因素對沉淀沒有影響。 ( )3、鹽析是指向蛋白質(zhì)溶液中參加*些濃的中性鹽后，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出，以到達(dá)別離、提純生物

14、大分子的目的。 ( )4、提取細(xì)胞外的物質(zhì)，常常采用機(jī)械法破碎細(xì)胞。 ( )5、丙酮的介電常數(shù)要低一些，相對而言沉析操作大于乙醇，所以在沉析時，應(yīng)優(yōu)先選用丙酮，在考慮乙醇。 ( )6、蛋白質(zhì)類物質(zhì)應(yīng)該在遠(yuǎn)離等電點的條件下進(jìn)展沉析操作。 ( )7、硫酸銨在堿性條件中也以應(yīng)用。 ( )8、在處理對溫度敏感的蛋白質(zhì)或者酶時，應(yīng)該在較低溫度下進(jìn)展操作，以保證物質(zhì)不會受人而變性。 ( )9、氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽、酶、核酸等兩性物質(zhì)可以用等電點沉析。 ( )10、膜別離操作中，所有溶質(zhì)均被透過液傳送到膜外表上，不能完全透過膜的溶質(zhì)受到膜的截留作用，在膜外表附近濃度升高，這種現(xiàn)象叫做濃差極化，濃差極化無法通

15、過任何手段來減輕。 ( )11、平衡離子帶正電荷的離子交換劑可以與帶正電荷的離子發(fā)生離子交換作用，叫做陰離子交換劑；平衡離子帶負(fù)電荷的離子交換劑可以與帶負(fù)電荷的離子發(fā)生離子交換作用，叫做陽離子交換劑。 ( )12、親和色譜可以應(yīng)用于生物素和親和素、抗原與抗體、凝聚唐與糖蛋白的別離，還能運(yùn)用于各種氨基酸的別離。 ( )13、枯燥技術(shù)按熱量供應(yīng)方式可分為傳導(dǎo)枯燥、對流枯燥、輻射枯燥、介電加熱枯燥。( )14、丙酮沉析作用小于乙醇。 ( )15、真空冷凍枯燥的操作條件是高溫低壓，所以適合于枯燥熱敏性物質(zhì)。 ( )三、選擇題18為單項選擇，每題2分，913為多項選擇，每題3分，共31分。1、常用于生物

16、大分子沉淀的有機(jī)溶劑，最為常用的是 A、乙醇 B、丙酮 C、異丙酮 D、甲醇2、蛋白質(zhì)具有兩性性質(zhì)的主要原因是 A、蛋白質(zhì)分子有一個羧基和一個氨基 C、蛋白質(zhì)分子有苯環(huán)和羥基 B、蛋白質(zhì)分子有多個羧基和多個氨基 D、以上都對電點3、大多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點都在 *圍內(nèi)A、酸性 B、堿性 C、中性 D、緩沖液4、聚丙烯酰胺凝膠可以通過化學(xué)聚合形成凝膠，化學(xué)聚合一般以 作為催化劑。A、硫酸銨AP C、N,N,N,N-四甲基乙二胺TEMED B、丙烯酰胺Acr D、雙丙烯酰胺Bis5、聚丙烯酰胺凝膠可以通過化學(xué)聚合形成凝膠，化學(xué)聚合一般以 作為增速劑。A、硫酸銨AP C、N,N,N,N-四甲基乙二胺TE

17、MED B、丙烯酰胺Acr D、雙丙烯酰胺Bis6、以游離態(tài)存在的氨基酸是 A、蛋白氨基酸 B、非蛋白氨基酸 C、脂肪族氨基酸 D、芳香族氨基酸7、可用于鑒別胱氨酸和半胱氨酸的試劑是 A、對二甲氨基苯甲醛 B、醋酸鉛 C、對氨基苯磺酸 D、米倫試劑8、萃取操作是利用原料液中 的差異實現(xiàn)別離的操作。A、沸點 B、在溶劑中的溶解度 C、揮發(fā)度 D、密度9、市售的離子交換劑通常陽離子交換劑為 ，陽離子交換劑為 A、Na型 B、H型 C、Cl型 D、OH型10、柱色譜洗脫時的洗脫方式主要分為： 簡單洗脫 B、分步洗脫 C、反洗脫 D、梯度洗脫11、在親和色譜中，根據(jù)配體對待別離物質(zhì)的親和性的不同，將其

18、分為兩類，分別是 A、特異性配體 C、通用性配體 B、抗原、抗體 D、激素受體12、鹽析常用的中性鹽有 A、硫酸銨 B、硫酸鎂 C、氯化鈉 D、硫酸鈉13、影響絮凝的因素很多，主要有 A、絮凝劑的參加量 C、溶液的pH B、操作溫度 D、攪拌轉(zhuǎn)速和時間四、簡答題每題5分，共20分。1、什么叫做等電點沉淀？等電點沉淀的操作條件是什么？適用于什么蛋白質(zhì)？2、根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)流動相的形式分類，色譜可分為哪幾類？根據(jù)別離原理的不同，色譜主要分為哪幾類？3、簡述在教材中給出的對物料中的水分的分類及關(guān)系。4、色譜技術(shù)管飯應(yīng)用于生物及化學(xué)物質(zhì)的使用中，其中柱色譜的應(yīng)用最為廣泛

19、，請簡述柱色譜的根本操作步驟和考前須知。五、綜合應(yīng)用題共13分1、離子交換色譜是一種簡單而有效的去除水中雜質(zhì)及各種離子的方法，聚苯乙烯樹脂已廣泛用于高純水的制備、硬水軟化及污水處理等方面。寫出離子交換樹脂制備去離子水的過程。3分以下是DNA的提取別離，答復(fù)下面問題。10分 DNA在氯化鈉中溶解度隨氯化鈉濃度的變化而變化，當(dāng)氯化鈉物質(zhì)的量濃度為2mol/L時，DNA的溶解度最大，當(dāng)氯化鈉物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時，DNA的溶解度最小。且DNA不溶于95%的乙醇。濾液雞血細(xì)胞液雞血原料制備 提取核物質(zhì) 溶解、析出、濾出DNA濾液雞血細(xì)胞液雞血 檸檬酸鈉溶液 蒸餾水 氯化鈉溶液、蒸餾DNA粘

20、稠物濾液DNA 提取 再溶解、過濾DNA粘稠物濾液DNA 95%酒精溶液 氯化鈉溶液1為什么選用雞血作為原料？2分2參加檸檬酸鈉的目的是什么？會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？2分3前后兩次參加了蒸餾水，其目的是什么？3分4前后兩次析出DNA沉淀，原理是什么？3分*理工成教院期終考試生化別離技術(shù)試卷B答案一、填空題每空1分，共21分。1、沉淀、離子交換、超濾2、加水稀釋法、加熱法3、極性、非極性、相似相溶4、差速離心法、密度梯度離心法、等密度梯度離心法5、沉淀、結(jié)晶6、低溫快凍、低溫慢凍7、特異性、非特異性8、高、小分子量蛋白、低、中高分子量蛋白二、判斷題每題1分，共15分1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、三、選擇題18為單項選擇，每題2分，913為多項選擇，每題3分，共31分。1、A 2、B 3、A 4、A 5、C 6、B 7、B 8、B9、A、C 10、ABD 11、AC 12、ABCD 13、ABCD四、簡答題每題5分，共20分。1、利用蛋白質(zhì)分子在等電點時，其溶解度最小的特性，向含有目的藥物成分的混合液中參加酸或堿，調(diào)節(jié)其pH，使蛋