血漿miRNA-30、miRNA-199、miRNA-208及miRNA-374在ACS診斷中的應用研究課件

1、1血漿miRNA-30、miRNA-199、miRNA-208及miRNA-374在ACS診斷中的應用研究導 師：王玉明 教授 段 勇 教授研究生：李 勤昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院臨床檢驗診斷學專業(yè)2Company Logo內容研究背景1技術路線2實驗內容和結果3討論和結論43研究背景急性冠脈綜合征(ACS):是指冠狀動脈內不穩(wěn)定的粥樣斑塊破裂引起血栓形成，導致的心臟急性缺血綜合征。 指急性心肌缺血引起的一組臨床癥狀，包括： ST段抬高急性心肌梗死（STEMI） 非ST段抬高急性心肌梗死（NSTEMI） 不穩(wěn)定性心絞痛（UA）衛(wèi)生部心血管病防治研究中心，中國心血管病報告2013。定義與分類4研究

2、背景高血壓高血脂糖尿病肥胖缺乏運動動脈粥樣硬化吸煙冠心病家族史高齡房顫ACS的多種危險因素5研究背景世界衛(wèi)生報告指出：心血管病是人類的常見病、多發(fā)病，是危害人類健康的主要殺手之一，在全球人類死亡原因中排在第三位，相當于1700萬人/年死于心血管病。預計2020年死亡人數(shù)將增加50，達到2500萬人/年，占全球死亡總數(shù)的1/3，在全球人類死亡原因中排名第一位。衛(wèi)生部心血管病防治研究中心，中國心血管病報告2013。心血管疾病的流行病學7研究背景圖-2012年中國城市居民主要疾病死因構成比（%）8研究背景圖-2012年中國農村居民主要疾病死因構成比（%）10研究背景圖-2002年2011年城鄉(xiāng)居民急

3、性心肌梗死死亡率變化趨勢11研究背景目前對于心肌梗死診斷的主要血清生物學標志物是肌鈣蛋白。肌鈣蛋白自身也存在一定的缺陷： 1、胸痛發(fā)生3h內敏感性低； 2、急性心肌梗死以外的其他疾病也會升高； 3、一些特殊物質干擾抗原抗體反應導致肌鈣蛋白假性升高； 4、不能很好的區(qū)分不穩(wěn)定性心絞痛和穩(wěn)定性心絞痛。需要尋找更好的生物學標志物。Kartukha A,et al. Clin Chem Lab Med,2009, 37(11/12):1091-1095.傳統(tǒng)標志物的不足12研究背景微小RNA(microRNAs，miRNAs)是一類長約21-25個核苷酸的內源性單鏈非編碼RNA，在動植物中均有表達。m

4、iRNAs通常與靶mRNAs 的3-非編碼區(qū)(3-UTR)互補結合，從而發(fā)揮其生物學功能。miRNA介紹14研究背景miR-208b可通過調節(jié)甲狀腺素抑制肌球蛋白重鏈使得心肌纖維化。miRNA-374b能刺激血管內平滑肌細胞和成纖維細胞增殖和遷移，并使這些細胞形成纖維增殖性病變。miRNA介紹Satoh M, et al. J Journal of cardiac failure, 2010 ,16(5):404-10.Gupta SK,et al. Circ Cardiovasc Genet ,2010, 3:4848.15研究背景研究證實在急性心肌梗死發(fā)生時，外周血或血漿中的某些miRNA

5、的表達可發(fā)生相應的變化。心肌特異性miRNA可能成為一種理想的生物學標志物用于急性心肌梗死的診斷及判斷預后。 Corsten MF，et alCirc Cardiovasc Genet，2010，3(6)：499506miRNA介紹17技術路線各組血漿樣本提取miRNA生化檢測cTnI、CK-MB甲醛變性膠電泳驗證熒光定量PCR擴增結果比較分析miRNA-30dmiRNA-199amiRNA-208bmiRNA-374b引物18Company Logo實驗內容和結果血漿RNA的甲醛變性凝膠電泳28S28S28S18S18S18S5S5S5S19Company Logo實驗內容和結果熒光定量PC

6、R檢測miRNA表達量PCR擴增的各miRNA引物20實驗內容和結果各miRNA溫度梯度電泳2170 30s最適退火溫度 30s94 15s40 cycles6595測熔解曲線95 15min實驗內容和結果各miRNA的最適退火溫度22實驗內容和結果50bp 100bpmiRNA-30d的擴增產物電泳圖、擴增曲線及溶解曲線 擴增產物分析24實驗內容和結果正態(tài)性檢驗結果25實驗內容和結果各患者組血漿miRNA的表達情況miRNA-30dmiRNA-199amiRNA-208bmiRNA-374bmiRNA-199a27實驗內容和結果miRNA與cTnI的相關性分析各miRNA表達倍數(shù)和cTnI檢

7、測值的相關性r=0.739r=0.840r=0.879miRNA-30dmiRNA-199amiRNA-208b28實驗內容和結果診斷心肌梗死的準確性比較各胸痛時間段miRNA、cTnI和CK-MB診斷心肌梗死的ROC曲線胸痛3h胸痛36h胸痛612h29實驗內容和結果診斷心肌梗死的準確性比較各胸痛時間段miRNA、cTnI和CK-MB的AUC值30討論和結論1、國內外對miRNA -208b與ACS診斷的報道已有很多，但都是單獨診斷，且對miRNA -30d、 miRNA-199a 、miRNA-374b與ACS診斷的報道還沒有。2、本文對四種miRNA與ACS診斷進行聯(lián)合分析，并得出很好的

8、結果。討論31討論和結論3、本實驗顯示在ACS的不同階段miRNA-30d、miRNA-208b、miRNA-374b的表達都是上調的；而miRNA-199a的表達是下調的。4、四種miRNA在ACS的不同階段的表達水平不一致，以在STEMI時表達最高，這與大多數(shù)的研究一致。討論32討論和結論5、miRNA-374b在ACS的不同階段的表達雖然有統(tǒng)計學意義，但是卻不能將STEMI組與NSTEMI組、UA組與SA組進行區(qū)分(P0.05)。6、四種miRNA在ACS不同階段的表達差異：胸痛3h時只有miRNA-208b的表達差異有顯著統(tǒng)計學意義；胸痛36h時均有顯著統(tǒng)計學意義；胸痛612h時均無統(tǒng)

9、計學意義。討論33討論和結論7、本研究中，血漿miRNA與cTnI具有相關性，且miRNA在診斷心肌梗死方面優(yōu)于cTnI，這與Yvan等的研究基本相同，但Keller等的研究結果卻與此相反。8、本研究中， miRNA在胸痛發(fā)作1小時后的部分患者血漿中也可以檢測到。討論34討論和結論1、血漿miRNA與cTnI的相關性分析表明：miRNA可能是一種新的心肌損傷指標，其敏感度較高，可以反映心肌微小損傷。2、血漿miRNA-30d、miRNA-199a、miRNA-208b可能作為ACS早期診斷的生物標志物，特別是miRNA-208b，能很好的將ACS的各階段進行區(qū)分。結論35討論和結論3、血漿miRNA-374b表達上調，但是卻不能將將ACS的各階段進行區(qū)分，可能miRNA-374b是心肌細胞特有表達的一種miRNA。4、四種miRNA，尤其是miRNA-208b，它能準確的對急性心肌梗死進行診斷，堪比cTnI。結論36討論和結論5、血漿miRNA的聯(lián)合運用可提高心肌梗死診斷的準確性，但與cTnI聯(lián)合運用效果不大。6、不論單獨診斷還是聯(lián)合診斷時都以miRNA-208b表現(xiàn)最佳。結論37致謝衷心的感謝我的導師王玉明教授三年來