微生物的分離純化課件

1、微生物的分離純化微生物的分離純化分離純化形態(tài)觀察內(nèi)容提要分離內(nèi)容提要半固體培養(yǎng)基：穿刺接種液體培養(yǎng)基接種普通瓊脂培養(yǎng)基：涂布平板，平板劃線接種，斜面劃線接種淺盤固體接種（1）接種半固體培養(yǎng)基：穿刺接種（1）接種無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行微生物的分離純化課件劃線分離劃線分離微生物的分離純化課件微生物的分離純化課件劃線接種注意要點(diǎn)劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成30-40度角,輕輕接觸,以腕力在瓊脂表面輕快滑動(dòng),不能劃破瓊脂.第一次劃線應(yīng)占平皿面積的1/10,以后每次劃線約占面積的1/41/5.劃線為連續(xù)劃線,不能間斷.應(yīng)占滿平皿.劃線不能交叉重

2、復(fù).每次劃完后接種環(huán)應(yīng)滅菌.劃線接種注意要點(diǎn)劃線時(shí)接種環(huán)與平皿約成30-40度角,輕輕接稀釋分離涂布平板稀釋分離涂布平板稀釋分離傾注平板稀釋分離傾注平板微生物的分離純化課件厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱厭氧罐厭氧手套箱厭氧罐厭氧手套箱細(xì)菌的分離1、一般采用NA培養(yǎng)基，加入抗真菌劑(如放線菌酮和制霉素)，摻加濃度一般為50gm1， 以抑制真菌的生長。2、瓊脂平板在使用前應(yīng)置于37培養(yǎng)箱中孵育l、2天。3、培養(yǎng)基的生物物理學(xué)參數(shù)，如pH及鹽分也應(yīng)調(diào)節(jié)到與試樣的生態(tài)系統(tǒng)參數(shù)值相近。細(xì)菌的分離1、一般采用NA培養(yǎng)基，加入抗真菌劑(如放線菌酮和 放線菌分離培養(yǎng)需考慮的生

3、態(tài)參數(shù)：溫度、pH、離子強(qiáng)度、氧化還原電勢(shì)和底物濃度。一般采用高氏1號(hào)培養(yǎng)基，大多數(shù)放線菌的分離培養(yǎng)是在貧脊或復(fù)雜底物的瓊脂平板上進(jìn)行的。除嗜溫性放線菌外，其他放線菌一般在培養(yǎng)4-20天內(nèi)在分離平板上緩慢形成菌落。選擇性地添加抗生素，通常加入抗真菌劑制霉菌素或放線菌酮，以抑制真菌的繁殖。放線菌的分離 放線菌分離培養(yǎng)需考慮的生態(tài)參數(shù)：放線菌的分離真菌分離利用低碳氮比的培養(yǎng)基可使真菌生長菌落分散，利于計(jì)數(shù)，分離和鑒定。這里主要是利用營養(yǎng)成分的減少而使生長減慢，并由此限制真菌的遷涉生長。一般采用PDA培養(yǎng)基改變培養(yǎng)溫度將有利于不同嗜溫區(qū)真菌的分離。有時(shí)，真菌子實(shí)體形成必須有光線，這在分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加以

4、考慮。真菌分離利用低碳氮比的培養(yǎng)基可使真菌生長菌落分散，利于計(jì)數(shù)（2）純化將分離得到的單菌落分別接種到單個(gè)平板上（2）純化將分離得到的單菌落分別接種到單個(gè)平板上 顏色反應(yīng)：分離特定的菌株； 牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；待分離的微生物的生長特征明顯不同 顏色反應(yīng)：分離特定的菌株； 牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；待微生物的分離純化課件微生物的分離純化課件液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng) 稀釋法進(jìn)行液體分離必須在同一個(gè)稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)（一般應(yīng)超過95%）表現(xiàn)為不生長。單細(xì)胞（孢子）分離 一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行；操作難度與細(xì)胞或個(gè)體的大小成反比；液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng) 稀釋法進(jìn)行液體分離必須

5、在同一（3）形態(tài)觀察（3）形態(tài)觀察菌落（colony）： 單個(gè)（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體眾多菌落連成一片菌苔（lawn）菌落（colony）： 單個(gè)（或聚集在一起的不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對(duì)該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落微生物的分離純化課件（4）菌種保藏最常見的保藏方法：斜面細(xì)菌的保藏：甘油

6、保藏真菌的保藏：石蠟油保藏、孢子保藏（4）菌種保藏最常見的保藏方法：斜面 菌 連續(xù)在培養(yǎng)基上（內(nèi)）移種 種 生活態(tài) 傳代培養(yǎng)保藏法 連續(xù)在活宿主上（內(nèi)）移種 保 固體斜面 藏 濕法 半固體瓊脂柱 方 休眠態(tài) 液體介質(zhì)（蒸餾水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管內(nèi) 吸附在合適的載體上菌種保藏的方法 菌 方法：低溫保藏法方法：菌種管置4冰箱保藏，定時(shí)傳代 原理：低溫下，微生物代謝強(qiáng)度明顯下降 。石蠟油低溫保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蠟油。干燥保藏法將菌種置于土壤、細(xì)紗、濾紙、硅膠等干燥材料上保藏。如砂土管法，適用于放線菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏時(shí)間幾至幾十年。方法：低溫保藏法方法：菌種管置4冰箱保藏，定時(shí)傳代 真空冷凍干燥法加有保護(hù)劑的菌懸液在凍結(jié)狀態(tài)下予以真空干燥。適用于各種微生物，便于大量保藏，菌種存活時(shí)間長，是目前最好的保藏方法。液氮超低溫保藏法將菌種置于保護(hù)劑中，預(yù)凍后保存在液氮超低溫冰箱中（ -196）。適用于各種微生物的較理想的保藏方法。真空冷凍干燥法幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評(píng)價(jià)冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑各大類細(xì)菌、酵