從業(yè)人員健康體檢沙門氏菌、志賀氏菌檢測操作程序(討論稿)

1、v1.0可編輯可修改從業(yè)人員健康體檢沙門氏菌、志賀氏菌檢測操作程序一、目的本程序用于對從業(yè)人員健康體檢進(jìn)行沙門氏菌、 志賀氏菌檢測等致病菌檢測 的方法，以規(guī)范操作程序，保證檢測數(shù)據(jù)的有效性。二、適用范圍：本方法適用于從人體糞便中沙沙門氏菌、志賀氏菌的分離、 鑒定及保存的梯相關(guān)操作。三、生物安全要求標(biāo)本及相應(yīng)的致病菌操作必須在 BSL-2 生物安全實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中進(jìn)行。四、試劑及儀器設(shè)備試劑采便盒、 Cary-Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基、亞硒酸增菌液（ SF）、改良亞硒酸鹽磺綠增菌肉湯（ SBG）、沙門志賀培養(yǎng)液、木糖 - 賴氨酸 - 脫氧膽酸瓊脂（XLD）、麥康凱瓊脂、沙門顯色培養(yǎng)基、結(jié)晶紫沙

2、門培養(yǎng)基（ YS）、三糖鐵（TSI）、動(dòng)力 - 吲哚 - 尿素培養(yǎng)基（MIU）、沙門氏菌屬診斷血清、志賀氏菌屬診斷血清、 API20E生化試劑條、磁珠菌種保存管儀器設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱、微生物鑒定儀五、采樣方法標(biāo)本應(yīng)為新鮮的或轉(zhuǎn)移至 Cary-Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便或肛拭子，最優(yōu)標(biāo)本是轉(zhuǎn)移到 Cary-Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便拭子。肛拭子不是1v1.0可編輯可修改最佳標(biāo)本，僅在病人無糞便標(biāo)本時(shí)采用。糞便標(biāo)本：應(yīng)采集自然排出的新鮮糞便，取稀水樣、粘血樣、膿血樣，黏液樣部分。盛于清潔、干燥、無吸水性的無菌容器，避免混入尿液、水和其他物質(zhì)。肛拭標(biāo)本 ：若無法獲得糞便（如排便困難或嬰幼兒） ，也可

3、以采用肛拭子，即無菌棉拭子用生理鹽水濕潤后，插入肛門內(nèi) 4-5cm 處兒童約 2-3cm），同一方向輕輕旋轉(zhuǎn) 2-3 周。以目測能見到糞便為準(zhǔn)。插入 Cary-Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基。標(biāo)本采集后立即送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，若室溫保存，不能超過1h；如不能立即送檢，應(yīng)放入 Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中冷藏條件下24 小時(shí)內(nèi)送檢。六、檢驗(yàn)程序糞便標(biāo)本或肛子XLD或麥康凱SBG增菌XLD或顯色平板可疑菌落接種TSI 和 MIU可疑菌落接種TSI 和 MIU生化符合者做血清凝集和生化符合者做血清凝集和系菌株保存管保存菌株上送七、操作步驟2v1.0可編輯可修改分別標(biāo)記一個(gè) XLD平板（或 YS 平板、麥

4、康凱平板）和 1 管 9ml 改良亞硒酸鹽磺綠增菌肉湯 （SBG）（或 SF 增菌液或沙門志賀培養(yǎng)液） 。用 1 個(gè)無菌拭子取少量標(biāo)本（不要使拭子 粘得太多，盡量從可見血或黏液的部位收集） 接種在 XLD平板的第一區(qū)， 接著把拭子放入SBG增菌液。再滅菌接種環(huán)在XLD平板的其余區(qū)進(jìn)行劃線接種。如果是 Cary-Blair 運(yùn)送培養(yǎng)基的糞便拭子，則輕攪混合標(biāo)本后接種增菌液與平板。所有培養(yǎng)基均放入 36 1培養(yǎng)， SBG的最佳增菌時(shí)間是 1618h（建議每天下午45 時(shí)接種標(biāo)本， 第二天早上 810 時(shí)用增菌液劃平板）。觀察平板：取培養(yǎng)后的平板，觀察有無可疑菌落。平板可疑菌落觀察：志賀菌在XLD平

5、板上為粉紅或無色、透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形菌落，直徑1-2mm，而大部分的大腸桿菌類的菌落為黃色、混濁、凸起、濕潤、邊緣整齊或不規(guī)則，直徑 2-3mm。大多數(shù)沙門菌在XLD平板上中心黑色的透明、 光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形的菌落。 （圖 2）7.4.YS平板可疑菌落觀察：7.4. 麥康凱平板可疑菌落觀察：志賀菌在麥康凱平板上為無色至淺粉色、半透明、光滑、濕潤、邊緣整齊或不規(guī)則、圓形菌落，直徑 2-3mm；大多數(shù)沙門菌為無色菌落，粉紅色，帶或不帶黑心，傷寒沙門菌為無色菌落； 而大部分的大腸桿菌類的菌落為粉紅或紅色、 混濁、凸起、濕潤、邊緣整齊或不規(guī)則，直徑 3-4mm。3v1.0可編輯可

6、修改7.4. SBG肉湯增菌： SBG增菌 1618 小時(shí)后，劃線接種XLE平板或沙門顯色平板，放入36 1培養(yǎng) 1824h。沙門顯色平板可疑菌落觀察：典型的沙門菌在沙門顯色平板上為紫色的菌落，直徑2-3mm。建議的初步篩查方案（初步生化特征見表1）：表沙門菌、傷寒沙門菌、志賀菌及常見腸道菌的初步生化特征TSI （斜面）TSI （底面）TSI（ H2S）TSI （產(chǎn)氣）MIU（動(dòng)力）MIU（吲哚）大部分傷 寒志 賀大 腸枸櫞酸變 形沙門菌沙門菌氏 菌桿 菌桿菌桿 菌K（紅色）K（紅色）K（紅色）A（黃色）A（黃色）K（紅色）A（黃色）A（黃色）A（黃色）A（黃色）A（黃色）A（黃色）+（黑色）

7、小部分-+（黑色）+（黑色）+（氣泡）-+（氣泡）+（氣泡）+（氣泡）+（彌漫+（彌漫-（沿接種+（彌漫+（彌漫+（彌漫生長）生長）線生長）生長）生長）生長）- （黃色- （黃色- （黃色+（加試劑+（加試劑- （黃色圓環(huán)）圓環(huán)）圓環(huán)）變紅色）變紅色）圓環(huán)）MIU（尿素）- （黃色）- （黃色）- （黃色）- （黃色）- （黃色）+（紅色）A：糞便（或肛拭子）SBG或SF 增菌XLD 分離接種 TSI 和 MIUB：糞便（或肛拭子）SBG或SF 增菌YS 分離接種 TSI 和 MIUC：糞便（或肛拭子）SBG或 SF增菌XLD和麥康凱分離4v1.0可編輯可修改接種 TSI 和 MIUD：糞便（

8、或肛拭子）SBG或 SF 增菌YS和沙門顯色分離接種 TSI 和 MIUE：糞便（或肛拭子）SBG或 SF增菌XLD和沙門顯色分離接種 TSI 和 MIU生化初步鑒定每個(gè)平板挑取35 個(gè)分離較好的單個(gè)可疑菌落，分別接種到三糖鐵（TSI）和動(dòng)力 - 吲哚 - 尿素培養(yǎng)基（MIU），36 1培養(yǎng) 1824h。沙門菌和志賀菌的生化特征見表2。系統(tǒng)生化試驗(yàn)沙門菌和志賀菌初步鑒定陽性菌經(jīng)轉(zhuǎn)種營養(yǎng)瓊脂單，取單個(gè)菌落進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定（可以使用 APE20E或全自動(dòng)生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行） 。血清學(xué)試驗(yàn)志賀菌血清學(xué)試驗(yàn)挑取生化反應(yīng)實(shí)篩符合志賀菌的營養(yǎng)瓊脂斜面， 首先用四種多價(jià)血清做玻片凝集反應(yīng) (4 種多價(jià)包括：

9、A 群 1、2 型； B 群和D群) 。凝集者則用 B 群多價(jià)、 D群和 A1、A2、血清分別凝集。若多價(jià)血清不凝集，可能為C 群或 A 群的 312 型，應(yīng)進(jìn)行 C群的四種多價(jià)和A 群另三種多價(jià)血清做玻片凝集。沙門菌血清學(xué)試驗(yàn)挑取生化反應(yīng)實(shí)篩符合沙門菌的營養(yǎng)瓊脂斜面，首先用A-F 群 O多價(jià)血清做玻片凝集反應(yīng)。5v1.0可編輯可修改若凝集可按常見O因子檢出頻率，按照 O4O10O9O7O8 O19O2O11順序凝集?？乖心栃缘木洌家瑫r(shí)用生理鹽水做凝集試驗(yàn)，只有不出現(xiàn)自凝時(shí)，才可以報(bào)告陽性結(jié)果。結(jié)果報(bào)告在初步生化鑒定符合后， 可以先將可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色， 最后綜合生化及血清學(xué)結(jié)果，可以報(bào)告檢出（或未檢出）沙門菌（或志賀菌）。對于從業(yè)人員體檢結(jié)果已經(jīng)納入檢驗(yàn)軟件管理的單位，可以直接在檢驗(yàn)軟件中錄入相應(yīng)結(jié)果。其他單位可以設(shè)計(jì)專門的報(bào)告格式反饋給送檢單位或送檢科室，檢驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)至少包括姓名，性別，年齡，體檢編號(hào)，檢測結(jié)果。檢測結(jié)果為陰性， 可以報(bào)告為未檢出腸道沙門菌和志賀菌； 檢測結(jié)果為陽性，根據(jù)檢