免疫磁珠技術在食品有害微生物檢測中的應用課件

1、免疫磁珠技術在食品有害微生物檢測中的應用小組成員：田理剛、張帥、田勇、朱林韜、趙建秋、董唯目 錄1免疫磁珠技術的介紹2免疫磁珠技術在食品有害微生物檢測中的應用3小結1、免疫磁珠技術的介紹 1.1免疫磁珠技術簡介 免疫磁珠( Immunomagnetic bead, IMB,簡稱磁珠)技術,是近年發(fā)展起來的將固化試劑特有優(yōu)點與免疫學反應高度特異性結合于一體的一項新技術。 以免疫學為基礎,滲透到病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學等各個領域,其在免疫檢測、細胞分離、生物大分子純化和分子生物學等方面得到越來越廣泛應用。全自動免疫磁珠技術細胞分選系統(tǒng)AutoMACS Pro1.2 免疫磁珠的結構

2、磁性微球高分子材料免疫配基1.3 IMB技術的基本原理特異性抗體加入待測液中撤去磁場磁性外力1.4 IMB技術作用方式免疫磁珠分離技術直接法間接法第一抗體第二抗體 直接法是先用抗體包被磁珠,使抗體與磁珠給合(物理吸附或化學結合),再加入抗原物質,二者結合形成磁珠-第一抗體-抗復原合物,在磁力作用下, 與其它物質分離。 間接法是先用羊抗鼠IgG(第二抗體)包被磁珠,使磁珠作為第二抗體載體,當抗原與第一抗體結合后,加入帶有第二抗體磁珠,磁珠上第二抗體便與第一抗體結合,形成磁珠-第二抗體-第一抗體-抗原復合物,在磁力作用下,與其它物質分離。1.5 IMB技術的優(yōu)點 特異性強、分離速度快、效率高可重復

3、性好、操作簡單不需要昂貴的儀器設備,不影響被分離細胞或其它生物材料的生物學性狀和功能等2.1 IMB技術對大腸桿菌O157H7的檢測(GB/T 4789.36-2008) 2.2 IMB技術對單增李斯特菌檢測 (SN/T 0184.3-2008)2.3 IMB技術對布魯氏桿菌檢驗 (DB32/T-2016)2.5 IMB技術對其余食源性致病微生物的檢測應用 劉琳琳等人利用“自制的金屬螯合免疫磁珠”來檢測食品中金黃色葡萄球菌。該法能夠在30min內富集檢測金黃色葡萄球菌且檢測低限可達100 cfu。同時磁珠可保持活性達3周以上。此檢測方法同傳統(tǒng)鑒定和分離金黃色葡萄球菌的方法相比具有速度快、靈敏性

4、高、成本低的優(yōu)點。 杜強等人利用“全自動免疫磁珠分選系統(tǒng)”檢測食品中沙門氏菌，與國標法相比，全自動免疫珠分選系統(tǒng)取消了SC和TTB增菌，經BPW增菌后直接使用系統(tǒng)富集目標菌并接種顯色平板。結果免疫磁珠法陽性檢出率為32，國標法陽性檢出率為31，二者無顯著性差異(P0.05)。但磁珠法取消了二次增菌的步驟，檢測時間比國標法節(jié)省24 h，且平板上的單個菌落生長率和菌株特異性也更好。 支援等人基于抗原抗體反應的免疫學特異性,以及量子點熒光標記的高靈敏度,免疫磁珠磁性分離,免疫量子點熒光標記聯(lián)合應用的檢測方法,對阪崎腸桿菌試驗結果表明，能在2h內對乳制品樣品中的食源性致病菌（阪崎腸桿菌）進行檢測，且方

5、法特異性好，靈敏度高（達10cfu/mL），其在食品檢測領域的應用成為可能。 蘇惠玉等人應用“山羊抗黃曲霉菌血清的免疫磁珠”捕獲食品中的黃曲霉菌，不需要進行增菌培養(yǎng)，應用磁捕獲-熒光聚合酶鏈式反應(LMC-FPCR)技術快速檢測鑒定食品中的黃曲霉菌。結果：IMC-FPCR方法檢測黃曲霉菌的最低檢測值為2cfumL。結論：建立了黃曲霉菌的磁捕獲-熒光聚合酶鏈式反應法 (IMC-FPCR) ，該方法可用于食品中黃曲霉菌的快速檢測及鑒定。2.7 IMB技術在微生物檢測應用時的主要影響因素1免疫磁珠的質量2目標菌、 雜菌及磁珠的比例3待測標本的性狀4磁珠與待測標本的反應條件2.8 IMB技術在食源性致

6、病菌檢測中應用進展1IMB技術結合顯色培養(yǎng)基 對食源性致病菌進行檢測2IMB技術結合PCR技術 對食源性致病菌進行檢測3IMB技術結合免疫學技術 對食源性致病菌進行檢測4IMB 技術結合電化學技術 對食源性致病菌進行檢測5IMB技術結合流式細胞儀 對食源性致病菌進行檢測3、小結 IMB技術在微生物學檢測領域中的應用越來越廣泛，其方便有效性主要在于代替了常規(guī)的選擇性增菌培養(yǎng)過程，可特異地將目的微生物從樣品中快速分離出來。與其他先進檢測技術結合使用，充分發(fā)揮二者優(yōu)勢，還能節(jié)約更多時間、發(fā)揮更大的作用。 但目前在免疫磁珠的生產上還存在一些問題，其制備難度大，要獲得均勻性好、超順磁性、粒度適中、易于結

7、合蛋白質的磁珠很難?，F(xiàn)今大部分的磁珠市場被瑞士Dynal和德國的Miltenyi兩大公司所占有，其產品價格昂貴，這極大地限制了免疫磁珠技術在我國的普及及應用。因此，商業(yè)化生產優(yōu)質的國產免疫磁珠是今后研究的主要方向。相信隨著研究的不斷深入，免疫磁珠技術的應用前景定會更加廣闊。References:1.蘇惠玉, 謝榮珍與牛建軍, 免疫磁珠捕獲結合熒光PCR技術檢測食品中黃曲霉菌的研究. 食品科學, 2010(10): 第287-291頁.2.費楓與黃迅辰, 免疫磁珠的原理與特性及其在動物源性食品檢測中的應用研究. 浙江畜牧獸醫(yī), 2014(05): 第43-47頁.3.劉細霞與涂俊銘, 免疫磁珠分

8、離技術及其在食源性致病菌檢測中應用的進展. 中國抗生素雜志, 2014(12): 第956-960頁.4.盛躍穎與陳敏, 免疫磁珠分離技術在病原微生物檢測中的應用. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2011(05): 第478-481頁.5.杜強與屠博文, 全自動免疫磁珠分選系統(tǒng)檢測沙門氏菌. 食品安全質量檢測學報, 2016(05): 第1836-1839頁.6.支援等, 一種快速檢測阪崎腸桿菌的新方法免疫磁性分離熒光標記. 乳業(yè)科學與技術, 2010(05): 第231-233+245頁.7馬燕萍.免疫磁珠技術簡介J.山西職工醫(yī)學院學報.2000.l0: l0.8范蓉,錢和年.免疫磁珠技術一一種新的免疫學技術J.國外醫(yī)學(免疫學分冊). 1998,21(1):3.9陸東東.免疫磁珠技術的應用研究J.陜西醫(yī)學檢驗. l999.14(2): 10.10 Petzinger E, Weidenbach A. Mycotoxins in the food chain:erole of ochratoxinsJ. Livestock Production Science,2002.76(3): 245-250.11 Petzinger E, Ziegler K. Ochratoxin A from a toxicologica1 perspectiveJ. Vet Phamacol,2000