原料藥注冊方法學(xué)驗(yàn)證中各項(xiàng)指標(biāo)的深度剖析課件

1、原料藥注冊方法學(xué)驗(yàn)證中各項(xiàng)指標(biāo)的深度剖析【溶解度】 會因結(jié)晶溶劑的不同導(dǎo)致結(jié)果的差異性，一般不做硬性規(guī)定，酌情處理。只是操作時樣品一定要研細(xì)后進(jìn)行?！揪汀?如研究表明：各晶型具有相同表觀溶解度，或者各晶型皆易溶于水，此時各晶型一般不會影響藥物的體內(nèi)生物利用度，便無需擬定。 如各晶型具有不同表觀溶解度，即有屬于低溶解性的晶型，此時則應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中擬定晶型檢測。一般采用X-射線衍射法。有時亦能采用紅外予以明辨。 列舉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中已有擬訂的“阿德福韋酯”和“那格列奈”實(shí)例。（儀器校正）【紅外鑒別】 觀測2500cm-1 - 400cm-1波數(shù)段間8大主峰波數(shù)。峰間高低可以不一。 個別小峰允許存在，是

2、雜質(zhì)存在的體現(xiàn)?！緹晒夥治龇ā?響應(yīng)值不穩(wěn)定，有時會波動較大，不建議使用?！救埸c(diǎn)測定法】 試驗(yàn)結(jié)束后切勿立即切斷電源，設(shè)置為室溫，使其自然降溫，之后再關(guān)閉電源。 熔距越短或終熔點(diǎn)越接近高限、純度越高。 【紫外-可見分光光度法】 比色法測定時、一定要平行操作，測定時迅即完成，切忌等待吸收度值穩(wěn)定后再行記錄！【旋光度測定法】 溫控尤為重要！先將溶劑置于該溫度水浴中，隨后采用該溶劑快速配制溶液，定容后立即測定?！狙跗咳紵ā?樣品一定要燃燒完全。若氧氣充滿、尚無法燃盡，可將樣品量減半，在其后的測定中再將濃度增加一倍，即可。【溶液的澄清度與顏色、氯化物、硫酸鹽、重金屬檢查等】 建議配制梯度對照液，這樣

3、可對樣品進(jìn)行一個全面、綜合分析?！緹胱茪?jiān)鼨z查法】 熾灼后放置于干燥器內(nèi)的時間不得少于1小時，否則稱重不穩(wěn)?！颈澜鈺r限】 膠囊劑有時會出現(xiàn)膠囊殼存留于網(wǎng)底的情況，可將囊殼取出，若其中無內(nèi)容物，亦可判斷為合格?！靖稍锸е睾退帧?1) 一些緩慢降解的物質(zhì)、不易采用恒重，規(guī)定時間。一般105、3小時肯定已可以！ 典型案例鹽酸西布曲明，見下。(2) 帶有結(jié)晶水的藥物，盡量采用卡氏法測定。 其中的環(huán)丁基較為“脆弱”，不斷緩慢分解。應(yīng)采用卡氏法測定。殘留溶劑研究思路 研究原則：合成過程中使用到的有機(jī)溶劑均需建立測定方法、并予以研究測定。 觀測樣品測定結(jié)果：申報(bào)3批樣品測定結(jié)果說明工藝穩(wěn)定性。 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬

4、定原則：除第一類溶劑外、“未檢出的溶劑”可以不擬定，僅擬定最后一步重結(jié)晶溶劑。 測定方法：根據(jù)研究檢測結(jié)果，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法完全可以與研究時方法不同。殘留溶劑研究思路 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)擬定原則：如僅殘留有重結(jié)晶溶劑、且為低沸點(diǎn)（如乙醇、丙酮等），完全可采用105干燥失重方法予以替代。從而省略掉氣相測定，且干燥失重限度可酌情放寬。 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是一個不斷完善的過程： 列舉“自套枷鎖”、“事倍功半”實(shí)例！ 列舉阿法骨化醇無需研究測定實(shí)例！氣相色譜法測定時應(yīng)注意事項(xiàng)(1)強(qiáng)烈建議男同志從事此項(xiàng)工作。將對照品溶液濃度配制為限度點(diǎn)。對于二氯甲烷、三氯甲烷采用氫火焰檢測器(FID)勉為其難、應(yīng)采用電子捕獲檢測器(ECD)

5、。如要強(qiáng)行檢測，可采用的辦法有：直接進(jìn)樣、加大流速，使峰形便尖銳、從而提高峰面積積分精密度。供試品溶液一定要全部溶解。對于一些高沸點(diǎn)和低沸點(diǎn)的殘留溶劑，不推薦采用頂空法進(jìn)樣！盡可能建立內(nèi)標(biāo)法、而非外標(biāo)法。氣相色譜法測定時應(yīng)注意事項(xiàng)(2)對照品溶液配制法（引申至對照品為油狀時）。直接進(jìn)樣法與頂空法的優(yōu)缺點(diǎn)比較。定性時、多根色譜柱使用的意義。色譜柱選擇的一定要遵循“極性相似”原理。直接法進(jìn)樣樣品溶液后，進(jìn)樣針極易堵塞。自動進(jìn)樣器時設(shè)定幾針溶劑，沖洗時多洗幾次。試驗(yàn)結(jié)束后用乙醇浸泡進(jìn)樣針。容量分析法測定含量(1) 滴定液的標(biāo)化與貯藏 氫氧化鈉滴定液標(biāo)化后一定要分成小塑料瓶、密閉包裝。使用時，酌情（針

6、對放置時間和樣品之類）再標(biāo)化一份即可。因其極易吸收空氣中的二氧化碳，使校正因子降低，消耗過多滴定液，從而使結(jié)果偏高，有時會出現(xiàn)高于101.0%情況。 高氯酸滴定液應(yīng)臨用現(xiàn)標(biāo)。使用當(dāng)天標(biāo)化三份，取均值即可。 不常用滴定液建議購買，如甲醇鈉滴定液等。容量分析法測定含量(2) 滴定液的消耗體積 針對不同消耗體積采用不同規(guī)格滴定管(10/26/50ml) 對于消耗量小于誤差要求的最小體積時，可采用稀釋滴定液、增加消耗體積的辦法；或采用電位滴定儀。(3) 指示劑使用注意點(diǎn) 部分指示液配制后，如放置時間過久，其變色會遲鈍，導(dǎo)致消耗體積過大，結(jié)果偏高；故配制后酌情放入冰箱中。容量分析法測定含量(4) 操作中

7、的注意事項(xiàng) 對于采用指示劑法測定的操作，只要有空白試驗(yàn)，樣品變色后的色澤一定要與空白色澤一致，以消除系統(tǒng)誤差。(5) 容量分析法與HPLC法介紹（引申至對照品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)） 容量分析法：專屬性差、人為因素較強(qiáng)；但省時省力。 HPLC法：專屬性強(qiáng)；但定量結(jié)果會因波長不同存在較大偏差，因雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子不同電位滴定法測定含量 對于指示劑變色難以辨明時 樣品溶液變色存在干擾（有輔料或沉淀存在等） 消耗體積很少、無法采用滴定管定量。 雜質(zhì)和主成分對照品的標(biāo)化方法。 設(shè)定的滴定參數(shù)應(yīng)使滴定曲線呈現(xiàn)平滑，以避免滴 定終點(diǎn)的誤判。即如何確定合適的“閾值”：先全程滴 定，根據(jù)突躍變化情況，確定閾值后再次滴定

8、，尤其 是進(jìn)行兩個突躍點(diǎn)的滴定時（引申至新版藥典）。高效液相色譜法應(yīng)用時經(jīng)常出現(xiàn)的問題 柱溫箱一定要配制。試驗(yàn)溫度建議在30-50。清洗溫度可高于試驗(yàn)溫度5。 色譜柱清洗： 對于正相、實(shí)驗(yàn)結(jié)束用流動相再沖洗半小時即可。 對于反相，除非流動相采用單純的甲醇/乙腈-水，其他所有流動相皆建議先用純水沖洗半小時（流速1.0ml/min），再改用20%甲醇沖洗半小時，隨后取下、兩頭密閉即可。絕不推薦 液相色譜儀：絕不建議為節(jié)約乙腈/甲醇，而采用兩個泵，將水相與有機(jī)相分別注入混合的方式（即便配置了脫氣機(jī)）。一定要將兩相按比例混合后脫氣過濾，采用一個泵注入，且清洗時一定就清洗使用泵，不建議采用另一個泵將清洗

9、液注入（重點(diǎn)講述?。?過濾膜一定要采用混相膜。 正相流動相無需過濾、混合均勻后超聲即可。高效液相色譜法應(yīng)用時經(jīng)常出現(xiàn)的問題 梯度洗脫時 最理想方式： A相位高比例的水相兌低比例的有機(jī)相；B相為低比例的水相兌高比例的有機(jī)相； 其次：A相位高比例的水相兌低比例的有機(jī)相；B相皆為有機(jī)相。 絕不建議A相位純水相、B相位純有機(jī)相，即便質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如此擬定，采用一元一次函數(shù)，將其轉(zhuǎn)換成第二種情況，否則極易出現(xiàn)基線飄動、無法準(zhǔn)確積分的現(xiàn)象。高效液相色譜法應(yīng)用時經(jīng)常出現(xiàn)的問題 梯度洗脫時，必須先行測定空白溶劑峰，應(yīng)基線平穩(wěn)、溶劑峰出峰在前。確認(rèn)色譜柱內(nèi)清洗干凈后再測定樣品。 以確保有關(guān)物質(zhì)檢測時，雜質(zhì)的準(zhǔn)確測定。

10、高效液相色譜法應(yīng)用時經(jīng)常出現(xiàn)的問題高效液相色譜法測定含量(1) 對照品溶液配制2份（2份粉末） 分別進(jìn)樣3針，計(jì)算校正因子f=C/A，隨后計(jì)算f的RSD，小于2.0%即認(rèn)為2份對照品溶液配制均無誤、且儀器已穩(wěn)定。取f均值測定樣品。(2) 樣品溶液亦配制2份，每份進(jìn)樣一針，兩份百分含量差值在2.0%以內(nèi)即可。高效液相色譜法測定含量(3) 待全部樣品檢測結(jié)束后（無所謂n針，即便運(yùn)轉(zhuǎn)了一天、亦無須擔(dān)憂），任取一份對照溶液回進(jìn)一針，計(jì)算含量（濃度），應(yīng)在理論濃度偏差的2.0%以內(nèi)，便可確保檢測過程中儀器性能的穩(wěn)定。(4) 如原方法為內(nèi)標(biāo)法，秉承藥審中心提出的“仿產(chǎn)品不是仿標(biāo)準(zhǔn)”理念，一定要改為外標(biāo)法！

11、除非前處理極為繁瑣、較易損失時。含量測定濃度和色譜條件如何建立濃度不要與有關(guān)物質(zhì)濃度一致；一般為1/101/50。便于過濾（對于制劑）、雜質(zhì)干擾減少、積分準(zhǔn)確。色譜條件可與有關(guān)物質(zhì)不一致（如有關(guān)物質(zhì)為梯度洗脫或保留時間很長），更加科學(xué)化、人性化。波長不是最大吸收波長亦可、選用末端吸收。要注意樣品粉末占有一定體積時引起的誤差。薄層色譜法測定有關(guān)物質(zhì)(1) 盡可能使用商品化薄層板、不建議自行鋪制。(2) 設(shè)置梯度對照(1.0%、0.5%、0.2%和0.1%，通過點(diǎn)樣量來實(shí)現(xiàn)，方便快捷、事半功倍)；實(shí)現(xiàn)“半定量”。(3) 0.1%斑點(diǎn)如顯現(xiàn)不出，加大點(diǎn)樣量。(4) 主斑點(diǎn)如超載、“斷腰”，可適當(dāng)減小點(diǎn)樣量。(5) 顯色劑盡可能新鮮配制。(6) 觀測時，建議增加翻轉(zhuǎn)觀測，即透過玻璃面觀測。高效液相色譜法測定有關(guān)物質(zhì)(1) 每批樣品配制1份，即可。(2) 多批樣品同時檢測時，選用粉末量最少的樣品稀釋制成自身對照溶液即可，絕對無需每一樣品均稀釋成自身對照溶液。(3) 對照溶液連續(xù)進(jìn)樣3針，計(jì)算主峰峰面積的RSD，小于2.0%即認(rèn)為儀器穩(wěn)定、積分無誤。取峰面積均值用于樣品雜質(zhì)峰比較。高效液相色譜法測定有