細胞治療移植復發(fā)培訓課件

1、 異基因造血干細胞移植（Allo-HSCT）是目前治愈急性白血病的主要方法。移植后復發(fā)是影響患者存活的主要障礙之一。 移植后復發(fā)的治療手段主要有二次移植和DLI（供者淋巴細胞輸注）、停用免疫抑制劑和應用細胞因子等方式。 前 言1細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 異基因造血干細胞移植（Allo-HSCT）是目前治愈急性白 二次移植風險高，25%-50%的患者死于感染、急性GVHD等治療相關(guān)并發(fā)癥，且二次移植后復發(fā)率亦高達40-60%，兩年無病存活僅12%-21%。 DLI后GVHD總發(fā)生率為60%，其中40%、度aGVHD，20%左右、cGVHD。 迫切需要找到一種新的方法來改善其生存2細胞治

2、療移植復發(fā)10/4/2022 二次移植風險高，25%-50%的患者死于感染、急性GVHD 免疫治療的發(fā)展，使其逐漸成為白血病患者造血干細胞移植后復發(fā)的治療手段之一。 我們中心應用細胞免疫治療急性非淋巴細胞白血病自體骨髓移植患者的結(jié)果表明5 年生存率為75% ,非細胞治療組5年生存率為45%，細胞組在累計生存率上明顯優(yōu)于非細胞治療組。3細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 免疫治療的發(fā)展，使其逐漸成為白血病患者細胞免疫治療大致分為兩類： 一是疫苗治療，即輸注可在體內(nèi)刺激抗白血病活性的細胞，如樹突狀細胞（DC）相關(guān)腫瘤疫苗等； 二是過繼性細胞免疫治療，即輸注有內(nèi)在抗白血病活性的免疫效應細胞，如細胞因

3、子誘導殺傷（CIK）細胞、細胞毒性T淋巴細胞（CTL）等。4細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療大致分為兩類：4細胞治療移植復發(fā)10/3/202 DC：樹突狀細胞，抗原提呈細胞 免疫反應的關(guān)鍵“決策細胞” 增強針對腫瘤抗原免疫反應的理想靶點 目前全球已有3支DC腫瘤疫苗獲標準5細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 DC：樹突狀細胞，抗原提呈細胞5細胞治療移植復發(fā)10/3/DC已由實驗室走向臨床DC臨床反應仍有限：成熟度，臨床反應，外源性負載的表位數(shù)較少等。 基因修飾DC：表達腫瘤抗原，增強免疫反應的刺激因子、細胞因子，下調(diào)免疫負調(diào)控分子。-未來發(fā)展的一個重要方向6細胞治療移植復發(fā)10/

4、4/2022DC已由實驗室走向臨床6細胞治療移植復發(fā)10/3/2022基因修飾DC的優(yōu)勢 無MHC限制性 提供更多的抗原表位 保證持久的抗原表達 胞內(nèi)抗原加工的抗原提呈更有效 表達外源基因的病毒載體能刺激和激活DC 避免正?？乖撦d可能存在的自身免疫反應Shurin MR, et al. New York: Springer. 2009.7細胞治療移植復發(fā)10/4/2022基因修飾DC的優(yōu)勢 無MHC限制性Shurin MR, etT細胞激活（3種信號）8細胞治療移植復發(fā)10/4/2022T細胞激活（3種信號）8細胞治療移植復發(fā)10/3/2022基因修飾DC策略 導入編碼腫瘤抗原基因或表達抗原

5、的mRNA 導入編碼免疫刺激分子、細胞因子、趨化因子、抗 凋亡分子和其他增強DC功能因子的基因Kikuchi T. Tohoku J Exp Med. 2006.9細胞治療移植復發(fā)10/4/2022基因修飾DC策略 導入編碼腫瘤抗原基因或表達抗原的mRNAK修飾方法與靶分子選擇Shurin MR, et al. Expert Opin Biol Ther. 2010.10細胞治療移植復發(fā)10/4/2022修飾方法與靶分子選擇Shurin MR, et al. Ex11細胞治療移植復發(fā)10/4/202211細胞治療移植復發(fā)10/3/2022Boudreau JE, et al. Mol Ther

6、. 2011.12細胞治療移植復發(fā)10/4/2022Boudreau JE, et al. Mol Ther. 基因修飾DC臨床結(jié)果13細胞治療移植復發(fā)10/4/2022基因修飾DC臨床結(jié)果13細胞治療移植復發(fā)10/3/2022Sipuleucel-T（美國，Dendreon）Sipuleucel-T利用DC負載PAP和GM-CSF的融合蛋白，這提示DC疫苗聯(lián)合細胞因子可能改進治療結(jié)果。14細胞治療移植復發(fā)10/4/2022Sipuleucel-T（美國，Dendreon）SipulAGS-003（美國，Argos Therapeutics） 轉(zhuǎn)移性腎細胞癌 自體腫瘤來源mRNA+合成的CD4

7、0L RNA15細胞治療移植復發(fā)10/4/2022AGS-003（美國，Argos Therapeutics）3期試驗方案16細胞治療移植復發(fā)10/4/20223期試驗方案16細胞治療移植復發(fā)10/3/2022病毒載體系統(tǒng)的優(yōu)缺點Kikuchi T. Tohoku J Exp Med. 2006.17細胞治療移植復發(fā)10/4/2022病毒載體系統(tǒng)的優(yōu)缺點Kikuchi T. Tohoku J 載體對DC生物學影響Ribas A. Curr Gene Ther. 2005.18細胞治療移植復發(fā)10/4/2022載體對DC生物學影響Ribas A. Curr Gene T 最近研究發(fā)現(xiàn)，APA分子

8、（antigen presentation attenuators）為抗原呈遞細胞內(nèi)控制信號傳導通路的關(guān)鍵性抑制因子，阻止了有效的抗自身腫瘤抗原的免疫反應。 SOCS1（suppressor of cytokine signaling 1）是APA中最關(guān)鍵性抑制因子之一。因此我們在常規(guī)采用細胞因子促進DC細胞成熟的基礎(chǔ)上，加上了針對APA的小干擾RNA以特異性阻斷其基因功能；加上特異性的腫瘤相關(guān)抗原（Survivin和muc1）負載，誘導的DC細胞與T細胞具有成熟度更高、功能與特異性更強的顯著優(yōu)點。19細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 最近研究發(fā)現(xiàn)，APA分子（antigen present

9、a提高DC抗原呈遞能力及腫瘤特異性CTL效應SOCS1SurvivinMuc1Flagellin中試放大急毒試驗安全性評價試驗人體細胞試驗Ad520細胞治療移植復發(fā)10/4/2022提高DC抗原呈遞能力及腫瘤特異性CTL效應SOCS1Surv細胞免疫治療的優(yōu)點體外活化、擴增和修飾免疫細胞可選擇性的控制其GVL；增殖速度快、殺傷活性高、副作用小等優(yōu)點；體外培養(yǎng)繞過了體內(nèi)免疫系統(tǒng)中復雜的負調(diào)控系統(tǒng)的影響，活性更強；輸注免疫細胞可避免由于應用大劑量的某些細胞因子引起的毒副反應。 21細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療的優(yōu)點體外活化、擴增和修飾免疫細胞可選擇性的控制面 臨 的 問 題為使制

10、備的免疫細胞具有更好的GVL效應，體外擴增技術(shù)尚需進一步研究和完善；治療方法尚不完善, 對于治療時機、劑量、療程、給藥方法、挑選合適的佐劑及如何克服腫瘤免疫逃逸等方面均有許多尚待解決和完善的問題；針對白血病的免疫機制及細胞回輸后在體內(nèi)的作用機制尚未完全闡明，一些細胞免疫治療的療效還存在爭議。22細胞治療移植復發(fā)10/4/2022面 臨 的 問 題為使制備的免疫細胞具有更好的GVL效應，體細胞免疫治療的不良反應 免疫細胞是誘導、激活的自體細胞，這種治療相當安全，有部分病例在細胞回輸后2-10個小時內(nèi)出現(xiàn)體溫升高（37.240），一般持續(xù)時間26小時，可自行緩解，極少數(shù)高熱病人使用解熱藥就可以完全

11、緩解。23細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療的不良反應 免疫細胞是誘導、激活的研究方法及步驟 病人的選擇：急性白血病異基因移植后復發(fā)（包括形態(tài)學復發(fā)、分子學復發(fā)和細胞遺傳學復發(fā)）的患者。簽署治療知情同意書DC-CIK體外培養(yǎng)治療方法：4次DC，2次CIK。觀測指標：臨床療效、 治療前后免疫功能變化、 治療前后細胞因子的變化。24細胞治療移植復發(fā)10/4/2022研究方法及步驟 病人的選擇：急性白血病異基因移植后復發(fā)（包括采集供者或患者抗凝全血50-60ml培養(yǎng)DC和CIK細 胞 回 輸d7 d9 d11 d13DC DC DC DC CIK CIK治 療 方 法25細胞治療移植復發(fā)

12、10/4/2022采集供者或患者抗凝全血50-60ml培養(yǎng)DC和CIK細 胞 26細胞治療移植復發(fā)10/4/202226細胞治療移植復發(fā)10/3/2022 急性白血病異基因移植后復發(fā)17例，其中分子學復發(fā)9例，骨髓復發(fā)7例，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病復發(fā)1例； 細胞免疫治療異基因移植后復發(fā)的完全緩解率為82%,GVHD發(fā)生率為65%，均為度以下GVHD。 臨 床 資 料27細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 急性白血病異基因移植后復發(fā)17例，其中分子學復發(fā)9例，骨髓細胞免疫治療急性白血病移植后復發(fā)病例性別/年齡診斷供者CIK前治療GVHD臨床情況細胞治療后生存時間存活情況治療前治療后1F/35AML同

13、胞NONO分子學復發(fā)CR14M29M2M/21AML無關(guān)格列衛(wèi) cGVHD分子學復發(fā)CR22M31M 3M/31AML無關(guān)NoGVHD分子學復發(fā)CR17M21M4F/19ALL單倍體NoGVHD分子學復發(fā)CR10M27M5M/17AML 無關(guān)NoNo分子學復發(fā)CR15M32M6F/28AML無關(guān)NoGVHD分子學復發(fā)CR-RL3M死亡7F/55AML同胞DSI腸道GVHD 分子學復發(fā)復發(fā)6M死亡8M/61AML同胞NoGVHD分子學復發(fā)CR5M死亡 9M/8AML無關(guān)+單倍體NoGVHD分子學復發(fā)CR14M34M10F/34MDS-AML同胞手術(shù)+放療+化療 NO髓外復發(fā)CR26M73M11M

14、/25ALL無關(guān)化療NO復發(fā)后CRCR40M64M12F/38AML同胞手術(shù)+放療+化療 GVHD復發(fā)后CRCR31M129M13M/38ALL無關(guān)化療NO復發(fā)后CRCR8M26M14F/15AML單倍體化療GVHD復發(fā)后PR未緩解3M死亡15M/22ALL單倍體化療GVHD復發(fā)后NRCR-RL4M死亡16M/30AML同胞鞘注NOCNLNR17M35M17F/35 M3-CR3同胞砷劑cGVHD復發(fā)CR13M59MDSI 供者外周血造血干細胞輸注CR-RL CR后3個月骨髓復發(fā) 病例9為第一次無關(guān)供者移植后2月復發(fā)，化療后未緩解，給予第二次單倍體移植后9月分子學復發(fā)病例12為移植后5年髓外復

15、發(fā)，給予手術(shù)和局部放療，3個月后骨髓復發(fā)28細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療急性白血病移植后復發(fā)病例性別/年齡診斷供者CIK病例資料患者，女性，49歲2001.6 診斷為急性髓性白血病M2 DA方案化療1療程后獲CR，鞏固化療1療程2001.9 HLA相合同胞外周血干細胞移植2009.6 胸壁髓外復發(fā) 手術(shù)切除+放療+細胞免疫治療2010.3 髓外+骨髓復發(fā)，blast 87.5% MA方案化療1療程獲CR此后予細胞免疫治療5次，持續(xù)CR狀態(tài)2012.5 復查提示分子學復發(fā)，TA方案化療+細胞免疫治療，再次達CR。29細胞治療移植復發(fā)10/4/2022病例資料患者，女性，49歲2

16、9細胞治療移植復發(fā)10/3/20細胞免疫治療前后殘留變化 DC+CIK TA方案化療30細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療前后殘留變化 DC+CI患者細胞免疫治療前后殘留變化無關(guān)供者移植移植后+10月自體細胞免疫治療+11月+15月+13月31細胞治療移植復發(fā)10/4/2022患者細胞免疫治療前后殘留變化無關(guān)供者移植移植后+10月自體細細胞免疫治療聯(lián)合化療治療粒細胞肉瘤一例 孫某，男性，43歲； 2011年9月以左頸部皮膚腫塊起病，活檢后病理經(jīng)江蘇省人民醫(yī)院、江蘇省腫瘤醫(yī)院、北京大學病理科會診，診斷為髓系肉瘤； 先后接受DA、MA（2療程）、FLAG（2療程）方案共5療程化療，初始

17、化療效果可，隨后化療效果不佳，化療后皮膚腫塊不消失；32細胞治療移植復發(fā)10/4/2022細胞免疫治療聯(lián)合化療治療粒細胞肉瘤一例 孫某，男性，43歲； 2012年5月28日就診我科； 5月30日開始給予TA+VM-26方案化療，化療后輸注DC+CIK細胞； 7月20日開始給予TA+VM-26方案化療，化療后輸注DC+CIK細胞； 治療過程中骨髓始終未受累。33細胞治療移植復發(fā)10/4/2022 2012年5月28日就診我科；33細胞治療移植復發(fā)10/35月30日6月15日7月16日8月21日化 療化 療34細胞治療移植復發(fā)10/4/20225月30日6月15日7月16日8月21日化 療化 療5

18、月30日6月15日7月16日8月21日35細胞治療移植復發(fā)10/4/20225月30日6月15日7月16日8月21日35細胞治療移植復發(fā)AML自體移植聯(lián)合 DC-CIK治療流程急性髓性白血?。ㄖ械臀＃琈3除外）（留標本）誘導化療完全緩解（無HLA相合供者）鞏固強化3-4個療程自體移植 血象恢復（4周后）DC-CIK細胞治療36細胞治療移植復發(fā)10/4/2022AML自體移植聯(lián)合 DC-CIK治療流程急性髓性白血?。ㄖ械图狈橇茏泽w骨髓移植后免疫治療結(jié)果（P=0.037)37細胞治療移植復發(fā)10/4/2022急非淋自體骨髓移植后免疫治療結(jié)果（P=0.037)37細胞治細胞免疫治療前后血清中細胞因子的對比 IFN-r（pg/ml）TNF-a（pg/ml）IL-10（pg/ml）IL-6（pg/ml）IL-4（pg/ml）IL-2（pg/ml）治療前7.082.554.203.273.800.787.534.107.723.246.250.60治療后88.62196.5066.12155.5826.3655.0426.5832.0149.7599.7042.8787.71P 值0.48